肝细胞生长因子对骨髓间充质干细胞生物学特性的影响

骨髓间充质干细胞的增殖、分化及迁移等生物学特性受骨髓微环境的调节。肝细胞生长因子(HGF)是骨髓微环境分泌的主要因子之一,但它对骨髓间充质干细胞生物学特性的影响并不清楚。本研究目的是观察重组人HGF对骨髓MSC生物学特性的影响。用免疫组织化学方法检测cMet的表达,用MTT法测定细胞增殖,定量测定ALP的活性,进行细胞迁移分析和失巢凋亡(anoikis)诱导MSC凋亡分析。结果表明,重组人HGF不影响骨髓间充质干细胞的增殖和向成骨细胞的分化,但可明显促进骨髓间充质干细胞的迁移并抑制anoikis诱导的细胞凋亡;PI3K和MAPK途径参与了HGF促进细胞迁移的作用。结论:肝细胞生长因子通过受体cMet影响骨髓间充质干细胞的生物学特性。

动物肝细胞生长因子(HGF)基因生物信息学分析

肝细胞生长因子（HGF）是一种多功能细胞因子。最初发现HGF具有调节肝脏生长的重要功能，随着研究的不断深入，其生物学功能也逐渐被揭示。

牛胎盘中肝细胞生长因子的生物学特性

实验研究来源于牛胎盘的肝细胞生长因子的生物学特性。将新鲜牛胎盘匀浆后经盐析、亲和层析、超滤和离子交换层析可以纯化到一种肝细胞生长因子。实验采用３Ｈ－ＴｄＲ掺入细胞ＤＮＡ的量来表示肝细胞生长因子促进细胞ＤＮＡ合成的作用，用液体闪烁计数来探测３Ｈ的放射性。结果表明：该因子对原代培养的大鼠肝细胞、肾细胞的ＤＮＡ合成都有刺激作用，而且也能刺激原代培养的人胎肝细胞的ＤＮＡ合成。但对传代培养的小鼠腹水Ｓ１８０细胞的ＤＮＡ合成则有抑制作用。另外，此因子对热不稳定，经热处理之后，其对大鼠肝细胞的刺激作用和对小鼠腹水Ｓ１８０细胞的抑制作用都降低了。

肝细胞生长因子刺激大鼠离体肝细胞DNA合成的剂量-与时间-效应

本工作采用３ＨＴｄＲ掺入ＤＮＡ法观察重组人肝细胞生长因子（ｒｈＨＧＦ）刺激大鼠离体肝细胞ＤＮＡ合成的剂量与时间效应。实验结果表明：ｒｈＨＧＦ是最强的促肝细胞分裂剂，在一定剂量范围内，ｒｈＨＧＦ与肝细胞ＤＮＡ合成有明显的量效关系。１ｎｇ／ｍｌｒｈＨＧＦ即可引起３ＨＴｄＲ掺入显著增加（Ｐ＜０．０１），随剂量增加，刺激ＤＮＡ合成的效应也随之增强；１０ｎｇ／ｍｌ时３ＨＴｄＲ掺入量最大，较对照组高７倍（Ｐ＜０．００１），剂量再增加即出现抑制效应；ｒｈＨＧＦ刺激肝细胞ＤＮＡ合成存在时间效应关系，表现为ｒｈＨＧＦ作用２４ｈ，ＤＮＡ合成量明显高于对照组（Ｐ＜０．０１），４８ｈ作用达最高（Ｐ＜０．００１），随后开始下降，至９６ｈ下降到相当于２４ｈ的水平。

肝细胞生长因子的分子生物学研究

肝细胞生长因子 (HGF)是一种多功能细胞因子 ,其分子为异二聚体糖蛋白 ,有NK1,NK2 ,NK4三个变种。HGF启动子的结构很复杂 ,其表达受多种因素和调控元件的调节。因HGF在体内有重要作用 。

肝细胞生长因子对兔骨髓基质细胞生物学特性的影响

目的 观察腺病毒携带肝细胞生长因子cDNA(adHGF)转染兔骨髓基质细胞 (MSC)后的主要生物学特性。方法 抽取成年雄性新西兰白兔骨髓 ,密度梯度离心获得MSC。取兔膝关节软骨 ,体外培养软骨细胞至第 3代。adHGF转染第 5代MSC ,噻唑蓝 (MTT)法检测细胞增生活力 ,阿尔新蓝法检测细胞培养上清液中氨基己糖多糖 (GAG)含量。酶联免疫吸附实验 (ELISA)检测adHGF转染MSC后HGF的表达。免疫组织化学染色及反转录 聚合酶链反应 (RT PCR)检测Ⅰ、Ⅱ型胶原表达。结果 原代MSC为短梭形、簇状生长 ,传代细胞呈长梭形、旋涡样生长。adHGF转染前后细胞增生状态差异无显著性。MSC转染后GAG含量增加。免疫组织化学染色MSC转染前后I型胶原阳性 ,转染后Ⅱ型胶原弱阳性。转染后HGF表达量在转染 1周内最高 ,达 12 0 5ng/ml,并可持续至 6周。RT PCR表明MSC在adHGF转染前后均表达I型胶原 ,转染后微量表达Ⅱ型胶原。结论 MSC在体外培养过程中的自然转归是趋向于成骨。MSC不仅是HGF的源细胞 。

细胞生长因子和维拉帕米在肝细胞胶原合成和前胶原基因表达中的作用

目的：探索肝细胞在肝纤维化形成中的可能作用。方法：用核酸原位分子杂交方法和３Ｈ脯氨酸掺入法，观察原代培养大鼠肝细胞在血小板衍生生长因子（ＰＤＧＦ）刺激前后胶原合成和Ⅰ、Ⅲ型前胶原ｍＲＮＡ的表达及钙拮抗剂维拉帕米对此作用的影响。结果：肝细胞培养一定时间后能够合成胶原，能够表达Ⅰ、Ⅲ型前胶原基因。ＰＤＧＦ能促进肝细胞的胶原合成和前胶原基因表达。但此刺激作用为维拉帕米所抑制。结论：这些研究为肝细胞参与肝纤维化形成提供了实验依据。

国内肝细胞癌患者血清中血管内皮生长因子表达的Meta分析

目的通过分析血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)在肝细胞癌(Hepatocellular Carcino-ma,HCC)患者血清中的表达情况,探讨其在肝癌发生发展过程中可能的作用机制。方法检索中国知网、中国生物医学文献数据库、维普及万方数据库,收集2000～2010年国内公开发表的论文,且为VEGF在HCC中表达及意义的独立病例对照研究,并对文献进行异质性检验,然后应用Meta分析软件RevMan5.1对各研究原始数据进行统计学处理,计算其加权均数(Mean Difference,MD),合并值以95%可信区间(Confidence interval,CI)表示,同时给出Meta分析森林图。结果最终进入系统评价的文献共有15篇病例对照研究。结果显示健康正常人组织中VEGF的表达明显低于HCC患者,差异有统计学意义[MD值-220.65,95%CI(-267.58,-173.72),P<0.00001]。VEGF表达与患者是否合并肝炎[MD值52.49,95%CI(22.03,82.94),P=0.0007]、肿瘤直径大小(<3 cm或≥3 cm)[MD值-121.86,95%CI(-202.00,-41.72),P=0.003]、是否出现门静脉癌栓[MD值147.43,95%CI(63.85,231.02),P=0.0005]以及远处转移灶[MD值103.24,95%CI(36.40,170.07),P=0.002]存在明显的相关,而与肝癌包膜是否受侵[MD值98.80,95%CI(-38.58,236.18),P=0.16]无明显相关性。结论本研究结果提示HCC患者血清中VEGF的表达明显高于健康正常人,与患者有无转移灶、是否合并肝炎、是否合并门静脉癌栓、肿瘤的直径有相关性,差异有统计学意义,而与肝癌包膜是否受侵无明显相关性。对目前相关研究结果的Me-ta分析显示,VEGF高表达可能在HCC的发生、发展及转移中起重要作用,这对于HCC的早期诊断、治疗和预防具有重要的参考意义。

乙醇脱氢酶1A和血管内皮生长因子-A在肝细胞癌中的表达

目的探讨乙醇脱氢酶1A(ADH1A)和血管内皮生长因子-A(VEGFA)在肝细胞癌(HCC)中的表达和临床意义。方法通过基因表达谱交互(GEPIA)分析ADH1A和VEGFA在HCC以及癌旁正常组织中的表达情况及相关性;肿瘤基因组图谱(TCGA)和基因富集分析(GSEA)探讨ADH1A在HCC中的相关通路;收集84例HCC患者的样本及临床病理资料,并选取54例癌旁正常组织样本做对照,分析ADH1A和VEGFA与HCC中临床病理参数的相关性;采用免疫组化法检测并分析病例组和对照组ADH1A和VEGFA的蛋白表达情况,结合临床病理参数并通过Kaplan-Meier法分析ADH1A和VEGFA的表达与HCC患者的临床进展和预后的关系。结果生物信息学分析发现ADH1A在HCC中低表达而VEGFA在HCC中高表达,并且两者呈负相关关系(P<0.001);免疫组化检测结果显示ADH1A在HCC组织中的表达率低于癌旁正常组织(P<0.01),而VEGFA在HCC组织中表达率高于癌旁正常组织(P<0.01);HCC组织中ADH1A高表达组的脉管癌栓及HCC患者的复发比例更低(P<0.05);HCC组织中VEGFA高表达组的肿瘤直径>5 cm、高TNM分期、有微卫星以及G2-G3分化程度比例更高(P<0.05);Kaplan-Meier生存分析显示,ADH1A高表达同时VEGFA低表达患者的五年生存率较高。结论HCC患者肿瘤组织中ADH1A的低表达以及VEGFA的高表达与肿瘤的进展有关,可作为HCC患者预后评估指标之一。

重组人肝细胞生长因子β链体外生物学活性的测定

目的 建立一种稳定灵敏的方法用于检测重组人肝细胞生长因子β链 (rhHGF β)对原代培养成年大鼠肝细胞的增生作用。方法 利用噻唑蓝 (MTT)比色方法在多种实验条件下对rhHGF β进行生物学活性检测。结果 对于体外原代培养成年大鼠肝细胞 ,rhHGF β可刺激肝细胞的增生 ,且有剂量依赖效应。 结论 确定了原代培养肝细胞检测rhHGF

新生牛促肝细胞生长因子的理化性质及生物学特性

目的：确证新生牛促肝细胞生长因子（ Ｈ Ｇ Ｆ）的理化性质及生物学特性。方法：采用高效液相 色谱法（ Ｈ Ｐ Ｌ Ｃ）、 Ｓ Ｄ Ｓ聚丙烯酰胺凝胶电泳（ Ｓ Ｄ Ｓ Ｐ Ａ Ｇ Ｅ）、紫外扫描、同位素３ Ｈ胸苷掺入法（３ Ｈ Ｔｄ Ｒ）测定 Ｈ Ｇ Ｆ的理化性质及生物学特性。结果： Ｈ Ｇ Ｆ主要为小分子肽，具有刺激损伤肝细胞 Ｄ Ｎ Ａ 合成，促进肝细胞再生的功能。结论： Ｈ Ｇ Ｆ 具有良好的肝脏保护与治疗作用。

重组人源性肝细胞生长因子的纯化及其生物学活性的初步研究

目的获取高纯度的重组人源性肝细胞生长因子(rhHDSSF),并探讨rhHDSSF在体外的生物学活性。方法收获大量培养的表达细胞,以冻融法提取蛋白质;以IMAC pH递减非变性法纯化表达的rhHDSSF;以MTT法测定其对HepG2,T24,Fibroblast和Hela细胞的增殖效应。结果从细胞裂解物中纯化得到20 kD左右的单一蛋白条带,其纯度达89％。细胞增殖实验证实这一蛋白产物对HepG2,Hela细胞有显著的增殖作用,并表现出良好的量效和时效关系,而对T24,Fibroblast细胞则增殖效果不明显。结论 本研究证实,人源性肝细胞生长因子(HDSSF)转染细胞株中有20 kD左右HDSSF相应蛋白表达,与HDSSF、598 bp开放读码框理论值相一致,且纯度达89％,并发现其有良好的细胞增殖作用。rhHDSSF是一种非特异性促细胞增长物质,但它也有一定的选择性,这可能与不同细胞表达的细胞受体差异而导致蛋白信号传导不同有关。

表皮生长因子对肝细胞DNA合成作用的体内与体外研究

本文应用单克隆抗溴脱氧脲嘧啶抗体(Monoclonal anti-bromodeoxyuridine)标记DNA 技术和流式细胞术(Flow cytometry)对表皮生长因子(Epidermal Growth Factor,EGF)、胰高血糖素(G)和胰岛素(I)对犬鼠肝细胞DNA 合成的刺激作用分别进行了体内和体外研究。

内皮生长因子G61A位点基因多态性与肝细胞癌易感性的Meta分析

肝细胞恶变和肿瘤进展的发病机制包括多种基因改变和分子信号通路调节等。其中，内皮生长因子（EGF）及受体信号通路的调节异常在肝细胞癌（HCC）的发生中具有重要作用。目前，国内外很多研究显示，EGF基因61A／G位点的功能多态性与人类多种恶性肿瘤相关。然而，

胰岛素样生长因子Ⅰ型受体基因对肝细胞癌生物学行为的影响

目的 研究胰岛素样生长因子 型受体 (IGF- R)对肝细胞癌生物学行为的影响。 方法 应用免疫组化 SP法检测肝细胞癌、癌旁和正常肝组织 IGF- R的表达。构建 IGF- R正、反义基因真核表达载体 ,经脂质体介导转入 SMMC- 772 1肝癌细胞株 ,观测 IGF- R正、反义基因对肝癌细胞生物学行为的影响。 结果 (1)在肝癌组织中 IGF- R呈过度表达(90 .3% ) ,以膜、胞浆混合型表达为主 ,显著高于正常肝组织。肝癌多发结节组高于单发结节组 (P<0 .0 5 )。 (2 ) IGF- R反义基因能明显下调内源性 IGF- R的表达 ,与 772 1细胞、正义细胞有显著性差异 (P<0 .0 1)。 (3)电镜下反义细胞内可见微腺腔、灶性坏死、髓鞘样结构。 4反义细胞 G0 /G1期明显增加 (6 3.9% ) ,S期减少 (19.3% ) ,细胞凋亡增加 (5 .89% ) ,与 772 1细胞、正义细胞有显著性差异 (P<0 .0 1)。 5 .反义细胞不能在软琼脂中生长。 结论 (1) IGF- R高表达与肝癌的发生及侵袭性行为有密切关系。 (2 ) IGF- R反义基因下调 772 1细胞内源性 IGF- R的表达 ,对肝癌细胞的增殖有明显抑制作用。

血清肝细胞生长因子检测及分析

目的 探讨肝脏病患者血清肝细胞生长因子 (HGF)的变化并分析其临床意义。方法 采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测肝细胞癌(HCC)70例、肝硬化(HC)85例、重症肝炎 (SH)53例、慢性肝炎 (CH) 72例患者血清中的HGF水平, 并与 68名健康献血员进行对照;同时测定血清中转氨酶(ALT、AST)、胆红素 (TBil)。结果 HGF分别为:HCC组为 145. 4ng/L;HC组为 758. 8ng/L;CHH组为 2158. 2ng/L;CH组为 328. 5ng/L;正常对照组为12. 8ng/L。肝脏疾病患者与正常组相比,HGF有显著性差异 (P<0. 01 )。肝脏病患者组之间也存在显著性差异(P<0. 01)。结论 血清HGF的变化对肝脏疾病的诊断,了解肝脏损伤的程度及预后有一定意义。

重组碱性成纤维细胞生长因子的生物活性分析

碱性成纤维细胞生长因子(bFGF）是1974年Gospodarowicx首先从牛的垂体中分离纯化。但天然FGF在动物组织中含量极微。常规生化方法提纯的FGF成本高且来源困难，使其在医学和生物学领域的应用受到限制，利用重组DNA技术获得重组牛bFGF产物，有力地推动了bFGF的实际应用。为此，采用人脐静脉血管内皮细胞原代培养，MTT摄取试验及鸡胚绒毛尿襄膜试验对重组牛bFGF和牛垂体bFGF进行了生物活性分析并比较了3种方法的优缺点。

肝细胞生长因子基因转染对髓核细胞生物学活性及细胞外基质表达的调节作用

椎间盘退变（intervertebral disc degeneration．IVD）是临床常见疾病，直接或间接引起腰背部和下肢疼痛不适．影像学表现多为椎间盘膨出、突出，腰椎不稳，滑脱，以及其引起的椎管狭窄，从而出现神经根压迫症状和脊髓压迫症状。主要机制首先是椎间盘内髓核细胞逐渐衰老、凋亡，并导致细胞外基质的化学成分和结构改变，进而出现髓核脱水，合成蛋白多糖能力减弱。胶原的排列和类型均发生改变．

新生牛肝细胞生长因子对大鼠急性肝衰竭影响的初步研究

参照Labrecque等提取肝细胞刺激物质(HSS)的方法,从新生牛肝脏中提取出分子量小于1.98万u的生物活性物质,动物试验表明,该物质对D-氨基半乳糖(D-Gal)所致的急性肝衰竭大鼠的存活率有明显的提高,并对大鼠肝细胞DNA合成有明显的促进作用。