大麻二酚对转化生长因子β1诱导肝星状细胞活化和肝纤维化的作用

背景:大麻二酚具有抗炎、抗氧化等药理学作用,并且不具有精神活性,在肝脏疾病中的研究日渐增加,但其对肝星状细胞转化生长因子β1/Smad信号转导通路的作用尚未明确。目的:探讨大麻二酚对肝星状细胞中转化生长因子β1/Smad信号转导通路的影响,研究其抗肝纤维化的可能机制。方法:(1)体外实验:选取大鼠肝星状细胞株(HSC-T6),分6组培养:对照组常规培养24 h,单纯药物组加入大麻二酚培养24 h,造模组加入转化生长因子β1培养24 h,造模+低剂量药物组、造模+高剂量药物组、造模+阳性对照组均加入转化生长因子β1培养24 h后分别加入1,5μmol/L大麻二酚或水飞蓟素培养24 h。培养结束后,检测各组细胞α-平滑肌肌动蛋白与Ⅰ型胶原mRNA表达、白细胞介素1β与肿瘤坏死因子α水平及Ⅰ型胶原、转化生长因子β1/Smad信号转导通路蛋白表达。(2)动物体内实验:将C57BL/6J小鼠随机分为5组,每组8只:假手术组不造模,造模组、造模+低剂量药物组、造模+高剂量药物组、造模+阳性对照组通过胆管结扎法建立肝纤维化模型,造模3周后分别腹腔注射4,8 mg/kg大麻二酚或水飞蓟素,1次/d,连续给药7 d。给药结束后,检测各组小鼠肝功能、肝脏病理形态及α-平滑肌肌动蛋白、Ⅰ型胶原、转化生长因子β1/Smad信号转导通路相关蛋白表达。结果与结论:(1)体外实验:与对照组比较,造模组HSC-T6细胞α-平滑肌肌动蛋白与Ⅰ型胶原mRNA表达、白细胞介素1β与肿瘤坏死因子α水平以及Ⅰ型胶原、转化生长因子β1、p-Smad2/3蛋白表达均升高(P<0.05),Smad7蛋白表达降低(P<0.05);两种剂量大麻二酚处理可改善转化生长因子β1诱导的HSC-T6细胞上述指标的变化,并且以造模+高剂量药物组改善作用更明显;(2)体内实验:与假手术组比较,模型组小鼠血清丙氨酸氨基转移酶、天门冬氨酸氨基转移酶活性升高(P<0.05),肝组织中炎性细胞浸润及胶原含量增加(P<0.05),转化生长因子β1/Smad信号转导通路被激活,α-平滑肌肌动蛋白、Ⅰ型胶原蛋白表达升高(P<0.05);两种剂量大麻二酚干预可减轻造模小鼠上述指标的变化,并且以造模+高剂量药物组效果更明显;(3)结果表明,大麻二酚通过抑制肝星状细胞转化生长因子β1/Smad信号传导通路的激活抑制肝纤维化。

重组牛碱性成纤维细胞生长因子治疗视神经损伤的药理学研究

目的 :研究重组牛碱性成纤维细胞生长因子 (rbFGF)在视神经损伤修复中的作用。方法 :视神经部分损伤后 ,球后分别注射生理盐水、维生素B12 、bFGF ,伤后 4周测量闪光视神经诱发电位 (F VEP) ,进行轴突定量、视网膜神经节细胞 (RGCs)定量以及RGCs凋亡的检测 ,观察视神经损伤修复情况。结果 :伤后 4周时生理盐水和维生素B12 组对刺激无反应 ,bFGF组F VEP接近正常 ,80 0U、16 0 0U和 2 40 0UbFGF对RGCs挽救率分别为 2 4.5 %、2 7.3 %、2 8.5 % ,80 0U、16 0 0U和 2 40 0UbFGF组未发生溃变的轴突数分别是损伤未治疗组的 2 .0 3、2 .43、2 .31倍。流式细胞仪检测结果显示 ,bFGF治疗 7d后 ,RGCs凋亡率显著减少。结论 :bFGF可挽救视网膜神经节细胞的存活 ,减少轴突溃变 ,有抗凋亡作用 。

基于网络药理学和实验验证探讨芝麻林素抗肝细胞癌作用及其机制

为了探究芝麻林素对肝细胞癌的抗肿瘤作用及其分子机制,通过网络药理学分析,预测芝麻林素与肝细胞癌的交集靶点,以及交集靶点富集的通路和生物学过程,然后检索SwissADME数据库分析芝麻林素的药代动力学。采用CCK8法检测细胞活性,采用Annexin V-FITC/PI双染法、流式细胞术、蛋白免疫印迹法、细胞迁移法分析芝麻林素处理后Huh-7细胞凋亡、周期阻滞及迁移抑制的作用与机制。结果表明,网络药理学分析可得交集靶点共64个,基因本体论功能共352个,京都基因与基因组百科全书信号通路共136个。体外细胞实验表明芝麻林素可以通过调控活性氧(reactive oxygen species,ROS)介导的丝裂原活化蛋白激酶/信号转导与转录激活因子3/核因子κB和磷脂酰肌醇3激酶(phosphatidylinositol 3-kinases,PI3K)/蛋白激酶B(protein kinase B,AKT)信号通路,诱导Huh-7细胞线粒体依赖性凋亡与G2/M期阻滞。同时,芝麻林素通过ROS介导的PI3K/AKT/糖原合成酶激酶-3β(glycogen synthase kinase-3β,GSK-3β)/β-连环蛋白信号通路抑制细胞迁移。最后,SwissADME分析结果表明芝麻林素具有良好的类药性。综上,芝麻林素可以通过ROS介导的信号通路诱导Huh-7细胞发生细胞凋亡、周期阻滞与抑制迁移作用。

肝细胞生长因子及其受体c-Met在结直肠癌中的表达及其意义

目的探讨结直肠癌中肝细胞生长因子及其受体c-Met表达及其意义。方法选取2020年2月—2022年2月在牡丹江医学院附属第二医院接受治疗的结直肠癌患者126例作为病例组,并选取同期40例正常结肠组织及良性腺瘤作为对照组。统计分析两组结直肠组织中微淋巴管密度(microlymphatic density,LMVD)表达、HGF及其受体c-Met阳性表达情况,统计分析病例组结直肠癌组织中不同临床指标患者的LMVD、肝细胞生长因子(hepatocyte growth factor,HGF)及其受体细胞间质上皮转换因子(cellular-mesenchymal epithelial transition factor,c-Met)表达。结果病例组患者结直肠组织中LMVD表达高于参照组(P<0.05)。病例组病理分期Ⅰ+Ⅱ期、有淋巴结转移患者的结直肠癌组织中LMVD分别低于病理分期Ⅲ+Ⅳ期、无淋巴结转移患者(P<0.05),HGF阳性、c-Met阳性患者的结直肠癌组织中LMVD分别高于HGF阴性、c-Met阴性患者(P<0.05)。病例组患者结直肠组织中HGF及其受体c-Met阳性表达率均高于参照组(P<0.05)。病例组病理分期Ⅰ+Ⅱ期结直肠癌组织中HGF及其受体c-Met阳性表达率均高于Ⅲ+Ⅳ期患者(P<0.05),有淋巴结转移患者的结直肠癌组织中HGF及其受体c-Met阳性表达率均低于无淋巴结转移患者(P<0.05)。结论结直肠癌中肝细胞生长因子及其受体c-Met阳性表达提升,病理分期越高阳性率越高、有淋巴结转移阳性率升高,可能成为治疗新靶点。

血清可溶性CD40L与肝细胞生长因子联合检测在急性肺栓塞患者诊断中的应用价值

目的探讨血清可溶性CD40L(sCD40L)、肝细胞生长因子(HGF)联合检测在急性肺栓塞患者诊断中的应用价值。方法选取2021年1月至2022年12月延安市人民医院收治的96例急性肺栓塞患者为肺栓塞组,根据《肺血栓栓塞症的诊断与治疗指南(草案)》相关标准分为大面积肺栓塞组(50例)及非大面积肺栓塞组(46例)。另选取同期于延安市人民医院就诊的90例非急性肺栓塞患者为对照组;收集两组临床资料及空腹血液,采用酶联免疫吸附法检测两组血清中sCD40L、HGF水平;采用Pearson法分析血清sCD40L与HGF水平的相关性;采用受试者工作特征曲线(ROC)分析血清sCD40L、HGF水平对急性肺栓塞的诊断价值。结果肺栓塞组血清sCD40L、HGF水平明显高于对照组(P<0.05);大面积肺栓塞组血清sCD40L、HGF水平明显高于非大面积肺栓塞组(P<0.05)。肺栓塞组患者血清sCD40L与HGF水平呈正相关(r=0.613,P<0.05)。ROC曲线显示,血清sCD40L、HGF诊断急性肺栓塞的曲线下面积(AUC)分别为0.820、0.848,特异度分别为82.2%、82.2%,敏感度分别为72.9%、72.9%,最佳截断值分别为113.48、492.81 ng/L;sCD40L和HGF联合诊断急性肺栓塞的AUC为0.875,特异度为91.1%,敏感度为74.1%。结论急性肺栓塞患者血清sCD40L、HGF水平升高,且二者呈正相关,sCD40L与HGF联合检测可有效提高急性肺栓塞患者的诊断效能。

肝细胞生长因子通过激活NF-κB信号通路促进BV2细胞介导神经炎症

目的 探讨肝细胞生长因子(hepatocyte growth factor,HGF)对小胶质细胞介导神经炎症的作用及其调控机制,为后续可能治疗靶点的确定提供实验依据和理论参考。方法 选取小鼠小胶质细胞(BV2)作为研究对象,分为对照组和HGF组,通过蛋白质组学分析、实时荧光定量聚合酶链反应(qRTPCR)以及蛋白质印迹法(western blot,WB)等检测HGF对BV2细胞NF-κB信号通路活性及炎症因子表达的影响。结果 蛋白质组学分析显示HGF处理后,NF-κB通路显著富集;HGF处理1h时,BV2细胞增殖活力随浓度升高下降,6h和12h时呈现先上升后下降的趋势;qRT-PCR显示HGF显著上调炎症因子(iNOS、TNF-α、IL-1β);WB表明HGF促进炎症相关因子(TNF-α、NF-κB p65)相对表达量上升。结论本研究首次证实HGF通过激活BV2细胞NF-κB信号通路促进神经炎症的作用及其机制,为进一步探究神经炎症调控策略及开发有效的临床治疗手段提供重要线索。

基于网络药理学和分子对接的半枝莲黄酮类成分治疗肝细胞癌的机制研究

目的网络药理学方法探究半枝莲黄酮类成分治疗肝细胞癌的作用机制及分子对接技术验证。方法通过TCMSP、SwissTargetPrediction、OMIM、BioGPS等数据库筛选黄酮类成分、肝特异性靶点;构建肝特异性靶点蛋白互作网络、筛选核心模块和基因;进行肝特异性靶点生物通路富集分析;将黄酮类成分和核心蛋白靶点在SwissDock平台进行分子对接。结果黄酮类成分36个,肝特异性靶点135个,核心基因4个;关键生物通路均与肝细胞癌的增殖抑制相关。黄酮成分与核心靶点有较强的结合活性。结论半枝莲黄酮类成分抗肿瘤作用可能是通过多成分-多靶点阻滞肝癌细胞的有丝分裂G1/S细胞周期,抑制肝细胞癌增殖。

基于网络药理学、分子对接和实验验证的三叶青治疗肝细胞癌作用机制研究

目的通过网络药理学方法研究三叶青治疗肝细胞癌(HCC)的作用机制,并进行实验验证。方法检索中国知网、万方数据知识服务平台、维普中文期刊服务平台、PubMed、Web of Science,结合TCMSP数据库,筛选三叶青的活性成分及靶点。检索OncoDB.HCC、GeneCards、OMIM、DrugBank数据库,收集HCC相关靶点。利用Cytoscape软件构建药物-活性成分-靶点-疾病网络,STRING数据库进行蛋白相互作用(PPI)分析,Metascape数据库进行GO及KEGG通路富集分析,AutoDock对关键靶点及主要活性成分进行分子对接。通过MTT比色法和细胞形态观察检测人肝癌HepG2细胞增殖,细胞划痕实验和Transwell小室实验观察细胞迁移和侵袭,AnnexinⅤ/PI双染法和流式细胞术检测细胞凋亡,RT-PCR和Western blot检测相关蛋白表达。结果网络药理学分析得到三叶青活性成分16个、作用靶点228个,其中与HCC相关靶点157个,JUN、AKT1、MAPK1、TP53等靶点可能是三叶青治疗HCC的核心靶点,与HCC密切相关的富集通路为IL-17信号通路、TNF信号通路、P53信号通路、PI3K-Akt信号通路等。分子对接结果显示,三叶青主要活性成分与核心靶点之间具有良好的结合效果。细胞实验结果显示,三叶青各剂量组可显著抑制HepG2细胞增殖、迁移和侵袭,促进凋亡,下调AP-1、MAPK1表达,上调TP53表达。结论三叶青能抑制人肝癌细胞增殖、迁移和侵袭,促进其凋亡,其治疗HCC的作用机制可能与下调AP-1、MAPK1蛋白表达及上调TP53蛋白表达有关。

基于网络药理学探究垂盆草保护急性肝细胞损伤的作用机制

目的通过网络药理学和体外细胞实验,探究垂盆草保护急性肝损伤的有效成分及潜在的功能机制。方法利用网络药理学和生物信息学预测垂盆草的有效成分、主要活性成分和靶点。800μl的四氯化碳(CCl_(4))处理肝细胞HepaRG 2 h,构建肝细胞损伤模型;10μmol/L异鼠李素或白细胞介素(IL)-17信号通路激活剂SR0987处理HepaRG细胞,再CCl4溶液培养2 h。酶联免疫吸附试验(ELISA)检测肝损伤生化指标谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)、乳酸脱氢酶(LDH)、苹果酸脱氢酶(MDH);细胞计数试剂盒(CCK8)、流式细胞术检测细胞增殖、凋亡;逆转录定量聚合酶链式反应(RT-qPCR)、Western印迹检测IL-17 mRNA和蛋白表达。结果中药系统药理学数据库与分析平台(TCMSP)、中医药综合数据库(TCMID)分析垂盆草得到5种主要活性成分,302个靶基因;疾病相关的基因与突变位点数据库(DisGeNET)、人类孟德尔遗传数据库(OMIM)分析肝损伤得到398个靶基因,与有效成分靶基因取交集,共有177个靶基因。通过对靶基因的京都基因组百科全书(KEGG)富集分析和基因本体论(GO)富集分析发现,IL-17信号通路富集率和差异均最高。体外细胞实验表明,成功构建CCl4诱导HepaRG细胞模型,模型细胞ALT、AST、LDH、MDH含量均显著升高,增殖率显著降低,凋亡率显著升高,IL-17 mRNA和蛋白表达均显著升高(P<0.05);异鼠李素处理后,这些指标的变化均得到抑制。SR0987处理后明显减弱异鼠李素的作用。结论垂盆草的主要活性成分异鼠李素通过抑制IL-17信号通路的活性发挥肝保护作用。

基于网络药理学和单细胞转录组探究灵芝蜂胶胶囊抗肝细胞癌的潜在机制

目的采用网络药理学和单细胞转录组分析方法研究灵芝蜂胶胶囊抗肝细胞癌的潜在机制。方法利用TCMSP、本草组鉴(HERB)和SwissTargetPrediction数据平台,获得灵芝和蜂胶的活性成分及靶点。基于TCGA数据库获取肝癌RNAseq数据,运用R软件包DESeq2进行差异分析,将差异基因与药物靶点的交集基因作为灵芝蜂胶胶囊抗肝细胞癌的潜在靶点基因。采用R软件包clusterProfilter进行GO和KEGG富集分析。利用Cox和KM方法对交集靶点进行筛选,再使用GEO数据库中的GSE14520进行生存分析再次筛选得到核心基因。利用分子对接进行核心靶点基因和对应成分的模拟结合。采用GSE149614数据对核心基因进行单细胞分析,并对关键基因在多种癌症中的生存预后进行分析。采用qPCR验证灵芝蜂胶对HepG2和Huh7细胞的干预作用。结果基于网络药理学成功鉴定出肝细胞癌差异基因706个,灵芝蜂胶潜在作用靶点603个,二者交集靶点29个。富集分析结果主要涉及神经活性配体-受体相互作用和细胞周期等。满足生存分析筛选的关键靶点为AURKB、CCNA2、CCNB1、CCR3、CDK1、PLK1、TOP2A和TTK。分子对接结果表明这些关键基因与对应成分均具有良好的结合能力。qPCR结果显示灵芝蜂胶可显著抑制HepG2和Huh7细胞中AURKB基因的表达。结论灵芝蜂胶可能通过过氧麦角甾醇等成分作用于AURKB等基因参与细胞周期等过程发挥抗肝细胞癌的作用,为进一步研究提供思路和参考。

3-甲基腺嘌呤对转化生长因子-β诱导大鼠肝脏星形细胞株HSC-T6活化及自噬的影响观察

目的观察3-甲基腺嘌呤(3-MA)对转化生长因子-β(TGF-β)诱导的大鼠肝星形细胞株HSC-T6活化及自噬的影响。方法取对数生长期的HSC-T6细胞分为空白组、TGF-β+PBS组、TGF-β+3-MA组。TGF-β+3-MA组细胞加入浓度为2 ng/mL TGF-β培养72 h后加入3-MA(0.5 mg/mL)处理24 h,TGF-β+PBS组细胞加入浓度为2 ng/mL TGF-β培养72 h后加入等量PBS处理24 h,空白组加入等量PBS处理,采用实时荧光定量PCR法检测各组细胞活化标志物α-SMA、TGF-βmRNA和自噬标志物LC3、Beclin-1、Atg5 mRNA,采用Western blotting法检测各组细胞活化标志物α-SMA、TGF-β蛋白和自噬标志物LC3、Beclin-1、Atg5蛋白。结果TGF-β+PBS组、TGF-β+3-MA组细胞活化标志物α-SMA、TGF-βmRNA和蛋白均高于空白组,且TGF-β+3-MA组均低于TGF-β+PBS组(P均<0.05)。TGF-β+PBS组、TGF-β+3-MA组细胞自噬标志物LC3、Beclin-1、Atg5 mRNA和蛋白均高于空白组,且TGF-β+3-MA组均低于TGF-β+PBS组(P均<0.05)。结论3-MA可抑制TGF-β诱导的大鼠肝星形细胞株HSC-T6活化及自噬。

过表达肝细胞生长因子的内皮祖细胞移植促进坐骨神经挤压伤修复的研究

目的探讨过表达肝细胞生长因子(HGF)慢病毒转染的内皮祖细胞对大鼠坐骨神经损伤的修复作用。方法体外实验方面,提取大鼠骨髓的内皮祖细胞(EPC)并利用DiI-acLDL和FITC-UEA-1双染法进行鉴定。EPC转染慢病毒后采用qRT-PCR实验检测HGF基因表达水平。采用CCK-8实验、Transwell实验以及血管形成实验对转基因EPC的体外功能进行评估。体内实验方面,随机将25只SD大鼠平均分为5组,即对照组(Con组)、正常EPC组(N-EPC组)、空载病毒转染EPC组(LV-NC组)、过表达HGF病毒转染EPC组(LV-HGF组)和假手术组(Sham组)。各组大鼠暴露出右侧坐骨神经后,在坐骨神经分叉处上方10 mm处使用止血钳形成2 mm宽的坐骨神经挤压伤,假手术组在暴露神经后不做处理;分别将转染空载慢病毒EPC、转染过表达HGF慢病毒EPC或正常EPC与基质胶按1∶1体积比混合后注入伤处神经外膜下,而对照组不注入EPC。术后4周,运用Catwalk检测大鼠运动功能的恢复情况,电生理实验检测神经传导功能的恢复情况,透射电镜观察髓鞘厚度,甲苯胺蓝染色观察神经纤维密度,腓肠肌湿重称重检测肌肉萎缩程度,马松染色检测各组手术侧的腓肠肌肌纤维面积。结果体外实验结果显示,与正常EPC组相比,LV-HGF组EPC在CCK8实验中细胞增殖速度更快(P<0.05),Transwell实验中细胞迁移速率更高(P<0.01),在血管形成实验中形成更多血管状结构(P<0.01)。动物实验结果显示,LV-HGF组的坐骨神经功能指数值显著高于其他3组(Con组,P<0.01;N-EPC组,P<0.01;LV-NC组,P<0.01);复合肌肉动作电位波幅更高(Con组,P<0.01;N-EPC组,P<0.05;LV-NC组,P<0.05);再生坐骨神经的髓鞘较厚(Con组,P<0.01;N-EPC组,P<0.01;LV-NC组,P<0.01);有髓神经纤维密度更高(Con组,P<0.01;N-EPC组,P<0.05;LV-NC组,P<0.05);腓肠肌湿重比值更高(Con组,P<0.01;N-EPC组,P<0.01;LV-NC组,P<0.01);肌纤维平均面积较大(Con组,P<0.01;N-EPC组,P<0.05;LV-NC组,P<0.05);LV-HGF组以上实验结果与Sham组相比,差异有统计学意义(P<0.01)。结论过表达HGF基因可以增强EPC的增殖、迁移及分化功能。在坐骨神经挤压伤后,HGF基因转染的EPC相较于正常EPC,能更明显地促进了受损周围神经结构和功能的恢复,其机制与促进受损周围神经的轴突再生及髓鞘形成有关。

过表达肝细胞生长因子的人牙髓来源间充质干细胞通过调节Th2/Th1、Th17/Treg平衡改善变应性鼻炎的研究

背景当前间充质干细胞治疗变应性鼻炎研究较多,过表达肝细胞生长因子的间充质干细胞在其中的作用和机制有待进一步探究。目的 构建过表达肝细胞生长因子的人牙髓来源间充质干细胞(hepatocyte growth factor-overexpressing human dental pulp-stem cells,HGF/hDPSCs),研究其对变应性鼻炎的作用和可能机制。方法 提取人牙髓来源间充质干细胞,利用腺病毒载体Ad5将靶基因HGF转入,以构建HGF/hDPSCs,并评估其HGF分泌能力和鼻黏膜分布。采取卵清蛋白腹腔注射致敏、滴鼻激发的方式构建变应性鼻炎小鼠模型。根据致敏、激发和干预措施的区别,将小鼠分为4组:WT-PBS组(阴性对照组),AR-PBS组(阳性对照组),AR-hDPSCs组(hDPSCs治疗组),AR-HGF/hDPSCs组(HGF/hDPSCs治疗组)。利用症状评分、病理学分析(HE、PAS染色)监测各组小鼠变应性鼻炎症状和鼻黏膜局部炎症情况。采取免疫组织化学染色(CD3、CD19)、ELISA(总IgE、OVA特异IgE)和PCR(IFN-γ、IL-5、IL-13、IL-17A、Foxp3)探究免疫应答机制。结果 HGF/hDPSCs可在体外和体内稳定表达HGF,经尾静脉注射后可迁移至小鼠鼻黏膜。症状评分显示,HGF/hDPSCs可改善变应性鼻炎小鼠挠鼻、喷嚏、流涕等过敏症状(P<0.05)。病理分析和免疫组化结果显示,变应性鼻炎小鼠鼻黏膜免疫反应以T淋巴细胞聚集为主要特征。应用HGF/hDPSCs可减少鼻黏膜淋巴细胞浸润和杯状细胞增生等鼻黏膜炎症表现,并降低病理损伤评分(P<0.01)。ELISA结果表明,HGF/hDPSCs可下调血清总IgE和OVA特异性IgE表达水平(P<0.01)。PCR结果表明,HGF/hDPSCs可抑制变应性鼻炎小鼠脾Th1细胞(IFN-γ)、Th2细胞(IL-5、IL-13)应答水平,改变了Th2/Th1平衡;下调Th17细胞(IL-17A)应答水平(P<0.05),不影响Treg细胞(Foxp3)应答水平(P>0.05),改变了Th17/Treg平衡。结论 HGF/hDPSCs可通过调节Th2/Th1、Th17/Treg平衡缓解变应性鼻炎小鼠的鼻部过敏症状,减轻鼻黏膜炎症。

人过表达肝细胞生长因子间充质干细胞对小鼠的免疫原性和免疫毒性评价

目的评价人过表达肝细胞生长因子间充质干细胞(hepatocyte growth factor-overexpressing dental pulp-stem cells,HGF-DPSCs)对小鼠的免疫原性和免疫毒性。方法采用BALB/c小鼠,雌雄各半,随机分组,每组6只,共6组,合计动物36只。设立第3天对照组(D3 PBS组)、第3天尾静脉注射DPSCs组(D3 DPSCs组)、第3天尾静脉注射HGF-DPSCs组(D3 HGF-DPSCs组)、第7天对照组(D7 PBS组)、第7天尾静脉注射DPSCs组(D7 DPSCs组)、第7天尾静脉注射HGF-DPSCs组(D7 HGF-DPSCs组)。全自动动物血液细胞分析仪检测外周血淋巴细胞、粒细胞、单核细胞,ELISA检测HGF、IgA、IgE、IgG、IgM、IFN-γ、IL-4、TNF-α表达水平,HE染色评价肝、肾、脾、肺组织的病理变化。结果D3 HGF-DPSCs组和D7 HGF-DPSCs组的血清人源HGF水平分别高于D3 DPSCs组和D7 DPSCs组,D3 PBS组和D7 PBS组不表达人源HGF。D7 PBS组较D3 PBS组、D7 DPSCs组较D3 DPSCs组、D7 HGF-DPSCs组较D3 HGF-DPSCs组,在淋巴细胞、炎症因子和器官毒性上均未观察到明显区别。各组间淋巴细胞总数、淋巴细胞百分比、总IgA、总IgE、总IgG、总IgM、IL-4、TNF-α、IFN-γ等指标差异均无统计学意义。同时HE染色结果表明经尾静脉注射HGF-DPSCs后,小鼠各脏器未出现明显病理损伤。结论腺病毒载体构建的HGF-DPSCs可在小鼠体内高表达HGF,同时HGF-DPSCs并无明显的免疫原性和免疫毒性,为HGF-DPSCs的后续研究和临床应用提供了直接的数据支撑和理论依据。

乙醇脱氢酶1A和血管内皮生长因子-A在肝细胞癌中的表达

目的探讨乙醇脱氢酶1A(ADH1A)和血管内皮生长因子-A(VEGFA)在肝细胞癌(HCC)中的表达和临床意义。方法通过基因表达谱交互(GEPIA)分析ADH1A和VEGFA在HCC以及癌旁正常组织中的表达情况及相关性;肿瘤基因组图谱(TCGA)和基因富集分析(GSEA)探讨ADH1A在HCC中的相关通路;收集84例HCC患者的样本及临床病理资料,并选取54例癌旁正常组织样本做对照,分析ADH1A和VEGFA与HCC中临床病理参数的相关性;采用免疫组化法检测并分析病例组和对照组ADH1A和VEGFA的蛋白表达情况,结合临床病理参数并通过Kaplan-Meier法分析ADH1A和VEGFA的表达与HCC患者的临床进展和预后的关系。结果生物信息学分析发现ADH1A在HCC中低表达而VEGFA在HCC中高表达,并且两者呈负相关关系(P<0.001);免疫组化检测结果显示ADH1A在HCC组织中的表达率低于癌旁正常组织(P<0.01),而VEGFA在HCC组织中表达率高于癌旁正常组织(P<0.01);HCC组织中ADH1A高表达组的脉管癌栓及HCC患者的复发比例更低(P<0.05);HCC组织中VEGFA高表达组的肿瘤直径>5 cm、高TNM分期、有微卫星以及G2-G3分化程度比例更高(P<0.05);Kaplan-Meier生存分析显示,ADH1A高表达同时VEGFA低表达患者的五年生存率较高。结论HCC患者肿瘤组织中ADH1A的低表达以及VEGFA的高表达与肿瘤的进展有关,可作为HCC患者预后评估指标之一。

基于网络药理学和生物信息学探索金雀异黄酮对肝细胞癌的作用机制

目的通过网络药理学及生物信息学方法阐明金雀异黄酮对肝细胞癌的作用机制。方法利用网络药理学、生物信息学和实验验证方法。从Pharm Mapper数据库获取金雀异黄酮的潜在作用靶点。使用Gene Cards数据库获取肝细胞癌的致病基因,分析确定金雀异黄酮潜在靶点与肝细胞癌相关靶点的交集基因。采用TCGA的肝细胞癌组织样本和正常组织样本的RNA测序数据及临床信息,筛选出差异表达的共同靶基因,并进行基因本体(GO)功能注释和京都基因与基因组百科全书(KEGG)通路富集分析。通过单因素Cox分析筛选影响患者总体生存期的差异表达基因(DEGs),利用STRING平台构建DEGs的靶点交互网络,并筛选核心基因进行验证。进行分子对接试验,检测金雀异黄酮对肝细胞癌增殖的影响。结果共筛选出235个金雀异黄酮的潜在作用靶点和9415个肝细胞癌的治疗靶点,其中40个差异表达的共同靶基因影响患者的预后。其中,ESR1、AR、HRAS、CCNA2、MMP9和CYP3A4为核心靶点。GO功能注释富集分析获得333个富集项,KEGG通路富集分析获得23个富集结果。分子对接结果显示,金雀异黄酮与核心靶蛋白有强烈的结合能力。体外实验证实,金雀异黄酮显著抑制了肝细胞癌的增殖。结论金雀异黄酮通过多个代谢和信号通路抑制肝细胞癌的发展机制。ESR1、AR、HRAS、CCNA2、MMP9和CYP3A4的表达水平可用于预测肝细胞癌患者的预后,为治疗提供有价值的靶点。

肝细胞肝癌组织表皮生长因子受体表达的临床病理学特征分析

目的 :检测肝细胞肝癌(hepatocellular carcinoma,HCC)患者癌旁肝组织中表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor,EGFR)的表达情况,并分析其临床病理意义。方法 :采用免疫组织化学法检测EGFR在158例癌旁组织及HCC组织中的表达,结合临床病理资料统计分析。结果:免疫组织化学染色显示EGFR蛋白阳性定位于HCC细胞和癌旁肝细胞的细胞膜及细胞浆;EGFR在癌旁组织和HCC组织中阳性表达率分别为65.8%(104/158)、58.2%(92/158),癌旁组织中EGFR蛋白表达高于HCC组织,但差异无统计学意义(P>0.05);EGFR在癌旁肝组织中的表达与有无肝硬化情况(r=0.175 3,P=0.027 6)及术后复发情况(r=0.212 5,P=0.015 6)相关,而与HCC患者年龄、性别、HBs Ag感染、血清甲胎蛋白水平、肿瘤直径、肿瘤个数、组织学分级及血管侵犯均无关。结论:EGFR在癌旁肝组织中高表达,并且与肝硬化情况及术后复发有关,提示EGFR可能参与HCC的发生发展过程,检测癌旁肝组织中EGFR表达有助于预测HCC复发。

基于网络药理学方法探析汉黄芩素治疗肝细胞癌作用机制和体外实验研究

背景肝细胞癌是癌症相关死亡的主要原因,目前的防治形势依然严峻,对新的肝细胞癌治疗药物进行探索研究具有科学意义。目的通过网络药理学方法分析汉黄芩素干预肝细胞癌的作用机制,并进行体外实验验证。方法在TCMSP数据库中检索汉黄芩素的药物靶点,从TTD、Gen Card、OMIM、Dis Gent数据库中收集肝细胞癌的疾病靶点。将收集的药物靶点和疾病靶点取交集,作为药物干预疾病的潜在靶点。对交集靶点运用R软件进行富集分析,使用STRING数据库和Cytoscape软件对交集靶点构建蛋白互作网络和筛选核心靶点。在GIEPA数据库对核心靶点行进一步分析。最后通过体外实验对前期分析结果进行验证:采用CCK-8试剂盒测定细胞活性;采用平板克隆形成实验测定细胞增殖;采用划痕实验测定细胞迁移;采用Western-blotting(WB)实验测定蛋白质表达水平。结果分析结果发现汉黄芩素的吸收、分布、代谢、排泄特性符合小分子药物成药规则并且毒性分析结果表明无毒性。收集到汉黄芩素靶点135个,肝细胞癌靶点8238个,两者交集靶点113个。通过对构建的蛋白互作网络筛选出的前10位的核心基因进行分析,发现细胞周期蛋白依赖性激酶1(CDK1)、原癌基因酪氨酸蛋白激酶Src(SRC)在肝细胞癌组织中m RNA水平较正常肝组织上调(P<0.05),并且在肝细胞癌患者中高表达与不良预后相关(P<0.05)。KEGG富集分析发现交集基因富集在PI3K/AKT信号通路上最多,分子对接结果显示汉黄芩素与CDK1、SRC结合构型活力较强。CCK-8试剂盒检测结果显示,加入汉黄芩素75.0、150.0、300.0μmol/L组Hep G2细胞活性均低于对照组(P<0.05);平板克隆形成实验结果显示,加入汉黄芩素37.5、75.0、150.0μmol/L组Hep G2细胞克隆形成数均低于对照组(P<0.05);划痕实验结果表明,加入汉黄芩素37.5、75.0、150.0μmol/L组Hep G2细胞迁移率均低于对照组(P<0.05);WB实验结果表明,加入汉黄芩素75.0、150.0μmol/L组PI3K、P-AKT/AKT、CDK1、SRC蛋白表达水平均低于对照组(P<0.05)。结论汉黄芩素通过下调CDK1、SRC蛋白表达,减弱PI3K/AKT通路信号,抑制肝癌细胞增殖和迁移,诱导细胞凋亡,从而达到干预肝细胞癌发生和进展的目的。

腺病毒介导的肝细胞生长因子/血管内皮生长因子165对大鼠超比例随意皮瓣成活的影响及机制研究

目的:观察术前注射腺病毒介导的肝细胞生长因子/血管内皮生长因子165(Ad-HGF/VEGF165)对大鼠超比例随意皮瓣成活的影响和其机制的初步研究。方法:大鼠背部设计超比例随意皮瓣模型,将其随机分为Ad-HGF/VEGF165组、AdVEGF165组和对照组。术前7 d,Ad-HGF/VEGF165组和Ad-VEGF165组分别于大鼠皮瓣及创缘内多点注射Ad-HGF/VEGF165及AdVEGF165,对照组注射等容量0.9%氯化钠注射液。分别于术后7 d、14 d观测皮瓣成活面积,切取皮瓣组织标本HE染色、免疫组化观察微血管密度及组织间VEGF阳性率等指标,WesternBlot检测目的蛋白表达情况。结果:术后7 d、14 d,Ad-HGF/VEGF165组、Ad-VEGF165组皮瓣存活面积、组织间微血管数目、VEGF及细胞外调节蛋白激酶(ERK1/2)蛋白表达情况均高于对照组(P<0.001),且Ad-HGF/VEGF165组明显高于Ad-VEGF165组(P<0.05)。结论:Ad-HGF/VEGF165具有协同作用,能显著促进VEGF和ERK1/2信号因子表达,短期内促进血管网重建,改善皮瓣血液灌注,提高大鼠超比例随意皮瓣成活面积。

非小细胞肺癌患者肝细胞生长因子受体和表皮生长因子受体及间变性淋巴癌激酶基因异常与临床病理特征的关系

目的分析非小细胞肺癌(NSCLC)患者肝细胞生长因子受体(c-Met)、表皮生长因子受体(EGFR)和间变性淋巴癌激酶(ALK)基因异常与临床病理特征的关系。方法回顾性分析2021年1—12月新钢中心医院收治的152例NSCLC患者的临床资料,取患者组织标本,采用荧光原位杂交技术检测c-Met基因扩增情况,采用聚合酶链扩增反应及直接测序法检测EGFR基因突变情况,采用实时荧光定量PCR检测ALK基因重排情况。分析c-Met基因扩增、EGFR基因突变和ALK基因重排与患者临床病理特征的关系。结果152例NSCLC患者中,c-Met基因扩增7例,阳性率为4.61%;EGFR基因突变48例,突变率为31.58%;ALK基因重排8例,重排率为5.26%。c-Met基因扩增阳性与阴性患者、ALK基因重排与无重排患者性别、年龄、临床分期、吸烟史、肿瘤位置、病理类型比较差异无统计学意义。EGFR基因突变与无突变患者性别、年龄、病理类型比较差异有统计学意义(P<0.05),其中EGFR基因突变患者以女性、年龄<70岁、腺癌占比较高。结论c-Met基因扩增及ALK基因重排与患者临床病理特征无关,而EGFR基因突变与患者性别、年龄及病理类型密切相关。