肝细胞生长因子通过激活NF-κB信号通路促进BV2细胞介导神经炎症

目的 探讨肝细胞生长因子(hepatocyte growth factor,HGF)对小胶质细胞介导神经炎症的作用及其调控机制,为后续可能治疗靶点的确定提供实验依据和理论参考。方法 选取小鼠小胶质细胞(BV2)作为研究对象,分为对照组和HGF组,通过蛋白质组学分析、实时荧光定量聚合酶链反应(qRTPCR)以及蛋白质印迹法(western blot,WB)等检测HGF对BV2细胞NF-κB信号通路活性及炎症因子表达的影响。结果 蛋白质组学分析显示HGF处理后,NF-κB通路显著富集;HGF处理1h时,BV2细胞增殖活力随浓度升高下降,6h和12h时呈现先上升后下降的趋势;qRT-PCR显示HGF显著上调炎症因子(iNOS、TNF-α、IL-1β);WB表明HGF促进炎症相关因子(TNF-α、NF-κB p65)相对表达量上升。结论本研究首次证实HGF通过激活BV2细胞NF-κB信号通路促进神经炎症的作用及其机制,为进一步探究神经炎症调控策略及开发有效的临床治疗手段提供重要线索。

大麻二酚对转化生长因子β1诱导肝星状细胞活化和肝纤维化的作用

背景:大麻二酚具有抗炎、抗氧化等药理学作用,并且不具有精神活性,在肝脏疾病中的研究日渐增加,但其对肝星状细胞转化生长因子β1/Smad信号转导通路的作用尚未明确。目的:探讨大麻二酚对肝星状细胞中转化生长因子β1/Smad信号转导通路的影响,研究其抗肝纤维化的可能机制。方法:(1)体外实验:选取大鼠肝星状细胞株(HSC-T6),分6组培养:对照组常规培养24 h,单纯药物组加入大麻二酚培养24 h,造模组加入转化生长因子β1培养24 h,造模+低剂量药物组、造模+高剂量药物组、造模+阳性对照组均加入转化生长因子β1培养24 h后分别加入1,5μmol/L大麻二酚或水飞蓟素培养24 h。培养结束后,检测各组细胞α-平滑肌肌动蛋白与Ⅰ型胶原mRNA表达、白细胞介素1β与肿瘤坏死因子α水平及Ⅰ型胶原、转化生长因子β1/Smad信号转导通路蛋白表达。(2)动物体内实验:将C57BL/6J小鼠随机分为5组,每组8只:假手术组不造模,造模组、造模+低剂量药物组、造模+高剂量药物组、造模+阳性对照组通过胆管结扎法建立肝纤维化模型,造模3周后分别腹腔注射4,8 mg/kg大麻二酚或水飞蓟素,1次/d,连续给药7 d。给药结束后,检测各组小鼠肝功能、肝脏病理形态及α-平滑肌肌动蛋白、Ⅰ型胶原、转化生长因子β1/Smad信号转导通路相关蛋白表达。结果与结论:(1)体外实验:与对照组比较,造模组HSC-T6细胞α-平滑肌肌动蛋白与Ⅰ型胶原mRNA表达、白细胞介素1β与肿瘤坏死因子α水平以及Ⅰ型胶原、转化生长因子β1、p-Smad2/3蛋白表达均升高(P<0.05),Smad7蛋白表达降低(P<0.05);两种剂量大麻二酚处理可改善转化生长因子β1诱导的HSC-T6细胞上述指标的变化,并且以造模+高剂量药物组改善作用更明显;(2)体内实验:与假手术组比较,模型组小鼠血清丙氨酸氨基转移酶、天门冬氨酸氨基转移酶活性升高(P<0.05),肝组织中炎性细胞浸润及胶原含量增加(P<0.05),转化生长因子β1/Smad信号转导通路被激活,α-平滑肌肌动蛋白、Ⅰ型胶原蛋白表达升高(P<0.05);两种剂量大麻二酚干预可减轻造模小鼠上述指标的变化,并且以造模+高剂量药物组效果更明显;(3)结果表明,大麻二酚通过抑制肝星状细胞转化生长因子β1/Smad信号传导通路的激活抑制肝纤维化。

肝细胞生长因子/酪氨酸蛋白激酶MET 信号通路与乳腺癌侵袭转移的相关性分析

目的探讨分析肝细胞生长因子(HGF)/酪氨酸蛋白激酶MET(c-met)信号通路与乳腺癌侵袭转移的相关性。方法选择2018年3月至2019年3月承德医学院附属医院临床术后经病理证实的乳腺癌标本75例、乳腺纤维腺瘤标本60例以及癌旁正常乳腺组织标本50例。采用SP免疫组化法以及逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)法检测各组织标本HGF、c-met、β连环素(β-catenin)蛋白表达和mRNA表达情况。结果HGF[82.67%(62/75)比48.33%(29/60)比14.00%(7/50)]、c-met[86.67%(65/75)比55.00%(33/60)比20.00%(10/50)]、β-catenin[78.67%(59/75)比41.67%(25/60)比6.00%(3/50)]在乳腺癌组织、乳腺纤维腺瘤组织以及癌旁正常乳腺组织中的表达均差异有统计学意义(P<0.05)。在乳腺癌、乳腺纤维腺瘤以及癌旁正常乳腺组织中HGF、c-met mRNA相对表达量差异有统计学意义(P<0.05),其中乳腺癌相对表达量最高、乳腺纤维腺瘤相对表达量次之;而乳腺癌、乳腺纤维腺瘤以及癌旁正常乳腺组织中β-catenin mRNA相对表达量比较差异无统计学意义(P>0.05)。HGF表达阳性率与病人TNM分期、淋巴结转移、肿瘤大小、ER表达、HER-2表达有关(P<0.05)。c-met蛋白表达阳性率与病人肿瘤TNM分期、淋巴结转移密切相关(P<0.05)。β-catenin蛋白表达异常率与病人TNM分期、淋巴结转移、肿瘤大小密切相关(P<0.05)。结论乳腺癌组织中HGF、c-met蛋白高表达而β-catenin蛋白异常表达,且HGF/c-met信号通路及β-catenin蛋白与乳腺癌侵袭转移密切相关。

榄香烯通过c-Met信号通路逆转由肝细胞生长因子诱导的吉非替尼耐药作用

目的:研究肝细胞生长因子(hepatocyte growth factor,HGF)诱导肺癌PC-9细胞对吉非替尼耐药的作用,并探讨榄香烯逆转此耐药作用的可能机制。方法:应用不同浓度的吉非替尼和榄香烯单独或联合作用于HGF诱导的PC-9细胞株。MTT法检测细胞活力,并计算吉非替尼的半数抑制浓度(half maximal inhibitory concentration,IC50);Transwell小室实验检测榄香烯对HGF诱导的吉非替尼耐药PC-9细胞侵袭能力的影响;Western blot检测PC-9细胞中c-Met、AKT及其磷酸化蛋白的水平。结果:榄香烯可以显著抑制肺癌PC-9细胞的活力(P<0.05),随着药物剂量的增加,榄香烯对PC-9细胞的生长抑制率显著上升,在给药24 h后,其IC50为169.31 mg/L。肺癌PC-9细胞对吉非替尼敏感,随着吉非替尼浓度的增加,其对PC-9细胞生长的抑制作用不断增强,IC50为0.30μmol/L;外源性HGF(50μg/L)对肺癌PC-9细胞的生长有明显的促进作用,并诱导吉非替尼耐药。同时,使用cMet抑制剂SU11274联合吉非替尼作用于HGF诱导的PC-9细胞时,其存活率比吉非替尼单独作用于HGF诱导的PC-9细胞明显降低(P<0.05)。Transwell小室结果显示,与对照组相比,HGF能显著提高肺癌PC-9细胞的侵袭能力;与HGF联合吉非替尼组相比,榄香烯、HGF联合吉非替尼作用能明显抑制肺癌PC-9细胞的侵袭能力。Western blot结果显示,与对照组相比,HGF可显著上调p-Met和p-AKT的蛋白水平;与HGF联合吉非替尼组相比,榄香烯、HGF联合吉非替尼作用能明显下调p-Met和p-AKT的蛋白水平(P<0.01)。结论:榄香烯可逆转HGF诱导的肺癌PC-9细胞对吉非替尼耐药,其机制可能与抑制HGF活化的c-Met及其下游信号通路有关。

c-Met siRNA对肝细胞生长因子诱导的人胆管癌QBC939细胞增殖的影响

目的:近年来胆管癌的发病率和病死率呈上升的趋势,5年生存期低于5%,因此亟需利用现代生物技术探索新的治疗方法。探讨针对肝细胞生长因子(HGF)受体c-Met的RNA干扰对人胆管癌(CCA)QBC939细胞增殖的影响。方法:构建针对人c-Met基因的小干扰RNA(siRNA),转染体外培养的人CCA QBC939细胞,应用MTT法检测细胞增殖,Western blot检测c-Met、细胞周期素(Cyclin)D1和A表达以及磷酸肌醇-3激酶/蛋白激酶B(PI3K/Akt)和胞外信号调节激酶(ERK1/2)信号通路活化。结果:c-Met siRNA显著抑制c-Met蛋白表达,且随着其浓度的增加,c-Met蛋白表达逐渐下降,500 nmol/L c-Met siRNA对c-Met蛋白表达的抑制率达65%。HGF刺激24 h,细胞增殖是对照组的4.54倍,100 nmol/L c-Met siRNA预处理即显著抑制HGF诱导的细胞增殖,其抑制率达26%,且随浓度增加,其抑制作用逐渐增强,500 nmol/L c-Met siRNA对HGF诱导的细胞增殖的抑制率达85%。HGF刺激4h,PI3K和Akt的活性即显著增强,分别是对照组的4.09和4.54倍,c-Met siRNA可呈浓度依赖性的抑制HGF诱导的PI3K/Akt活化,500 nmol/L c-Met siRNA几乎完全抑制HGF诱导的PI3K/Akt活化。HGF显著诱导人CCAQBC939细胞ERK1/2活化,50 ng/ml HGF刺激4 h,磷酸化ERK1/2表达是对照组的3.63倍,c-Met siRNA可呈浓度依赖性的抑制HGF诱导的ERK1/2活化。HGF显著诱导人CCA QBC939细胞细胞周期素D1和A表达,分别是对照组的2.83和3.16倍,c-Met siRNA可呈浓度依赖性的抑制HGF诱导的细胞周期素D1和A表达。结论:针对人c-Met基因的RNA干扰可有效阻断人CCA QBC939细胞c-Met表达,并通过阻断PI3K/Akt和ERK1/2信号通路活化而抑制HGF诱导的细胞增殖。

肝细胞生长因子受体c-met在骨肉瘤中的表达及其临床意义

目的:探讨骨肉瘤组织中肝细胞生长因子受体c-met蛋白的表达情况,分析其临床意义及与预后的关系。方法:应用免疫组织化学方法检测行手术的35例骨肉瘤及13例骨样骨瘤患者标本肝细胞生长因子受体c-met的表达,并分析其与临床因素和预后的关系。结果:骨肉瘤组织中肝细胞生长因子受体c-met的阳性表达率为80%(28/35),而在骨样骨瘤中的表达率为7.7%(1/12),两者比较显著差异(P<0.01);结合临床资料分析,其表达与患者性别、年龄、发病次数、肿瘤体积、病理分型无关(P>0.05),而与临床分期、有无转移有关(P<0.05)。结论:C-met可能在骨肉瘤细胞侵袭、转移的过程中起重要作用;肝细胞生长因子受体c-met可以作为骨肉瘤诊断和预测转移的指标。

乳腺癌中肝细胞生长因子及其受体C-Met和血管内皮生长因子表达的意义

目的:研究肝细胞生长因子及其受体C-M et和血管内皮生长因子蛋白在乳腺癌组织中表达的意义。方法:应用免疫组织化学方法检测53例乳腺癌患者组织标本中肝细胞生长因子、C-M et和血管内皮生长因子蛋白的表达情况。结果:肝细胞生长因子、C-M et和血管内皮生长因子蛋白在乳腺癌组织中的表达明显高于乳腺良性肿瘤组织(P<0.05),其阳性表达率随癌组织的组织学分级,临床分期和淋巴结转移的增多而增高。结论:乳腺癌组织中肝细胞生长因子、C-M et和血管内皮生长因子蛋白的高表达,表明了乳腺癌细胞的高活动性,可能与患者的预后密切相关。

重组人肝细胞生长因子对心脏移植后冠状动脉内膜c-Met表达的影响

目的探讨重组人肝细胞生长因子(rh-HGF)对大鼠移植心脏冠状动脉内膜c-Met表达的影响及其意义。方法雄性Wistar大鼠80只,雄性SD大鼠40只,建立腹腔异位心脏移植模型。将60只受体大鼠分为3组,对照组:20只Wistar大鼠,术后当天开始腹腔注射生理盐水1ml/kg.d;环孢菌素A(CsA)组:20只SD大鼠,术后当天开始腹腔注射CsA5mg/kg.d;rh-HGF组:20只SD大鼠,术后当天开始腹腔注射rh-HGF500μg/kg.d+CsA5mg/kg.d。分别于术后15d、60d观察冠状动脉的病理变化;采用免疫组织化学方法检测冠状动脉内膜c-Met的表达,逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测冠状动脉内膜c-MetmRNA的表达。结果rh-HGF组移植心脏冠状动脉内皮细胞完整,内膜轻度增厚,管腔轻度狭窄,病理改变明显轻于CsA组。术后15d、60drh-HGF组c-Met和c-MetmRNA在移植心脏冠状动脉内膜的表达均明显高于CsA组和对照组(术后60dc-Met:1.85±0.26vs.0.96±0.10,t=8.491,P=0.000;1.85±0.26vs.0.58±0.03,t=13.725,P=0.000;术后60dc-MetmRNA:1.92±0.22vs.0.88±0.07,t=11.940,P=0.000;1.92±0.22vs.0.42±0.02,t=19.206,P=0.000)。结论rh-HGF通过上调移植心脏冠状动脉内膜c-Met的表达,可促进冠状动脉内皮细胞修复和再生,预防移植心脏血管病的发生。

抑制转化生长因子β和Notch信号通路诱导人胆囊上皮细胞分化为功能性肝细胞样细胞

目的通过小分子化合物改变细胞命运,诱导人胆囊上皮细胞(hGBEC)分化为具有功能的肝细胞样细胞。方法在基质胶中对原代hGBEC进行三维培养,生长培养基中添加B27添加剂、N2添加剂、N-乙酰半胱氨酸、表皮生长因子、肝细胞生长因子等。添加小分子化合物/蛋白因子对细胞进行诱导分化,筛选出关键作用因子。采用PCR、qPCR和免疫荧光染色检测干细胞标志物及肝细胞相关标志物的表达情况,通过脂肪BODIPY-493染色、糖原过碘酸希夫染色和白蛋白ELISA检测评估细胞的肝样功能。结果三维培养的hGBEC表达造血干细胞抗原CD133、上皮细胞黏附分子、肝细胞核因子4α等肝脏干细胞和肝前体细胞标志物。TGF-β信号通路抑制剂和Notch信号通路抑制剂是诱导hGBEC分化的关键作用因子。分化条件下所得细胞表达肝细胞功能标志物α1-抗胰蛋白酶、细胞色素P4503A4、白蛋白和延胡索酰乙酰乙酸水解酶,可以贮存糖原,具有合成脂肪的能力,能够分泌白蛋白。结论hGBEC可在体外长期培养,通过抑制TGF-β和Notch信号通路可初步诱导其分化为具有部分肝功能的肝细胞样细胞。

整合素/黏着斑激酶信号通路及转化生长因子-β信号通路与肝星状细胞活化的关系

肝损伤-炎症-修复导致肝星状细胞（hepatic stellate cell,HSC）活化,分泌大量的胶原蛋白,引起细胞外基质细胞外基质（extracellular matrix,ECM）的合成与降解失调,是肝纤维化（hepatic fibrosis）形成的关键.整合素（integrin）/黏着斑激酶（focal adhesion kinase,FAK）信号通路可以通过多条途径促进HSC的活化,加重转化生长因子-β（TGF-β）诱导的纤维化进程.本文就整合素/FAK信号通路促进HSC的活化及其与TGF-β信号通路的相互作用作一综述.

转化生长因子-β_1-Smads信号通路在肝星状细胞凋亡中的作用

目的探讨转化生长因子-β_1(TGF-β_1)-Smads信号通路对肝星状细胞凋亡的研究价值。方法以大鼠T6肝星状细胞株(HSC-T6)作为研究对象,随机分为对照组和实验组,对照组采取常规培养措施,不做任何干预,实验组分别用50 mg/ml和100 mg/ml的外源性神经生长因子(NGF)干预。比较实验组和对照组HSC的增殖、凋亡情况和实验组不同处理方式下α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、TGF-β_1、细胞转导信号分子磷酸化的Smad3蛋白(Smad3)、Smad7表达的变化。结果对照组HSC增殖高于实验组、凋亡明显低于实验组,差异有统计学意义(P<0.05);实验组不同处理方式下α-SAM、TGF-β_1、Smad3和Smad7表达变化比较,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 TGF-β_1-Smads信号通路能够有效抑制肝星状细胞的凋亡,对肝纤维化的防治有重要意义。

肝细胞生长因子对人舌鳞癌Tca8113细胞VEGF-C表达的影响及作用机制的初步研究

目的:研究HGF对人舌鳞癌Tca8113细胞中VEGF-C表达的影响并探讨其作用机制。方法:体外培养Tca8113细胞,应用ELISA方法测定不同浓度HGF作用下以及分别用LY294002、U0126、SP600125、SB203580信号通路抑制剂阻断PI3K/Akt、P44/P22MAPK、JNK、P38MAPK信号通路后VEGF-C的表达水平。结果:随着培养液中HGF浓度的增加,Tca8113细胞中VEGF-C的表达水平出现先增高后降低的趋势,当HGF浓度为40 ng/ml时,VEGF-C表达水平最高。PI3K/Akt信号通路抑制剂(LY294002)和P42/44MAPK信号通路抑制剂(U0126)显著抑制了HGF刺激下Tca8113的VEGF-C蛋白的表达(P<0.01);而JNK信号通路抑制剂(SP600125)和P38MAPK信号通路抑制剂(SB203580)对HGF刺激下Tca8113的VEGFC蛋白的表达影响甚微(P>0.05)。结论:在人舌鳞癌Tca8113细胞中,随着HGF浓度的增加,VEGF-C的表达先增高后降低。PI3K/Akt和P44/P22MAPK信号通路在口腔鳞状细胞癌淋巴转移中可能发挥作用。

灵芪合剂影响肝细胞生长因子/上皮间质转化因子通路抑制结直肠癌

目的:探索灵芪合剂对结直肠癌发展的作用机制,并且明确灵芪合剂是否可通过肝细胞生长因子(HGF)/上皮间质转化因子(c-Met)信号通路抑制结直肠癌发展。方法:将直肠癌大鼠分为灵芪合剂高中低剂量组,同时进行中西药对比的治疗效果,通过蛋白质印迹法(Western Blotting)检测、免疫荧光检测和凋亡的检测等技术手段的检测与分析,观察肿瘤的生长、细胞凋亡情况和HGF/c-Met通路蛋白的表达情况。结果:Western Blotting检测肿瘤组织中HGF蛋白表达增强,c-Met蛋白表达减少;在灵芪合剂治疗后,HGF的表达减少,c-Met的表达增强,这与免疫荧光表现结果一致,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:灵芪合剂通过抑制HGF的表达,上调c-Met的表达,抑制HGF/c-Met信号通路从而抑制结直肠癌细胞的侵袭和转移,实现对结直肠癌的预防和治疗。

转化生长因子β-Smad信号通路与肝纤维化

肝纤维化是慢性肝损伤向肝硬化进展过程中的一个关键阶段,是一种可逆的过程,其形成是由于肝内多种细胞分泌的细胞因子和炎性介质综合作用于肝星状细胞（Hepatic stellate cell,HSC）,激活HSC致使细胞外基质（extracellular matrix,ECM）各成分合成增多而在肝内过度沉积引起的。

内皮生长因子G61A位点基因多态性与肝细胞癌易感性的Meta分析

肝细胞恶变和肿瘤进展的发病机制包括多种基因改变和分子信号通路调节等。其中，内皮生长因子（EGF）及受体信号通路的调节异常在肝细胞癌（HCC）的发生中具有重要作用。目前，国内外很多研究显示，EGF基因61A／G位点的功能多态性与人类多种恶性肿瘤相关。然而，

JNK信号通路胞外生长因子途径在肝再生中作用研究

为了研翱NK信号通路对肝再生过程的影响，本文选取该信号通路中胞外生长因子与RTKs结合激活CRK／CRKL或RAS途径对大鼠再生肝的肝细胞影响变化做进一步研究。通过基因芯片检测和基因表达谱分析，发现胞外生长因子途径中途径1—3促进肝细胞的增殖、分化，途径4-10促进肝再生进展和终止阶段肝细胞有丝分裂和生存，而途径11-17可能抑制进展和终止阶段肝细胞的生长和增殖。

肝细胞生长因子在烟雾病发病机制中的作用

目的探讨肝细胞生长因子(hepatocyte growth factor,HGF)在烟雾病发病机制中的作用。方法采用酶联免疫吸附法检测30例烟雾病患者组、60例健康对照组、8例非烟雾病脑缺血对照组的血清HGF浓度;以2例非烟雾病患者的颞浅动脉分支作为对照,应用免疫组织化学的方法研究12例烟雾病患者的6例颞浅动脉分支和6例脑膜中动脉分支的HGF及其受体c-Met的表达情况。结果烟雾病组和非烟雾病脑缺血对照组的血清HGF浓度分别为1154.3±348.9pg/ml和955.6±277.5pg/ml,均明显高于健康对照组(701.3±134.3pg/ml),统计概率分别为P<0.001和P<0.05;烟雾病组与非烟雾病脑缺血对照组之间的差异虽尚无显著性(P>0.05),但前者比后者仍有升高趋势。免疫组化研究显示HGF及c-Met在烟雾病组颞浅动脉分支和脑膜中动脉分支的管壁平滑肌细胞和内皮细胞的表达均强于对照组。结论烟雾病患者的血清HGF浓度比健康对照组明显升高,HGF及其受体c-Met在烟雾病颞浅动脉分支、脑膜中动脉分支的管壁表达增多,提示HGF在烟雾病的发病机制中可能具有重要作用。

肉苁蓉苯乙醇总苷对血小板衍生生长因子诱导的肝星状细胞增殖的影响及机制

目的探讨肉苁蓉苯乙醇总苷(CPh Gs)抑制血小板衍生生长因子-BB(rr PDGF-BB)介导的大鼠肝星状细胞(HSC)增殖活化作用及对PDGF/ERK_(1/2)信号通路表达的影响。方法培养HSC细胞,体外给予不同浓度(0、3.91、7.81、15.63、31.25、62.50、125.00、250.00和500.00 mg·L^(-1))的CPh Gs测定半数抑制率(IC50),选取25、50、75、100 mg·L^(-1)的CPh Gs,rr PDGF-BB刺激后,通过四甲基偶氮唑盐法(MTT)检测细胞的增殖;采用荧光定量PCR(RT-PCR)检测ERK_(1/2)、α-SMA、c-fos、c-jun和Collagen I mRNA的表达;进一步采用Western blot法检测CPh Gs对PDGF/ERK_(1/2)通路中ERK_(1/2)、P-ERK_(1/2)和Collagen I蛋白的表达。结果 (50~100)mg·L^(-1)的CPh Gs可以抑制rr PDGF-BB诱导的HSC的增殖(P<0.05);(25~100)mg·L^(-1)剂量组的CPh Gs均可抑制ERK_(1/2)、α-SMA、c-fos、c-jun和CollagenⅠmRNA水平的表达,并且明显抑制ERK_(1/2)、P-ERK_(1/2)和CollagenⅠ通路蛋白的表达。结论 CPh Gs的抗肝纤维化作用可能与其阻断PDGF/ERK_(1/2)通路进而阻断HSC的活化、增殖有关。

HGF/c-Met信号传导通路与晚期非小细胞肺癌关系的研究进展

肝细胞生长因子(hepatocyte growth factor,HGF)/c—Met信号传导通路在晚期非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)的发生、发展中起重要调控作用,并与表皮生长因子受体酪氨酸激酶抑制剂的继发性耐药密切相关。针对该通路的分子靶向治疗为晚期NSCLC提供了新的思路,现已成为近年研究的热点:本文就HGF/c—Met的结构、功能及其在晚期NSCLC中的治疗进展等作一综述。