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基于单细胞RNA测序技术的肝癌手术前后外周血B细胞基因表达谱研究
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作者 梁思 盛勇红 +5 位作者 刘顺 刘美良 杨钰 雷蕾 巫丽丽 曾小云 《中国癌症防治杂志》 CAS 2024年第4期433-442,共10页
目的探索肝细胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC)患者手术前后外周血B细胞基因表达谱的变化。方法收集2022年9月在广西医科大学附属肿瘤医院行肝切除术治疗的3例HCC患者手术前及手术后的外周血样本,提取外周血单个核细胞(peripheral bl... 目的探索肝细胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC)患者手术前后外周血B细胞基因表达谱的变化。方法收集2022年9月在广西医科大学附属肿瘤医院行肝切除术治疗的3例HCC患者手术前及手术后的外周血样本,提取外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cell,PBMC)并进行单细胞RNA测序(single-cell RNA sequencing,scRNA-seq)。根据测序数据进行B细胞数量分析、上下调基因差异分析、KEGG分析、GSEA-KEGG及GSEA-GO分析和细胞通讯分析,比较手术前后B细胞的动态改变。结果PBMC经scRNA-seq分析识别出了标记基因为MS4A1、CD79A的细胞簇,即B细胞群。B细胞群重新聚类分析后可分为记忆B(memory B)细胞、初始B(naive B)细胞和浆母细胞(plasmablasts)共3个细胞亚群。与术前组相比,术后组naive B和plasmablasts细胞占比升高,memory B细胞占比降低。手术前后B细胞中共筛选出285个显著差异表达基因(differentially expressed genes,DEGs),其中S100A8、S100A9、IL1R2、MALAT1等152个基因在手术后显著上调(P<0.05),RPS27A、RPS3A、RPS12、RPS3等133个基因在手术后显著下调(P<0.05)。KEGG分析发现手术后B细胞中显著下调的DEGs主要富集到核糖体、抗原处理和提呈通路。GSEA-KEGG分析发现手术后B细胞中表达上调的基因集显著富集于癌症中的转录失调、P53信号通路,表达下调的基因集显著富集于核糖体、抗原处理和提呈通路;GSEA-GO分析发现手术后B细胞中表达上调的基因集显著富集于环氧化酶P450途径、信号模式识别受体活性,表达下调的基因集显著富集于免疫球蛋白复合物、T细胞受体复合物。手术后B细胞与T细胞之间的通讯增强,且手术后配体-受体对CD22-PTPRC在B细胞与B细胞、B细胞与Mono细胞之间的通讯概率上调(P<0.01)。无论是手术前还是手术后,CD22信号通路对B细胞与T细胞之间的通讯均具有较强调控能力。结论HCC患者外周血B细胞基因表达谱在手术前后发生动态变化且与外周血B细胞免疫功能相关,可为研究外周血B细胞的抗肿瘤免疫作用提供新的参考依据。 展开更多
关键词 细胞RNA测序 B细胞 肝癌 基因表达
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CTHRC1基因在人肝癌中高表达并促进MHCC97L肝癌细胞的转移 被引量:8
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作者 万晓桢 覃文新 +4 位作者 谭宁 姚根富 谭玉婷 况文祥 顾健人 《肿瘤》 CAS CSCD 北大核心 2007年第6期476-479,483,共5页
目的:分析CTHRC1基因在人肝癌组织和肝癌细胞株中的表达情况及其对MHCC97L肝癌细胞转移能力的影响。方法:采用northern blot、RT-PCR和荧光定量PCR分析人肝癌组织和肝癌细胞株中CTHRC1 mRNA水平。构建包含CTHRC1基因编码框的真核表达载... 目的:分析CTHRC1基因在人肝癌组织和肝癌细胞株中的表达情况及其对MHCC97L肝癌细胞转移能力的影响。方法:采用northern blot、RT-PCR和荧光定量PCR分析人肝癌组织和肝癌细胞株中CTHRC1 mRNA水平。构建包含CTHRC1基因编码框的真核表达载体pCMV-3Tag-CTHRC1,通过体外实验分析CTHRC1在MHCC97L细胞中过表达对MHCC97L细胞迁移、侵袭等转移能力的影响。结果:Northern blot、RT-PCR和荧光定量PCR结果显示,14例肝癌患者中11例存在癌组织CTHRCI mRNA表达水平高于癌旁组织,8种肝癌细胞株中5种肝癌细胞株存在着CTHRC1的高表达。当CTHRC1过表达后,MHCC97L细胞的迁移及侵袭能力显著增强(P<0.001)。结论:CTHRC1基因在人肝癌组织和人肝癌细胞株中存在着高表达,同时该基因可使肝癌细胞MHCC97L的转移能力明显增强,提示CTHRC1基因可能在肿瘤转移中起重要作用。 展开更多
关键词 细胞 肿瘤转移 基因表达 细胞运动 基因 CTHRC1
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肝癌中高表达的新基因LAPTM4B对细胞增殖及成瘤性的影响 被引量:13
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作者 何静 邵根泽 周柔丽 《北京大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2003年第4期348-352,共5页
目的 :研究在肝细胞癌中高表达的新基因LAPTM4B对小鼠NIH3T3细胞生物学行为的影响 ,探讨LAPTM4B基因的生物学功能。方法 :构建真核表达质粒 pcDNA3 TM 4B ,利用脂质体稳定转染LAPTM 4BcDNA至NIH3T3细胞中 ,用RT -PCR、Northern和Wester... 目的 :研究在肝细胞癌中高表达的新基因LAPTM4B对小鼠NIH3T3细胞生物学行为的影响 ,探讨LAPTM4B基因的生物学功能。方法 :构建真核表达质粒 pcDNA3 TM 4B ,利用脂质体稳定转染LAPTM 4BcDNA至NIH3T3细胞中 ,用RT -PCR、Northern和Western杂交法筛选和鉴定转染后LAPTM4B基因高表达的单克隆细胞株 ,研究其与细胞增殖相关的生物学特征的变化。结果 :与转染空载体的对照组相比 ,转染了LAPTM4BcDNA的NIH3T3细胞表面发生明显变化 ,微绒毛的数量和长度增加 ,多分枝且缠绕成团。转染细胞在纤黏连蛋白、人工基膜和层黏连蛋白基质上的黏附 /铺展能力增强。生长曲线显示转染细胞的生长速率增高。流式细胞仪检测显示转染细胞的S期细胞数比未转染细胞显著增多 ,而G0 ~G1期细胞数减少。Western杂交显示CyclinE蛋白在转染细胞中的表达显著增加。转染细胞对血清的依赖性下降并具有成瘤性。结论 :LAPTM 4B基因能影响细胞增殖的调节 ,促进NIH3T3细胞的增殖 ,并使NIH3T3细胞具有成瘤性 ,在肿瘤发生过程中具有重要的作用。 展开更多
关键词 肝癌 表达 基因 LAPTM4B 细胞增殖 成瘤性
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高聚金葡素对中晚期肝癌患者多药抗药性基因表达及NK细胞活性的影响 被引量:8
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作者 江学良 权启镇 +3 位作者 谢宗贵 孙自勤 王要军 刘同亭 《中国肿瘤临床》 CAS CSCD 北大核心 1998年第7期546-547,共2页
研究高聚金葡素对中晚期肝癌患者多药抗药性(MDR)基因表达及NK细胞活性的影响。结果显示化疗联合高聚金葡素治疗组(50例)较单纯化疗组(30例)可明显抑制MDR基因过度表达,升高NK细胞活性,临床疗效显著优于对照组。
关键词 肿瘤 聚金葡素 多药耐药 基因表达 NK细胞
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PNPLA3基因高表达对非酒精性脂肪性肝病模型细胞增殖和甘油三酯的影响
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作者 何晓萱 马雪儿 +4 位作者 杨雪霞 李琴 贾茜茜 任树风 蔡雯 《中国医药导报》 CAS 2024年第23期9-13,27,共6页
目的探讨patatin样磷脂酶域3(PNPLA3)高表达对非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)细胞模型细胞增殖和甘油三酯(TG)的影响。方法将人肝癌细胞(SMMC-7721细胞)分为对照组、模型组、PNPLA3过表达组、PNPLA3过表达空载组。模型组:经游离脂肪酸诱导建... 目的探讨patatin样磷脂酶域3(PNPLA3)高表达对非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)细胞模型细胞增殖和甘油三酯(TG)的影响。方法将人肝癌细胞(SMMC-7721细胞)分为对照组、模型组、PNPLA3过表达组、PNPLA3过表达空载组。模型组:经游离脂肪酸诱导建立NAFLD细胞模型,PNPLA3过表达组、PNPLA3过表达空载组:在造模后经慢病毒原液感染、嘌呤霉素筛选获得。用定量反转录聚合酶链反应(qRT-PCR)、MTT比色法和TG测试技术检测细胞中PNPLA3表达情况、细胞存活率和胞内TG含量。结果qRT-PCR结果显示,模型组PNPLA3基因的表达量高于对照组(P<0.01),PNPLA3过表达组PNPLA3基因表达量高于模型组(P<0.01)。MTT结果显示,模型组细胞相对存活率高于对照组(P<0.05),PNPLA3过表达组细胞相对存活率高于模型组(P<0.01)。TG检测结果显示:模型组TG含量高于对照组(P<0.01),PNPLA3过表达组中胞内TG含量高于模型组(P<0.05)。结论成功构建PNPLA3过表达NAFLD稳转株,PNPLA3的过量表达有助于细胞脂质堆积并增强细胞相对存活率。 展开更多
关键词 非酒精性脂肪性 patatin样磷脂酶域3 基因表达 肝癌细胞 慢病毒 甘油三酯
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人TNFα基因转染的人肝癌细胞稳定高表达克隆SMMC7721-TNF体外抗瘤活性及其可能机制的初步研究 被引量:1
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作者 冯学胜 汤钊猷 +3 位作者 叶胜龙 郑仲承 戈凯 刘新垣 《中国肿瘤生物治疗杂志》 CAS CSCD 1995年第4期276-276,共1页
应用逆转录病毒载体介导人TNFα基因感染人肝癌细胞株SMMC7721,经G418筛选获得一稳定高表达SMMC7721-TNF,观察SMMC7721-TNF细胞及其培养液上清对SMMC7721和BEL7404肝癌细胞的抗瘤效应,结果表明SMMC7721-TNFα细胞本身对两种细胞均无... 应用逆转录病毒载体介导人TNFα基因感染人肝癌细胞株SMMC7721,经G418筛选获得一稳定高表达SMMC7721-TNF,观察SMMC7721-TNF细胞及其培养液上清对SMMC7721和BEL7404肝癌细胞的抗瘤效应,结果表明SMMC7721-TNFα细胞本身对两种细胞均无明显的杀伤作用,但其培养液上清对这两种细胞均具有明显的抑制作用, 展开更多
关键词 SMMC7721 TNFΑ 表达 肝癌细胞 抗瘤活性 体外 基因转染 克隆 培养液 初步研究
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胆管细胞型肝癌lncRNA-mRNA共表达网络的高通量基因芯片筛查分析 被引量:1
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作者 唐津天 王瑞宾 王伯庆 《中国医药导报》 CAS 2021年第3期21-25,F0004,共6页
目的探索胆管细胞型肝癌的长链非编码RNA(lncRNA)-信使RNA(mRNA)共表达网络,并对差异表达的lncRNA进行功能分析。方法选取2017年1月—6月在新疆医科大学附属肿瘤医院肝胆外科手术切除的5例胆管细胞型肝癌新鲜组织标本。采用高通量芯片... 目的探索胆管细胞型肝癌的长链非编码RNA(lncRNA)-信使RNA(mRNA)共表达网络,并对差异表达的lncRNA进行功能分析。方法选取2017年1月—6月在新疆医科大学附属肿瘤医院肝胆外科手术切除的5例胆管细胞型肝癌新鲜组织标本。采用高通量芯片技术对5例胆管细胞型肝癌组织进行mRNA和lncRNA差异表达谱分析,构建lncRNA-mRNA共表达网络。选择显著差异的Top1 lncRNA进行mRNA共表达筛查,进行GO分析和Pathway分析。并对Top1 lncRNA及其共表达mRNA在其他30例胆管细胞型肝癌标本中进行验证。结果在筛选阈值为P≤0.05,log2|差异倍数|≥1(FC)的情况下,获得差异基因共计475个,其中上调mRNA 213个,下调mRNA 262个;获得差异lncRNA共计438个,其中上调lncRNA131个,下调lncRNA307个。筛选获得Top1 lncRNA为氨基甲酰磷酸合成酶Ⅰ-内含子转录本1(CSP1-IT1)。GO分析和Pathway分析结果示CSP1-IT1与20个生物过程和2个细胞组成功能相关,涉及8个细胞信号通路。结论胆管细胞型肝癌中存在的mRNA和lncRNA形成复杂的共表达网络,参与多个重要的生物学过程。 展开更多
关键词 胆管细胞肝癌 表达网络 基因芯片 长链非编码RNA
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基于生物信息学数据库研究NDC1基因在肝细胞肝癌组织中的表达水平及临床意义
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作者 许华 陈雨帆 +1 位作者 周黛丽 李晓伟 《海南医学》 2024年第2期153-159,共7页
目的 探讨肝细胞肝癌(LIHC)中NDC1基因的表达水平及临床价值。方法 利用The Human Protein Atlas、GEPIA、TIMER数据库在线分析NDC1基因在健康人体各器官组织、正常肝组织和肝细胞肝癌组织中的表达情况。利用Kaplan-Meier Ploter和UALCA... 目的 探讨肝细胞肝癌(LIHC)中NDC1基因的表达水平及临床价值。方法 利用The Human Protein Atlas、GEPIA、TIMER数据库在线分析NDC1基因在健康人体各器官组织、正常肝组织和肝细胞肝癌组织中的表达情况。利用Kaplan-Meier Ploter和UALCAN数据库的肝癌数据集在线分析患者NDC1表达与生存总周期的关系。通过STRING数据库在线检索NDC1的相关蛋白网络图,并进行功能注释和KEGG通路富集分析。通过TIMER数据库检测NDC1在肝癌中的免疫细胞的浸润水平以分析临床不良预后的相关性。结果 人体不同器官的NDC1 m RNA存在差异表达。与对照组相比,NDC1基因在乳腺癌、膀胱癌、结肠癌、胆管癌、肺鳞癌、肝癌的表达水平显著上升,且差异有显著统计学意义(P<0.001)。肝癌组织NDC1 m RNA的表达水平高于正常肝脏组织,肝癌组织中NDC1 m RNA表达水平明显上调,差异有统计学意义(P<0.05)。NDC1基因在正常肝组织中的表达水平为2.356(1.728~2.878)。根据病理分级,NDC1基因在1级肝癌组织中的表达水平为3.071 (2.475~4.981),在2级肝癌组织中的表达水平为3.69 (2.457~5.305),在3级肝癌组织中的表达水平为4.676 (2.745~6.874),在4级肝癌组织中的表达水平为4.586 (3.159~6.954),各级肝癌中NDC1的表达水平差异有显著统计学意义(P<0.01);根据肿瘤临床分期,NDC1基因在Ⅰ期肝癌组织中表达水平为3.323 (2.371~5.414),在Ⅱ期肝癌组织中表达水平为4.294 (2.704~7.496),在Ⅲ期肝癌组织中表达水平为4.684 (2.979~7.037),在Ⅳ期肝癌组织中表达水平为1.983 (1.801~2.669),肝癌Ⅰ、Ⅱ和Ⅲ期中NDC1基因的表达水平均显著高于正常组织(P<0.001),而肝癌Ⅱ期和Ⅲ期中的表达水平显著高于Ⅰ期,差异具有显著统计学意义(P<0.01);根据身体质量指数分组,在正常体质量的肝癌组织表达水平为3.62 (2.584~5.661),在超常体质量的肝癌组织表达水平为3.841 (2.098~6.056),在肥胖的肝癌组织表达水平为3.627 (2.504~5.182),在极度肥胖的肝癌组织表达水平为3.577 (2.359~4.909)。任何BMI患者的肝癌组织中NDC1的表达水平均显著高于正常肝脏组织,差异具有显著统计学意义(P<0.01)。NDC1与CDK1、CCNB1、CCNB2、SEH1L、NUP155、CDCA8等蛋白相关,NDC1 m RNA在肝癌免疫微环境中与CD8^(+)T细胞、CD4^(+)T细胞、T细胞、B细胞、中性粒细胞、单核细胞、巨噬细胞和骨髓细胞等免疫细胞中的表达呈正相关性(P<0.05)。结论 肝癌组织中NDC1基因呈现高表达水平,其表达水平与肝癌的发生、发展及预后密切相关,可能是肝癌潜在的预后生物学标志物及治疗靶标。 展开更多
关键词 细胞肝癌 NDC1基因 预后 生物信息学
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人TNFα基因转染的人肝癌细胞稳定高表达细胞克隆SMMC7721-TNF的建立及其部分生物学特性的初步观察
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作者 冯学胜 汤钊猷 +3 位作者 叶胜龙 郑仲承 戈凯 刘新垣 《中国肿瘤生物治疗杂志》 CAS CSCD 1995年第4期275-276,共2页
用重组逆转录病毒载体L-tnfSN的包装病毒颗粒感染人肝癌细胞SMMC7721,G418筛选后,随机挑选10个细胞克隆,扩大培养,检测细胞培养液上清中TNFα的水平,将其中表达TNF最高细胞克隆命名为SMMC7721-TNF。观察SMMC7721-TNF的分子生物学... 用重组逆转录病毒载体L-tnfSN的包装病毒颗粒感染人肝癌细胞SMMC7721,G418筛选后,随机挑选10个细胞克隆,扩大培养,检测细胞培养液上清中TNFα的水平,将其中表达TNF最高细胞克隆命名为SMMC7721-TNF。观察SMMC7721-TNF的分子生物学特性。Southern Blot证明TNFα基因完整地整合在细胞基因组中, 展开更多
关键词 SMMC7721 肝癌细胞 TNFΑ基因 观察 细胞克隆 表达 转染 重组逆转录病毒载体 细胞培养液 病毒颗粒
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BAP1在肝细胞肝癌中的表达及其与预后的关系
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作者 王珺平 陈可和 王志强 《海南医学》 CAS 2024年第1期24-28,共5页
目的探讨BRCA1相关蛋白1(BAP1)在肝细胞肝癌(LIHC)中的表达变化及其与预后的关系。方法从UALCA获得癌症基因组图谱(TCGA)中LIHC的BAP1 m RNA表达水平及临床数据并进行数据分组和处理。采用R3.2.2软件进行分析。比较BAP1在癌组织与正常... 目的探讨BRCA1相关蛋白1(BAP1)在肝细胞肝癌(LIHC)中的表达变化及其与预后的关系。方法从UALCA获得癌症基因组图谱(TCGA)中LIHC的BAP1 m RNA表达水平及临床数据并进行数据分组和处理。采用R3.2.2软件进行分析。比较BAP1在癌组织与正常组织中的表达差异,并分析LIHC患者各亚组临床指标的BAP1表达水平与正常组织的差异。采用寿命表法计算生存率,采用Kaplan-Meier法比较BAP1高表达组和中低表达组患者的生存率,并绘制患者的生存曲线。结果LIHC组织中BAP1 mRNA表达中位数为37.748 TPM,明显高于正常组织中的18.444 TPM,差异有显著统计学意义(P<0.01);患者的性别、年龄、种族、体质量、组织学类型、组织学分级、淋巴结、TNM分期Ⅰ~Ⅲ期、TP53突变的各组癌组织中BAP1表达水平与正常组织表达水平比较差异均有统计学意义(P<0.05),而Ⅳ期组癌组织中BAP1表达水平与正常组织表达水平比较差异无统计学意义(P>0.05);患者的中位生存时间为27.18个月,1年、2年、3年、4年、5年生存率分别为0.57%、0.31%、0.20%、0.13%、0.08%;BAP1 m RNA高表达的整体生存率较BAP1mRNA中低表达者短,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论BAP1 m RNA在LIHC中呈高表达,高表达组生存率较低,提示预后不良。 展开更多
关键词 细胞肝癌 BRCA1相关蛋白1 基因表达 预后 相关性
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蟾蜍灵对肝癌细胞SMMC 7721的细胞毒作用及生长相关基因表达的影响 被引量:42
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作者 陈小义 呼文亮 +2 位作者 徐瑞成 陈莉 钱进 《中国药理学与毒理学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2001年第4期293-296,共4页
为探讨蟾蜍灵的抗癌作用机理 ,以肝癌SMMC772 1细胞为靶细胞 ,应用噻唑蓝还原法检测细胞毒作用 ,双荧光染色法和DNA电泳技术检测细胞凋亡与坏死 ;免疫组织化学方法检测细胞生长相关基因p2 1waf1/cip1和增殖细胞核抗原 (PCNA)蛋白表达 .... 为探讨蟾蜍灵的抗癌作用机理 ,以肝癌SMMC772 1细胞为靶细胞 ,应用噻唑蓝还原法检测细胞毒作用 ,双荧光染色法和DNA电泳技术检测细胞凋亡与坏死 ;免疫组织化学方法检测细胞生长相关基因p2 1waf1/cip1和增殖细胞核抗原 (PCNA)蛋白表达 .结果表明 ,0 .0 1μmol·L- 1及以上浓度蟾蜍灵对SMMC772 1细胞具有显著细胞毒作用 ,形态学和DNA片段化检测证实蟾蜍灵诱导的细胞死亡以凋亡为主 ;p2 1waf1/cip1在蟾蜍灵诱导下表达上调 ,同时PCNA的表达下降 ,两者呈负相关 (P <0 .0 1) .提示蟾蜍灵通过上调p2 1waf1/cip1表达 ,下调PCNA表达 。 展开更多
关键词 蟾蜍灵 细胞毒性 肝癌 增殖细胞核抗原 基因表达 细胞 SMMC7721细胞 细胞凋亡
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丙型肝炎病毒核心蛋白结合蛋白6基因转染肝癌细胞的基因表达谱芯片分析 被引量:29
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作者 刘妍 成军 +4 位作者 李克 杨倩 陆荫英 王琳 王建军 《世界华人消化杂志》 CAS 2003年第4期394-398,共5页
目的:筛选并克隆丙型肝炎病毒(HCV)核心蛋白的肝细胞结合蛋白基因,并对新基因转染肝癌细胞的基因表达谱进行分析,探索该基因表达对肝细胞基因表达的调节机制。方法:应用酵母双杂交技术,以HCV的核心蛋白作为“诱饵(bait)”,筛选鉴定与其... 目的:筛选并克隆丙型肝炎病毒(HCV)核心蛋白的肝细胞结合蛋白基因,并对新基因转染肝癌细胞的基因表达谱进行分析,探索该基因表达对肝细胞基因表达的调节机制。方法:应用酵母双杂交技术,以HCV的核心蛋白作为“诱饵(bait)”,筛选鉴定与其结合的肝细胞中蛋白的编码基因。应用生物信息学(bioinformatics)技术,分析其中筛选得到的人HCV核心蛋白结合蛋白6(HCBP6)基因的全长编码序列,并构建HCBP6基因的真核表达载体pcDNA3.1(-)-HCBP6。应用基因表达谱芯片技术对重组表达质粒pcDNA3.1(-)-HCBP6转染的HepG2细胞和空载体处理的相同细胞差异表达的mRNA进行检测。结果:通过酵母双杂交技术的筛选和鉴定,结合生物信息学分析,确定人的HCBP6基因由456 nt组成,编码152 aa的蛋白。基因表达谱芯片所检测的1 152条目的基因均为GenBank中登录的基因,HCBP6表达质粒转染的细胞有20条差异表达基因,其中13条基因表达增强,7条基因表达降低。这些差异表达的基因与细胞信号转导、增生、分化及生长调节密切相关。结论:酵母双杂交技术结合生物信息学技术,是克隆蛋白结合蛋白的有效方法,基因表达谱芯片技术对于初步全面探索新基因的功能提供重要的资料。本实验结果为进一步阐明HCV核心蛋白与Hcbp6相互作用后的肝细胞生物大分子变化提供了理论依据。 展开更多
关键词 丙型炎病毒 核心蛋白结合蛋白6 基因转染肝癌细胞 细胞结合蛋白基因 基因表达 核心蛋白
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人肝癌细胞差异表达基因纤维蛋白原γ-多肽的克隆与鉴定 被引量:15
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作者 范秉琳 朱武凌 +3 位作者 邹国林 雒国胜 许春雷 赵卫星 《癌症》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2004年第3期249-253,共5页
背景与目的:肝细胞癌(肝癌)的发生、发展与基因的异常表达有关,但详细机制还不清楚,原因在于目前所知的遗传学信息尚欠充分;本研究旨在探索新的人肝癌细胞差异表达基因。方法:应用抑制性消减杂交技术获得肝癌细胞消减cDNA,以T/A方法进... 背景与目的:肝细胞癌(肝癌)的发生、发展与基因的异常表达有关,但详细机制还不清楚,原因在于目前所知的遗传学信息尚欠充分;本研究旨在探索新的人肝癌细胞差异表达基因。方法:应用抑制性消减杂交技术获得肝癌细胞消减cDNA,以T/A方法进行克隆,通过DNA测序分析、Northern印迹杂交、cDNA末端快速扩增(rapidamplificationofcDNAend,RACE)和RT-PCR等方法加以鉴定。结果:在被克隆的消减cDNA之中,一个长度为787个核苷酸的差异表达cDNA片段经Northern印迹分析,发现其在两种人肝癌细胞株SMMC-7721和HepG2中的表达均明显高于正常肝细胞;经过RACE后获得一个长度为1597bp、具有3'端polyA结构的基因序列,它含有完整的开放阅读框,编码437个氨基酸,经同源性分析证实该基因为编码人纤维蛋白原γ-多肽(fibrinogengammapolypeptide,FGG)的基因;RT-PCR分析证明癌组织中FGGmRNA表达水平较癌旁非癌组织明显增加,尤其是在肝癌转移灶中。结论:SMMC-7721和HepG2细胞中发现FGG高表达,FGG基因的上调表达是肝癌病理过程中一个重要分子事件。 展开更多
关键词 肝癌细胞 基因纤维蛋白原 γ-多肽 克隆 基因表达 肿瘤
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活性氧改变在PIG11高表达诱导人肝癌HepG_2细胞凋亡中的作用 被引量:13
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作者 刘小敏 王晓娟 +2 位作者 张杨 吴艳 梁晓秋 《肿瘤》 CAS CSCD 北大核心 2009年第12期1116-1119,共4页
目的:探讨活性氧(reactive oxygen species,ROS)改变在PIG11蛋白高表达诱导人肝癌HepG2细胞凋亡中的作用。方法:本研究采用2’,7’-二氯氢化荧光素二脂(2’,7’-dichlorofluorescin diacetate,DCFH-DA)荧光探针标记PIG11蛋白高表达肝癌... 目的:探讨活性氧(reactive oxygen species,ROS)改变在PIG11蛋白高表达诱导人肝癌HepG2细胞凋亡中的作用。方法:本研究采用2’,7’-二氯氢化荧光素二脂(2’,7’-dichlorofluorescin diacetate,DCFH-DA)荧光探针标记PIG11蛋白高表达肝癌细胞株pLXSN-PIG11-HepG2细胞内ROS,用N-乙酰半胱氨酸(N-acetylcystine,NAC)清除细胞内ROS后,FCM检测细胞内ROS水平的变化以及细胞凋亡率。结果:FCM测定结果显示,pLXSN-PIG11-HepG2细胞内ROS水平(15.60±0.92)明显高于pLXSN-HepG2细胞(4.90±0.70)和HepG2细胞(5.37±1.17),差异有统计学意义(P<0.01)。NAC(10 mmol/L)清除细胞内ROS后,FCM检测显示pLXSN-PIG11-HepG2细胞凋亡率较未清除前明显降低(P<0.01)。结论:PIG11高表达诱导细胞凋亡的机制可能与细胞内ROS水平升高有关。 展开更多
关键词 细胞 活性氧 基因表达 细胞凋亡 p53诱导基因11
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力达霉素对人肝癌bel-7402细胞凋亡基因表达和细胞骨架的影响 被引量:10
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作者 何琪杨 姜兵 +1 位作者 李电东 甄永苏 《癌症》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2002年第4期351-355,共5页
背景与目的:力达霉素是我所分离的烯二炔类抗肿瘤抗生素,因其独特的化学结构和对体内外肿瘤的强烈抑制作用,而倍受关注。除了断裂DNA外,力达霉素对细胞凋亡基因表达和细胞骨架的影响,可能与其高活性有关。本文通过观察力达霉素对人肝癌b... 背景与目的:力达霉素是我所分离的烯二炔类抗肿瘤抗生素,因其独特的化学结构和对体内外肿瘤的强烈抑制作用,而倍受关注。除了断裂DNA外,力达霉素对细胞凋亡基因表达和细胞骨架的影响,可能与其高活性有关。本文通过观察力达霉素对人肝癌bel-7402细胞多指标的影响,进一步阐明其分子机制。方法:用Northernblot印迹法和dot印迹法检测癌基因表达,间接免疫荧光法检测微丝和微管,线粒体特异染料MitosensorTM检测细胞凋亡。结果:低浓度的力达霉素(0.1nmol/L)处理人肝癌bel-7402细胞8h,明显促进c-myc、c-fos基因表达,而抑制N-ras表达。10nmol/L力达霉素处理细胞8h后,细胞伸展,微丝排列整齐,向非恶性细胞转变,但对微管没有影响。用线粒体特异凋亡染料MitosensorTM检测发现,力达霉素处理8h后的细胞未出现凋亡,说明力达霉素引起肿瘤细胞凋亡首先需要诱导c-myc基因表达。结论:低浓度的力达霉素明显影响人肝癌bel-7402细胞的有关凋亡基因表达和细胞骨架的分布,这些结果有助于解释力达霉素高活性地作用肿瘤细胞的分子机制。 展开更多
关键词 力达霉素 基因表达 细胞骨架 凋亡 肝癌细胞
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Bak基因过表达诱导肝癌细胞凋亡 被引量:8
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作者 郑建勇 王文亮 +3 位作者 李江 杨新科 于欣欣 张杰 《癌症》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2000年第9期891-895,共5页
目的:本文旨在研究bcl-2基因家族促凋亡蛋白Bak在肝癌细胞凋亡中的作用,同时评价它作为肿瘤治疗的潜在靶基因的可能性。方法:免疫组织化学法研究Bak在HCC组织中的分布,并结合TUNEL染色,分析Bak在肝癌细胞凋亡中潜在的作用。采用MT... 目的:本文旨在研究bcl-2基因家族促凋亡蛋白Bak在肝癌细胞凋亡中的作用,同时评价它作为肿瘤治疗的潜在靶基因的可能性。方法:免疫组织化学法研究Bak在HCC组织中的分布,并结合TUNEL染色,分析Bak在肝癌细胞凋亡中潜在的作用。采用MTⅡ调节系统,通过加锌离子(ZnSO4,100μmol/L)诱导Bak基因表达。HCC-9204肝癌细胞系作为靶细胞,获得表达Bak基因的稳定转染子。结果:在HCC组织中,Bak抗原的表达主要位于肝(癌)细胞的胞浆,呈细颗粒状均匀分布,在癌细胞中偶有核内表达。TUNELLI的分析结果显示,低TUNELLI组Bak表达的细胞阳性率显著低于高TUNELLI组的细胞阳性率(P<0.01)。可诱导性Bak基因过表达的HCC9204细胞显示广泛的细胞死亡。TUNEL染色证实细胞核的碎片化,Annexin-V实验证实细胞膜不对称丧失,从而提示这种细胞死亡是凋亡。流式细胞仪显示在诱导后24h,有19.29%的细胞发生凋亡。结论:肝癌细胞的凋亡与bcl2家族促凋亡成员Bak抗原的表达有关;Bak基因显著诱导HCC-9204细胞凋亡。因此Bak基因可能成为肿瘤基因治疗的靶基因。 展开更多
关键词 BAK基因 细胞凋亡 细胞 基因过度表达
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人间充质干细胞抑制肝癌细胞增殖的作用及其基因表达谱分析 被引量:8
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作者 乔玲 赵铁军 +2 位作者 山长亮 叶丽虹 张晓东 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第12期1037-1044,共8页
干细胞移植治疗肿瘤具有重要的临床价值.应用人间充质干细胞条件培养液作用H7402肝癌细胞,拟探讨间充质干细胞对肿瘤细胞的抑制作用,为今后应用人间充质干细胞进行肿瘤细胞治疗奠定理论基础.应用胎儿真皮来源的Z3间充质干细胞和胎儿骨... 干细胞移植治疗肿瘤具有重要的临床价值.应用人间充质干细胞条件培养液作用H7402肝癌细胞,拟探讨间充质干细胞对肿瘤细胞的抑制作用,为今后应用人间充质干细胞进行肿瘤细胞治疗奠定理论基础.应用胎儿真皮来源的Z3间充质干细胞和胎儿骨髓来源的BMMS-03间充质干细胞的条件培养液作用于H7402肝癌细胞,采用软琼脂克隆形成实验、流式细胞仪技术、基因芯片技术和免疫印迹技术观察H7402细胞的克隆形成、增殖和基因表达谱变化.结果显示,H7402细胞在间充质干细胞条件培养液作用下,克隆形成和增殖受到了明显抑制;基因芯片检测结果显示,H7402细胞在间充质干细胞条件培养液作用下有23个基因上调表达,17个基因下调表达,这些差异表达的基因与细胞的转录调控、新陈代谢、信号转导、细胞周期、应激反应和细胞粘附等功能相关.本实验结果表明,人间充质干细胞对H7402肝癌细胞的克隆形成和增殖具有抑制作用,并有多种基因的表达发生改变,这些基因表达的改变可能参与了对上述肿瘤细胞的抑制. 展开更多
关键词 间充质干细胞 肝癌细胞 克隆形成 增殖 基因表达
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三氧化二砷抑制肝癌HepG2细胞侵袭转移及对RhoC基因表达的影响 被引量:6
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作者 冯觉平 黄涛 +3 位作者 王亚萍 方静 李敏 孔庆志 《肿瘤防治研究》 CAS CSCD 北大核心 2008年第11期775-777,共3页
目的了解三氧化二砷(As2O3)对肝癌HepG2细胞体外黏附、侵袭和迁移的抑制作用及对转移基因RhoC表达的影响,探讨As2O3抑制肝癌细胞转移的机制。方法分别采用MTT法、Transwell检测As2O3对HepG2细胞黏附、迁移、侵袭能力的影响;采用RT-PCR、... 目的了解三氧化二砷(As2O3)对肝癌HepG2细胞体外黏附、侵袭和迁移的抑制作用及对转移基因RhoC表达的影响,探讨As2O3抑制肝癌细胞转移的机制。方法分别采用MTT法、Transwell检测As2O3对HepG2细胞黏附、迁移、侵袭能力的影响;采用RT-PCR、Westernblot方法检测As2O3作用前后HepG2细胞中RhoC基因的表达及变化。结果As2O3作用后HepG2细胞黏附率、侵袭及侵袭细胞数较对照组明显下降(P<0.05)。As2O3作用4、6、8天后RhoC-mRNA及蛋白表达水平逐渐下降(P<0.05)。HepG2细胞中RhoC-mRNA表达和蛋白表达具有相关性(r=0.92,P=0.046)。结论As2O3可明显抑制HepG2细胞细胞黏附、迁移和侵袭的能力;并可通过下调RhoC基因的表达而抑制其侵袭转移。 展开更多
关键词 三氧化二砷 肝癌细胞 HEPG2细胞 转移 RHOC基因 表达
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微囊藻毒素促肝癌过程中肝细胞PCNA、p21^(waf1)基因表达研究 被引量:7
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作者 胡志坚 陈华 +1 位作者 李一伟 孙昌盛 《中国公共卫生》 CAS CSCD 北大核心 2002年第5期538-540,共3页
目的 探讨微囊藻毒素 (MC)促肝癌的分子机制。方法 采用二阶段致癌理论建立中期试验动物模型 ,γ -GT染色检验MC的促癌作用 ,并以免疫组化法结合图像分析技术精确测定大鼠肝脏PCNA和p2 1waf1基因的表达情况。结果  (1)MC在促大鼠肝... 目的 探讨微囊藻毒素 (MC)促肝癌的分子机制。方法 采用二阶段致癌理论建立中期试验动物模型 ,γ -GT染色检验MC的促癌作用 ,并以免疫组化法结合图像分析技术精确测定大鼠肝脏PCNA和p2 1waf1基因的表达情况。结果  (1)MC在促大鼠肝癌过程中能显著增加γ -GT阳性率。 (2 )MC在促大鼠肝癌过程中能显著增加大鼠肝脏PCNA基因表达强度和面积。 (3)MC在促大鼠肝癌过程中能显著降低大鼠肝脏 p2 1waf1基因的表达强度和面积。结论  (1)进一步证明MC促癌剂的作用。 (2 )初步明确 ,调节与细胞增殖相关的癌基因和抑癌基因表达是MC促癌过程的重要机制。 展开更多
关键词 微囊藻毒素 肝癌 细胞 PCNA P21^WAF1 基因表达 Γ-GT
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黄芪总苷对肝癌细胞凋亡及wtp53基因表达的影响 被引量:51
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作者 杨雁 陈敏珠 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2001年第4期447-451,共5页
目的 研究黄芪总苷 (TA)对肝癌细胞凋亡的影响及其机制。方法 将两种人肝癌细胞株HepG2细胞和Bel 740 4细胞分别与TA(2 0 ,40和 80mg·L-1)共培养 6d ,经流式细胞术检测凋亡峰以及p5 3癌基因的表达。结果 TA(2 0 ,40和 80mg·... 目的 研究黄芪总苷 (TA)对肝癌细胞凋亡的影响及其机制。方法 将两种人肝癌细胞株HepG2细胞和Bel 740 4细胞分别与TA(2 0 ,40和 80mg·L-1)共培养 6d ,经流式细胞术检测凋亡峰以及p5 3癌基因的表达。结果 TA(2 0 ,40和 80mg·L-1)可明显促进人肝癌HepG2细胞和Bel 740 4细胞的DNA亚G1峰 (凋亡峰 )升高 ,分别使HepG2细胞凋亡率由 4 1%增至 2 5 4%、5 7 0 %、74 6 % ;使Bel 740 4细胞凋亡率由 4 5 %增至 43 6 %、48 1%、5 0 5 %。TA(80mg·L-1)可促进人肝癌HepG2细胞野生型 p5 3(wtp5 3)的表达 ,还可促进Bel 740 4细胞的wtp5 3癌基因表达 ,并有降低突变型 p5 3(mtp5 3)表达的趋势。 结论 TA具有诱导肝癌细胞凋亡的作用 ,其机制可能与其上调肝癌细胞的wtp5 展开更多
关键词 黄芪总苷 肝癌 细胞凋亡 基因表达 WTP53
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