肝细胞核因子-1b在糜烂性毒剂2-氯乙基乙基硫醚诱导急性肺支气管上皮细胞损伤中的作用及其机制

目的:探讨肝细胞核因子-1b(HNF-1b)在糜烂性毒剂2-氯乙基乙基硫醚(CEES)诱导人源性肺支气管上皮细胞(BEAS-2B)损伤中的作用及其机制。方法:用不同浓度(0、0.4、0.6、0.8、1.0和1.2 mmol/L)的CEES染毒BEAS-2B细胞24 h,使用CCK-8法检测细胞活力,光镜下观察细胞形态,分别采用DCFH-DA和MitoSOX荧光探针检测细胞总活性氧(ROS)和线粒体ROS水平。Western blot检测BEAS-2B细胞中HNF-1b蛋白的表达。再利用慢病毒感染技术构建过表达HNF-1b的BEAS-2B细胞系,用1 mmol/L CESS处理24 h后,分别采用CCK-8法测定细胞活力,Annexin V-FITC/PI双染法检测细胞凋亡率,MitoSOX和DHE荧光探针检测线粒体ROS和细胞总ROS水平,JC-1染色法检测线粒体膜电位。结果:与对照组比较,0.6~1.2 mmol/L CEES染毒后细胞活力均降低(P<0.01);细胞形态发生损伤性改变;0.8~1.2 mmol/L CEES染毒后细胞总ROS和线粒体ROS水平均增加(P<0.01);CEES染毒组细胞HNF-1b蛋白表达水平显著下调(P<0.01)。慢病毒转染后,与对照组正常细胞相比,CEES染毒组HNF-1b过表达细胞的细胞活力显著增加(P<0.01),细胞凋亡率降低(P<0.01),线粒体膜电位的损伤缓解,且线粒体ROS和细胞内总ROS水平显著降低(P<0.01)。结论:糜烂性毒剂CEES能够导致肺支气管上皮细胞中HNF-1b表达降低,过表达HNF-1b能够减轻CEES诱导的细胞损伤和凋亡,抑制线粒体功能障碍,其机制可能与抗氧化有关。上述结果提示HNF-1b可能是糜烂性毒剂导致肺损伤的新靶点,激活HNF-1b可能是糜烂性毒剂毒性靶点治疗的新策略。

急性药物性肝损伤患者血清核因子E2相关因子2、血红素加氧酶-1、脂肪酸结合蛋白4、缺氧诱导因子1α表达意义及其与肝功能指标相关性研究

目的:探讨急性药物性肝损伤患者血清核因子E2相关因子2(Nrf2)、血红素加氧酶-1(HO-1)、脂肪酸结合蛋白4(FABP4)、缺氧诱导因子1α(HIF-1α)表达意义及其与肝功能指标的相关性。方法:回顾性选取62例急性药物性肝损伤患者的临床资料作为病例组,另选80例健康体检者的临床资料作为对照组。比较两组血清Nrf2、HO-1、FABP4、HIF-1α及肝功能指标水平,用Pearson相关性分析急性药物性肝损伤患者血清Nrf2、HO-1、FABP4、HIF-1α水平与肝功能的相关性,并绘制受试者工作特征曲线(ROC)分析血清Nrf2、HO-1、FABP4、HIF-1α水平联合检测对急性药物性肝损伤的诊断价值。结果:病例组血清Nrf2、HO-1、FABP4、HIF-1α及谷丙转氨酶(ALT)、碱性磷酸酶(ALP)、谷草转氨酶(AST)、谷氨酰转移酶(GGT)、总胆红素(TBIL)水平高于对照组(均P<0.05)。Pearson相关性分析结果显示,急性药物性肝损伤患者血清Nrf2水平与血清ALT、AST、TBIL水平呈负相关(r=-0.763、-0.741、-0.685,均P<0.05);血清HO-1水平与血清ALT、AST、TBIL水平呈负相关(r=-0.489、-0.524、-0.568,均P<0.05);血清FABP4水平与血清AST、TBIL水平呈正相关(r=0.509、0.512,均P<0.05);血清HIF-1α水平与血清ALT、AST、TBIL水平呈正相关(r=0.527、0.486、0.542,均P<0.05)。ROC曲线分析结果显示,血清Nrf2、HO-1、FABP4、HIF-1α水平联合检测诊断急性药物性肝损伤的曲线下面积(AUC)值为0.919,高于血清Nrf2、HO-1、FABP4、HIF-1α水平单独检测(0.787、0.822、0.824、0.772,均P<0.05)。结论:血清Nrf2、HO-1、FABP4、HIF-1α在急性药物性肝损伤患者中呈高表达,其表达水平与患者肝功能损伤有关,且四者联合检测对急性药物性肝损伤的诊断价值更高。

肝细胞核因子4α基因突变致先天性高胰岛素血症合并Fanconi综合征1例报道

先天性高胰岛素血症血症(congenital hyperinsulinemia,CHI)是由胰岛β细胞持续不适当分泌胰岛素导致的严重低血糖症,其临床特征为婴儿期出现高胰岛素性低血糖,是婴幼儿持续性、频发性低血糖的主要原因。目前已发现多种基因与CHI有关,肝细胞核因子4α(hepatocyte nuclear fator 4 alpha,HNF4α)的基因发生功能缺失性突变引起CHI是CHI的罕见类型。2012年Stanescu DE等[1]首次报道了HNF4αp.R63w基因突变引起的CHI同时合并Fanconi综合征(Fan-coni syndrome,FS),目前仅有16例个案报道[1-8],临床罕见。作为一种临床综合征,高胰岛素性低血糖伴FS是其特征性的表现。现报告1例由该基因突变引起CHI合并FS的患儿临床资料并相关文献复习,以提高临床医生对该病的认识。

PEP-1介导的重组肝细胞核因子4α蛋白转导对肝癌细胞的抑制作用

目的利用细胞穿膜肽PEP-1介导重组肝细胞核因子4α(HNF4α)蛋白进入肝癌细胞,并明确外源融合蛋白PHNF4α对肝癌细胞的作用。方法构建表达质粒pET28a-P-HNF4α,优化原核表达体系的诱导条件,经大量表达、亲和层析纯化及浓缩、透析后获得纯度较高的带有细胞穿膜肽PEP-1的融合蛋白P-HNF4α;P-HNF4α转导人肝癌细胞,蛋白质印迹法检测其穿膜效率,核质分离和细胞免疫荧光检测P-HNF4α的亚细胞定位,Real-time PCR检测肝癌细胞基因表达,CCK-8法检测肝癌细胞增殖,细胞划痕实验及小室侵袭实验检测P-HNF4α对肝癌细胞转移能力的影响。结果细胞穿膜肽PEP-1成功介导融合蛋白P-HNF4α进入Huh7细胞并定位于细胞核;P-HNF4α蛋白可促进Huh7细胞肝功能基因表达,抑制干细胞相关基因表达(P<0.05或0.01),并显著抑制肝癌细胞增殖(P<0.05)、迁移(P<0.001)和侵袭(P<0.05)能力。结论 P-HNF4α可诱导肝癌细胞向成熟肝细胞分化,降低肝癌细胞的恶性程度,是诱导分化治疗肝癌的潜在手段。

荔枝核总黄酮通过抑制TLR4-TAK1抗大鼠肝纤维化的机制分析

目的探讨荔枝核总黄酮对四氯化碳(CCl 4)诱导的肝纤维化模型的抗肝纤维化作用机制。方法利用40%CCl 4-花生油溶液背部皮下注射构建肝纤维化大鼠模型,将造模成功的大鼠分为模型组、扶正化瘀组、荔枝核总黄酮低、中、高剂量组,另设空白组。连续灌胃给药8周后,取肝左大叶进行HE染色,观察肝脏组织病理变化;RT-qPCR法检测各组大鼠肝脏ColⅠ、ColⅢ、α-SMA mRNA的表达水平;并通过Western blotting检测大鼠肝脏Toll样受体-4(TLR4)、转化生长因子β激活激酶1(TAK1)、磷酸化转化生长因子β激活激酶1(P-TAK1)、氨基末端蛋白激酶(JNK)、磷酸化氨基末端蛋白激酶(P-JNK)的表达情况。结果肝组织HE染色显示,与肝纤维化模型大鼠比较,荔枝核总黄酮各剂量均能不同程度的改善大鼠肝脏炎症浸润情况。肝纤维化相关因子检测显示,荔枝核总黄酮各剂量肝脏ColⅠ、ColⅢ与α-SMA mRNA表达下降(P<0.05或P<0.01)。Western blotting检测结果显示,与模型组比较,荔枝核总黄酮低、中剂量组肝脏TLR4、P-TAK1蛋白表达下降(P<0.05),低剂量组的肝脏P-JNK蛋白也降低(P<0.05)。结论荔枝核总黄酮能减轻CCl 4诱发的大鼠肝纤维化,此作用可能与抑制肝脏TLR4-TAK1通路有关。

肝细胞核因子4α和3β在人主要器官中的表达

目的:观察肝细胞核因子4α(Hepatocyte Nuclear Factor 4α,HNF-4α)和HNF-3β在人主要组织器官中的表达情况,为进一步探索这两个因子与慢性乙型肝炎患者HBV复制之间的可能关系提供理论基础．方法:采用免疫组织化学染色方法检测HNF- 4α和HNF-3β在14例尸解标本的主要器官(肝、脑、肺、肾、心、脾、肠、胰腺、胃和甲状腺)中的表达情况．结果:HNF-4α和HNF-3β在10个器官的表达情况不同(HNF-4α:F=22．479,P<0．01;HNF- 3β:F=13．021,P<0．01)．HNF-4α在肝、肾、心、脾和肠中呈高水平表达,在肺和甲状腺呈低水平表达;HNF-3β在肝、肾、心和胰腺中呈高水平表达,在脾、肺、肠和甲状腺中呈低水平表达;HNF-4α和HNF-3β在脑、胃、阑尾、胸腺、肾上腺和扁桃体中均不表达:上述HNF-4α和HNF-3β高表达组和低表达组的表达水平差异有统计学意义(P<0．05),而高表达组各器官之间的表达水平差异无统计学意义(P>0．05)．结论:人体各组织中HNF-4α与HNF-3β的表达水平不同,在肝脏的表达水平较高,这提示二者有可能参与了HBV的组织特异性复制．

肝细胞核因子4α抑制大鼠肝癌细胞增殖、侵袭能力和新生血管生成相关基因表达

目的 :研究肝细胞核因子4α(hepatocyte nuclear factor 4α,HNF4α)在体内、体外实验中与大鼠肝癌新生血管生成相关基因表达之间的相互关系。方法:将过表达HNF4α腺病毒转染CBRH-7919细胞,采用CCK-8法检测细胞增殖效应,Transwell法检测细胞侵袭能力,RT-PCR和Western blot检测血管生成素2(angiopoietin-2,Ang-2)、血管内皮生长因子(vascular endothelial grouth factor,VEGF)的表达情况。体内试验建立肝大部切除模型(70%),分别在残肝上注入CBRH-7919细胞(空白组)或转染空载体腺病毒CBRH-7919细胞(阴性对照组)或转染过表达HNF4α腺病毒的CBRH-7919细胞(实验组)。4周后处死大鼠,通过免疫组化来观察肝标本Ang-2、VEGF的表达情况。结果:转染过表达HNF4α腺病毒的CBRH-7919细胞增殖能力和侵袭能力较空白、阴性对照组均明显抑制(P<0.05);实验组Ang-2、VEGF在基因、蛋白水平表达较空白、阴性对照组均明显抑制(P<0.05)。体内实验大鼠肝脏组织免疫组织化学切片显示实验组Ang-2、VEGF蛋白表达水平较空白、阴性对照组均明显抑制(P<0.05)。结论 :HNF4a可以抑制大鼠肝癌7919的增殖、侵袭能力,并且抑制肝癌新生血管生成相关基因Ang-2、VEGF的表达。

肝细胞癌中载脂蛋白M,肝受体同系物1和肝细胞核因子1α表达的相关性分析

目的:探讨肝细胞癌(HCC)组织和癌旁组织中载脂蛋白M(apoM)、肝受体同系物1(LRH-1)和肝细胞核因子1α(HNF-1α)的表达并分析3者之间的相关性。方法:采用RT-PCR和免疫组化分别检测17例原发性肝细胞癌和相应癌旁组织中apoM、LRH-1、HNF-1αmRNA的表达及apoM和HNF-1α蛋白的表达。结果:apoM、LRH-1和HNF-1αmRNA及apoM和HNF-1α蛋白在癌组织中的表达均明显高于癌旁组织(P均<0.01)。LRH-1、HNF-1αmRNA和apoMmRNA表达均呈正相关关系(依次为r=0.463,P<0.01;r=0.356,P<0.05)。结论:肝细胞癌中apoM的表达和LRH-1及HNF-1α表达密切相关,LRH-1和HNF-1α可能是apoM表达的重要调节因子。

肝星状细胞经趋化因子SDF-1/CXCR4轴途径促进肝癌细胞侵袭的作用及其机制

目的:探讨肝星状细胞(HSC)通过SDF-1/CXCR4轴对肝癌细胞侵袭的影响和可能机制,为研究肝癌的侵袭过程提供依据。方法:采用Western blotting和RT-PCR检测HSC LX02和肝癌细胞MHCC97、SMMC7721、Hep3B、HepG2中SDF-1和CXCR4的表达。采用Transwell实验检测LX02共培养或外源性SDF-1干预对肝癌细胞HepG2以及CXCR4基因沉默后的HepG2侵袭的影响。Western blotting法检测上皮标志E-Cadherin和间质标志Vimentin的表达水平。结果:与肝癌细胞比较,LX02中趋化因子SDF-1呈高表达(P<0.05)。4株人肝细胞癌细胞均有CXCR4高表达。HSC或SDF-1均能促进肝癌细胞HepG2侵袭(P<0.05),并诱导E-Cadeherin蛋白表达下调,Vimentin蛋白表达上调。通过RNA干扰技术靶向沉默肝癌细胞CXCR4基因后,HSC和SDF-1对肝癌细胞HepG2侵袭能力均无明显影响(P>0.05),肝癌细胞E-Cadeherin、Vimentin蛋白及mRNA表达水平亦无明显变化。结论:HSC可通过SDF-1/CXCR4轴促进肝癌细胞侵袭,其机制可能与诱导肝癌细胞上皮-间质转化有关。

过表达肝细胞核因子4alpha对人骨髓间充质干细胞向肝样细胞分化的作用

目的应用转基因技术将肝细胞核因子4alpha(HNF-4α)转导入人骨髓间充质干细胞(MSCs)内,使其连续过表达HNF-4α并促进MSCs向肝样细胞分化。方法 HNF-4α基因通过慢病毒表达载体pLV/Final-puro-hHNF4α-hrGFP转入人MSCs(UE7T-13细胞)内,用流式细胞分析法检测及分选后,收集hrGFP阳性的UE7T-13细胞进行扩增。体外成肝诱导一周后,免疫荧光染色检测过表达HNF-4α基因的UE7T-13细胞(E7-hHNF-4α细胞)的白蛋白(ALB)和细胞角蛋白(CK18)的表达情况,糖原染色检测UE7T-13细胞及E7-hHNF-4α细胞的糖原储存功能。结果建立稳定、过表达hHNF-4α基因的E7-hHNF-4α细胞,持续过表达HNF-4α促进MSCs向肝样细胞分化,经过7天体外成肝诱导,E7-hHNF-4α细胞具有成熟肝样细胞表达ALB和CK18蛋白及糖原储存功能。结论利用Gateway技术可将HNF-4α高效转导入人MSCs细胞中,并有效促进MSCs向肝样细胞分化。

转4-1BBL基因的小鼠肝癌细胞瘤苗刺激脾细胞产生细胞因子的研究

目的研究转4-1BBL基因的小鼠肝癌细胞瘤苗体外刺激同系小鼠脾细胞产生细胞因子(IL-2、TNF-α和GM-CSF)的能力。方法以丝裂霉素C(MMC)处理高表达转m4-1BBL基因的小鼠Hepa1-6肝癌细胞,制成肿瘤细胞瘤苗(TCV),体外与同系小鼠脾淋巴细胞共同培养后,观察其对脾细胞产生细胞因子(IL-2、TNF-α和GM-CSF)的影响。结果TCV-4-1BBL刺激后,脾细胞体外分泌细胞因子IL-2、TNF-α和GM-CSF的水平明显增高。结论转4-1BBL基因的小鼠肝癌细胞瘤苗能刺激脾细胞产生细胞因子IL-2、TNF-α和GM-CSF。

肝细胞核因子4α与肝细胞癌关系的研究进展

肝细胞核因子4α(HNF4α)是调节肝脏内特异性基因表达的转录因子,在肝细胞发育分化,肝脏脂质、胆固醇代谢及肝脏药物代谢中起重要作用,并且抑制肝脏肿瘤的发生。HNF4α主要通过抑制肿瘤细胞增殖,促进肿瘤细胞分化、凋亡,逆转肝细胞上皮-间质转化等过程,影响肝细胞癌(HCC)的发生发展。本文对HNF4α的来源分布、结构特点、生物学功能及其在HCC发生发展中的作用进行了系统综述,旨在探索HNF4α干预HCC的新思路。

肝细胞核因子-4α启动子基因多态性与江苏地区非肥胖2型糖尿病患者胰岛素分泌相关

目的:研究肝细胞核因子-4α(hepatocyte nuclear factor-4α,HNF-4α)基因的P2启动子区域的2个单核苷酸多态性(SNP)位点rs1884614和rs2144908与2型糖尿病的相关性。方法:收集2型糖尿病患者328例和非糖尿病患者196例,应用Taq Man SNP Genotyping系统进行rs1884614和rs2144908的基因型多态性分析。并分析它们与患者有关临床代谢指标的关系。结果:两组的基因型分布及等位基因频率差异无统计学意义(P>0.05);但在非肥胖(BMI<25 kg/m^2)患者的OGTT检测中,rs1884614 T/T基因型与较小的血浆胰岛素曲线下面积存在相关性(P<0.05)。结论:HNF-4α基因的P2启动子区的SNP rs1884614可能影响江苏地区非肥胖型2型糖尿病患者的胰岛素分泌。

中国人青年发病的成年型糖尿病/2型糖尿病家系葡萄糖激酶和肝细胞核因子-1α基因缺陷的分子筛查

目的 :探索包含青年发病的成年型糖尿病 ( maturity- onset diabetes of the young,MODY)患者的 2型糖尿病家族中可能存在的 MODY基因的致病突变。方法 :选择 MODY基因中突变率最高的葡萄糖激酶 ( glucokinase,GCK,MODY2 )和肝细胞核因子- 1α( hepatic nuclear factor- 1α,HNF- 1α,MODY3 )基因的微卫星多态遗传标志 ,在一个包含 2名 MODY患者的中国人 2型糖尿病家系中进行连锁分析 ,对可能与疾病连锁的基因进行全基因外显子的突变筛查—— DNA序列直接测定以明确具体的碱基突变和所编码的氨基酸的改变。结果 :家系 5 0 0 0 1中 MODY3的最大 L OD( logarithm of odds)值达到 2 .3 75 93 0 (θ=0 .0 0 0 0 0 0 ) ,但未发现与MODY2连锁的依据。 DNA直接测序发现在家系 5 0 0 0 1中所有家族成员 MODY3基因外显子 7中存在一个杂合多态 Ser4 87Asn( AGC/ AAC) ,该多态在正常人中也可见到。结论 :GCK基因内或附近的基因变异不是本家系 2型糖尿病的主要致病原因 ;HNF- 1α基因的启动子和所有外显子内均未发现明确的致病突变 ,但无法否定内含子或其他调节区域的变异有可能的致病倾向 ;也不能排除HNF- 1α基因附近其他未知疾病基因的致病可能。本家系的致病基因有待进一步明确。

妊娠期糖尿病肝细胞核因子1a外显子7基因多态性与血浆胰岛素水平的相关性

目的了解妊娠期糖尿病孕妇肝细胞核因子1a外显子7基因变异与血浆胰岛素水平的相关性。方法分析妊娠期糖尿病与正常人的肝细胞核因子1a外显子7基因变异,测定相应血浆胰岛素水平,统计分析它们之间的关系。结果妊娠期糖尿病孕妇肝细胞核因子1a第7号外显子中密码子459的CTG变为CTA,CTG变为TTG,密码子487位AGC变为AAC。这变化为一种多态性。多态性纯合子的血浆胰岛素水平偏低。结论肝细胞核因子1a外显子7基因多态性纯合子孕妇胰岛素分泌水平偏低,提示HNF-1a外显子7基因的多态性改变可能与妊娠期糖尿病的发病有关系。

丝胶对2型糖尿病大鼠肝脏肝细胞核因子-4α表达的影响

目的研究丝胶对2型糖尿病大鼠肝脏肝细胞核因子(HNF)-4α表达的影响。方法雄性SD大鼠48只随机分为:正常对照组、糖尿病模型组、丝胶治疗组和丝胶预防组,每组12只大鼠。链脲佐菌素连续腹腔注射制作2型糖尿病大鼠模型,待模型成功建立后,模型组大鼠不做任何处理,丝胶治疗组大鼠给予2.4 g·kg-1·d-1的丝胶连续灌胃35 d;丝胶预防组大鼠在链脲佐菌素连续腹腔注射前,给予丝胶(2.4 g·kg-1·d-1)灌胃,时间与丝胶治疗组相同。分别采用Western印迹法和RT-PCR法检测大鼠肝脏HNF-4α蛋白和mRNA的表达。结果与正常对照组大鼠比较,糖尿病模型组大鼠肝脏HNF-4α蛋白和mRNA的表达明显升高(P<0.01);与糖尿病模型组大鼠比较,丝胶治疗组、丝胶预防组大鼠肝脏HNF-4α蛋白和mRNA的表达明显降低(P<0.01)。结论丝胶改善糖代谢的作用可能与其调节肝脏HNF-4α的表达有关。

非酒精性脂肪性肝病大鼠肝脏肝细胞核因子-4α的表达

目的:探讨高脂饮食所致大鼠非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)肝细胞核因子4α(HNF-4α)mRNA的表达及在NAFLD发病机制中的作用。方法:24只Wistar大鼠随机分为模型组和对照组(各12只),通过高脂饮食建立NAFLD大鼠模型,并在造模第8、12周末分批处死大鼠,同期设正常饮食组作为对照组。检测大鼠血清甘油三酯(TG)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、丙氨酸转氨酶(ALT)及内毒素(ET)等指标,测空腹血糖(FBG)、空腹胰岛素(FINS),并计算胰岛素抵抗指数(IRI);采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)技术检测肝脏HNF-4αmRNA的表达;取肝标本做HE染色,观察其病理变化。结果:模型组大鼠肝脏HNF-4αmRNA表达量于第8周时开始降低,与同期对照组比较差异有统计学意义(P<0.05);同时血清TNF-α、IRI及ET与同期对照组相比明显升高(P<0.05),HNF-4α与TNF-α、IRI、ALT、TG及ET均呈负相关(P<0.05)。结论:胰岛素抵抗(IR)可能是NAFLD发生、发展的基础,NAFLD大鼠肝脏HNF-4α可能通过一定机制参与了IR及炎症反应,进而影响了NAFLD的发生、发展。

肝细胞核因子1α基因多态位点与上海地区2型糖尿病相关临床性状的关系

目的肝细胞核因子(HNF)-1α基因单核苷酸多态(SNP)位点可能与2型糖尿病及其相关性状相关,对以往发现的HNF-1α基因6个标签SNP进行糖尿病相关数量性状分析,以进一步探讨其与糖脂代谢及体脂分布的潜在关系。方法245名无亲缘关系的上海地区中国人,包括152例早发/多发糖尿病家系先证者(病例组)及93名糖调节正常者(正常对照组)。采用直接测序或聚合酶链反应(PCR)-限制性片段长度多态性(RFLP)方法检测受试者基因型,并测定所选人群的糖脂代谢及体脂分布指标。对不同基因型亚组间进行标签SNP的单点和单倍型数量性状分析。结果正常对照组中,rs1169294、rs1169301和rs2259820的各基因型亚组间的体质指数(BMI)、腰臀比(WHR)和腰股比(WFR)的差异均有统计学意义(P值均<0.05),且经性别、年龄校正后差异仍有统计学意义(P值均<0.05)。此外,rs1169289的基因型亚组间WFR的差异有统计学意义(P<0.05)。单倍型分析发现,正常对照组中最常见单倍型GCGC携带者的BMI较非GCGC携带者显著降低(P=0.006 5),且经年龄和性别校正后,差异仍有统计学意义(P=0.017 0)。结论HNF-1α多态位点与中国人体脂分布相关。