免疫组化在肝细胞肿瘤诊断中的应用

肝细胞癌 (HCC)与肝内胆管癌 (ICC)及转移性腺癌 (MAC)的鉴别诊断是外科病理诊断中常遇到的难题 ,HepPar 1是目前肝细胞分化标记物中最敏感且具特异性的一种阳性标记物 ,可结合其他抗体 ,如CD3 4、pCEA、AFP、CK19和MOC3 1等用于日常HCC。

环氧化酶-2通过影响髓源抑制性细胞增殖及活化参与肝细胞肿瘤进展

目的:以COX2-PGE2通路为靶标,探讨其调控髓源抑制性细胞(myeloid-derived suppressor cell,MDSC)增殖及活化,进而影响肝细胞肿瘤(hepatocelluar carcinoma,HCC)进展的可能机制。方法:建立小鼠肝细胞肿瘤模型,利用流式细胞术分析外周血及脾脏组织中的MDSC比例,CFSE标记法分析肿瘤浸润MDSCs对T淋巴细胞增殖的影响,ELISA检测肿瘤组织体外培养上清中PGE2水平,Western blot检测肿瘤组织中COX-2表达,最终腹腔注射COX2-PGE2通路的小分子抑制剂吲哚美辛,证实该通路在调控MDSCs增殖活化,进而影响肿瘤进展过程中具有重要作用。结果:随着HCC的进展,小鼠外周血及脾脏中MDSC比例逐渐升高,其对T淋巴细胞增殖的抑制作用,即免疫抑制功能显著增加;肿瘤组织COX-2及PGE2表达水平较正常肝脏显著升高,腹腔注射吲哚美辛能够有效抑制肿瘤生长;过继回输MDSC则在一定程度上降低吲哚美辛的肿瘤抑制作用。结论:HCC发展过程中,肿瘤细胞通过COX2-PGE2通路活化MDSC,促进肿瘤进展。COX2-PGE2通路抑制剂吲哚美辛可通过抑制MDSC介导的免疫抑制作用,减缓肿瘤进程。

TNF相关凋亡诱导配体基因治疗小鼠肝细胞肿瘤

目的:探讨经化疗药物作用后的H22细胞对TRAIL诱导凋亡的敏感性,观察TRAIL、纤黏连蛋白及内皮抑素的真核表达质粒pTRAIL,pCH510,pES联合化疗抑制小鼠肿瘤生长的作用。方法:pTRAIL转染BHK细胞后,加入分别经MMC,ADM,5-FU处理的H22细胞,MTT法检测pTRAIL对H22细胞的生长抑制作用,流式细胞仪分析H22细胞凋亡。在小鼠种植瘤体内注射MMC与pTRAIL,pCH510,pES,观察其对肿瘤生长的抑制作用。结果:pTRAIL能抑制H22生长并诱导细胞凋亡,与MMC,ADM及5-FU联合,H22的凋亡百分数分别为28.1%(P<0.01),22.5%(P<0.01)及47%(P>0.05)。体内,MMC+pTRAIL+pES+pCH510联合能有效抑制肝细胞肿瘤生长,肿瘤生成率为37.5%。结论:MMC或ADM作用后的残存H22肿瘤细胞对pTRAIL敏感,MMC+pTRAIL+pES+pCH510具有协同抑瘤效应,能将小鼠肝细胞肿瘤抑制在组织学水平。

磁共振功能成像在肝细胞肿瘤中的应用进展

磁共振（M R）常规T1WI、T2WI序列联合3期增强对大部分肝肿瘤诊断已有较高敏感性，但对于部分小于2 mm小肝肿瘤敏感性和特异性较低，肝脏其他局灶性病变会对小肝肿瘤病灶检出造成干扰。磁共振功能成像（fMRI）可通过不同成像技术对病灶水分子运动、微循环、化合物成分及能量代谢、含氧量进行定量分析；fM RI和肝脏特异性对比剂的运用会提高肝肿瘤诊断的敏感性，并在预后及指导临床治疗上有巨大应用前景。

大黄鱼肝细胞肿瘤相关抗原-127基因克隆及分子特征分析

在构建大黄鱼肌肉组织cDNA文库的基础上,克隆了肝细胞肿瘤相关抗原-127基因。克隆到的基因全长1 439bp,其中5'-UTR 124 bp,3'-UTR 640 bp,编码序列675 bp,编码224个氨基酸。生物信息学分析显示,大黄鱼HCA127基因存在多个功能位点,即N端糖基化位点、蛋白激酶C磷酸化位点、酪蛋白激酶Ⅱ磷酸化位点和亮氨酸拉链结构位点。大黄鱼HCA127氨基酸序列具有较高的保守性,与斑马鱼、胡瓜鱼、大西洋鲑等多种鱼类的相似性在80%以上。在检测的9种组织中,肝细胞肿瘤相关抗原-127基因在肝、肾、肠、鳃、眼、脑组织中表达,其中在脑组织中表达最强,肝和鳃组织中次之,肾和眼组织中表达较微弱。

利用共表达网络分析寻找肝细胞肿瘤术后复发分子标记物

目的 结合肝细胞肿瘤（hepatocellular carcinoma,HCC）患者的表达谱数据和基因共表达网络分析,寻找HCC术后复发相关的分子标记物.方法 筛选35/41例术后复发/未复发患者的表达谱数据的差异表达基因,然后建立基因共表达网络;利用MCODE软件寻找网络中基因共表达模块以及核心基因;最后,利用三种交叉验证方法[留一交叉验证（LOOCV）、十折交叉验证（10 fold CV）以及蒙特卡罗交叉验证（MCCV）]证明核心基因的分类能力.结果 差异表达基因筛选得到316个差异基因,共表达网络分析得到了包括84个基因的网络,MCODE软件分析得到两个基因模块及其核心基因：RACGAP1和ETS2.三种交叉验证实验发现,这两个基因对HCC样本的分类结果,LOOCV：87％（86％ ～ 89％）、10 fold CV：88％（87％ ～89％）,MCCV：85％（85％ ～86％）.结论 以上结果提示,RACGAP1和ETS2基因可作为HCC术后复发的分子标记物.

肝细胞癌肝切除术后肺部转移研究进展

肝切除术是原发性肝细胞癌(hepatocellular carcinoma, HCC)的主要治愈性治疗手段,但术后肿瘤复发及转移率较高。HCC行肝切除术后发生的肝外转移以肺部转移(pulmonary metastasis, PM)最为常见。近年来对于HCC肝切除术后PM的研究仍在不断深入,微血管侵犯及肿瘤直径等因素被认为是影响HCC肝切除术后PM的风险因素,手术可能是治疗肝切除术后PM的有效手段。本文对HCC肝切除术后PM的风险因素及治疗方法的研究进展作相关综述。

IL-4诱导M2型巨噬细胞极化在慢性肝病中的研究进展

肝脏在血容量调节、营养素代谢、免疫系统和生长信号通路的调控等生理过程中起关键作用,多种因素导致肝脏功能异常,形成急性肝损伤(ALI)、病毒性肝炎、酒精性肝病(ALD)、代谢相关脂肪性肝病、肝纤维化(LF)、肝细胞癌(HCC)等疾病。我国是肝病发生率较高的国家,肝癌在我国的死亡率占第2位,我国肝癌的普遍发展模式为乙型肝炎-肝硬化-肝癌[1-4]。肝癌在早期不易发现,但可以通过早期对慢性肝病治疗,延缓或控制肝癌发展进程,提高患者生存率。巨噬细胞是一种髓系免疫细胞,在机体组织中占据重要位置,它们摄取和降解死亡细胞、碎片和异物,并参与协调炎症发生的过程[5]。巨噬细胞在不同的微环境刺激下可极化为M1型和M2型。M1型巨噬细胞通过分泌促炎因子,推进炎症反应;M2型巨噬细胞通过分泌抗炎因子,参与炎症消退和组织修复。白细胞介素-4(IL-4)的表达在巨噬细胞分化过程中起到了重要作用。本文通过探讨IL-4调节巨噬细胞极化在肝脏疾病中作用,为巨噬细胞分化治疗肝脏疾病提供方向和科学依据。

肝动脉栓塞联合依维莫司治疗复发性肝血管周上皮样细胞肿瘤1例并文献复习

血管周上皮样细胞肿瘤(perivascular epithelioid cell tumor,PEComa)是一类间叶源性肿瘤,肿瘤细胞常在血管壁周围呈放射状排列,好发于肾脏,少数发生于肝脏。PEComa为交界性肿瘤,少数PEComa组织学表现为良性但生物学行为具有恶性潜能,恶性PEComa则更为罕见。现介绍复发性恶性肝脏PEComa病例报道1例。本研究符合伦理委员会所制定的伦理学标准,受试对象及其监护人均已知情同意。

ADC定量对鉴别肝血管周上皮样肿瘤与肝细胞癌的价值

目的探讨通过ADC值区分肝血管周上皮样细胞肿瘤(PEComa)与肝细胞癌(HCC)的可能性。方法收集2015年1月~2022年12月经手术病理证实的17例肝PEComa临床及MRI资料,其中男6例,女11例,年龄29~69岁(中位年龄39岁)。另外匹配同期经手术病理证实的HCC病例45例,分为2组,HCC-A组19例(无乙肝病史、肝硬化、转移和/或癌栓,血清甲胎蛋白阴性),HCC-B组26例(有乙肝病史,轻度肝硬化,无转移和/或癌栓,血清甲胎蛋白阴性)。所有患者均有完整3.0 T磁共振平扫加普美显(钆塞酸二钠)增强及DWI资料,DWI扫描采用4个b值(0、50、400、800 s/mm^(2)),ADC图自动产生。回顾性分析三组病例的临床资料、磁共振平扫及增强特点、肝胆特异期对比剂的摄取及肿瘤定量ADC值。结果肝PEComa组增强模式表现为“快进快出”的比例为94.1%(16/17),与HCC-A组(84.2%,16/19)、HCC-B组(92.3%,24/26)相比差异无统计学意义(P>0.05);肝胆特异期无对比剂摄取的比率三组依次为82.4%(14/17)、73.7%(14/19)、46.2%(12/26),两两相较差异无统计学意义(P>0.05)。DWI上肿瘤最受限区域ADC定量分析,三组ADC值依次为(791.9±298.8)×10^(-3) mm^(2)/s、(576.39±154.61)×10^(-3) mm^(2)/s、(560.71±166.01)×10^(-3) mm^(2)/s,肝PEComa组与任一HCC组均存在显著性统计学差异(P<0.05),ADC值鉴别诊断肝PEComa和HCC的诊断界值为785.75×10^(-3) mm^(2)/s[(608~968)×10^(-3) mm^(2)/s],诊断敏感度76.5%和特异度为95.0%。结论磁共振成像ADC定量可单独用于鉴别肝PEComa与HCC,具有较高的诊断效能,有助于简化检查方案。

层粘蛋白及其受体、增殖细胞核抗原与肝细胞癌肿瘤生物学特性的关系

目的：探讨层粘蛋白（ＬＮ）、层粘蛋白受体（ＬＮ－Ｒ）及增殖细胞核抗原（ＰＣＮＡ）与原发性肝细胞癌（ＨＣＣ）恶性程度的关系。方法：采用ＳＡＢＣ法分别检测４２例肝细胞癌及癌旁组织中ＬＮ、ＬＮ－Ｒ及ＰＣＮＡ的表达情况。结果：ＬＮ、ＬＮ－Ｒ及ＰＣＮＡ在肝细胞癌中的表达均显著高于癌旁组织（Ｐ＜０．０５），且与肝细胞癌Ｅｄｍｏｎｄｓｏｎ分级呈正相关；浸润型（ＩＨＣＣ）生长、有转移、肿瘤直径＞３ｃｍ者ＬＮ、ＬＮ－Ｒ及ＰＣＮＡ的表达高，而膨胀型（ＥＨＣＣ）生长、无转移、肿瘤直径≤３ｃｍ者多表达较低；在高增殖指数组ＬＮ、ＬＮ－Ｒ表达高于低增殖指数组（Ｐ＜０．０５）。结论：细胞内ＬＮ、ＬＮ－Ｒ及ＰＣＮＡ可作为评判肝细胞癌恶性程度及临床预后的良好指标。

儿童过渡型肝细胞肿瘤体外切除一例

1 临床资料 患儿男,13岁.因右上腹巨大包块1个月余于2010年7月18日入院.2010年6月27日,患儿家长偶然触及其右上腹一直径约15 c包块,无触痛,不伴腹痛、腹胀,无畏寒、发热,无潮热、盗汗,无头昏、头痛,无反酸、嗳气,无心慌、心累,无皮肤、巩膜黄染,无尿频、尿急、尿痛,无腹泻、便血、陶土便等.2010年7月12日,当地医院CT检查提示肝左叶巨大包块,AFP 742.7μg/L,ALT 54 U/L,AST 57 U/L,ALP 270 U/L,TBil 20.2 μmol/L,DBil 8.6μmol/L,IBil 11.6 μmol/L.诊断为肝母细胞瘤,未做其他处理.随后包块进行性增大,为进一步治疗入住我院.患儿精神、睡眠、饮食良好,大小便正常,体质量无明显下降.

原发性肝细胞肝癌伴肝外恶性肿瘤9例临床分析

探讨肝细胞癌（ＨＣＣ）伴肝外恶性肿瘤（Ｅｘｔｒａｈｅｐａｔｉｃ Ｍａｌｉｇｎａｎｔ Ｃａｒｃｉｎｏｍａ、ＥＨＭ）患者的临床特征。１９８６～１９９８年经手术切除病理证实的ＨＣＣ共１８１例，其中９例在ＨＣＣ诊断前后发现ＥＨＭ。结果：ＨＣＣ伴ＥＨＭ发生率５％（９／１８１），其中伴大肠癌４例、甲状腺癌２例、肾透明细胞癌、胰腺癌、肺癌各１例。ＥＨＭ组病例血清ＨＢｓＡｇ阳性率４４％（４／９）、ＡＦＰ＞２０ｎｇ／ｍｌ ３３％（３／９）、切除标本伴肝炎后肝硬化３３％（３／９）均明显低于同期单纯ＨＣＣ病例（Ｐ＜００２５—０００５），三者分别为８８％（１０３／１１７）、７６％（１１７／１５５）、７７％（１２４／１６１）。本组中除２例第二原发癌仅行活检术外，余病例经两次手术后均存活１年以上，最长已达７年以上。结论：ＨＣＣ伴ＥＨＭ病例在病因上可能与单纯ＨＣＣ不同；肿瘤预后取决于患者病期的早晚及治疗措施的彻底性，重复癌经根治手术预后并不劣于单纯ＨＣＣ。

ALBI和PALBI分级在乙肝相关性肝细胞癌病人预后评估中的价值

目的:探讨白蛋白-胆红素(ALBI)和血小板-白蛋白-胆红素(PALBI)分级在Child-Pugh A级肝细胞癌(HCC)病人预后评估中的价值。方法:行根治性手术的Child-Pugh A级乙肝相关性HCC病人134例,根据术前血清学检查结果计算ALBI和PALBI分级,采用Kaplan-Meier曲线和Cox回归分析评估病人总生存期(OS)和无复发生存期(RFS)。结果:经随访,病死37例,复发35例。Kaplan-Meier分析结果显示,ALBI、PALBI分级与OS和RFS均具有相关关系(P<0.05)。多因素分析显示,ALBI和PALBI分级均为病人独立的预后模型。不同评分系统间,PLABI+肿瘤直径、ALBI+肿瘤直径、ALBI+意大利肝癌小组评分(CLIP)较单独的CLIP、PLABI、ALBI、终末期肝癌模型评分、巴塞罗那分期在预后预测能力方面更具有意义。结论:ALBI和PALBI分级是评估Child-Pugh A级HCC病人预后有价值的模型,如结合肿瘤直径,PALBI较ALBI分级有更好的预后价值。

乙型肝炎病毒相关肝细胞癌关键基因筛选及其与预后关系的生物信息学分析

目的:采用生物信息学方法识别与乙型肝炎病毒相关肝细胞癌(HBV-HCC)的早期诊断和不良预后相关的关键基因,阐明HBV-HCC发生发展的潜在分子机制。方法:从基因表达综合数据库(GEO)中检索“hepatitis Binduced HCC”,下载基因数据集GSE121248,通过R软件中的“limma”数据包筛选差异表达基因(DEGs),采用“clusterProfiler”数据包对DEGs进行基因本体(GO)功能富集分析和京都基因与基因组百科全书(KEGG)信号通路富集分析,采用STRING数据库和Cytoscape软件建立蛋白-蛋白互作(PPI)网络并筛选关键基因。采用基因表达水平值的交互式分析(GEPIA)、Kaplan Meier-Plotter和人类蛋白质图谱(HPA)数据库验证关键基因及其蛋白质表达水平,采用“CIBERSORT”数据包分析免疫细胞的浸润情况。结果:共筛选出574个DEGs,其中上调基因173个,下调基因401个。GO功能富集分析,DEGs主要富集于小分子代谢、信号转导、免疫应答和炎症反应等生物学过程;KEGG通路富集分析,DEGs主要富集于视黄醇代谢、细胞色素P450对外源药物代谢通路和化学致癌作用等。筛选PPI网络中的细胞分裂周期20(CDC20)、细胞周期蛋白依赖性激酶1(CDK1)、细胞周期蛋白A2(CCNA2)、纺锤体检测点蛋白(BUB1B)、拓扑异构酶Ⅱα(TOP2A)、Discs大同源相关蛋白5(DLGAP5)、异常纺锤体样小头畸形相关蛋白(ASPM)、中心体蛋白55(CEP55)、驱动蛋白超家族11(KIF11)和驱动蛋白超家族20A(KIF20A)为HBV-HCC的关键基因。GEPIA数据库分析,上述10种关键基因在HCC患者中均呈高表达。Kaplan-Meier生存曲线分析,关键基因高表达的HCC患者总生存期短于低表达患者。结论:细胞周期与病毒致癌作用相关基因(CDC20、CDK1、CCNA2和BUB1B)与HBV-HCC患者的发生发展及不良预后有密切关联,可能成为诊断标志物和治疗新靶点。

CXC趋化因子配体10对肝细胞癌SMMC-7721细胞增殖和迁移的影响及其机制

目的:探讨外源性CXC趋化因子配体10 (CXCL10)对肝细胞癌(HCC) SMMC-7721细胞增殖和迁移的影响,并阐明其作用机制。方法:按照CXCL10作用浓度,将人HCC SMMC-7721细胞分为0 mg·L^(-1)CXCL10组、10 mg·L^(-1)CXCL10组和30 mg·L^(-1)CXCL10组。上述部分细胞给予细胞外调节蛋白激酶(ERK)抑制剂PD98059 (80μmol·L^(-1))后,将SMMC-7721细胞分为0 mg·L^(-1)CXCL10+PD98059组、 10mg·L^(-1)CXCL10+PD98059组和30mg·L^(-1)CXCL10+PD98059组。CCK-8法检测各组SMMC-7721细胞增殖率,EdU法检测各组SMMC-7721细胞中EdU阳性表达率,Transwell小室实验检测各组SMMC-7721细胞迁移率,Western blotting法检测各组SMMC-7721细胞中ERK、磷酸化ERK (p-ERK)和细胞周期蛋白D1 (Cyclin D1)蛋白表达水平。结果:CCK-8法检测,培养24h后,与0mg·L^(-1)CXCL10组比较,10mg·L^(-1)CXCL10和30mg·L^(-1)CXCL10组SMMC-7721细胞增殖率升高(P<0.05或P<0.01)。EdU法检测,与0mg·L^(-1)CXCL10组比较,10mg·L^(-1)CXCL10和30mg·L^(-1)CXCL10组SMMC-7721细胞中EdU阳性表达率升高(P<0.01);Transwell小室实验检测,培养48 h后,与0 mg·L^(-1)CXCL10组比较,10 mg·L^(-1)CXCL10和30 mg·L^(-1)CXCL10组SMMC-7721细胞迁移率升高(P<0.01)。Western blotting法检测,细胞培养24 h后,采用CXCL10溶液处理24h,与0mg·L^(-1)CXCL10组比较,10mg·L^(-1)CXCL10组和30 mg·L^(-1)CXCL10组SMMC-7721细胞中ERK、p-ERK及Cyclin D1蛋白表达水平升高(P<0.01)。CCK-8法检测,加入ERK抑制剂PD98059后,与0 mg·L^(-1)CXCL10组比较,10 mg·L^(-1)CXCL10+PD98059组和30 mg·L^(-1)CXCL10+PD98059组SMMC-7721细胞增殖率降低(P<0.05);与10 mg·L^(-1)CXCL10组比较,10 mg·L^(-1)CXCL10+PD98059组SMMC-7721细胞增殖率降低(P<0.05);与30 mg·L^(-1)CXCL10组比较,30 mg·L^(-1)CXCL10+PD98059组SMMC-7721细胞增殖率降低(P<0.05)。结论:CXCL10能够促进HCCSMMC-7721细胞增殖和迁移,其作用机制与上调ERK/p-ERK/Cyclin D1通路蛋白表达有关。

PLGA纳米载体介导的端粒酶反义核酸体外转染率及对肝肿瘤细胞的影响

目的通过以PLGA纳米粒作为端粒酶hTERT反义核酸的载体,促进反义核酸对肝肿瘤细胞的抑制作用。方法用绿色荧光蛋白报道基因pEGFP-N1表达质粒DNA转染细胞;观测不同转染方法的转染率,TRAP-ELISA法检测端粒酶活性;噻唑蓝(MTT)法测定端粒酶反义核酸对肝肿瘤细胞HepG2的抑制;过氧化物酶的抗荧光素抗体法检测肿瘤细胞凋亡指数。结果裸DNA和磷酸钙的转染效率均不高,分别为18%和24%;脂质体的转染效率为42%,纳米粒的转染效率最高,达61%;以脂质体或PLGA纳米粒为载体介导端粒酶反义核酸处理的肿瘤细胞,其端粒酶活性和生长与空白对照相比明显下降(P<0.05),两种载体之间的差异也非常显著(P<0.05);处理72h后,纳米粒介导组的肿瘤细胞凋亡率显著高于脂质体介导组,分别为23.1%和16.4%。结论PLGA纳米粒是一种非常有前途的非病毒基因治疗载体。

氯化饮水中有机提取物对大鼠和人肝肿瘤细胞(HepG2)的遗传毒性及脂质过氧化作用

The genotoxic effects of chlorinated drinking water(CDW) extracts were examined in human HepG2 hepatoma cells, liver cells and polychromatic erythrocytes (PCEs) of bone marrow of Wistar rats by using in vivo and in vitro micronucleus(MN) test and single cell gel electrophoresis(comet assay). The influence of CDW on the lipidperoxidation (LPO) in blood and tissue of rats was also studied. The results indicated a significant increase of the frequencies of MN in PCEs at the low concentration of CDW and in HepG2 at the high concentration of CDW. The increased DNA breakage caused by CDW was observed in rat liver cells and in HepG2 cells by using comet assay. The levels of malon dialdehyde(MDA) were significantly increased almost in all animals and in all organs tested. A dose dependent increases of MDA were observed in rat liver. It was demonstrated that CDW extracts caused genotoxic and oxidative damage on animals.