肝细胞生长因子基因转染对骨质疏松骨愈合的影响及其作用机制

目的:探究肝细胞生长因子(HGF)基因转染对骨质疏松骨愈合的影响及其作用机制。方法:分离大鼠的骨髓间充质干细胞(BMSCs),以慢病毒作为载体介导HGF转染BMSCs。按照随机数字表法将100只大鼠分为假手术组(Sham组)、模型组(Model组)、BMSCs组、空载慢病毒组(Vehicle组)及HGF慢病毒组(Vehicle+HGF组),后四组构建骨质疏松骨折模型,饲养1个月后测定大鼠骨折愈合程度评分、骨密度,骨痂骨参数,组织中骨愈合相关因子mRNA水平。结果:Model组骨折愈合程度评分、骨密度、百分比骨体积、骨愈合相关因子mRNA低于Sham组,平均断面面积、相对骨体积均高于Sham组(P<0.05);BMSCs组、Vehicle组与Vehicle+HGF组骨折愈合程度评分与骨密度、百分比骨体积、骨愈合相关因子mRNA高于Model组,平均断面面积、相对骨体积均低于Model组(P<0.05);Vehicle+HGF组骨折愈合程度评分与骨密度、骨愈合相关因子mRNA高于BMSCs组、Vehicle组,平均断面面积、相对骨体积均低于BMSCs组、Vehicle组(P<0.05)。结论:HGF基因转染应用于骨质疏松骨愈合可经由促进软骨成骨形成以及骨痂重塑,加速骨质疏松骨愈合进程,改善骨愈合质量。

肝细胞生长因子基因转染骨髓间充质干细胞异体移植修复烧伤创面

背景:经携带人肝细胞生长因子的重组腺病毒(adenoviral vector mediated human hepatocyte growth factor,Ad-HGF)修饰的骨髓间充质干细胞创面移植后,可分化为"修复细胞",并能够在创面持续释放肝细胞生长因子。目的:观察Ad-HGF基因转染的骨髓间充质干细胞异体移植对大鼠烧伤创面愈合的影响。设计、时间及地点:随机对照动物观察,于2006-02/2007-03在解放军兰州军区兰州总医院临床实验科和烧伤整形科实验室完成。材料:Wistar大鼠40只,由解放军兰州军区兰州总医院动物实验科提供。Ad-HGF与携带绿色荧光蛋白的重组腺病毒(adenoviral vector mediated human hepatocyte growth factor,Ad-GFP)颗粒均由哈小琴博士惠赠。方法:取雄鼠10只,Percoll密度梯度离心法体外分离培养骨髓间充质干细胞,并行Ad-HGF转染。取雌鼠30只,随机分为未转染细胞组、Ad-HGF转染细胞组、Ad-GFP转染细胞组、Ad-HGF对照组、假伤组,6只/组。前4组大鼠复制背部深Ⅱ度烧伤模型,并分别于创面真皮层下方多点注射对应的细胞悬液或病毒悬液1mL;假伤组大鼠背部剃毛后浸入37℃温水12s模拟烧伤,同法注射等量生理盐水。主要观察指标:对采集的创面标本行组织学观察和羟脯氨酸含量测定,采用免疫组化分析创面肝细胞生长因子的表达。结果:苏木精-伊红染色结果显示,Ad-HGF转染细胞组移植后7d创面表皮化优于其他组,至21d再生表皮明显厚于其他组,并可见真皮钉脚下伸。胶原特殊染色结果显示,Ad-HGF转染细胞组移植后7,21d创面中的胶原排列较其他组整齐。移植后7d,Ad-HGF转染细胞组羟脯氨酸含量显著低于其他组(F=3.216,P<0.01)。移植后21d,Ad-HGF转染细胞组愈合创面中肝细胞生长因子的阳性表达位于真皮层,表达强度明显强于其他组。结论:Ad-HGF基因修饰的大鼠骨髓间充质干细胞异体移植后,对烧伤创面愈合存在一定的促进作用。

肝细胞生长因子基因转染兔髁状突软骨细胞及对其生物学特性的影响

目的观察携带有绿色荧光蛋白(gree fluorescent protein,GFP)标记的肝细胞生长因子(hepatocyte growth factor,HGF)cDNA转染兔髁状突软骨细胞后的主要生物学特性。方法取兔髁状突软骨细胞体外培养至第2代,HGFcDNA转染软骨细胞,空白质粒组为对照组;噻唑蓝(MTT)检测软骨细胞的增殖能力,SABC免疫组化及原位杂交法测其Ⅱ型胶原在转染前后的变化与mRNA的表达。结果髁状突软骨细胞在转染后可较长时间的保持其软骨细胞的生物学特性,并可促进软骨细胞的增殖,SABC免疫组化测第Ⅵ代软骨细胞的Ⅱ型胶原表达仍呈强阳性,而对照组软骨细胞则明显减弱,说明HGF基因转染软骨细胞后可表达其生物学功能。基因瞬间转染率大约为31.23%。结论GFP标记的HGF基因以脂质体为载体转染兔髁状突软骨细胞后可发挥其生物学功能,加速细胞的生长,在荧光显微镜下可直观地计算软骨细胞的瞬间转染率。

肝细胞生长因子基因转染脂肪细胞对移植组织工程脂肪存活的影响

背景:在脂肪组织工程的研究中,若将种子细胞与支架材料复合后移植,则此组织工程脂肪将可替代颗粒脂肪。肝细胞生长因子可以促进血管生成、减少纤维组织增生。目的:观察肝细胞生长因子基因修饰骨髓间充质干细胞来源的脂肪细胞对大鼠组织工程脂肪移植存活的影响。设计、时间及地点:随机区组设计的动物实验,于2006-08/2007-07在解放军兰州军区兰州总医院医学科学实验中心完成。材料:纳入Wistar大鼠用于分离、培养骨髓间充质干细胞及植入细胞-支架复合物。方法:①分离培养雄性大鼠骨髓间充质干细胞,诱导成脂,携带绿色荧光蛋白基因及肝细胞生长因子基因的重组腺病毒毒株分别转染脂肪细胞,流式细胞仪测定转染效率,应用酶联免疫吸附试验法测定培养上清中肝细胞生长因子的表达,将脂肪细胞接种于聚乳酸聚乙醇酸共聚物支架。②将75只Wistar雌性大鼠按随机数字表法分为3组:脂肪细胞组、Ad-肝细胞生长因子转染组及Ad-绿色荧光蛋白转染组分别将脂肪细胞-聚乳酸聚乙醇酸共聚物、转染肝细胞生长因子基因脂肪细胞-聚乳酸聚乙醇酸共聚物、转染绿色荧光蛋白基因脂肪细胞-聚乳酸聚乙醇酸共聚物移植于大鼠腿部肌肉之间。主要观察指标:移植后3,7,14,28,60d,每组各取5只大鼠麻醉后处死,取出移植物。电镜观察;并行苏木精-伊红、油红O、Masson’s染色,观察病理改变;同时用免疫组织化学法检测组织中肝细胞生长因子表达,观察并计数血管生成。结果:①骨髓间充质干细胞来源的脂肪细胞胞浆内富含丰富的脂滴,重组腺病毒感染复数=100时,携带绿色荧光蛋白基因的重组腺病毒株转染脂肪细胞效率可达64.39%。②移植3,7,14d时,Ad-肝细胞生长因子转染组移植物中肝细胞生长因子的表达高于其他组(P<0.05),且3d达到高峰。③移植3,7,14,28,60d时,Ad-肝细胞生长因子转染组移植物中血管生成高于其他组(P<0.05),且7d时血管增加的幅度最大。④移植28,60d时,Ad-肝细胞生长因子转染组坏死程度均小于其他组,电镜下脂肪细胞也多于其他组。结论:携带肝细胞生长因子基因的脂肪细胞在移植物中能够表达肝细胞生长因子,促进移植组织工程脂肪血管生成,进而促进移植组织的成活。

肝细胞生长因子基因转染后对内皮祖细胞增殖、迁移、分泌一氧化氮及血管再生的影响

目的:本研究拟用肝细胞生长因子(HGF)基因修饰内皮祖细胞(EPCs),以观察其对 EPCs 增殖、迁移、分泌一氧化氮(NO)及生血管能力的影响。方法:采用梯度离心法分离并培养大鼠骨髓 EPCs,荧光 DiI 标记乙酰化低密度脂蛋白(DiI-acLDL)摄取和异硫氰酸荧光素标记的荆豆凝集素(FITC-UEA-I)结合荧光双染法鉴定大鼠 EPCs。细胞分为 HGF 转染组、阴性对照组及空白对照组,HGF 组用脂质体介导法导入 pIRES2-EGFP-HGF 质粒,阴性对照组导入 pIRES2-EGFP 质粒,空白对照组不导入质粒,然后用荧光显微镜观察绿色荧光蛋白的合成及逆转录多聚酶链反应(RT-PCR)检测细胞 HGF mRNA 的表达来鉴定转染的 EPCs。用四唑盐(MTF)法、改良的 Bodyen 小室及硝酸盐还原法观察细胞增殖、移行及分泌 NO 能力;体外成管试验用于分析细胞生血管的能力。结果:原代细胞培养4天后发现可成梭形贴壁细胞,7天后细胞成集落状,原代细胞培养21大左右接近融合并呈典型的鹅卵石样排列,细胞 DiI-LDL 摄取试验阳性,FITC-UEA-I 染色阳性。转染18h 后 HGF 转染组及阴性对照组细胞绿色荧光蛋白检测呈阳性,转染率为40%,而空白组则呈阴性。RT-PCR 结果显示,HGF 转染组细胞内 mRNA 的表达显著高于对照组,而空白对照及阴性对照组 HGF mRNA 表达无显著性差异。HGF 转染组细胞增殖、移行能力及分泌 NO 量均显著高于对照组。在 ECMatrix 培养基上培养12h,HGF 转染组体外成管评分显著高于对照组。结论:HGF 基因修饰能够显著提高 EPCs 增殖、移行、分泌 NO 及生血管能力,改善 EPCs 的生物学功能。

人肝细胞生长因子基因转染治疗脑梗死的实验研究

目的探讨人肝细胞生长因子(Hepatocyte growth factor,HGF)基因蛋白在缺血半暗带中的表达水平及其治疗脑梗死及人HGF基因对脑梗死后学习记忆功能恢复的机制,为基因治疗缺血性脑血管病及血管性痴呆探索新的途径和方法。方法选择22月龄纯种健康Wistar大鼠60只,随机分为3组:假手术组20只;模型转染质粒组20只;模型转染空质粒组20只。将人HGF基因直接转染至大脑中动脉阻塞(MCAO)大鼠脑缺血半暗带区,利用免疫组化技术测定半暗带区HGF蛋白表达水平,并检测血管内皮细胞CD31的表达,显微镜下血管计数,使用图像分析软件测定梗死体积,利用被动逃避试验测定梗死后学习记忆功能的恢复情况,比较3组大鼠以上各项指标的差异,观察人HGF基因蛋白在缺血半暗带中的表达水平及其对脑梗死的治疗疗效。结果转染质粒组的半暗带区HGF蛋白表达水平和血管计数显著高于转染空质粒组和假手术组(P<0.01),而转染质粒组的梗死面积显著小于转染空质粒组(P<0.01),同时转染质粒组的梗死后学习和记忆功能明显提高(P<0.01)。结论人HGF基因蛋白能够在缺血半暗带区表达,通过增加梗死区的血管数量,明显缩小脑梗死体积,对脑梗死有良好的治疗作用,同时对脑梗死后学习和记忆功能的恢复也有较好作用。

肝细胞生长因子基因转染对淋巴瘤细胞的生物学效应

目的:克隆肝细胞生长因子(HGF)基因,构建重组真核表达载体,并观察HGF基因转染对Raji细胞的生物学效应。方法:从人肝组织中提取总RNA,反转录后行PCR获得HGF基因cDNA,与载体pVITRO2-mcs构建重组真核表达载体,转染Raji细胞。行潮霉素B筛选,连续传代,采用实时荧光定量PCR、ELISA和细胞免疫组化及半固体培养等方法,观察HGF基因转染后的表达与对Raji细胞生物学性状的影响。结果:成功克隆HGF基因并构建了重组真核表达载体pVITRO2-mcs-HGF。经RT-PCR证实HGF基因成功转染Raji细胞。HGF基因转染后可在Raji细胞稳定表达HGF mRNA和蛋白,且可促进其增殖和迁徙及侵袭。结论:HGF基因获成功克隆并构建了重组真核表达载体,转染Raji细胞后可稳定表达,并对其生物学性状具促进作用。

肝细胞生长因子基因转染对髓核细胞生物学活性及细胞外基质表达的调节作用

椎间盘退变（intervertebral disc degeneration．IVD）是临床常见疾病，直接或间接引起腰背部和下肢疼痛不适．影像学表现多为椎间盘膨出、突出，腰椎不稳，滑脱，以及其引起的椎管狭窄，从而出现神经根压迫症状和脊髓压迫症状。主要机制首先是椎间盘内髓核细胞逐渐衰老、凋亡，并导致细胞外基质的化学成分和结构改变，进而出现髓核脱水，合成蛋白多糖能力减弱。胶原的排列和类型均发生改变．

非小细胞肺癌患者肝细胞生长因子受体和表皮生长因子受体及间变性淋巴癌激酶基因异常与临床病理特征的关系

目的分析非小细胞肺癌(NSCLC)患者肝细胞生长因子受体(c-Met)、表皮生长因子受体(EGFR)和间变性淋巴癌激酶(ALK)基因异常与临床病理特征的关系。方法回顾性分析2021年1—12月新钢中心医院收治的152例NSCLC患者的临床资料,取患者组织标本,采用荧光原位杂交技术检测c-Met基因扩增情况,采用聚合酶链扩增反应及直接测序法检测EGFR基因突变情况,采用实时荧光定量PCR检测ALK基因重排情况。分析c-Met基因扩增、EGFR基因突变和ALK基因重排与患者临床病理特征的关系。结果152例NSCLC患者中,c-Met基因扩增7例,阳性率为4.61%;EGFR基因突变48例,突变率为31.58%;ALK基因重排8例,重排率为5.26%。c-Met基因扩增阳性与阴性患者、ALK基因重排与无重排患者性别、年龄、临床分期、吸烟史、肿瘤位置、病理类型比较差异无统计学意义。EGFR基因突变与无突变患者性别、年龄、病理类型比较差异有统计学意义(P<0.05),其中EGFR基因突变患者以女性、年龄<70岁、腺癌占比较高。结论c-Met基因扩增及ALK基因重排与患者临床病理特征无关,而EGFR基因突变与患者性别、年龄及病理类型密切相关。

腺病毒介导的肝细胞生长因子/血管内皮生长因子双基因转染骨髓间充质干细胞移植治疗心肌梗死

背景:骨髓间充质干细胞可以分化为心肌细胞,促进血管再生,但在移植早期其自身分泌的细胞因子不足以维持良好的分化和再生。目的:验证腺病毒介导的肝细胞生长因子和血管内皮生长因子双基因转染新西兰兔骨髓间充质干细胞移植对新西兰兔梗死心肌组织的修复重建和血管再生的影响。方法:腺病毒介导肝细胞生长因子/血管内皮生长因子双基因转染BrdU标记的新西兰兔骨髓间充质干细胞。取新西兰兔50只建立急性心肌梗死模型,4周后随机分为5组,分别于梗死心肌内注射:①骨髓间充质干细胞/Ad.血管内皮生长因子+肝细胞生长因子。②骨髓间充质干细胞/Ad.肝细胞生长因子。③骨髓间充质干细胞/Ad.血管内皮生长因子。④骨髓间充质干细胞。⑤对照组注射等量无血清IMDM培养液。移植4周后观察移植细胞的分化和新生血管的形成,并通过超声多普勒检测心功能变化。结果与结论:除对照组外,其余4组兔心功能都较移植前有明显改善(P<0.05),其中移植双基因转染骨髓间充质干细胞/Ad.血管内皮生长因子+肝细胞生长因子组兔的心功能改善程度要明显高于其他3组。部分BrdU染色阳性的细胞可以分化成为内皮细胞,参与构成了梗死区域的新生毛细血管。与对照组比较,其余4组都有明显的血管新生(P<0.05),而以骨髓间充质干细胞/Ad.血管内皮生长因子+肝细胞生长因子组最显著。提示肝细胞生长因子/血管内皮生长因子双基因转染新西兰兔骨髓间充质干细胞移植于梗死心肌可以促进心肌再生和新生血管的形成,明显改善心功能。

腺病毒介导的肝细胞生长因子/血管内皮生长因子165对大鼠超比例随意皮瓣成活的影响及机制研究

目的:观察术前注射腺病毒介导的肝细胞生长因子/血管内皮生长因子165(Ad-HGF/VEGF165)对大鼠超比例随意皮瓣成活的影响和其机制的初步研究。方法:大鼠背部设计超比例随意皮瓣模型,将其随机分为Ad-HGF/VEGF165组、AdVEGF165组和对照组。术前7 d,Ad-HGF/VEGF165组和Ad-VEGF165组分别于大鼠皮瓣及创缘内多点注射Ad-HGF/VEGF165及AdVEGF165,对照组注射等容量0.9%氯化钠注射液。分别于术后7 d、14 d观测皮瓣成活面积,切取皮瓣组织标本HE染色、免疫组化观察微血管密度及组织间VEGF阳性率等指标,WesternBlot检测目的蛋白表达情况。结果:术后7 d、14 d,Ad-HGF/VEGF165组、Ad-VEGF165组皮瓣存活面积、组织间微血管数目、VEGF及细胞外调节蛋白激酶(ERK1/2)蛋白表达情况均高于对照组(P<0.001),且Ad-HGF/VEGF165组明显高于Ad-VEGF165组(P<0.05)。结论:Ad-HGF/VEGF165具有协同作用,能显著促进VEGF和ERK1/2信号因子表达,短期内促进血管网重建,改善皮瓣血液灌注,提高大鼠超比例随意皮瓣成活面积。

骨髓干细胞介导的人肝细胞生长因子基因转染在兔心肌梗死组织中的表达

目的:观察以骨髓干细胞(BMSCs)介导的人肝细胞生长因子(hHGF)基因转染在兔心肌梗死组织中能否稳定表达。方法:家兔16只,复制急性心肌梗死(AMI)模型。随机分为2组:移植组:BMSCs加hHGF移植,对照组。另外随机选取8只兔作为假手术组。AMI术后3 d,抽取股骨骨髓1.5 ml,分离BMSCs培养。于对数生长期加入5-溴脱氧尿苷孵育24 h,以标记移植细胞。构建pcDNA3.1-hHGF重组表达载体,移植前用脂质体包裹表达载体转染BMSCs,孵育24 h。AMI术后14 d,行自体细胞移植,对照组接受等量的无血清培养基注射,假手术组只开胸,不注射。细胞移植后28 d,检测左心室血流动力学指标;取心肌组织,RT-PCR检测hHG-FmRNA的表达;酶联免疫吸附法(ELISA)测定心肌组织中HGF的含量。结果:与假手术组比较,心肌梗死后28d,对照组左心室功能降低,但BMSCs加hHGF组左心心室功能有改善;RT-PCR结果显示移植组有hHGFmR-NA表达,ELISA测定HGF含量移植组高于对照组。结论:AMI组织中HGF含量降低,转染HGF的BMSCs能在AMI组织中生存并能表达分泌HGF,其左心室功能有改善。

人肝细胞生长因子基因转染成骨细胞移植治疗早期股骨头缺血性坏死的实验研究

目的探讨人肝细胞生长因子（hHGF）基因转染成骨细胞移植促进股骨头的早期血管新生，增强坏死股骨头的局部骨修复能力。方法36只新西兰兔随机分成对照组、移植转染hGHF基因组和未转染成骨细胞组。体外分离、培养胎兔颅骨中的成骨细胞，利用脂质体介导hHGF基因体外转染成骨细胞，同时建立兔激素性股骨头缺血坏死模型，然后将细胞通过髓芯减压后移植于坏死的股骨头内，组织形态学分析血管发生和骨修复情况。结果胎兔颅骨中分离培养的成骨细胞表达Ⅰ型胶原和碱性磷酸酶，hHGF基因转染成骨细胞体外及体内检测均有hHGF蛋白的表达。转染hHGF基因的成骨细胞组和成骨细胞组移植坏死的股骨头内的新生骨小梁与单纯髓芯减压组比较有差异性，同时基因转染组的新生血管数较对照组差异有统计学意义（P〈0．01）。结论hHGF基因转染可促进缺血股骨头的血管新生，并增加骨形成，显著促进坏死骨修复。

肝细胞生长因子基因转染对人淋巴瘤细胞凋亡的影响

探讨肝细胞生长因子(HGF)基因转染人淋巴瘤细胞系Raji细胞后,拮抗足叶乙甙(VP-16)诱导细胞凋亡的研究。将三种细胞:未转染Raji细胞、空载体pVITRO2-mcs转染细胞和HGF基因转染细胞,分成正常对照组和经VP-16处理的药物组。采用Western blot法验证HGF蛋白的表达;CCK-8法检测诱导Raji细胞凋亡的药物浓度;通过透射电镜、流式细胞术、吖啶橙(AO)染色、苏木精–伊红(HE)染色等方法观察Raji细胞的凋亡情况,并进行相关分析。结果显示:Western blot法验证了HGF蛋白质的表达;CCK-8法显示100μg/mL足叶乙甙可明显抑制Raji细胞增殖;透射电镜下可发现典型的凋亡细胞;流式检测结果表明:给药组与正常组相比,三组细胞的凋亡率明显升高(P<0.01),提示VP-16具有诱导细胞凋亡的作用;但给药组间:HGF基因转染组凋亡率明显低于未转染组(P<0.05)和空载体pVITRO2-mcs转染组(P<0.05),提示HGF基因转染可明显抑制VP-16诱导的Raji细胞的凋亡,AO染色和HE染色结果也同样提示HGF具有拮抗VP-16诱导的细胞凋亡效应。

人肝细胞生长因子基因转染对大鼠肾脏缺血再灌注损伤的保护作用

目的用基因电转染方法分别在肾脏和骨骼肌进行人肝细胞生长因子（hHGF）基因转染,比较两种治疗模式对肾脏缺血再灌注损伤的保护作用。方法雄性SD大鼠30只,随机分为3组,每组10只,分别为对照组、肌肉电转染组及肾脏电转染组。在热缺血前3 d将含有hHGF基因的质粒用电转染的方法转入大鼠的骨骼肌和肾脏,3d后建立大鼠肾热缺血模型。观察hHGF的药代动力学,并评价缺血肾脏功能和组织学。结果肾脏电转染组的肾组织及血浆hHGF表达显著高于肌肉电转染组（P＜0．01）。在肾缺血后的第1、3、5天,两个电转染组的Scr水平均较对照组[（164．8±55．5）μmol/L]显著降低（P＜0．01）;而肾脏电转染组[（79．4±23．4）μmol/L]的Scr水平比肌肉电转染组[（109．7±18．6）μmol/L]显著降低（P＜0．05）。两个电转染组肾小管细胞坏死评分显著低于对照组（肾1．365±0．186、肌肉1．864±0．389、对照2．230±0．250,P＜0．05）;而肾脏电转染组的肾小管坏死评分显著低于肌肉电转染组（P＜0．05）。两个电转染组的淋巴细胞、巨噬细胞及中性粒细胞浸润均较对照组显著减少（P＜0．01）,而在两个电转染组间差异无统计学意义。结论无论是hHGF的药代动力学还是治疗效果,肾脏hHGF基因电转染均优于肌肉电转染。肾脏hHGF基因电转染有可能成为防治移植肾缺血再灌注损伤的有效方法之一。

肝细胞生长因子基因转染对阿霉素诱导胃癌细胞凋亡的影响

目的研究肝细胞生长因子（HGF）基因转染对阿霉素诱导的胃癌细胞凋亡的影响。方法先构建HGF基因的真核表达质粒pIRES2-EGFP-HGF,应用pIRES2-EGFP-HGF重组质粒和pIRES2-EGFP空质粒转染人胃癌MKN-45细胞,以未转染组为对照。用转染细胞的培养液培养MDCK细胞后,以细胞形态学改变来分析目的基因mRNA、蛋白的表达,分别用RT-PCR、Western blot测定其功能。MTT法测定阿霉素对细胞生长的抑制作用,DNA凋亡条带法和PI染色法检测细胞凋亡。结果稳定转染HGF基因的MKN-45细胞株可表达HGF mRNA,其分泌的HGF蛋白具有正常功能。MTT检测表明,HGF质粒转染组活细胞数高于空质粒转染和未转染组。0．1μg／ml阿霉素作用细胞后DNA凋亡条带分析发现,空质粒转染及未转染组的MKN-45细胞出现典型阶梯状条带, HGF转染组细胞凋亡条带不显著。流式细胞术结果显示,HGF质粒转染组细胞凋亡率显著低于未转染及空质粒转染组。结论HGF基因稳定转染可显著抑制阿霉素诱导的胃癌细胞凋亡。

肝细胞生长因子基因转染大鼠急性脑卒中模型的生物效应

目的探讨肝细胞生长因子(HGF)基因转染大鼠急性脑卒中模型后的表达情况及其生物学效应。方法 39只实验用大鼠,线栓法制备成可控性急性大鼠脑卒中模型。利用基因重组技术将 HGF 基因与增强型绿色荧光蛋白(EGFP)基因标记的真核表达载体 PIRES2-EGFP 进行融合,构建真核细胞表达质粒。通过脂质体介导法,立体定向下多点注射到大鼠急性脑卒中模型的缺血半暗带区域行基因转染,转染7 d 后断头取大鼠脑组织,切片观察 HGF 基因在大鼠脑内的表达情况;并采用兔抗人Ⅷ因子相关抗原多克隆抗体对大鼠脑组织进行免疫组化染色,显微镜下随机检测5个高倍视野下缺血半暗带区血管数量;同时在基因转染前及转染后7 d,应用 CT 灌注扫描对实验鼠脑血流量进行监测,观察基因转染对脑血流量的影响。将大鼠脑卒中模型随机分成3组(每组13只):(1)注射脂质体/pIRES2-EGFP-HGF 质粒的实验组;(2)注射脂质体/PIRES2-EGFP 空载质粒的空载体对照组;(3)空白对照组(未进行注射)。结果酶切鉴定及基因测序证实,HGF 基因片段已克隆到PIRES2-EGFP 的 BamH I 和 Sal I 位点之间。HGF 基因转染大鼠缺血半暗带区7 d 后,利用荧光显微镜观察可见到绿色荧光蛋白的表达,用免疫组化方法进一步让实了 HGF 的表达。实验组大鼠转染局部血管数量(46.71±7.11)条/5个高倍视野,明显多于对照组的(20.43±3.21)条/5个高倍视野和空白对照组的(18.00±3.27)条/5个高倍视野(F=74.447;P<0.01);CT 灌注显示其梗死侧大脑半球的脑血流量(63.82±6.08)%也高于对照组(53.58±4.19)%和空白对照组(52.46±4.93)%(F=10.445;P<0.01)。结论脂质体转染 HGF 基因能够在缺血半暗带区表达,表达产物能够发挥生物学效应,促进局部血管侧支循环形成。

转化生长因子β_1基因转染人肝癌细胞及其对MMP-2,9表达的影响

目的 通过对人肝癌细胞株 (SMMC 772 1)转染TGF β1基因 ,观察该细胞MMP 2 ,9表达的变化。方法 用电穿孔法进行基因转染 ,并经Westernblot ,Northernblot法作鉴定 ,后分别应用Northernblot,Westernblot法观察该细胞株表达MMP 2 ,9mRNA和MMP 2蛋白的变化。结果 经转染TGF β1基因的细胞株MMP 2mRNA和蛋白表达均高于对照组 ,但MMP 9mRNA表达则没有变化。结论 TGF β1可促进肝癌细胞MMP 2表达 ,表明TGF

独立生长因子1负调控GREM1基因抑制肝星状细胞增殖与活化实验研究

目的:探讨独立生长因子1(GFI1)负调控GREM1基因对肝星状细胞(HSC)增殖与活化的影响。方法:选择HSC细胞株LX-2培养并进行相关实验。采用CCK-8法检测GREM1基因和GFI1对LX-2细胞增殖的影响。采用Western blot分析GREM1基因和GFI1对α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)蛋白表达的影响。利用生物信息学方法分析GREM1基因的转录因子并通过染色质免疫共沉淀(CHIP)实验验证GREM1基因是否可与GFI1结合。采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测GFI1对GREM1 mRNA的影响。通过抑制GFI1并下调GREM1表达分析GFI1是否通过负调控GREM1抑制LX-2细胞增殖和α-SMA表达。结果:过表达GREM1可促进LX-2细胞增殖及上调α-SMA蛋白表达水平(均P<0.05)。GFI1可能是GREM1的上游转录因子,CHIP实验证实GFI1可与GREM1直接结合。下调GFI1表达可促进GREM1 mRNA表达和LX-2细胞增殖,并上调α-SMA蛋白表达水平(均P<0.05)。下调GREM1表达可以减弱GFI1表达(P<0.05)。结论:GREM1可促进HSC活化,而GFI1可通过负调控GREM1基因抑制HSC增殖与活化。