部分肝切除肝再生过程中肝细胞生长因子激活因子抑制因子1,2的表达

背景:有研究表明肝硬化个体在行肝部分切除后肝再生较健康肝脏缓慢的原因可能与其肝再生过程中的肝细胞生长因子的合成分泌延迟及活性降低有关,但导致这一现象的原因尚不明确,近年来发现的肝细胞生长因子激活因子的抑制因子(hepatocyte growth factor activator inhibitor,HAI)能够间接地抑制肝细胞生长因子的激活,但是鲜有研究探索HAI的抑制因子在肝硬化肝脏行部分肝切除后肝再生过程中的表达情况及其与肝再生的关系。目的:通过建立肝硬化大鼠部分肝切除模型来研究HAI的抑制因子1,2(HAI-1,HAI-2)在硬化和正常肝脏再生中的表达情况,探讨HAI-1,HAI-2在硬化肝脏部分肝切除后的生物学效应及其与肝再生的关系。方法:采用体积分数40%四氯化碳油溶液背部皮下注射法建立大鼠肝硬化模型,对实验组进行70%肝脏切除术建立再生模型,对照组大鼠仅给予普通饲料饮水喂养并行70%肝脏切除。分别于术前及术后3,6,12,24,48 h麻醉处死大鼠并留取脾脏标本检测。采用RT-PCR技术检测脾源性HAI-1,HAI-2 mR NA的表达情况。结果与结论:两组大鼠部分肝切除后HAI-1 mR NA的表达均呈现出先升高后降低的趋势,而肝硬化大鼠HAI-1mR NA表达量持续高于对照组(P<0.05),两组大鼠之间HAI-2 mRNA表达量差异无显著性意义(P>0.05)。说明肝硬化大鼠部分肝切除后再生过程中HAI-1 mR NA的表达持续高于健康大鼠,这可能导致了肝硬化大鼠肝细胞生长因子激活因子合成分泌不足,从而使得肝细胞生长因子前体活化不足,最终引起肝再生缓慢。HAI-2并没有参与肝脏的损伤修复进程。

重组人肝细胞生长因子激活因子质粒的构建、表达和功能研究

背景：肝细胞生长因子激活因子（HGFA）是活化单链前体HGF（pro—HGF）成为有生物学功能的HGF的关键酶．在受损组织器官的修复和再生中发挥重要作用。目的：制备rhHGFA—Fc融合蛋白并证实其具有肝细胞保护功能。方法：采用基因重组技术构建表达人源化HGFA成熟肽段与人IgGFc段融合蛋白的载体，以脂质体介导法转染人胚肾293细胞。纯化293细胞表达产物，以蛋白质印迹法鉴定纯化蛋白（rhHGFA—Fc融合蛋白）及其对pr0．HGF的酶切活性，以流式细胞术检测融合蛋白介导的肝细胞凋亡抑制作用。结果：SDS—PAGE显示转染重组质粒的293细胞总蛋白纯化产物在62kDa处显示单一蛋白条带。蛋白质印迹法结果显示纯化的rhHGFA-Fc融合蛋白能与抗hHGFA单克隆抗体发生特异性反应，并将pro-HGF酶切为仅链和p链，酶切活性呈剂量依赖性，半效酶切活性（IC50）为8．22nmol／L；流式细胞术结果显示融合蛋白通过激活pro．HGF发挥其抑制肝细胞凋亡的作用。结论：293细胞表达的rhHGFA—Fc融合蛋白纯度高、酶切活性强，可高效激活pro—HGF，对于肝组织严重损伤，特别是肝硬化基础上肝损伤的治疗具有潜在价值。

大鼠部分肝切除后肝细胞生长因子激活因子抑制因子1,2的表达

目的探讨肝细胞生长因子激活因子抑制因子(hepatocyte growth factor activator inhibitor,HAI)1、HAI-2在部分肝切除后的表达特点,分析HAI-1和HAI-2在肝再生中的作用。方法随机将健康雄性SD大鼠分成对照组和肝切除组,各30只。在肝切除手术前和手术后3 h、12 h、24 h以及48 h时,对比2组HAI-1和HAI-2 mRNA和蛋白的表达变化。结果手术前2组HAI-1、HAI-2的mRNA及蛋白均呈显著低表达,组间无明显差异(P>0.05);与手术前相比,术后对照组HAI-1、HAI-2的mRNA及蛋白均无明显变化(P>0.05);而肝切除组HAI-1 mRNA和蛋白表达水平先显著升高再逐渐下降,同时间点与对照组比较,差异均有统计学意义(P<0.05);HAI-2 mRNA和蛋白则无明显变化(P>0.05)。结论 HAI-1在部分肝切除肝细胞再生过程中呈持续高表达,其可能参与了肝细胞再生过程,而HAI-2对肝再生过程无明显影响。

大麻二酚对转化生长因子β1诱导肝星状细胞活化和肝纤维化的作用

背景:大麻二酚具有抗炎、抗氧化等药理学作用,并且不具有精神活性,在肝脏疾病中的研究日渐增加,但其对肝星状细胞转化生长因子β1/Smad信号转导通路的作用尚未明确。目的:探讨大麻二酚对肝星状细胞中转化生长因子β1/Smad信号转导通路的影响,研究其抗肝纤维化的可能机制。方法:(1)体外实验:选取大鼠肝星状细胞株(HSC-T6),分6组培养:对照组常规培养24 h,单纯药物组加入大麻二酚培养24 h,造模组加入转化生长因子β1培养24 h,造模+低剂量药物组、造模+高剂量药物组、造模+阳性对照组均加入转化生长因子β1培养24 h后分别加入1,5μmol/L大麻二酚或水飞蓟素培养24 h。培养结束后,检测各组细胞α-平滑肌肌动蛋白与Ⅰ型胶原mRNA表达、白细胞介素1β与肿瘤坏死因子α水平及Ⅰ型胶原、转化生长因子β1/Smad信号转导通路蛋白表达。(2)动物体内实验:将C57BL/6J小鼠随机分为5组,每组8只:假手术组不造模,造模组、造模+低剂量药物组、造模+高剂量药物组、造模+阳性对照组通过胆管结扎法建立肝纤维化模型,造模3周后分别腹腔注射4,8 mg/kg大麻二酚或水飞蓟素,1次/d,连续给药7 d。给药结束后,检测各组小鼠肝功能、肝脏病理形态及α-平滑肌肌动蛋白、Ⅰ型胶原、转化生长因子β1/Smad信号转导通路相关蛋白表达。结果与结论:(1)体外实验:与对照组比较,造模组HSC-T6细胞α-平滑肌肌动蛋白与Ⅰ型胶原mRNA表达、白细胞介素1β与肿瘤坏死因子α水平以及Ⅰ型胶原、转化生长因子β1、p-Smad2/3蛋白表达均升高(P<0.05),Smad7蛋白表达降低(P<0.05);两种剂量大麻二酚处理可改善转化生长因子β1诱导的HSC-T6细胞上述指标的变化,并且以造模+高剂量药物组改善作用更明显;(2)体内实验:与假手术组比较,模型组小鼠血清丙氨酸氨基转移酶、天门冬氨酸氨基转移酶活性升高(P<0.05),肝组织中炎性细胞浸润及胶原含量增加(P<0.05),转化生长因子β1/Smad信号转导通路被激活,α-平滑肌肌动蛋白、Ⅰ型胶原蛋白表达升高(P<0.05);两种剂量大麻二酚干预可减轻造模小鼠上述指标的变化,并且以造模+高剂量药物组效果更明显;(3)结果表明,大麻二酚通过抑制肝星状细胞转化生长因子β1/Smad信号传导通路的激活抑制肝纤维化。

肝细胞生长因子通过激活NF-κB信号通路促进BV2细胞介导神经炎症

目的 探讨肝细胞生长因子(hepatocyte growth factor,HGF)对小胶质细胞介导神经炎症的作用及其调控机制,为后续可能治疗靶点的确定提供实验依据和理论参考。方法 选取小鼠小胶质细胞(BV2)作为研究对象,分为对照组和HGF组,通过蛋白质组学分析、实时荧光定量聚合酶链反应(qRTPCR)以及蛋白质印迹法(western blot,WB)等检测HGF对BV2细胞NF-κB信号通路活性及炎症因子表达的影响。结果 蛋白质组学分析显示HGF处理后,NF-κB通路显著富集;HGF处理1h时,BV2细胞增殖活力随浓度升高下降,6h和12h时呈现先上升后下降的趋势;qRT-PCR显示HGF显著上调炎症因子(iNOS、TNF-α、IL-1β);WB表明HGF促进炎症相关因子(TNF-α、NF-κB p65)相对表达量上升。结论本研究首次证实HGF通过激活BV2细胞NF-κB信号通路促进神经炎症的作用及其机制,为进一步探究神经炎症调控策略及开发有效的临床治疗手段提供重要线索。

肝细胞生长因子激活因子的抑制因子1基因在前列腺癌组织中的表达及其意义

目的探讨肝细胞生长因子激活因子的抑制因子（HAI-1）在前列腺癌（PCa）组织中的表达及其意义。方法收集20例前列腺增生（BPH）和48例PCa患者的前列腺组织标本，应用逆转录-聚合酶链反应（RT—PCR）、蛋白印迹（Westernblot）法分别从mRNA水平、蛋白水平检测HAI-1基因的表达。结果HAI-1的阳性率在BPH和PCa中为85．00％、52．08％（P〈0．05）；HAI-1mRNA的相对表达值分别为0．5482±0．0313、0．6718±0．0516（P〈0．05）；HAI-1蛋白的相对表达值分别为0．5975±0．0518、0．7039±0．0377（P〈0．05）；随细胞分化程度的降低、临床分期的递增，HAI-1基因的表达量下降（P〈0．05），有淋巴结转移组显著低于无淋巴结转移组（P〈0．05）。结论HAI-1基因的表达缺失可作为前列腺癌浸润、转移和预后的一种分子标志。

肝细胞生长因子及其受体c-Met在结直肠癌中的表达及其意义

目的探讨结直肠癌中肝细胞生长因子及其受体c-Met表达及其意义。方法选取2020年2月—2022年2月在牡丹江医学院附属第二医院接受治疗的结直肠癌患者126例作为病例组,并选取同期40例正常结肠组织及良性腺瘤作为对照组。统计分析两组结直肠组织中微淋巴管密度(microlymphatic density,LMVD)表达、HGF及其受体c-Met阳性表达情况,统计分析病例组结直肠癌组织中不同临床指标患者的LMVD、肝细胞生长因子(hepatocyte growth factor,HGF)及其受体细胞间质上皮转换因子(cellular-mesenchymal epithelial transition factor,c-Met)表达。结果病例组患者结直肠组织中LMVD表达高于参照组(P<0.05)。病例组病理分期Ⅰ+Ⅱ期、有淋巴结转移患者的结直肠癌组织中LMVD分别低于病理分期Ⅲ+Ⅳ期、无淋巴结转移患者(P<0.05),HGF阳性、c-Met阳性患者的结直肠癌组织中LMVD分别高于HGF阴性、c-Met阴性患者(P<0.05)。病例组患者结直肠组织中HGF及其受体c-Met阳性表达率均高于参照组(P<0.05)。病例组病理分期Ⅰ+Ⅱ期结直肠癌组织中HGF及其受体c-Met阳性表达率均高于Ⅲ+Ⅳ期患者(P<0.05),有淋巴结转移患者的结直肠癌组织中HGF及其受体c-Met阳性表达率均低于无淋巴结转移患者(P<0.05)。结论结直肠癌中肝细胞生长因子及其受体c-Met阳性表达提升,病理分期越高阳性率越高、有淋巴结转移阳性率升高,可能成为治疗新靶点。

血清可溶性CD40L与肝细胞生长因子联合检测在急性肺栓塞患者诊断中的应用价值

目的探讨血清可溶性CD40L(sCD40L)、肝细胞生长因子(HGF)联合检测在急性肺栓塞患者诊断中的应用价值。方法选取2021年1月至2022年12月延安市人民医院收治的96例急性肺栓塞患者为肺栓塞组,根据《肺血栓栓塞症的诊断与治疗指南(草案)》相关标准分为大面积肺栓塞组(50例)及非大面积肺栓塞组(46例)。另选取同期于延安市人民医院就诊的90例非急性肺栓塞患者为对照组;收集两组临床资料及空腹血液,采用酶联免疫吸附法检测两组血清中sCD40L、HGF水平;采用Pearson法分析血清sCD40L与HGF水平的相关性;采用受试者工作特征曲线(ROC)分析血清sCD40L、HGF水平对急性肺栓塞的诊断价值。结果肺栓塞组血清sCD40L、HGF水平明显高于对照组(P<0.05);大面积肺栓塞组血清sCD40L、HGF水平明显高于非大面积肺栓塞组(P<0.05)。肺栓塞组患者血清sCD40L与HGF水平呈正相关(r=0.613,P<0.05)。ROC曲线显示,血清sCD40L、HGF诊断急性肺栓塞的曲线下面积(AUC)分别为0.820、0.848,特异度分别为82.2%、82.2%,敏感度分别为72.9%、72.9%,最佳截断值分别为113.48、492.81 ng/L;sCD40L和HGF联合诊断急性肺栓塞的AUC为0.875,特异度为91.1%,敏感度为74.1%。结论急性肺栓塞患者血清sCD40L、HGF水平升高,且二者呈正相关,sCD40L与HGF联合检测可有效提高急性肺栓塞患者的诊断效能。

3-甲基腺嘌呤对转化生长因子-β诱导大鼠肝脏星形细胞株HSC-T6活化及自噬的影响观察

目的观察3-甲基腺嘌呤(3-MA)对转化生长因子-β(TGF-β)诱导的大鼠肝星形细胞株HSC-T6活化及自噬的影响。方法取对数生长期的HSC-T6细胞分为空白组、TGF-β+PBS组、TGF-β+3-MA组。TGF-β+3-MA组细胞加入浓度为2 ng/mL TGF-β培养72 h后加入3-MA(0.5 mg/mL)处理24 h,TGF-β+PBS组细胞加入浓度为2 ng/mL TGF-β培养72 h后加入等量PBS处理24 h,空白组加入等量PBS处理,采用实时荧光定量PCR法检测各组细胞活化标志物α-SMA、TGF-βmRNA和自噬标志物LC3、Beclin-1、Atg5 mRNA,采用Western blotting法检测各组细胞活化标志物α-SMA、TGF-β蛋白和自噬标志物LC3、Beclin-1、Atg5蛋白。结果TGF-β+PBS组、TGF-β+3-MA组细胞活化标志物α-SMA、TGF-βmRNA和蛋白均高于空白组,且TGF-β+3-MA组均低于TGF-β+PBS组(P均<0.05)。TGF-β+PBS组、TGF-β+3-MA组细胞自噬标志物LC3、Beclin-1、Atg5 mRNA和蛋白均高于空白组,且TGF-β+3-MA组均低于TGF-β+PBS组(P均<0.05)。结论3-MA可抑制TGF-β诱导的大鼠肝星形细胞株HSC-T6活化及自噬。

过表达肝细胞生长因子的内皮祖细胞移植促进坐骨神经挤压伤修复的研究

目的探讨过表达肝细胞生长因子(HGF)慢病毒转染的内皮祖细胞对大鼠坐骨神经损伤的修复作用。方法体外实验方面,提取大鼠骨髓的内皮祖细胞(EPC)并利用DiI-acLDL和FITC-UEA-1双染法进行鉴定。EPC转染慢病毒后采用qRT-PCR实验检测HGF基因表达水平。采用CCK-8实验、Transwell实验以及血管形成实验对转基因EPC的体外功能进行评估。体内实验方面,随机将25只SD大鼠平均分为5组,即对照组(Con组)、正常EPC组(N-EPC组)、空载病毒转染EPC组(LV-NC组)、过表达HGF病毒转染EPC组(LV-HGF组)和假手术组(Sham组)。各组大鼠暴露出右侧坐骨神经后,在坐骨神经分叉处上方10 mm处使用止血钳形成2 mm宽的坐骨神经挤压伤,假手术组在暴露神经后不做处理;分别将转染空载慢病毒EPC、转染过表达HGF慢病毒EPC或正常EPC与基质胶按1∶1体积比混合后注入伤处神经外膜下,而对照组不注入EPC。术后4周,运用Catwalk检测大鼠运动功能的恢复情况,电生理实验检测神经传导功能的恢复情况,透射电镜观察髓鞘厚度,甲苯胺蓝染色观察神经纤维密度,腓肠肌湿重称重检测肌肉萎缩程度,马松染色检测各组手术侧的腓肠肌肌纤维面积。结果体外实验结果显示,与正常EPC组相比,LV-HGF组EPC在CCK8实验中细胞增殖速度更快(P<0.05),Transwell实验中细胞迁移速率更高(P<0.01),在血管形成实验中形成更多血管状结构(P<0.01)。动物实验结果显示,LV-HGF组的坐骨神经功能指数值显著高于其他3组(Con组,P<0.01;N-EPC组,P<0.01;LV-NC组,P<0.01);复合肌肉动作电位波幅更高(Con组,P<0.01;N-EPC组,P<0.05;LV-NC组,P<0.05);再生坐骨神经的髓鞘较厚(Con组,P<0.01;N-EPC组,P<0.01;LV-NC组,P<0.01);有髓神经纤维密度更高(Con组,P<0.01;N-EPC组,P<0.05;LV-NC组,P<0.05);腓肠肌湿重比值更高(Con组,P<0.01;N-EPC组,P<0.01;LV-NC组,P<0.01);肌纤维平均面积较大(Con组,P<0.01;N-EPC组,P<0.05;LV-NC组,P<0.05);LV-HGF组以上实验结果与Sham组相比,差异有统计学意义(P<0.01)。结论过表达HGF基因可以增强EPC的增殖、迁移及分化功能。在坐骨神经挤压伤后,HGF基因转染的EPC相较于正常EPC,能更明显地促进了受损周围神经结构和功能的恢复,其机制与促进受损周围神经的轴突再生及髓鞘形成有关。

过表达肝细胞生长因子的人牙髓来源间充质干细胞通过调节Th2/Th1、Th17/Treg平衡改善变应性鼻炎的研究

背景当前间充质干细胞治疗变应性鼻炎研究较多,过表达肝细胞生长因子的间充质干细胞在其中的作用和机制有待进一步探究。目的 构建过表达肝细胞生长因子的人牙髓来源间充质干细胞(hepatocyte growth factor-overexpressing human dental pulp-stem cells,HGF/hDPSCs),研究其对变应性鼻炎的作用和可能机制。方法 提取人牙髓来源间充质干细胞,利用腺病毒载体Ad5将靶基因HGF转入,以构建HGF/hDPSCs,并评估其HGF分泌能力和鼻黏膜分布。采取卵清蛋白腹腔注射致敏、滴鼻激发的方式构建变应性鼻炎小鼠模型。根据致敏、激发和干预措施的区别,将小鼠分为4组:WT-PBS组(阴性对照组),AR-PBS组(阳性对照组),AR-hDPSCs组(hDPSCs治疗组),AR-HGF/hDPSCs组(HGF/hDPSCs治疗组)。利用症状评分、病理学分析(HE、PAS染色)监测各组小鼠变应性鼻炎症状和鼻黏膜局部炎症情况。采取免疫组织化学染色(CD3、CD19)、ELISA(总IgE、OVA特异IgE)和PCR(IFN-γ、IL-5、IL-13、IL-17A、Foxp3)探究免疫应答机制。结果 HGF/hDPSCs可在体外和体内稳定表达HGF,经尾静脉注射后可迁移至小鼠鼻黏膜。症状评分显示,HGF/hDPSCs可改善变应性鼻炎小鼠挠鼻、喷嚏、流涕等过敏症状(P<0.05)。病理分析和免疫组化结果显示,变应性鼻炎小鼠鼻黏膜免疫反应以T淋巴细胞聚集为主要特征。应用HGF/hDPSCs可减少鼻黏膜淋巴细胞浸润和杯状细胞增生等鼻黏膜炎症表现,并降低病理损伤评分(P<0.01)。ELISA结果表明,HGF/hDPSCs可下调血清总IgE和OVA特异性IgE表达水平(P<0.01)。PCR结果表明,HGF/hDPSCs可抑制变应性鼻炎小鼠脾Th1细胞(IFN-γ)、Th2细胞(IL-5、IL-13)应答水平,改变了Th2/Th1平衡;下调Th17细胞(IL-17A)应答水平(P<0.05),不影响Treg细胞(Foxp3)应答水平(P>0.05),改变了Th17/Treg平衡。结论 HGF/hDPSCs可通过调节Th2/Th1、Th17/Treg平衡缓解变应性鼻炎小鼠的鼻部过敏症状,减轻鼻黏膜炎症。

乙醇脱氢酶1A和血管内皮生长因子-A在肝细胞癌中的表达

目的探讨乙醇脱氢酶1A(ADH1A)和血管内皮生长因子-A(VEGFA)在肝细胞癌(HCC)中的表达和临床意义。方法通过基因表达谱交互(GEPIA)分析ADH1A和VEGFA在HCC以及癌旁正常组织中的表达情况及相关性;肿瘤基因组图谱(TCGA)和基因富集分析(GSEA)探讨ADH1A在HCC中的相关通路;收集84例HCC患者的样本及临床病理资料,并选取54例癌旁正常组织样本做对照,分析ADH1A和VEGFA与HCC中临床病理参数的相关性;采用免疫组化法检测并分析病例组和对照组ADH1A和VEGFA的蛋白表达情况,结合临床病理参数并通过Kaplan-Meier法分析ADH1A和VEGFA的表达与HCC患者的临床进展和预后的关系。结果生物信息学分析发现ADH1A在HCC中低表达而VEGFA在HCC中高表达,并且两者呈负相关关系(P<0.001);免疫组化检测结果显示ADH1A在HCC组织中的表达率低于癌旁正常组织(P<0.01),而VEGFA在HCC组织中表达率高于癌旁正常组织(P<0.01);HCC组织中ADH1A高表达组的脉管癌栓及HCC患者的复发比例更低(P<0.05);HCC组织中VEGFA高表达组的肿瘤直径>5 cm、高TNM分期、有微卫星以及G2-G3分化程度比例更高(P<0.05);Kaplan-Meier生存分析显示,ADH1A高表达同时VEGFA低表达患者的五年生存率较高。结论HCC患者肿瘤组织中ADH1A的低表达以及VEGFA的高表达与肿瘤的进展有关,可作为HCC患者预后评估指标之一。

人过表达肝细胞生长因子间充质干细胞对小鼠的免疫原性和免疫毒性评价

目的评价人过表达肝细胞生长因子间充质干细胞(hepatocyte growth factor-overexpressing dental pulp-stem cells,HGF-DPSCs)对小鼠的免疫原性和免疫毒性。方法采用BALB/c小鼠,雌雄各半,随机分组,每组6只,共6组,合计动物36只。设立第3天对照组(D3 PBS组)、第3天尾静脉注射DPSCs组(D3 DPSCs组)、第3天尾静脉注射HGF-DPSCs组(D3 HGF-DPSCs组)、第7天对照组(D7 PBS组)、第7天尾静脉注射DPSCs组(D7 DPSCs组)、第7天尾静脉注射HGF-DPSCs组(D7 HGF-DPSCs组)。全自动动物血液细胞分析仪检测外周血淋巴细胞、粒细胞、单核细胞,ELISA检测HGF、IgA、IgE、IgG、IgM、IFN-γ、IL-4、TNF-α表达水平,HE染色评价肝、肾、脾、肺组织的病理变化。结果D3 HGF-DPSCs组和D7 HGF-DPSCs组的血清人源HGF水平分别高于D3 DPSCs组和D7 DPSCs组,D3 PBS组和D7 PBS组不表达人源HGF。D7 PBS组较D3 PBS组、D7 DPSCs组较D3 DPSCs组、D7 HGF-DPSCs组较D3 HGF-DPSCs组,在淋巴细胞、炎症因子和器官毒性上均未观察到明显区别。各组间淋巴细胞总数、淋巴细胞百分比、总IgA、总IgE、总IgG、总IgM、IL-4、TNF-α、IFN-γ等指标差异均无统计学意义。同时HE染色结果表明经尾静脉注射HGF-DPSCs后,小鼠各脏器未出现明显病理损伤。结论腺病毒载体构建的HGF-DPSCs可在小鼠体内高表达HGF,同时HGF-DPSCs并无明显的免疫原性和免疫毒性,为HGF-DPSCs的后续研究和临床应用提供了直接的数据支撑和理论依据。

过氧化物酶增殖物激活受体γ抑制大鼠肝星状细胞中转化生长因子-β1诱导的结缔组织生长因子表达

目的探讨过氧化物酶增殖物激活受体γ(PPARγ)对大鼠肝星状细胞(HSC)中转化生长因子-β1(TGF-β1)诱导的结缔组织生长因子(CTGF)表达的抑制作用。方法常规培养大鼠HSC,预先给予或不给予PPARγ特异性拮抗剂GW9662处理,再经系列浓度的PPARγ天然配体(15-d-PGJ2)或合成配体(GW7845)及TGF-β1序贯作用后,通过半定量RT-PCR及Western-blotting分析CTGF表达状况,透射电镜观察HSC形态学变化。结果15-d-PGJ2和GW7845可显著抑制HSC中TGF-β1诱导的CTGF表达(同时在转录和转录后水平),且PPARγ配体对CTGF表达的抑制作用可被GW9662部分或完全逆转,说明此种抑制效应确由PPARγ所介导;电镜观察亦显示HSC由活化态向静息态的形态学转变。结论PPARγ活化可显著抑制HSC中TGF-β1诱导的CTGF表达,提示PPARγ可作为逆转肝纤维化治疗的新的有效靶点。

健脾活血方含药血清对肝癌细胞肝细胞生长因子/c-Met通路、尿激酶型纤溶酶原激活因子分泌及缺氧状态下细胞活性及增殖的影响

目的探讨健脾活血方含药血清对肝癌细胞肝细胞生长因子(HGF)/c-Met通路、尿激酶型纤溶酶原激活因子(uPA)分泌及缺氧状态下细胞活性及增殖的影响。方法将20只大鼠随机均分为实验组及对照组,分别给予健脾活血方及生理盐水连续灌胃7d后,取血制备含药血清。取对数生长期肝癌细胞株SMMC-7721分为对照组、实验组,加入相应含药血清,并加入氯化钴模拟缺氧状态,培养72h后检测各组细胞的活力与增殖能力、侵袭能力。另取SMMC-7721细胞分为对照组、实验组分别加入相应含药血清培养72h后,检测细胞培养液上清uPA浓度、HGF及其细胞中mRNA表达水平、c-Met蛋白及mRNA表达水平。结果实验组SMMC-7721细胞的A值、细胞增殖率、迁移到下室的细胞数量均低于或少于对照组(均P<0.05)。实验组细胞培养液上清uPA浓度、HGF以及细胞中HGFmRNA表达水平、c-Met蛋白及其mRNA表达水平均低于对照组(均P<0.05)。结论健脾活血方含药血清可抑制缺氧状态下肝癌细胞的活力及增殖能力,其或通过抑制HGF/c-Met通路及uPA的分泌,阻止肝癌的复发和转移。

肝细胞生长因子激活因子抑制因子-1的表达与功能

肝细胞生长因子激活因子抑制因子-1(hepatocyte growth factor activator inhibitor type1,HAI-1)是一种Kunitz型丝氨酸蛋白酶抑制因子,定位于细胞的基底侧,具有膜型和分泌型两种形式,能有效抑制肝细胞生长因子激活因子HGFA和丝氨酸蛋白酶Matriptase的活性,参与HGF/c-Met信号传导途径调节。HAI-1在包括妊娠、再生及肿瘤等各种正常生理及病理状态下均有不同水平的表达,其表达水平的变化以及其与靶蛋白酶表达比例的变化直接影响到靶蛋白酶的活性,从而在调控个体发育、血管生成、组织损伤修复以及抑制肿瘤的侵袭性生长等生理和病理过程中发挥重要作用。

成纤维细胞激活蛋白和转化生长因子-β1在小鼠肝纤维化组织中的表达及相关性

目的探讨成纤维细胞激活蛋白(FAP)、α-SMA和TGF-β1在小鼠肝纤维化组织中的表达和三者之间的关系。方法建立四氯化碳诱导的小鼠实验性肝纤维化模型,应用免疫组织化学技术检测小鼠肝纤维化组织中FAP、α-SMA和TGF-β1的表达。结果FAP、α-SMA和TGF-β1与小鼠肝纤维化程度呈正相关(rs分别为0.753,0.762,0.834,P<0.0001);且FAP与α-SMA、FAP与TGF-β1的表达均呈正相关(rs为0.825和0.814,P<0.0001)。结论FAP可作为判定肝纤维化程度的指标之一,且可能与TGF-β1共同促进肝纤维化进展。

小分子干扰RNA沉默结缔组织生长因子对鼠肝星状细胞培养激活的影响

目的研究化学合成小分子干扰RNA(siRNA)对大鼠原代肝星状细胞(HSC)结缔组织生长因子(CTGF)基因表达的阻抑作用及对HSC培养激活的影响。方法以胶原酶原位灌注消化加密度梯度离心法分离大鼠原代HSC,将siRNA以脂质体包裹,转染培养72h的原代HSC,设空白对照,收集孵育96h细胞,以Westernblot和免疫细胞化学染色法检测原代HSCCTGF及α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)基因表达。结果转染siRNA的原代HSCCTGF及α-SMA基因表达显著下调,与对照相比,CTGF蛋白下调(92±5)%(P<0.01);α-SMA蛋白表达分别下调(62±9)%(P<0.01,Westemblot方法)和(58±6)%(P<0.01,免疫细胞化学染色法)。结论siRNA能显著下调大鼠原代HSCCTGF基因表达,明显阻抑原代HSC培养激活,提示针对CTGF基因化学合成的siRNA具有防治肝纤维化的潜力。

丙泊酚对转化生长因子-β1诱导肝星状细胞激活的影响及其机制

目的:观察丙泊酚对转化生长因子-β1(TGF-β1)诱导的肝星状细胞系HSC2-T6细胞激活的影响并探讨其可能的作用机制。方法:实验分为对照组、TGF-β1组、丙泊酚组、TGF-β1+丙泊酚组、雷帕霉素组、TGF-β1+丙泊酚+雷帕霉素组。先用含雷帕霉素(5μmol/L)DMEM培养液培养1 h,用丙泊酚(100μmol/L)处理1 h,然后再加入TGF-β1(5 ng/ml)继续共同培养24 h。细胞的增殖水平通过MTT法测量,细胞培养液上清中透明质酸(HA)、IV型胶原(IV-C)和层粘连蛋白(LN)的浓度采用ELISA法测量,细胞的超微结构采用透射电镜观测,α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)、磷酸化mTOR(p-mTOR)及自噬相关基因Beclin 1、微管相关蛋白1轻链3(LC3)和p62的表达通过Western blot测量。结果:与对照组比较,TGF-β1组细胞增殖、α-SMA蛋白的表达、培养液上清中HA、IV-C和LN的浓度、自噬体数量、Beclin-1和LC3-Ⅱ的蛋白表达及LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比值显著性增加(P均<0.05),p-mTOR蛋白的表达和p-mTOR/mTOR比值及p62的蛋白表达显著性降低(P均<0.05)。与TGF-β1组比较,丙泊酚+TGF-β1组细胞增殖、α-SMA蛋白的表达、培养液上清中HA、IV-C和LN的浓度、自噬体数量、Beclin-1和LC3-Ⅱ的蛋白表达及LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比值均显著性降低(P均<0.05),p-mTOR蛋白表达和p-mTOR/TOR比值及p62的蛋白表达均显著性增加(P均<0.05)。mTOR抑制剂雷帕霉素部分逆转丙泊酚的作用。结论:丙泊酚抑制TGFβ1诱导的肝星状细胞激活,其机制涉及mTOR-自噬途径。

鳖甲煎丸含药血清通过调控TLR4-NF-κB通路抑制血小板衍生生长因子诱导的肝星状细胞激活

目的研究鳖甲煎丸(Biejiajian Pill,BJJ)含药血清对血小板衍生生长因子(platelet derived growth factor,PDGF)诱导肝星状细胞(hepatic stellate cells,HSC)活化的抑制作用及其机制。方法通过PDGF诱导HSC激活并给予鳖甲煎丸含药血清处理,MTT实验检测PDGF处理后HSC细胞增殖活性,EdU染色检测HSC细胞增殖。ELISA实验检测HSC激活相关细胞因子,最后通过Western blotting实验研究Toll样受体-4(Toll-like receptor 4,TLR 4)/核因子κB(nuclear factor kappa-B,NF-κB)信号通路相关蛋白表达情况。结果MTT和EdU实验结果显示鳖甲煎丸含药血清可显著抑制PDGF引起的HSC细胞增殖活性;ELISA实验结果显示鳖甲煎丸含药血清可显著降低PDGF处理后HSC中Ⅰ型胶原(collagen typeⅠ,Col-Ⅰ)、白介素-6(interleukin 6,IL-6)、PDGF-AA和肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor alpha,TNF-α)含量;并可显著抑制PDGF处理后TGF-β1和α-SMA表达;免疫印迹实验显示鳖甲煎丸含药血清可抑制TLR4、p-IKK表达并升高p-IκBα表达。结论鳖甲煎丸含药血清可通过作用于TLR4-NF-κB信号通路抑制HSC细胞增殖和激活。