肝细胞核因子4α和3β在人主要器官中的表达

目的:观察肝细胞核因子4α(Hepatocyte Nuclear Factor 4α,HNF-4α)和HNF-3β在人主要组织器官中的表达情况,为进一步探索这两个因子与慢性乙型肝炎患者HBV复制之间的可能关系提供理论基础．方法:采用免疫组织化学染色方法检测HNF- 4α和HNF-3β在14例尸解标本的主要器官(肝、脑、肺、肾、心、脾、肠、胰腺、胃和甲状腺)中的表达情况．结果:HNF-4α和HNF-3β在10个器官的表达情况不同(HNF-4α:F=22．479,P<0．01;HNF- 3β:F=13．021,P<0．01)．HNF-4α在肝、肾、心、脾和肠中呈高水平表达,在肺和甲状腺呈低水平表达;HNF-3β在肝、肾、心和胰腺中呈高水平表达,在脾、肺、肠和甲状腺中呈低水平表达;HNF-4α和HNF-3β在脑、胃、阑尾、胸腺、肾上腺和扁桃体中均不表达:上述HNF-4α和HNF-3β高表达组和低表达组的表达水平差异有统计学意义(P<0．05),而高表达组各器官之间的表达水平差异无统计学意义(P>0．05)．结论:人体各组织中HNF-4α与HNF-3β的表达水平不同,在肝脏的表达水平较高,这提示二者有可能参与了HBV的组织特异性复制．

肝细胞核因子4α抑制大鼠肝癌细胞增殖、侵袭能力和新生血管生成相关基因表达

目的 :研究肝细胞核因子4α(hepatocyte nuclear factor 4α,HNF4α)在体内、体外实验中与大鼠肝癌新生血管生成相关基因表达之间的相互关系。方法:将过表达HNF4α腺病毒转染CBRH-7919细胞,采用CCK-8法检测细胞增殖效应,Transwell法检测细胞侵袭能力,RT-PCR和Western blot检测血管生成素2(angiopoietin-2,Ang-2)、血管内皮生长因子(vascular endothelial grouth factor,VEGF)的表达情况。体内试验建立肝大部切除模型(70%),分别在残肝上注入CBRH-7919细胞(空白组)或转染空载体腺病毒CBRH-7919细胞(阴性对照组)或转染过表达HNF4α腺病毒的CBRH-7919细胞(实验组)。4周后处死大鼠,通过免疫组化来观察肝标本Ang-2、VEGF的表达情况。结果:转染过表达HNF4α腺病毒的CBRH-7919细胞增殖能力和侵袭能力较空白、阴性对照组均明显抑制(P<0.05);实验组Ang-2、VEGF在基因、蛋白水平表达较空白、阴性对照组均明显抑制(P<0.05)。体内实验大鼠肝脏组织免疫组织化学切片显示实验组Ang-2、VEGF蛋白表达水平较空白、阴性对照组均明显抑制(P<0.05)。结论 :HNF4a可以抑制大鼠肝癌7919的增殖、侵袭能力,并且抑制肝癌新生血管生成相关基因Ang-2、VEGF的表达。

肝细胞核因子4α与肝细胞癌关系的研究进展

肝细胞核因子4α(HNF4α)是调节肝脏内特异性基因表达的转录因子,在肝细胞发育分化,肝脏脂质、胆固醇代谢及肝脏药物代谢中起重要作用,并且抑制肝脏肿瘤的发生。HNF4α主要通过抑制肿瘤细胞增殖,促进肿瘤细胞分化、凋亡,逆转肝细胞上皮-间质转化等过程,影响肝细胞癌(HCC)的发生发展。本文对HNF4α的来源分布、结构特点、生物学功能及其在HCC发生发展中的作用进行了系统综述,旨在探索HNF4α干预HCC的新思路。

肝细胞核因子4α在实验性结肠炎中的表达及意义

目的:通过检测肝细胞核因子4α(HNF4α)在小鼠实验性结肠炎肠组织中表达水平,探讨其在溃疡性结肠炎(UC)发病过程中的作用及意义。方法:分别采用2%和2.5%的葡聚糖硫酸钠(DSS)溶液诱导BALB/c小鼠急性结肠炎模型,以疾病活动指数(DAI)、组织学损伤及炎症细胞因子表达水平评价炎症严重程度。分析HNF4α表达水平与结肠炎严重程度及内皮型钙黏蛋白(E-CAD)、连接黏附分子1(JAM-1)和桥粒糖蛋白2(DSC-2)表达的相关性。结果:与正常对照组相比,DSS处理组小鼠DAI、组织学损伤及炎症因子表达显著增高(P<0.05),结肠黏膜中HNF4α蛋白及mRNA表达显著降低(P<0.01)。相关性分析结果提示HNF4α蛋白表达与DAI及组织学损伤程度呈负相关(P<0.01),HNF4αmRNA表达与E-CAD、JAM-1和DSC-2 mRNA表达呈正相关(P<0.01)。结论:HNF4α表达水平与实验性结肠炎严重程度及细胞间连接蛋白表达密切相关,提示HNF4α低表达可削弱肠道黏膜屏障功能,从而促进UC的发生发展。

过表达肝细胞核因子4α脐带间充质干细胞促进小鼠大部肝切后肝再生

目的：探讨人源性脐带间充质干细胞（UC-MSC）以及过表达肝细胞核因子4α（HNF4α）的UC-MSC能否促进小鼠大部肝切后肝再生。方法体外分离、培养、鉴定人UC-MSC，慢病毒转染过表达HNF4α。体外收集细胞培养上清液，将L02与上清液共培养，通过细胞增殖实验试剂盒（CCK8）检测细胞增殖活性。体内实验建立肝大部切除模型（约70%），分别经尾静脉向肝切除小鼠移植0.9%生理盐水（NS）、MSC、MSC-HNF4α。48h后比较3组肝切后肝再生的变化，通过免疫组化来观察肝标本Ki67的表达。结果成功分离鉴定UC-MSC，并且成功建立稳定过表达HNF4α的MSC。体外实验MSC组和MSC-HNF4α组中L02的增殖能力都明显高于NS组（P＜0.01），MSC组高于MSC-HNF4α组（P＜0.05）。同样体内实验相对于NS组，经MSC或MSC-HNF4α细胞处理的肝脏，其Ki67的表达明显高于NS组（ P＜0.01），同样MSC组高于MSC-HNF4α组（P＜0.05）。结论 UC-MSC和过表达HNF4α的MSC都分泌一系列因子促进肝再生。

肝细胞核因子4α与溃疡性结肠炎

肝细胞核因子4α(HNF4α)是一种细胞特异性转录因子,为细胞核受体超家族成员之一。近年来有研究发现,HNF4α对肠道屏障功能的维持起着重要作用。在炎性反应中HNF4α表达减少可促进其下游炎性因子表达。肠黏膜组织中HNF4α基因表达缺陷可引发慢性自发性结肠炎。进一步研究发现HNF4α与溃疡性结肠炎(UC)发病密切相关,可能成为UC防治的有效靶点。

肝细胞核因子4α基因突变致先天性高胰岛素血症合并Fanconi综合征1例报道

先天性高胰岛素血症血症(congenital hyperinsulinemia,CHI)是由胰岛β细胞持续不适当分泌胰岛素导致的严重低血糖症,其临床特征为婴儿期出现高胰岛素性低血糖,是婴幼儿持续性、频发性低血糖的主要原因。目前已发现多种基因与CHI有关,肝细胞核因子4α(hepatocyte nuclear fator 4 alpha,HNF4α)的基因发生功能缺失性突变引起CHI是CHI的罕见类型。2012年Stanescu DE等[1]首次报道了HNF4αp.R63w基因突变引起的CHI同时合并Fanconi综合征(Fan-coni syndrome,FS),目前仅有16例个案报道[1-8],临床罕见。作为一种临床综合征,高胰岛素性低血糖伴FS是其特征性的表现。现报告1例由该基因突变引起CHI合并FS的患儿临床资料并相关文献复习,以提高临床医生对该病的认识。

PEP-1介导的重组肝细胞核因子4α蛋白转导对肝癌细胞的抑制作用

目的利用细胞穿膜肽PEP-1介导重组肝细胞核因子4α(HNF4α)蛋白进入肝癌细胞,并明确外源融合蛋白PHNF4α对肝癌细胞的作用。方法构建表达质粒pET28a-P-HNF4α,优化原核表达体系的诱导条件,经大量表达、亲和层析纯化及浓缩、透析后获得纯度较高的带有细胞穿膜肽PEP-1的融合蛋白P-HNF4α;P-HNF4α转导人肝癌细胞,蛋白质印迹法检测其穿膜效率,核质分离和细胞免疫荧光检测P-HNF4α的亚细胞定位,Real-time PCR检测肝癌细胞基因表达,CCK-8法检测肝癌细胞增殖,细胞划痕实验及小室侵袭实验检测P-HNF4α对肝癌细胞转移能力的影响。结果细胞穿膜肽PEP-1成功介导融合蛋白P-HNF4α进入Huh7细胞并定位于细胞核;P-HNF4α蛋白可促进Huh7细胞肝功能基因表达,抑制干细胞相关基因表达(P<0.05或0.01),并显著抑制肝癌细胞增殖(P<0.05)、迁移(P<0.001)和侵袭(P<0.05)能力。结论 P-HNF4α可诱导肝癌细胞向成熟肝细胞分化,降低肝癌细胞的恶性程度,是诱导分化治疗肝癌的潜在手段。

基于报告基因系统的肝细胞核因子4α活性检测体系的建立

目的建立一个基于荧光素酶报告基因系统的肝细胞核因子4α(HNF4α)活性检测系统,筛选可调控HNF4α活性的小分子化合物。方法采用亲和层析法纯化HNF4α蛋白,行蛋白热迁移实验检测相关DNA片段及小分子化合物与HNF4α蛋白的直接相互作用。分别构建含有3个拷贝和9个拷贝的Ninjurin1(NINJ1)基因启动子区HNF4α反应元件的荧光素酶报告基因质粒pGL3-NINJ1-3p和pGL3-NINJ1-9p,转染肝癌细胞,采用荧光素酶报告基因法检测肝癌细胞内HNF4α转录活性的改变,qPCR检测小分子化合物木犀草素或阿尔维林处理后肝癌细胞中HNF4α及下游基因的表达情况,荧光素酶报告基因法检测小分子化合物处理后细胞内HNF4α转录活性的改变。结果蛋白热迁移实验证实,NINJ1基因启动子区HNF4α的DNA结合片段可与HNF4α蛋白结合。在过表达HNF4α的肝癌细胞中,pGL3-NINJ1-3p和pGL3-NINJ1-9p均可检测到肝癌细胞中HNF4α活性的改变,且pGL3-NINJ1-9p较pGL3-NINJ1-3p的检测灵敏度更高(P<0.01)。木犀草素和阿尔维林与HNF4α蛋白存在直接相互作用,分别下调和上调HNF4α靶基因;pGL3-NINJ1-9p可检测到木犀草素和阿尔维林对HNF4α转录活性的影响。结论利用报告基因载体pGL3-NINJ1-9p成功建立了HNF4α活性的检测系统,为筛选调控HNF4α活性的小分子化合物等提供了基础工具。

肝细胞核因子4α抑制人肝癌细胞株血管内皮生长因子表达和人脐静脉内皮细胞小管形成

背景:肝细胞核因子4α(HNF4α)在肝脏的发育过程中发挥重要作用。研究证实HNF4α与肝细胞癌(HCC)的发生相关。然而HNF4α对人肝癌细胞株血管内皮生长因子(VEGF)表达和人脐静脉内皮细胞(HUVEC)小管形成的调控作用尚不明确。目的:探讨HNF4α对人肝癌细胞株VEGF表达和HUVEC小管形成的影响。方法:构建过表达HNF4α的慢病毒,并转染人肝癌细胞株HepG 2和SMMC-7721(实验组),以转染慢病毒空载体和未转染的细胞分别作为阴性对照组和空白对照组。分别以qRT-PCR、蛋白质印迹法检测HNF4α、VEGF mRNA和蛋白表达。将HUVEC与HepG2和SMMC-7721细胞不含血清的条件培养基共培养,检测小管形成数量。结果:成功构建了过表达HNF4α的HepG2和SMMC-7721稳转株。与阴性对照组和空白对照组相比,实验组HepG 2和SMMC-7721细胞中VEGF mRNA和蛋白表达均明显降低(P<0.05),HUVEC小管形成数量明显减少(P<0.05)。结论:HNF4α能明显抑制人肝癌细胞株中VEGF表达以及HUVEC小管的形成。

肝细胞核因子4α:肝脏疾病研究与治疗的新方向

肝脏是人体内最大的实质性器官,是人体的“化工厂”.肝脏组织60％～ 80％由肝细胞组成,肝细胞通过特异性地表达一系列功能与分化相关基因,为肝脏发挥重要的生物学功能提供保障.肝细胞核因子4α（HNF4α）是细胞核受体超家族成员,在分化成熟的肝细胞中高表达,能与成熟肝脏中12％的基因的启动子结合,对促进正常的肝细胞分化和维护正常的肝细胞生物学功能发挥着重要的调控作用.近年来,人们开始研究HNF4α与各种肝脏疾病间的关系,并且取得了一定的研究成果,为肝脏疾病的进一步研究和临床治疗提供了新的思路.

肝细胞核因子4α在肝脏再生中的研究进展

肝细胞核因子4(HNF4)是从大鼠肝脏中发现的,属类固醇激素受体超家族成员,其DNA结合活性与α1-抗胰蛋白酶、载脂蛋白A1和丙酮酸激酶基因转录调控有关。HNF4α与大鼠肝脏提取物中transthyretin (TTR)和apolipoprotein CⅢ(APOCⅢ)转录所需要的位点结合。在小鼠肝脏发育过程中,HNF4α在胃泌素分泌前的原发性和胚胎外内脏内皮细胞中表达,在肝、胰腺和肠形成初期的上皮细胞中表达。HNF4包括HNF4α、HNF4β、HNF4γ和变异剪切体,与肝脏疾病相关的HNF4分子主要是HNF4α,本研究对HNF4α在肝脏再生中的研究进展综述如下。

肝细胞核因子4α在胃癌中的研究进展

2018年我国最新癌症报告显示,胃癌发病率和死亡率在我国肿瘤中居第2位。胃癌是全球第5大常见癌症,2018年新发病例超过1000000例,其中估计有783000例死亡(相当于全球每12例胃癌病例就有1例死亡),居癌症死亡率的第3位[1]。胃癌的发生是多因素参与、多步骤演变的复杂病理过程,是人口、生活饮食、遗传、感染和环境等因素相互作用的综合结果。尽管本病的全球发病率在下降,但近90%胃癌患者在被诊断时已是进展期,使患者错失最佳手术期。即使患者接受了以外科手术为主的综合治疗,其5年生存率仍低于30%。《中国癌症预防与控制规划纲要(2004—2010)》明确指出癌症的早期预防控制、早期筛查诊断和早期精准治疗是降低癌症发病及提高生存率的主要策略。因此,筛选早期胃癌特有分子靶点对胃癌高危人群进行早期筛查、早期诊断及早期治疗具有重要意义[2],是改变我国胃癌诊治严峻形势的高效可行途径。肝细胞核因子4α(hepatocyte nuclear factor 4α,HNF4α)是细胞核受体之一,是一种高度保守的转录因子,其在促进胃癌发生发展、影响胃癌预后等方面的作用正逐渐受到重视,可能成为胃癌早期诊断及判断预后的重要分子靶点之一。本文就HNF-4α与胃癌致病因素、癌前病变、病情进展、侵袭转移及诊断预后方面的研究进展作一综述。

肝细胞核因子4α在胃癌中的作用

肝细胞核因子4α(hepatocyte nuclear factor 4α,HNF-4α)是核受体超家族中成员之一,近年来研究发现,HNF-4α及其相关信号通路与胃癌的发生、发展高度相关,有望成为胃癌新的治疗靶点。本文就HNF-4α的组织特异性及其在胃癌发生、发展过程中HNF-4α相关信号通路:AMPKα—HNF-4α信号通路、NF-κB—HNF-4α信号通路、HNF-4α—Wnt/β-catenin信号通路作一概述,旨在明确胃癌的发病机制,同时为胃癌的靶向治疗提供新思路。

肝细胞核因子4α在肝脏疾病发生发展中的作用

肝细胞核因子(HNF)4α属于细胞核受体超家族成员,在分化成熟的肝细胞中高表达。HNF4α在转录水平上调控肝脏特异基因的表达,促进肝细胞的发育和分化,参与肝细胞极性的建立和维持,增强肝脏的合成、代谢以及解毒功能。HNF4α可通过抑制肝星状细胞的活化、逆转上皮间质细胞转化、抑制肝癌细胞增殖、侵袭和转移等机制,参与肝纤维化、肝硬化、肝细胞癌等疾病的发生和变化过程。阐述了HNF4α的生物学功能,对其参与多种主要肝脏疾病信号通路机制的研究进展进行了分析总结,旨在为进一步发掘这一潜在的肝脏疾病靶向治疗途径提供参考。

肝细胞核因子4α抑制胃癌中自噬的作用及其机制

目的探讨肝细胞核因子4α(HNF4A)对胃癌(GC)细胞自噬的调控作用及机制。方法人GC细胞株AGS(CRL-1739)、HGC-27(CL-0107)购自美国典型培养物保藏中心,GC细胞株分为空载体对照组、HNF4A过表达组、随机干扰组、HNF4A干扰组,筛选稳定过表达/敲低HNF4A的亚克隆细胞株;采用实时荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)、蛋白质印迹法(Western blot)检测GC细胞中HNF4A的转录水平和蛋白表达变化;通过JASPAR分析寻找胃癌中HNF4A潜在靶基因;荧光成像检测细胞自噬通量变化;软琼脂克隆形成和基质胶侵袭检测细胞增殖及侵袭能力,组间比较采用t检验。结果稳定过表达/敲低HNF4A的亚克隆细胞株,HNF4A组表达指标高于空载对照组(3.56±0.03比1.00±0.04,t=25.62,P<0.05),敲低HNF4A组表达指标低于随机干扰组(0.27±0.04比1.00±0.03,t=21.53,P<0.05)。HNF4A过表达组自噬相关蛋白5(ATG5,2.54±0.11比1.00±0.03,t=41.70,P<0.05)和自噬相关蛋白12(ATG12,3.14±0.03比1.00±0.02,t=24.72,P<0.05)表达指标,克隆形成数指标(386.00±14.42比144.00±11.14,t=23.00,P<0.05)和侵袭细胞数指标(391.70±9.50比144±11.14,t=29.30,P<0.05)均高于空载对照组;相反,HNF4A干扰组ATG5(0.28±0.05比1.00±0.02,t=20.32,P<0.05)和ATG12(0.31±0.07比1.00±0.05,t=18.93,P<0.05)表达指标,克隆形成数指标(50.00±5.57比136.00±10.15,t=12.87,P<0.05)和侵袭细胞数指标(45.00±11.00比150.30±13.58,t=10.44,P<0.05)均低于随机干扰组。结论转录因子HNF4A调控自噬相关基因ATG5和ATG12表达,促进胃癌细胞自噬。

肝细胞核因子4α在肝脏疾病中的作用及调控机制

肝细胞核因子4α(HNF4α)是核受体超家族的一员,调控多种肝脏特异性基因的表达,在肝脏的生长、发育和代谢过程中起着非常重要的作用。近年研究发现,HNF4α在各种肝脏疾病中均存在表达变化,在肝脏疾病的发生、发展过程中处于转录调控网络的中心节点,上调HNF4α表达可显著缓解慢性肝病进程并抑制甚至逆转肝脏肿瘤的进展。本文对HNF4α在肝脏疾病中的作用及其调控机制进行了总结。

肝细胞核因子4α基因突变导致年轻的成年发病型糖尿病一例报道

16岁男性DM患者体型匀称,无DM家族史。基因测序发现先证者及父HNF-4α基因第5外显子发生无义突变(c.580C>T)。起病年轻DM患者临床表现不符合典型T1DM、T2DM,需考虑单基因DM,必要时进行基因检测。

过表达肝细胞核因子4alpha对人骨髓间充质干细胞向肝样细胞分化的作用

目的应用转基因技术将肝细胞核因子4alpha(HNF-4α)转导入人骨髓间充质干细胞(MSCs)内,使其连续过表达HNF-4α并促进MSCs向肝样细胞分化。方法 HNF-4α基因通过慢病毒表达载体pLV/Final-puro-hHNF4α-hrGFP转入人MSCs(UE7T-13细胞)内,用流式细胞分析法检测及分选后,收集hrGFP阳性的UE7T-13细胞进行扩增。体外成肝诱导一周后,免疫荧光染色检测过表达HNF-4α基因的UE7T-13细胞(E7-hHNF-4α细胞)的白蛋白(ALB)和细胞角蛋白(CK18)的表达情况,糖原染色检测UE7T-13细胞及E7-hHNF-4α细胞的糖原储存功能。结果建立稳定、过表达hHNF-4α基因的E7-hHNF-4α细胞,持续过表达HNF-4α促进MSCs向肝样细胞分化,经过7天体外成肝诱导,E7-hHNF-4α细胞具有成熟肝样细胞表达ALB和CK18蛋白及糖原储存功能。结论利用Gateway技术可将HNF-4α高效转导入人MSCs细胞中,并有效促进MSCs向肝样细胞分化。