过表达肝细胞生长因子的内皮祖细胞移植促进坐骨神经挤压伤修复的研究

目的探讨过表达肝细胞生长因子(HGF)慢病毒转染的内皮祖细胞对大鼠坐骨神经损伤的修复作用。方法体外实验方面,提取大鼠骨髓的内皮祖细胞(EPC)并利用DiI-acLDL和FITC-UEA-1双染法进行鉴定。EPC转染慢病毒后采用qRT-PCR实验检测HGF基因表达水平。采用CCK-8实验、Transwell实验以及血管形成实验对转基因EPC的体外功能进行评估。体内实验方面,随机将25只SD大鼠平均分为5组,即对照组(Con组)、正常EPC组(N-EPC组)、空载病毒转染EPC组(LV-NC组)、过表达HGF病毒转染EPC组(LV-HGF组)和假手术组(Sham组)。各组大鼠暴露出右侧坐骨神经后,在坐骨神经分叉处上方10 mm处使用止血钳形成2 mm宽的坐骨神经挤压伤,假手术组在暴露神经后不做处理;分别将转染空载慢病毒EPC、转染过表达HGF慢病毒EPC或正常EPC与基质胶按1∶1体积比混合后注入伤处神经外膜下,而对照组不注入EPC。术后4周,运用Catwalk检测大鼠运动功能的恢复情况,电生理实验检测神经传导功能的恢复情况,透射电镜观察髓鞘厚度,甲苯胺蓝染色观察神经纤维密度,腓肠肌湿重称重检测肌肉萎缩程度,马松染色检测各组手术侧的腓肠肌肌纤维面积。结果体外实验结果显示,与正常EPC组相比,LV-HGF组EPC在CCK8实验中细胞增殖速度更快(P<0.05),Transwell实验中细胞迁移速率更高(P<0.01),在血管形成实验中形成更多血管状结构(P<0.01)。动物实验结果显示,LV-HGF组的坐骨神经功能指数值显著高于其他3组(Con组,P<0.01;N-EPC组,P<0.01;LV-NC组,P<0.01);复合肌肉动作电位波幅更高(Con组,P<0.01;N-EPC组,P<0.05;LV-NC组,P<0.05);再生坐骨神经的髓鞘较厚(Con组,P<0.01;N-EPC组,P<0.01;LV-NC组,P<0.01);有髓神经纤维密度更高(Con组,P<0.01;N-EPC组,P<0.05;LV-NC组,P<0.05);腓肠肌湿重比值更高(Con组,P<0.01;N-EPC组,P<0.01;LV-NC组,P<0.01);肌纤维平均面积较大(Con组,P<0.01;N-EPC组,P<0.05;LV-NC组,P<0.05);LV-HGF组以上实验结果与Sham组相比,差异有统计学意义(P<0.01)。结论过表达HGF基因可以增强EPC的增殖、迁移及分化功能。在坐骨神经挤压伤后,HGF基因转染的EPC相较于正常EPC,能更明显地促进了受损周围神经结构和功能的恢复,其机制与促进受损周围神经的轴突再生及髓鞘形成有关。

腺病毒介导的肝细胞生长因子/血管内皮生长因子165对大鼠超比例随意皮瓣成活的影响及机制研究

目的:观察术前注射腺病毒介导的肝细胞生长因子/血管内皮生长因子165(Ad-HGF/VEGF165)对大鼠超比例随意皮瓣成活的影响和其机制的初步研究。方法:大鼠背部设计超比例随意皮瓣模型,将其随机分为Ad-HGF/VEGF165组、AdVEGF165组和对照组。术前7 d,Ad-HGF/VEGF165组和Ad-VEGF165组分别于大鼠皮瓣及创缘内多点注射Ad-HGF/VEGF165及AdVEGF165,对照组注射等容量0.9%氯化钠注射液。分别于术后7 d、14 d观测皮瓣成活面积,切取皮瓣组织标本HE染色、免疫组化观察微血管密度及组织间VEGF阳性率等指标,WesternBlot检测目的蛋白表达情况。结果:术后7 d、14 d,Ad-HGF/VEGF165组、Ad-VEGF165组皮瓣存活面积、组织间微血管数目、VEGF及细胞外调节蛋白激酶(ERK1/2)蛋白表达情况均高于对照组(P<0.001),且Ad-HGF/VEGF165组明显高于Ad-VEGF165组(P<0.05)。结论:Ad-HGF/VEGF165具有协同作用,能显著促进VEGF和ERK1/2信号因子表达,短期内促进血管网重建,改善皮瓣血液灌注,提高大鼠超比例随意皮瓣成活面积。

非小细胞肺癌患者肝细胞生长因子受体和表皮生长因子受体及间变性淋巴癌激酶基因异常与临床病理特征的关系

目的分析非小细胞肺癌(NSCLC)患者肝细胞生长因子受体(c-Met)、表皮生长因子受体(EGFR)和间变性淋巴癌激酶(ALK)基因异常与临床病理特征的关系。方法回顾性分析2021年1—12月新钢中心医院收治的152例NSCLC患者的临床资料,取患者组织标本,采用荧光原位杂交技术检测c-Met基因扩增情况,采用聚合酶链扩增反应及直接测序法检测EGFR基因突变情况,采用实时荧光定量PCR检测ALK基因重排情况。分析c-Met基因扩增、EGFR基因突变和ALK基因重排与患者临床病理特征的关系。结果152例NSCLC患者中,c-Met基因扩增7例,阳性率为4.61%;EGFR基因突变48例,突变率为31.58%;ALK基因重排8例,重排率为5.26%。c-Met基因扩增阳性与阴性患者、ALK基因重排与无重排患者性别、年龄、临床分期、吸烟史、肿瘤位置、病理类型比较差异无统计学意义。EGFR基因突变与无突变患者性别、年龄、病理类型比较差异有统计学意义(P<0.05),其中EGFR基因突变患者以女性、年龄<70岁、腺癌占比较高。结论c-Met基因扩增及ALK基因重排与患者临床病理特征无关,而EGFR基因突变与患者性别、年龄及病理类型密切相关。

血清肝细胞生长因子和富亮氨酸α2糖蛋白1水平与子痫前期及急性肾损伤的相关性分析

目的探讨血清肝细胞生长因子(HGF)、富亮氨酸α2糖蛋白1(LRG1)水平与子痫前期及急性肾损伤(AKI)的相关性。方法选取延安大学附属医院2020年6月至2022年6月收治的110例子痫前期患者(PE组)和121例妊娠期高血压患者(GH组),另选择51例健康孕妇为对照组。记录受试者血清HGF、LRG1、血尿素氮、血肌酐水平及估算肾小球滤过率(eGFR)。根据是否发生AKI将子痫前期患者分为AKI组和非AKI组。采用Pearson相关性方法分析血清HGF、LRG1与肾功能指标的相关性,多因素Logistic回归模型分析子痫前期患者AKI的影响因素。采用受试者工作特征(ROC)曲线分析血清HGF、LRG1对子痫前期患者发生AKI的预测价值。结果PE组和GH组血清LRG1、血尿素氮、血肌酐水平均高于对照组、且PE组均高于GH组,PE组和GH组血清HGF水平、eGFR均低于对照组、且PE组均低于GH组,差异均有统计学意义(均P<0.05)。110例子痫前期患者中49例发生AKI(AKI组)、61例未发生AKI(非AKI组)。子痫前期患者血清HGF水平与血尿素氮、血肌酐呈负相关(r=-0.420,P<0.001;r=-0.398,P=0.001),与eGFR呈正相关(r=0.547,P<0.001);血清LRG1水平与血尿素氮、血肌酐呈正相关(r=0.416,P<0.001;r=0.502,P<0.001),与eGFR呈负相关(r=-0.685,P<0.001)。多因素Logistic回归分析结果显示,重度子痫前期、LRG1是子痫前期患者发生AKI的独立危险因素(均P<0.05),HGF是独立保护因素(P<0.05)。ROC曲线分析结果显示,HGF、LRG1联合预测的曲线下面积大于二者单独预测(Z=4.339、4.942,均P<0.001)。结论子痫前期患者血清HGF水平降低、LRG1水平升高,低水平HGF和高水平LRG1与患者发生AKI有关。

miR-200b、miR-200c靶向肝细胞生长因子抑制结直肠癌细胞

目的研究miR-200b、miR-200c对肝细胞生长因子进行靶向调节抑制结直肠癌细胞增殖的机制。方法采用生物信息学软件预测和验证miR-200b、miR-200c靶基因,分析miR-200b、miR-200c过表达抑制HGF表达,并分析miR-200b、miR-200c在体外影响结直肠癌细胞增殖活性的情况。结果培养1d、2d、3d,阴性对照模拟物的结直肠癌细胞增殖活性均高于miR-200b模拟物、miR-200c模拟物、miR-200b/c模拟物(P<0.05),阴性对照抑制剂的结直肠癌细胞增殖活性均低于miR-200b抑制剂、miR-200c抑制剂、miR-200b/c抑制剂(P<0.05),miR-200b模拟物、miR-200c模拟物的结直肠癌细胞增殖活性均高于miR-200b/c模拟物(P<0.05),miR-200b抑制剂、miR-200c抑制剂的结直肠癌细胞增殖活性均低于miR-200b/c抑制剂(P<0.05)。结论miR-200b、miR-200c对肝细胞生长因子进行靶向调节抑制结直肠癌细胞增殖,可以作为潜在治疗靶点。

灵芪合剂影响肝细胞生长因子/上皮间质转化因子通路抑制结直肠癌

目的:探索灵芪合剂对结直肠癌发展的作用机制,并且明确灵芪合剂是否可通过肝细胞生长因子(HGF)/上皮间质转化因子(c-Met)信号通路抑制结直肠癌发展。方法:将直肠癌大鼠分为灵芪合剂高中低剂量组,同时进行中西药对比的治疗效果,通过蛋白质印迹法(Western Blotting)检测、免疫荧光检测和凋亡的检测等技术手段的检测与分析,观察肿瘤的生长、细胞凋亡情况和HGF/c-Met通路蛋白的表达情况。结果:Western Blotting检测肿瘤组织中HGF蛋白表达增强,c-Met蛋白表达减少;在灵芪合剂治疗后,HGF的表达减少,c-Met的表达增强,这与免疫荧光表现结果一致,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:灵芪合剂通过抑制HGF的表达,上调c-Met的表达,抑制HGF/c-Met信号通路从而抑制结直肠癌细胞的侵袭和转移,实现对结直肠癌的预防和治疗。

从脑肠轴探讨黄芪建中汤对胃溃疡大鼠肝细胞生长因子及ERK1/2和TFF3蛋白表达的影响

目的观察黄芪建中汤对脾胃虚寒型胃溃疡大鼠胃组织中肝细胞生长因子(HGF)及下丘脑和海马区中磷酸化细胞外信号调节激酶1/2(p-ERK1/2)及肠三叶因子3(TFF3)蛋白表达的影响,探究黄芪建中汤治疗脾胃虚寒型胃溃疡的作用及可能机制。方法用随机数字表法将60只大鼠分为正常组、模型组、奥美拉唑组和黄芪建中汤组,每组15只。正常组隔日蒸馏水灌胃,每日不限饮食;其余组大鼠先以小承气汤结合饥饱失常法复制脾胃虚寒证模型,实验第11天采用冰醋酸法建立胃溃疡模型。之后模型组继续隔日上午给予小承气汤并当日禁食,次日恢复饮食,共持续20 d;奥美拉唑组和黄芪建中汤组大鼠除同模型组的每日处理外,每日下午分别给予4.2 mg/(kg·d)奥美拉唑和6.8 g/(kg·d)黄芪建中汤灌胃;正常组隔日上午及每日下午给予蒸馏水灌胃。实验结束后摘取各组大鼠胃,记录溃疡大小并计算胃溃疡指数,HE染色观察胃组织病理形态,免疫组化染色检测胃组织中HGF及下丘脑和海马区中p-ERK1/2、TFF3蛋白阳性表达情况。结果正常组大鼠胃黏膜正常,未见溃疡点及糜烂斑等;模型组大鼠胃黏膜皱襞存在中断,有点状溃疡、糜烂及大量炎性细胞浸润;黄芪建中汤组与奥美拉唑组胃黏膜损伤较模型组轻,有少量炎性细胞浸润,未见明显溃疡。奥美拉唑组和黄芪建中汤组大鼠的胃溃疡指数均明显低于模型组(P均<0.05),胃组织中HGF及下丘脑和海马区中p-ERK1/2、TFF3蛋白表达平均光密度均明显高于模型组(P均<0.05)。结论黄芪建中汤能促进脾胃虚寒型胃溃疡大鼠溃疡愈合,上调HGF、ERK1/2及TFF3的表达可能是其基于脑肠轴治疗脾胃虚寒型胃溃疡的作用机制之一。

部分肝切除肝再生过程中肝细胞生长因子激活因子抑制因子1,2的表达

背景:有研究表明肝硬化个体在行肝部分切除后肝再生较健康肝脏缓慢的原因可能与其肝再生过程中的肝细胞生长因子的合成分泌延迟及活性降低有关,但导致这一现象的原因尚不明确,近年来发现的肝细胞生长因子激活因子的抑制因子(hepatocyte growth factor activator inhibitor,HAI)能够间接地抑制肝细胞生长因子的激活,但是鲜有研究探索HAI的抑制因子在肝硬化肝脏行部分肝切除后肝再生过程中的表达情况及其与肝再生的关系。目的:通过建立肝硬化大鼠部分肝切除模型来研究HAI的抑制因子1,2(HAI-1,HAI-2)在硬化和正常肝脏再生中的表达情况,探讨HAI-1,HAI-2在硬化肝脏部分肝切除后的生物学效应及其与肝再生的关系。方法:采用体积分数40%四氯化碳油溶液背部皮下注射法建立大鼠肝硬化模型,对实验组进行70%肝脏切除术建立再生模型,对照组大鼠仅给予普通饲料饮水喂养并行70%肝脏切除。分别于术前及术后3,6,12,24,48 h麻醉处死大鼠并留取脾脏标本检测。采用RT-PCR技术检测脾源性HAI-1,HAI-2 mR NA的表达情况。结果与结论:两组大鼠部分肝切除后HAI-1 mR NA的表达均呈现出先升高后降低的趋势,而肝硬化大鼠HAI-1mR NA表达量持续高于对照组(P<0.05),两组大鼠之间HAI-2 mRNA表达量差异无显著性意义(P>0.05)。说明肝硬化大鼠部分肝切除后再生过程中HAI-1 mR NA的表达持续高于健康大鼠,这可能导致了肝硬化大鼠肝细胞生长因子激活因子合成分泌不足,从而使得肝细胞生长因子前体活化不足,最终引起肝再生缓慢。HAI-2并没有参与肝脏的损伤修复进程。

负载肝细胞生长因子水凝胶对心肌梗死组织区域的作用

背景:研究证实肝细胞生长因子可显著减轻糖尿病大鼠心肌梗死后心肌细胞凋亡、改善心功能,但是以往的研究多是静脉注射或是基因转染的给药方式,利用药物缓释系统给药的研究不多见。目的:以水凝胶作为肝细胞生长因子的载体,有效注射至心肌梗死部位,观察其改善心功能的效果。方法:制备甘油磷酸钠/壳聚糖/海藻酸钠/肝细胞生长因子水凝胶,检测该水凝胶对心肌细胞的相容性与体外生长因子释放特征。取3月龄雄性SD大鼠54只,结扎冠状动脉左前降分支复制心肌梗死模型,采用随机数字表法分3组处理:未治疗组于心肌梗死边缘分多点注射PBS,无生长因子水凝胶组于心肌梗死边缘分多点注射甘油磷酸钠/壳聚糖/海藻酸钠水凝胶,载生长因子水凝胶组心肌梗死边缘分多点注射甘油磷酸钠/壳聚糖/海藻酸钠/肝细胞生长因子水凝胶,每组18只,于设定时间点进行相关检测。结果与结论:①活死染色与CCK-8实验结果显示,甘油磷酸钠/壳聚糖/海藻酸钠/肝细胞生长因子水凝胶具有良好的细胞相容性,可促进心肌细胞的增殖与存活;甘油磷酸钠/壳聚糖/海藻酸钠/肝细胞生长因子水凝胶可持续释放肝细胞生长因子达42 d以上;②造模后第7,14,35天,与未治疗组、无生长因子水凝胶组比较,载生长因子水凝胶组大鼠舒张末期左室容积及收缩末期左室容积减小(P<0.05),左室射血分数、左室短轴缩短率增加(P<0.05);③造模后第35天的苏木精-伊红与Masson染色显示,与未治疗组相比,两治疗组大鼠心肌组织病理均有明显改善,其中以载生长因子水凝胶组改善更明显;④造模后第35天的Tunel染色与α-平滑肌肌动蛋白免疫荧光染色显示,载生长因子水凝胶组大鼠的心肌细胞凋亡数量低于未治疗组、无生长因子水凝胶组(P<0.05),微血管密度大于未治疗组、无生长因子水凝胶组(P<0.05);⑤结果表明,将甘油磷酸钠/壳聚糖/海藻酸钠/肝细胞生长因子水凝胶注射于心肌梗死部位,可抑制心肌细胞凋亡及心肌纤维化、促进血管新生、延缓左心室重塑,达到改善心功能的目的。

肝细胞生长因子联合B型钠尿肽对慢性心力衰竭患者中长期死亡事件的预测价值

目的探索肝细胞生长因子(HGF)联合B型钠尿肽(BNP)对慢性心力衰竭(CHF)患者中长期死亡事件的预测价值。方法回顾性分析2015年8月至2017年9月就诊安徽医科大学第一附属医院心内科CHF患者131例,根据随访12、24、36个月不同时间节点全因死亡事件是否发生分为12个月生存组119例和12个月死亡组12例;24个月生存组96例和24个月死亡组35例;36个月生存组89例和36个月死亡组42例,采用ROC曲线评估各指标对12、24、36个月死亡危险因素的预测效能。结果12个月生存组BNP、HGF明显低于12个月死亡组(P<0.05)。24个月生存组年龄、BNP、HGF明显低于24个月死亡组(P<0.05,P<0.01)。36个月生存组BMI明显高于36个月死亡组,BNP、HGF明显低于36个月死亡组(P<0.01)。HGF、BNP是CHF患者随访12个月死亡的独立危险因素(P<0.05),二者联合预测12个月全因死亡的ROC曲线下面积(AUC)为0.786(95%CI:0.676~0.897)。年龄、HGF、BNP是CHF患者随访24个月死亡的独立危险因素(P<0.05,P<0.01),三者联合预测的AUC为0.754(95%CI:0.654~0.854);HGF、BNP、BMI是CHF患者随访36个月死亡的独立危险因素(P<0.05,P<0.01),三者联合预测的AUC为0.748(95%CI:0.704~0.871)。结论HGF、BNP是CHF随访12、24、36个月全因死亡事件的独立危险因素。HGF联合BNP对预测CHF患者中长期死亡事件的价值更高。

胰岛素样生长因子-1、肝细胞生长因子、肿瘤间质比值诊断乳腺癌患者淋巴结转移的价值及与预后的关系

目的:探讨血清胰岛素样生长因子-1(IGF-1)、肝细胞生长因子(HGF)、肿瘤间质比值(TSR)诊断乳腺癌发生淋巴结转移的价值及与患者预后的关系。方法:采取回顾性研究方法,选取2015年6月—2017年8月北京市通州区妇幼保健院乳腺科收治的120例乳腺癌患者作为研究对象,根据手术后病理学结果患者是否发生淋巴结转移将其分为复发转移组24例、未复发转移组96例,对比两组患者的血清IGF-1、HGF、TSR值,采用受试者工作特组(ROC)曲线分析三项指标诊断乳腺癌患者发生淋巴结转移的价值;采用Logistic回归模型分析乳腺癌病理学特征、治疗方法及IGF-1、HGF、TSR与乳腺癌患者预后结局的关系。结果:乳腺癌淋巴结转移组患者的IGF-1、HGF测定值高于未转移组,TSR水平低于未转移组,差异均有统计学意义(P<0.05);IGF-1、HGF、TSR测定值诊断乳腺癌发生淋巴结转移的ROC曲线下面积值分别为0.837(0.766~0.907)、0.842(0.773~0.911)、0.880(0.821~0.938);Logistic回归分析结果显示:TNM分期≥Ⅱ期、发生淋巴结转移、IGF-1水平增高、HGF水平增高、TSR低水平会增加乳腺癌患者手术治疗后复发转移的风险(P<0.05)。结论:IGF-1、HGF水平增高及TSR降低会增加乳腺癌患者发生手术后复发的风险,术前检查IGF-1、HGF及TSR可以评估是否发生淋巴结转移,对手术方案制定有一定的参考价值。

防脱育发精华液对雄激素性脱毛大鼠局部皮肤睾酮、双氢睾酮、肝细胞生长因子水平的影响

目的探讨防脱育发精华液对雄激素性脱毛大鼠局部皮肤组织睾酮(testosterone,T)、双氢睾酮(dihydrotestosterone,DHT)、肝细胞生长因子(hepatocyte growth factor,HGF)水平的影响。方法将45只大鼠随机分为空白组、对照组、模型组、米诺地尔酊组、防脱育发液精华液组,每组9只。模型组、米诺地尔酊组、防脱育发精华液组连续6周皮下注射丙酸睾酮注射液(5 mg/kg)建立雄激素性脱毛大鼠模型,对照组皮下注射生理盐水,造模同时给药,实验过程中定期观察大鼠一般状态,运用免疫组化、Western blot、ELISA等技术手段,检测大鼠局部皮肤T、DHT、HGF表达的变化。结果与空白组比较,模型组T、DHT含量均明显升高(P<0.05,P<0.01),HGF蛋白表达水平明显降低(P<0.05)。与模型组比较,米诺地尔酊组和防脱育发精华液组T、DHT含量均明显降低(P<0.05,P<0.01),防脱育发精华液组HGF蛋白表达水平明显升高(P<0.05)。与米诺地尔酊组比较,防脱育发精华液组DHT含量明显降低(P<0.05)。结论防脱育发精华液可减轻雄激素性脱毛大鼠脱毛程度,通过降低局部皮肤组织T、DHT含量,促进HGF表达是其主要作用机制之一。

慢性冠状动脉综合征病人肝细胞生长因子的表达及其诊断价值

目的探讨慢性冠状动脉综合征(CCS)病人血清肝细胞生长因子(HGF)的变化及其诊断价值。方法选取2020年3~10月在我院心血管内科住院、临床诊断或者怀疑CCS并拟行冠脉造影的病人89例,根据冠脉造影检查结果,分为CCS组(56例)和非CHD组(33例)。收集所有病人的一般资料,检测并比较2组血脂、血糖、肾功能、BNP、LVEF、HGF水平。采用倾向性评分匹配(PSM)法控制混杂因素,二元Logistic回归分析CCS的影响因素,使用ROC曲线评估HGF对CCS的诊断效能。结果CCS组HGF血清水平显著高于非CHD组(P<0.05)。PSM前后二元Logistic回归分析显示:HGF(OR=1.004,95%CI:1.001~1.007,P<0.05)是CCS的危险因素。ROC曲线分析提示:HGF预测CCS的AUC为0.677(95%CI:0.567~0.788,P<0.05),敏感度为48.2%,特异度为87.9%。结论CCS病人血清的HGF水平显著高于非CHD者,其对CCS诊断有一定的价值,有助于早期识别CCS病人。

血清肝细胞生长因子评估儿童肺炎支原体肺炎的临床价值

目的探讨在儿童肺炎支原体肺炎评估中实施血清肝细胞生长因子水平检测的临床价值。方法2019年1月—2021年6月从茂名市人民医院择取60例肺炎支原体肺炎患儿作为研究组,根据病情严重程度可以分为两组,20例重症支原体肺炎患儿纳入研究一组,40例非重症支原体肺炎患儿纳入研究二组,另外择取20例健康体检儿童作为对照组,通过酶联免疫吸附法对血清肝细胞生长因子水平进行检测,并通过全自动生化分析仪测定研究组患儿的血清C-反应蛋白浓度、乳酸脱氢酶浓度,对照分析上述几组的检验结果。结果研究组血清肝细胞生长因子水平均高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);从临床特征与实验室特点分析,研究一组年龄大于研究二组,住院时间比研究二组长,支气管肺炎类型的胸片患者多于研究二组,差异有统计学意义(P<0.05);研究一组的血清肝细胞生长因子、血清C-反应蛋白浓度、乳酸脱氢酶浓度明显高于研究二组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论在儿童肺炎支原体肺炎评估中,血清肝细胞生长因子水平检测具备显著临床价值,可以评估病情严重程度,还可以为临床治疗效果评估提供指导作用。

肝细胞生长因子对糖基化终产物诱导内皮细胞凋亡的影响

目的探讨糖基化终产物对内皮细胞的凋亡作用,以及肝细胞生长因子对内皮细胞凋亡的影响。方法体外培养人脐静脉内皮细胞,予不同浓度糖基化终产物及肝细胞生长因子干预,分为实验对照组及100 mg/L、200mg/L4、00 mg/L糖基化终产物组和400 mg/L糖基化终产物+100μg/L肝细胞生长因子组,采用四甲基偶氮唑蓝比色法测定各组内皮细胞生长抑制率,通过吖啶橙荧光染色观察细胞形态学变化,流式细胞术测定Annexin V-FITC/PI双染标记的细胞凋亡率,检测肝细胞生长因子对糖基化终产物诱导内皮细胞凋亡的影响;蛋白免疫印迹法分析各组凋亡基因Bax、Bcl-2蛋白的表达及酶联反应法测定细胞凋亡蛋白酶3的活性。结果肝细胞生长因子能明显降低糖基化终产物对内皮细胞生长的抑制作用(P<0.01);糖基化终产物诱导培养的内皮细胞出现明显的凋亡形态学改变,在一定浓度范围内,内皮细胞凋亡率与糖基化终产物的浓度和作用时间呈依赖关系,肝细胞生长因子干预后可显著降低不同时间的内皮细胞凋亡率(P<0.05);肝细胞生长因子作用内皮细胞抗凋亡基因Bcl-2表达明显升高(P<0.01),而促凋亡基因Bax表达无明显变化(P>0.05);细胞凋亡蛋白酶3活性显著降低(P<0.05)。结论糖基化终产物诱导人内皮细胞凋亡,而肝细胞生长因子抑制糖基化终产物诱导的内皮细胞凋亡,其作用机制可能是上调抗凋亡基因Bcl-2水平、抑制细胞凋亡蛋白酶3的激活。

风湿性心脏病慢性心房颤动患者右心耳肝细胞生长因子及其受体的表达

目的观察风湿性心脏病慢性心房颤动(简称房颤)患者右心耳肝细胞生长因子(HGF)及受体(c-Met)表达的变化。方法将术中获取右心耳的27例风湿性瓣膜病患者分为2组,其中窦性心律(简称窦律)组8例,慢性房颤组19例,另选先天性心脏病患者8例(均为窦律)作为对照组,以β-肌动蛋白(β-actin)为内参照基因,采用实时荧光定量聚合酶链式反应(RealtimePCR)技术测定心房组织中HGF、c-MetmRNA的含量,用免疫组织化学方法评价HGF及c-Met的蛋白表达情况。结果与对照组和窦律组比较,慢性房颤组HGF表达显著下降(P<0.01)。而风心窦律组与对照组无差异。c-MetmRNA的表达三组无差异。结论慢性房颤患者心房组织HGF的表达显著降低,而其受体c-Met在房颤患者心房组织中未见明显变化。

肝细胞生长因子对子宫内膜癌细胞增殖影响的实验研究

目的观察肝细胞生长因子(HGF)对子宫内膜癌细胞HEC-2B增殖的影响及子宫内膜癌细胞HEC-2B中HGF受体C-met的表达,了解HGF对子宫内膜癌细胞的作用及其机制。方法体外培养人子宫内膜癌细胞HEC-2B,用RT-PCR的方法检测HEC-2B中HGF受体C-met有表达。对HEC-2B进行24 h血清饥饿后用不同剂量的HGF作用于HEC-2B。用四甲基偶氮唑盐微量酶反应比色法(MTT法)分析细胞的增殖力,用流式细胞仪检测细胞的增殖周期。结果C-met在HEC-2B细胞中稳定表达,HGF促进细胞的增殖,并在一定的范围内有剂量依赖关系,各处理组与对照组相比,P<0.05。当HGF浓度达到60 ng.mL-1时,增殖水平较对照上调约1.9倍。结论HGF/C-met能够在体外促进子宫内膜癌细胞的增殖。

腺病毒载体介导的RNAi对胶质瘤U251细胞肝细胞生长因子受体表达的影响

目的探讨腺病毒载体介导的RNA干扰技术对胶质瘤细胞肝细胞生长因子(HGF)受体(c-Met)的表达和细胞凋亡的影响。方法用PCR法获得人U6启动子及带有c-Met反向互补靶序列的片段HU6shmet;利用腺病毒载体将其传递至U251细胞;分别采用RT-PCR和Westernblot方法检测U251细胞的c-MetmRNA和蛋白的表达,Annexin-V-PI双染法流式细胞术检测细胞的凋亡状况。结果获得了带有人U6启动子及c-Met反向互补靶序列的重组腺病毒载体rAdUshmet1和rAdUshmet2。转导了rAdUshmet1和rAdUshmet2的U251细胞的c-MetmRNA和蛋白相对表达量较未转导腺病毒及转导了rAdGFP和rAdU-sicon的U251细胞均有明显下降(P<0.01),rAdUshmet1和rAdUshmet2转导的U251细胞凋亡率分别为(13.5±4.2)%和(28.2±5.6)%,明显高于未转导腺病毒的及rAdGFP和rAdUsicon转导的U251细胞凋亡率(P<0.05)。结论腺病毒载体rAdUshmet通过抑制HGF受体c-Met表达,能在一定程度上阻断HGF-c-Met信号通路,有可能成为对胶质瘤进行基因治疗的有效载体。