调控HNF4α诱导肝细胞癌分化的机制进展

肝细胞核因子4α(HNF4α)是诱导肝细胞癌(HCC)分化中重要的开关因子,HNF4α甚至可重编程肝癌细胞为肝样细胞。在此过程中,调控HNF4α的上游因子有肝细胞核因子6等转录因子。另外,非编码RNA对HNF4α的调控也很重要。此外,去甲基化酶1011易位甲基胞嘧啶双加氧酶-1会诱导HNF4α启动子的去甲基化,启动HCC分化,抑制精氨酸甲基转移酶5也有类似的效果。本文将近年来在诱导肝细胞癌分化过程中激活HNF4α基因、非编码RNA及去甲基化修饰及相关通路等研究加以综述。

血清KLF5和actinin-4水平与肝细胞肝癌肝动脉化疗栓塞术治疗预后的关系

目的探讨血清Krüpple样因子5(KLF5)、辅肌动蛋白4(actinin-4)对肝细胞肝癌(HCC)肝动脉化疗栓塞术(TACE)治疗预后的关系。方法选取西安交通大学第二附属医院2015年3月至2020年3月期间收治的130例HCC患者作为HCC组,同期收治的86例肝硬化患者作为对照。术后随访3年,根据生存结局分为生存组(n=38)和死亡组(n=92)。采用ELISA检测各组血清KLF5和actinin-4水平,并分析血清KLF5与actinin-4水平之间的相关性;Cox回归分析HCC患者预后死亡的影响因素;受试者工作特征曲线(ROC)评估血清KLF5和actinin-4水平对HCC患者预后死亡的预测价值。结果死亡组患者血清KLF5和actinin-4水平明显高于生存组(P<0.05),且血清KLF5与actinin-4水平呈正相关(P<0.001);低分化、中国肝癌分期方案(CNLC)分期为Ⅲa期、血管侵犯、KLF5和actinin-4水平升高是HCC患者预后死亡的危险因素(P<0.05);血清KLF5和actinin-4单独及联合预测HCC患者预后死亡的曲线下面积(AUC)分别为0.835、0.866、0.936,联合预测效果较高(Z二者联合-KLF5=2.792,P=0.005,Z二者联合-actinin-4=2.014,P=0.044)。结论HCC患者血清KLF5和actinin-4水平升高,二者血清水平对预后具有较高预测价值。

红花清肝十三味丸通过激活HNF4α改善肝功能的保肝机制研究

[目的]探讨红花清肝十三味丸(HHQG)通过激活肝细胞核因子4α(hepatocyte nuclear factor 4α,HNF4α)改善肝功能的保肝作用机理。[方法]将45只C57BL/6J小鼠随机分为对照组、CCl_(4)损伤组、HHQG组,每组15只;HHQG组小鼠灌胃剂量为0.6165 g/(kg·BW)的HHQG,每天1次,持续7 d,对照组和CCl_(4)损伤组灌胃等体积的无菌蒸馏水;末次灌胃4 h后,对照组小鼠腹腔注射剂量为5 mL/(kg·BW)的橄榄油,CCl_(4)损伤组和HHQG组小鼠腹腔注射相同剂量的CCl_(4)与橄榄油混合液(CCl_(4)∶橄榄油=1∶4,V/V)进行肝损伤造模;分别在造模后第2、5、7天采集各组小鼠血液及肝脏组织样本;记录各组小鼠在试验期间的体重;测定血清谷草转氨酶(AST)、谷丙转氨酶(ALT)及总超氧化物歧化酶(SOD)活力;采用HE染色法及Masson染色法观察肝脏病理组织学变化;应用转录组测序(RNA-seq)技术分析差异基因富集通路;利用免疫组织化学技术检测HNF4α蛋白的表达情况。[结果]与对照组相比,在造模后第1~4天以及第6~7天,CCl_(4)损伤组小鼠体重显著(P<0.05)或极显著(P<0.01或P<0.001)降低;与CCl_(4)损伤组相比,在造模后第4天以及第6~7天,HHQG组小鼠体重显著(P<0.05)或极显著(P<0.01)增加。与对照组相比,在造模后第2天,CCl_(4)损伤组小鼠血清ALT和AST活力极显著(P<0.001)升高;与CCl_(4)损伤组相比,在造模后第2天,HHQG组小鼠血清ALT和AST活力显著(P<0.05)降低。HE染色及Masson染色观察结果显示,在造模后第2、5、7天,与CCl_(4)损伤组相比,HHQG组小鼠肝脏组织损伤程度明显改善。KEGG信号通路富集分析表明,与CCl_(4)损伤组相比,HHQG组小鼠肝脏组织中过氧化物酶体增殖物激活受体、脂肪酸降解、脂肪酸代谢等信号通路上调,核糖体、甘油磷脂代谢、甲状腺癌症等信号通路下调。与CCl_(4)损伤组相比,HHQG组小鼠肝脏组织中与肝脏分化相关的基因群(HNF4α、ATF5、Cebpb等)显著上调。免疫组织化学分析显示,与CCl_(4)损伤组相比,在造模后第2、5天,HHQG组小鼠肝脏组织中HNF4α表达量明显增加。[结论]HHQG通过激活HNF4α,抑制肝脏氧化损伤、促进肝脏组织修复以及维持肝脏功能,改善小鼠肝损伤,从而发挥保肝效应。

Toll样受体4/核因子-κB p65通路对轮状病毒肠炎患儿肝损害的影响

目的探讨轮状病毒(RV)肠炎患儿Toll样受体4(TLR4)/核因子-κB(NF-κB)p56通路对肝损害的影响。方法选取50例RV肠炎患儿为RV组,另选取同期50例RV感染阴性的肠炎患儿为对照组。采用全自动生化分析仪检测患儿肝功能指标谷草转氨酶(AST)和谷丙转氨酶(ALT)水平。采用聚合酶链式反应(PCR)检测外周血单核细胞(PMBC)的TLR4 mRNA、NF-κB mRNA表达;采用蛋白质印迹法检测NF-κB p65蛋白表达水平。比较2组患儿血清AST、ALT水平和肝损害发生率。比较2组患儿PMBC的TLR4 mRNA、NF-κB mRNA和NF-κB p65蛋白表达。比较RV组中伴肝损害患儿和无肝损害患儿PMBC的TLR4 mRNA、NF-κB mRNA和NF-κB p65蛋白表达水平。采用Pearson相关分析法分析RV肠炎患儿肝功能与TLR4/NF-κB p65通路的相关性。结果RV组患儿血清AST、ALT水平及肝损伤发生率高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。RV组患儿PBMC的TLR4 mRNA、NF-κB mRNA和NF-κB p65蛋白表达高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。RV组中,伴肝损害患儿PBMC的TLR4 mRNA、NF-κB mRNA和NF-κB p65蛋白表达高于无肝损害患儿,差异有统计学意义(P<0.05)。RV肠炎患儿血清AST、ALT与TLR4 mRNA、NF-κB mRNA和NF-κB p65蛋白表达呈正相关(P<0.05)。结论RV肠炎患儿肝损害发生率较高,且与TLR4/NF-κB p65通路相关。TLR4/NF-κB p65通路过度激活可能是RV肠炎患儿发生肝损害的原因之一。

三叶香茶菜含药血清对肝细胞TLR4/NF-κB/NLRP3信号通路的影响

目的研究三叶香茶菜含药血清对大鼠原代肝细胞的Toll样受体4/核转录因子-κB/NOD样受体热蛋白结构域相关蛋白3(TLR4/NF-κB/NLRP3)信号通路的影响。方法将脂多糖(LPS)诱导的肝细胞分为A~G组7个组,采用MTT比色法检测肝细胞增殖,生化法检测肝细胞中谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)的含量;ELISA法测定肝细胞白介素-1β(IL-1β)、IL-18、caspase-1。通过RT-PCR、Western blotting或免疫荧光法检测检测肝细胞TLR4、p-IκB-α、NF-κB、IκB-α、NLRP3、GSDMD、ASC的mRNA和蛋白表达。结果三叶香茶菜含药血清对肝细胞的增殖具有抑制作用,并能有效减少肝细胞中ALT、AST、caspase-1、IL-1β、IL-18的分泌;此外,还能明显降低TLR4、NF-κB p65、NLRP3、ASC以及GSDMD等炎症相关蛋白表达,同时上调IκB-α的表达。结论三叶香茶菜通过下调TLR4/NF-κB/NLRP3活化,有效阻止肝细胞的过度活化,减少肝细胞炎性因子的释放,从而改善肝细胞炎症损伤状况。

糖尿病小鼠肾小管上皮细胞HNF4A和MUCDHL下调促进肾纤维化

目的:探索肝细胞核因子4α(HNF4A)和μ-原钙黏蛋白(MUCDHL)在糖尿病小鼠肾脏中的作用和联系。方法:(1)选取12周龄的db/m小鼠和db/db小鼠各6只,正常饮食喂养至16周,Western blot检测肾组织纤维连接蛋白(FN)、Ⅲ型胶原(Col-Ⅲ)、上皮钙黏素(E-cadherin)、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、HNF4A、Snail和MUCDHL的蛋白水平,免疫组织化学染色观察FN、HNF4A和MUCDHL蛋白的表达及分布情况。(2)体外培养小鼠肾小管上皮细胞(mRTEC),分为正常糖(NG)组、高糖(HG)组、过表达对照组(NG+vector组和HG+vector组)、过表达组(NG+OE-MUCDHL组、HG+OE-MUCDHL组、NG+OE-HNF4A组和HG+OE-HNF4A组)、敲减对照组(NG+control组和HG+control组)和敲减组(NG+si-MUCDHL组、HG+si-MUCDHL组、NG+si-HNF4A组和HG+si-HNF4A组),Western blot检测相关指标的蛋白水平。结果:(1)与db/m组相比,db/db组体重、血糖和尿白蛋白/肌酐比值均显著升高(P<0.05),提示db/db小鼠有明显肾损伤;与db/m组相比,db/db组FN、Col-Ⅲ、α-SMA和Snail蛋白表达升高,E-cadherin、HNF4A和MUCDHL蛋白表达降低(P<0.05);MUCDHL主要表达在肾小管上皮细胞顶端膜,FN主要表达在肾小管间质,HNF4A主要表达在肾小管细胞浆和细胞核。(2)与NG组相比,HG组FN、Col-Ⅲ、α-SMA和Snail蛋白表达升高,E-cadherin、HNF4A和MUCDHL蛋白表达降低(P<0.05);过表达MUCDHL后FN、Col-Ⅲ、α-SMA和Snail蛋白表达降低,E-cadherin和MUCDHL蛋白表达升高(P<0.05),HNF4A表达不变;敲减MUCDHL后相关指标表达与上述效应相反(P<0.05),HNF4A表达不变;过表达HNF4A可使MUCDHL表达增加,其余指标的表达变化与过表达MUCDHL一致;敲减HNF4A表达可使上述效应反转(P<0.05);MUCDHL可能是HNF4A的下游靶基因。结论:HNF4A和MUCDHL在糖尿病小鼠肾小管中表达降低。HNF4A可能通过上调MUCDHL的表达延缓糖尿病肾病肾纤维化进程。

USP10对KLF4蛋白的调控及对肝细胞癌侵袭的影响

目的探究泛素特异蛋白酶10(USP10)对肝细胞癌(HCC)中Krüppe样因子4(KLF4)蛋白的调控及对HCC细胞增殖与侵袭的影响。方法采用Western blot实验检测USP10和KLF4在人正常肝细胞系L02和HCC细胞系HepG2、HUH7、HCCLM3等中的表达差异。选取HCCLM3和HUH7细胞,将过表达或沉默USP10的慢病毒颗粒(oe-USP10或sh-USP10)转染入细胞中,并将其记为oe-USP10组和oe-NC组。免疫共沉淀(Co-IP)实验检测HCCLM3或HUH7细胞中USP10是否可与KLF4直接结合。加入蛋白酶体抑制剂MG132,再次使用Co-IP检测转染oe-USP10或sh-USP10的HCCLM3和HUH7细胞中KLF4蛋白的泛素化水平。将过表达KLF4的pcDNA3.1载体质粒及其阴性对照质粒(pc-KLF4或pc-NC)共转染入HCCLM3和HUH7的sh-USP10组或sh-NC组细胞中,并将细胞记为sh-NC+pc-NC组、sh-USP10+pc-NC组、sh-NC+pc-KLF4组和sh-USP10+pc-KLF4组,采用CCK-8法检测HCCLM3和HUH7中各组细胞的增殖活力,Transwell实验检测各组细胞的侵袭能力。结果与L02细胞比较,USP10和KLF4在HepG2、HUH7、HCCLM3等细胞中蛋白表达均降低(P<0.05)。在HCCLM3和HUH7细胞中,USP10蛋白可直接与KLF4相互结合。同时,MG132处理后,HCCLM3和HUH7细胞中KLF4蛋白表达量呈时间依赖性增加。沉默USP10可增加HCCLM3与HUH7细胞中KLF4的泛素化,过表达USP10可降低上述细胞中KLF4的泛素化水平。与sh-NC+pc-NC组比较,sh-USP10+pc-NC组中HCCLM3和HUH7的增殖和侵袭能力均升高(P<0.01),而sh-NC+pc-KLF4组和sh-USP10+pc-KLF4组的HCCLM3或HUH7细胞增殖和侵袭能力均降低(P<0.05);与sh-USP10+pc-NC组比较,sh-USP10+pc-KLF4组细胞的增殖和侵袭能力均降低(P<0.05)。结论在HCC细胞中USP10通过去泛素化促进KLF4蛋白稳定性,进而抑制肿瘤细胞的增殖与侵袭。

肝细胞肝癌组织中WDR4和EIF2A的表达及临床预后价值

目的探讨肝细胞肝癌(HCC)组织中WD重复结构域4(WDR4)、真核翻译起始因子2A(EIF2A)的表达情况及临床预后意义。方法收集2019年1月—2020年1月南京大学医学院附属金陵医院收治的90例HCC患者的临床资料。利用R语言(4.2.1版本)分析癌症基因组图谱(TCGA)数据库下载的327对HCC癌组织和癌旁组织中WDR4 mRNA、EIF2A mRNA表达的转录组测序数据。免疫组织化学检测HCC癌组织、癌旁组织中WDR4、EIF2A表达。分析HCC癌组织WDR4、EIF2A表达与临床病理特征的关系。Kaplan-Meier法分析WDR4、EIF2A表达对HCC患者预后的影响。Cox回归模型分析HCC预后的影响因素。结果HCC癌组织WDR4 mR-NA、EIF2A mRNA表达高于癌旁组织,差异有统计学意义(P均<0.05)。HCC癌组织中WDR4、EIF2A表达阳性率高于癌旁组织,差异有统计学意义(P均<0.05)。HCC癌组织WDR4 mRNA与EIF2A mRNA表达呈正相关(r=0.404,P<0.001)。HCC癌组织中WDR4蛋白与EIF2A蛋白表达呈正相关(r=0.667,P<0.05)。肿瘤最大径>5 cm、TNM分期Ⅲ期及浸润型HCC癌组织中WDR4、EIF2A阳性率分别高于肿瘤最大径≤5 cm、TNM分期Ⅰ-Ⅱ期及非浸润型癌组织,差异有统计学意义(P均<0.05)。WDR4阳性组3年累积生存率明显低于WDR4阴性组,差异有统计学意义(P=0.016)。EIF2A阳性组3年累积生存率明显低于EIF2A阴性组,差异有统计学意义(P=0.022)。肿瘤TNM分期Ⅲ期、肿瘤最大径>5 cm、WDR4阳性、EIF2A阳性是HCC患者不良预后的独立危险因素。结论HCC组织中WDR4、EIF2A表达升高,两者与HCC不良临床病理特征有关,是评估HCC预后的肿瘤标志物。

急性药物性肝损伤患者血清核因子E2相关因子2、血红素加氧酶-1、脂肪酸结合蛋白4、缺氧诱导因子1α表达意义及其与肝功能指标相关性研究

目的:探讨急性药物性肝损伤患者血清核因子E2相关因子2(Nrf2)、血红素加氧酶-1(HO-1)、脂肪酸结合蛋白4(FABP4)、缺氧诱导因子1α(HIF-1α)表达意义及其与肝功能指标的相关性。方法:回顾性选取62例急性药物性肝损伤患者的临床资料作为病例组,另选80例健康体检者的临床资料作为对照组。比较两组血清Nrf2、HO-1、FABP4、HIF-1α及肝功能指标水平,用Pearson相关性分析急性药物性肝损伤患者血清Nrf2、HO-1、FABP4、HIF-1α水平与肝功能的相关性,并绘制受试者工作特征曲线(ROC)分析血清Nrf2、HO-1、FABP4、HIF-1α水平联合检测对急性药物性肝损伤的诊断价值。结果:病例组血清Nrf2、HO-1、FABP4、HIF-1α及谷丙转氨酶(ALT)、碱性磷酸酶(ALP)、谷草转氨酶(AST)、谷氨酰转移酶(GGT)、总胆红素(TBIL)水平高于对照组(均P<0.05)。Pearson相关性分析结果显示,急性药物性肝损伤患者血清Nrf2水平与血清ALT、AST、TBIL水平呈负相关(r=-0.763、-0.741、-0.685,均P<0.05);血清HO-1水平与血清ALT、AST、TBIL水平呈负相关(r=-0.489、-0.524、-0.568,均P<0.05);血清FABP4水平与血清AST、TBIL水平呈正相关(r=0.509、0.512,均P<0.05);血清HIF-1α水平与血清ALT、AST、TBIL水平呈正相关(r=0.527、0.486、0.542,均P<0.05)。ROC曲线分析结果显示,血清Nrf2、HO-1、FABP4、HIF-1α水平联合检测诊断急性药物性肝损伤的曲线下面积(AUC)值为0.919,高于血清Nrf2、HO-1、FABP4、HIF-1α水平单独检测(0.787、0.822、0.824、0.772,均P<0.05)。结论:血清Nrf2、HO-1、FABP4、HIF-1α在急性药物性肝损伤患者中呈高表达,其表达水平与患者肝功能损伤有关,且四者联合检测对急性药物性肝损伤的诊断价值更高。

肝细胞核因子4α和3β在人主要器官中的表达

目的:观察肝细胞核因子4α(Hepatocyte Nuclear Factor 4α,HNF-4α)和HNF-3β在人主要组织器官中的表达情况,为进一步探索这两个因子与慢性乙型肝炎患者HBV复制之间的可能关系提供理论基础．方法:采用免疫组织化学染色方法检测HNF- 4α和HNF-3β在14例尸解标本的主要器官(肝、脑、肺、肾、心、脾、肠、胰腺、胃和甲状腺)中的表达情况．结果:HNF-4α和HNF-3β在10个器官的表达情况不同(HNF-4α:F=22．479,P<0．01;HNF- 3β:F=13．021,P<0．01)．HNF-4α在肝、肾、心、脾和肠中呈高水平表达,在肺和甲状腺呈低水平表达;HNF-3β在肝、肾、心和胰腺中呈高水平表达,在脾、肺、肠和甲状腺中呈低水平表达;HNF-4α和HNF-3β在脑、胃、阑尾、胸腺、肾上腺和扁桃体中均不表达:上述HNF-4α和HNF-3β高表达组和低表达组的表达水平差异有统计学意义(P<0．05),而高表达组各器官之间的表达水平差异无统计学意义(P>0．05)．结论:人体各组织中HNF-4α与HNF-3β的表达水平不同,在肝脏的表达水平较高,这提示二者有可能参与了HBV的组织特异性复制．

肝细胞核因子4α抑制大鼠肝癌细胞增殖、侵袭能力和新生血管生成相关基因表达

目的 :研究肝细胞核因子4α(hepatocyte nuclear factor 4α,HNF4α)在体内、体外实验中与大鼠肝癌新生血管生成相关基因表达之间的相互关系。方法:将过表达HNF4α腺病毒转染CBRH-7919细胞,采用CCK-8法检测细胞增殖效应,Transwell法检测细胞侵袭能力,RT-PCR和Western blot检测血管生成素2(angiopoietin-2,Ang-2)、血管内皮生长因子(vascular endothelial grouth factor,VEGF)的表达情况。体内试验建立肝大部切除模型(70%),分别在残肝上注入CBRH-7919细胞(空白组)或转染空载体腺病毒CBRH-7919细胞(阴性对照组)或转染过表达HNF4α腺病毒的CBRH-7919细胞(实验组)。4周后处死大鼠,通过免疫组化来观察肝标本Ang-2、VEGF的表达情况。结果:转染过表达HNF4α腺病毒的CBRH-7919细胞增殖能力和侵袭能力较空白、阴性对照组均明显抑制(P<0.05);实验组Ang-2、VEGF在基因、蛋白水平表达较空白、阴性对照组均明显抑制(P<0.05)。体内实验大鼠肝脏组织免疫组织化学切片显示实验组Ang-2、VEGF蛋白表达水平较空白、阴性对照组均明显抑制(P<0.05)。结论 :HNF4a可以抑制大鼠肝癌7919的增殖、侵袭能力,并且抑制肝癌新生血管生成相关基因Ang-2、VEGF的表达。

大鼠肝再生的肝细胞凋亡中Kruppel样因子4 mRNA、微小RNA-881-3p、环状RNA_20298和环状RNA_14826的表达变化与作用

目的 了解大鼠肝再生(LR)0 h和120 h时Kruppel样因子4(KLF4)基因及其mRNA相互作用的微小RNA(miRNA)和环状RNA(circRNA)的表达变化、相互作用和调节肝细胞凋亡的途径与方式。方法 按Higgins等方法制备大鼠2/3肝切除(PH)模型,按Smedsrod等方法分离肝细胞,用大规模定量检测技术测定大鼠肝再生中肝细胞的mRNA、miRNA和circRNA合称内源竞争RNA(ceRNA)表达变化,用Cytoscape 3.2软件构建ceRNA的相互作用网络,用ceRNA综合分析等方法解析它们的表达相关性和作用相关性。结果 PH后0 h和120 h时,KLF4 mRNA的比值为1.00±0.16和3.14±0.27,miR-881-3p为18.30±1.44和0.47±0.02,circRNA_20298为0.32±0.10和4.24±0.22,circRNA_14826为0.42±0.13和0.61±0.08。同时,PH后0 h时,KLF4促进的肾上腺素受体β 2(ADRB2)、二甲基精氨酸二甲基氨基水解酶2(DDAH2)、膜联蛋白A5(ANXA5)等4个细胞凋亡相关基因表达下调,抑制的细胞凋亡相关基因突触核蛋白γ(synuclein gamma, SNCG)、谷胱甘肽二硫化物还原酶(GSR)、FYVE、RhoGEF和PH结构域包含4(FGD4)表达上调。PH后120 h时,KLF4促进的细胞凋亡相关基因ANXA5和胸腺素beta 10(TMSB10)表达上调,抑制的细胞凋亡相关基因氯化物细胞内通道4(CLIC4)和紫杉素3(ATXN3)表达下调。结论 上述circRNA抑制的miRNA、miRNA抑制的KLF4 mRNA以及KLF4调节的细胞凋亡相关基因的表达相关性和作用相关性有利于PH后0 h时肝细胞保持活性状态和PH后120 h时肝细胞处于凋亡状态。

肝细胞生长因子对CCl_(4)致肝细胞损伤相关炎性因子的影响

目的:探究肝细胞生长因子(hepatocyte growth factor,HGF)对CCl_(4)所致小鼠肝脏损伤IL⁃8、TNF⁃α、IL⁃4、IL⁃21表达水平的影响。方法:建立CCl_(4)急性肝损伤小鼠模型,通过梯度密度离心分离肝实质细胞及白细胞,体外加入不同浓度HGF,ELISA检测细胞因子表达水平。结果:体内损伤模型中,肝实质细胞实验结果显示,10 ng/mL HGF组与损伤肝细胞组相比IL⁃8表达水平降低(P<0.05),50 ng/mL HGF组与10 ng/mL HGF组相比IL⁃8表达水平升高(P<0.05);与损伤肝细胞组相比,25 ng/mL HGF组(P<0.05),50 ng/mL HGF组(P<0.05)IL⁃4表达水平均降低。白细胞实验结果显示,与损伤白细胞组相比,10 ng/mL HGF组(P<0.05)、25 ng/mL HGF组(P<0.05)TNF⁃α表达水平均降低。体外损伤模型中,肝实质细胞实验结果显示,与正常对照组相比,25 ng/mL HGF组(P<0.05)、50 ng/mL HGF组(P<0.05)TNF⁃α表达水平均降低;25 ng/mL HGF组与正常对照组相比IL⁃4表达水平降低(P<0.05)。白细胞实验结果显示,50 ng/mL HGF组与10 ng/mL HGF组相比TNF⁃α表达水平升高(P<0.001);与正常对照组相比CCl_(4)模型组(P<0.05)、10 ng/mL HGF组(P<0.05)、25 ng/mL HGF组(P<0.05)、50 ng/mL HGF组(P<0.05)IL⁃21表达水平均降低。结论:CCl_(4)致小鼠肝脏急性受损时,HGF可降低肝实质细胞分泌炎性因子IL⁃8,TNF⁃α,IL⁃4以及肝脏白细胞TNF⁃α的表达水平。

过表达肝细胞核因子4alpha对人骨髓间充质干细胞向肝样细胞分化的作用

目的应用转基因技术将肝细胞核因子4alpha(HNF-4α)转导入人骨髓间充质干细胞(MSCs)内,使其连续过表达HNF-4α并促进MSCs向肝样细胞分化。方法 HNF-4α基因通过慢病毒表达载体pLV/Final-puro-hHNF4α-hrGFP转入人MSCs(UE7T-13细胞)内,用流式细胞分析法检测及分选后,收集hrGFP阳性的UE7T-13细胞进行扩增。体外成肝诱导一周后,免疫荧光染色检测过表达HNF-4α基因的UE7T-13细胞(E7-hHNF-4α细胞)的白蛋白(ALB)和细胞角蛋白(CK18)的表达情况,糖原染色检测UE7T-13细胞及E7-hHNF-4α细胞的糖原储存功能。结果建立稳定、过表达hHNF-4α基因的E7-hHNF-4α细胞,持续过表达HNF-4α促进MSCs向肝样细胞分化,经过7天体外成肝诱导,E7-hHNF-4α细胞具有成熟肝样细胞表达ALB和CK18蛋白及糖原储存功能。结论利用Gateway技术可将HNF-4α高效转导入人MSCs细胞中,并有效促进MSCs向肝样细胞分化。

肝细胞核因子-4α启动子基因多态性与江苏地区非肥胖2型糖尿病患者胰岛素分泌相关

目的:研究肝细胞核因子-4α(hepatocyte nuclear factor-4α,HNF-4α)基因的P2启动子区域的2个单核苷酸多态性(SNP)位点rs1884614和rs2144908与2型糖尿病的相关性。方法:收集2型糖尿病患者328例和非糖尿病患者196例,应用Taq Man SNP Genotyping系统进行rs1884614和rs2144908的基因型多态性分析。并分析它们与患者有关临床代谢指标的关系。结果:两组的基因型分布及等位基因频率差异无统计学意义(P>0.05);但在非肥胖(BMI<25 kg/m^2)患者的OGTT检测中,rs1884614 T/T基因型与较小的血浆胰岛素曲线下面积存在相关性(P<0.05)。结论:HNF-4α基因的P2启动子区的SNP rs1884614可能影响江苏地区非肥胖型2型糖尿病患者的胰岛素分泌。

肝细胞核因子4α与肝细胞癌关系的研究进展

肝细胞核因子4α(HNF4α)是调节肝脏内特异性基因表达的转录因子,在肝细胞发育分化,肝脏脂质、胆固醇代谢及肝脏药物代谢中起重要作用,并且抑制肝脏肿瘤的发生。HNF4α主要通过抑制肿瘤细胞增殖,促进肿瘤细胞分化、凋亡,逆转肝细胞上皮-间质转化等过程,影响肝细胞癌(HCC)的发生发展。本文对HNF4α的来源分布、结构特点、生物学功能及其在HCC发生发展中的作用进行了系统综述,旨在探索HNF4α干预HCC的新思路。

丝胶对2型糖尿病大鼠肝脏肝细胞核因子-4α表达的影响

目的研究丝胶对2型糖尿病大鼠肝脏肝细胞核因子(HNF)-4α表达的影响。方法雄性SD大鼠48只随机分为:正常对照组、糖尿病模型组、丝胶治疗组和丝胶预防组,每组12只大鼠。链脲佐菌素连续腹腔注射制作2型糖尿病大鼠模型,待模型成功建立后,模型组大鼠不做任何处理,丝胶治疗组大鼠给予2.4 g·kg-1·d-1的丝胶连续灌胃35 d;丝胶预防组大鼠在链脲佐菌素连续腹腔注射前,给予丝胶(2.4 g·kg-1·d-1)灌胃,时间与丝胶治疗组相同。分别采用Western印迹法和RT-PCR法检测大鼠肝脏HNF-4α蛋白和mRNA的表达。结果与正常对照组大鼠比较,糖尿病模型组大鼠肝脏HNF-4α蛋白和mRNA的表达明显升高(P<0.01);与糖尿病模型组大鼠比较,丝胶治疗组、丝胶预防组大鼠肝脏HNF-4α蛋白和mRNA的表达明显降低(P<0.01)。结论丝胶改善糖代谢的作用可能与其调节肝脏HNF-4α的表达有关。

非酒精性脂肪性肝病大鼠肝脏肝细胞核因子-4α的表达

目的:探讨高脂饮食所致大鼠非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)肝细胞核因子4α(HNF-4α)mRNA的表达及在NAFLD发病机制中的作用。方法:24只Wistar大鼠随机分为模型组和对照组(各12只),通过高脂饮食建立NAFLD大鼠模型,并在造模第8、12周末分批处死大鼠,同期设正常饮食组作为对照组。检测大鼠血清甘油三酯(TG)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、丙氨酸转氨酶(ALT)及内毒素(ET)等指标,测空腹血糖(FBG)、空腹胰岛素(FINS),并计算胰岛素抵抗指数(IRI);采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)技术检测肝脏HNF-4αmRNA的表达;取肝标本做HE染色,观察其病理变化。结果:模型组大鼠肝脏HNF-4αmRNA表达量于第8周时开始降低,与同期对照组比较差异有统计学意义(P<0.05);同时血清TNF-α、IRI及ET与同期对照组相比明显升高(P<0.05),HNF-4α与TNF-α、IRI、ALT、TG及ET均呈负相关(P<0.05)。结论:胰岛素抵抗(IR)可能是NAFLD发生、发展的基础,NAFLD大鼠肝脏HNF-4α可能通过一定机制参与了IR及炎症反应,进而影响了NAFLD的发生、发展。

肝细胞核因子4α在实验性结肠炎中的表达及意义

目的:通过检测肝细胞核因子4α(HNF4α)在小鼠实验性结肠炎肠组织中表达水平,探讨其在溃疡性结肠炎(UC)发病过程中的作用及意义。方法:分别采用2%和2.5%的葡聚糖硫酸钠(DSS)溶液诱导BALB/c小鼠急性结肠炎模型,以疾病活动指数(DAI)、组织学损伤及炎症细胞因子表达水平评价炎症严重程度。分析HNF4α表达水平与结肠炎严重程度及内皮型钙黏蛋白(E-CAD)、连接黏附分子1(JAM-1)和桥粒糖蛋白2(DSC-2)表达的相关性。结果:与正常对照组相比,DSS处理组小鼠DAI、组织学损伤及炎症因子表达显著增高(P<0.05),结肠黏膜中HNF4α蛋白及mRNA表达显著降低(P<0.01)。相关性分析结果提示HNF4α蛋白表达与DAI及组织学损伤程度呈负相关(P<0.01),HNF4αmRNA表达与E-CAD、JAM-1和DSC-2 mRNA表达呈正相关(P<0.01)。结论:HNF4α表达水平与实验性结肠炎严重程度及细胞间连接蛋白表达密切相关,提示HNF4α低表达可削弱肠道黏膜屏障功能,从而促进UC的发生发展。

过表达肝细胞核因子4α脐带间充质干细胞促进小鼠大部肝切后肝再生

目的：探讨人源性脐带间充质干细胞（UC-MSC）以及过表达肝细胞核因子4α（HNF4α）的UC-MSC能否促进小鼠大部肝切后肝再生。方法体外分离、培养、鉴定人UC-MSC，慢病毒转染过表达HNF4α。体外收集细胞培养上清液，将L02与上清液共培养，通过细胞增殖实验试剂盒（CCK8）检测细胞增殖活性。体内实验建立肝大部切除模型（约70%），分别经尾静脉向肝切除小鼠移植0.9%生理盐水（NS）、MSC、MSC-HNF4α。48h后比较3组肝切后肝再生的变化，通过免疫组化来观察肝标本Ki67的表达。结果成功分离鉴定UC-MSC，并且成功建立稳定过表达HNF4α的MSC。体外实验MSC组和MSC-HNF4α组中L02的增殖能力都明显高于NS组（P＜0.01），MSC组高于MSC-HNF4α组（P＜0.05）。同样体内实验相对于NS组，经MSC或MSC-HNF4α细胞处理的肝脏，其Ki67的表达明显高于NS组（ P＜0.01），同样MSC组高于MSC-HNF4α组（P＜0.05）。结论 UC-MSC和过表达HNF4α的MSC都分泌一系列因子促进肝再生。