骨髓间充质干细胞通过调节LPS-TLR4通路抑制肝星形细胞活化的作用机制

目的研究人骨髓间充质干细胞(BMSC)是否可通过干预LPS-TLR4通路,调控肝星状细胞(HSC)LX2活化,阐明BMSC在肝纤维化形成中的作用。方法体外共培养BMSC、LX2,分为BMSC+LX2(LPS刺激)组、TLR4阻断剂+LX2(LPS刺激)组、LX2(LPS刺激)组、BMSC(LPS刺激)组、LX2(无LPS刺激)组,培养6、12、36、48 h;收集上清,ELISA检测IL-8及TGFβ表达,RT-PCR检测LX2的TLR4、Myd88及NF-κB的表达,Western Blot检测TGFβ、SMA、ColⅠ、MyD88、TLR4表达。免疫荧光检测NF-κB细胞内表达情况。结果 LPS可以刺激LX2活化,活化的LX2分泌IL-8及TGFβ增多,TGFβ、SMA、ColⅠ、MyD88、TLR4表达增加,NF-κB p65主要为核内表达。与BMSC共培养后,LPS导致的LX2活化减弱,LX2的TGF-β、SMA、ColⅠ、MyD88、TLR4的表达下降,NF-κB p65胞浆表达为主。结论 BMSC可以通过干预LPS-TLR4通路抑制LX2的活化。

乙型肝炎病毒对大鼠肝星状细胞活化的影响

目的观察乙型肝炎病毒(HBV)对大鼠肝星状细胞(HSC)是否有作用。方法用Friedman方法分离大鼠HSC,蔗糖梯度浓度法纯化HBV。用不同浓度HBV刺激HSC 24 h,检测上清液中的前胶原蛋白Ⅲ。选前胶原蛋白Ⅲ分泌增加的细胞作为研究对象,检测其细胞内C/EBPs、PPARγ、RAR表达情况,了解HBV是否影响HSC活化通路。结果 HBV可以呈浓度依赖方式刺激大鼠HSCs分泌前胶原蛋白Ⅲ,在浓度为3.0×105拷贝/ml时可以使前胶原蛋白Ⅲ分泌明显增加。C/EBPs的表达明显减少,而RAR受体表达明显增加、PPARγ表达无变化。结论 HBV对大鼠HSC具有直接激活作用,促其合成Ⅲ型前胶原蛋白,这可能与其刺激C/EBP表达减少和RAR表达增加有关。