酵母双杂交技术筛选Hcbp6结合的肝细胞蛋白编码基因

目的:Hcbp6是与核心蛋白相结合的未知功能蛋白基因,为了初步提示他的生物学功能和在细胞中的存在形式,采用酵母双杂交体系寻找与他相互作用的肝细胞蛋白,探讨Hcbp6的生物功能。方法:应用酵母双杂交系统3,构建Hcbp6诱饵质粒并转化酵母AH109,与含人肝细胞cDNA文库质粒的酵母Y187进行配合,在涂有x-α-gal营养缺陷型培养基(SD/Trp-Leu-His-Ade)上筛选生长。挑选蓝色克隆,提取此酵母克隆的质粒,转化大肠杆菌提取质粒DNA后进行测序,然后进行生物信息学分析。结果:筛选出4种与Hcbp6特异性相互作用的蛋白,包括Paralemmin(PALM)、Ran结合蛋白2(Ranbp2)、跨膜运输蛋白21(Tmp21)和血清白蛋白。结论:推测该蛋白可能为一分泌性蛋白,或与分泌蛋白的形成有关,进一步的生物学功能的研究需要更多的实验加以探讨。

基于SEER数据库建立和验证甲胎蛋白阴性肝细胞癌患者癌症特异生存期的列线图

目的:探讨甲胎蛋白(AFP)阴性肝细胞癌(HCC)患者预后相关因素,构建列线图以预测患者生存时间。方法:回顾性分析监测、流行病学和最终结果(SEER)数据库提取的2064例AFP阴性HCC患者数据,将所有患者按7∶3比例随机分为训练集和内部验证集,以湖南省中西医结合医院101例AFP阴性HCC患者作为外部验证集。将单因素Cox回归分析结果纳入多因素分析,采用多因素Cox分析获得AFP阴性HCC患者的独立危险因素,构建AFP阴性HCC患者癌症特异生存(CSS)预后列线图。采用时间依赖受试者工作特征曲线(ROC)、校准图和决策曲线分析(DCA)评估列线图的预测效能和临床实用性。将列线图所得总分进行风险分层,比较列线图和美国癌症联合委员会(AJCC)分期系统的风险区分程度。结果:采用多因素Cox回归分析筛选出10个独立危险因素,构建AFP阴性HCC患者3、4和5年CSS预后列线图,包括患者年龄、病理分级、手术情况、放疗情况、化疗情况、肺转移情况、肿瘤大小、肿瘤T分期、肿瘤M分期和婚姻状况。3、4和5年时间依赖ROC曲线下面积(AUC),训练集分别为0.807(95%CI:0.786~0.828)、0.804(95%CI:0.782~0.826)和0.813(95%CI:0.790~0.835),内部验证集分别为0.776(95%CI:0.743~0.810)、0.772(95%CI:0.737~0.808)和0.789(95%CI:0.752~0.826),外部验证集分别为0.773(95%CI:0.677~0.868)、0.746(95%CI:0.620~0.872)和0.736(95%CI:0.577~0.895)。校准图验证列线图能够很好地拟合到完美曲线上。DCA曲线显示列线图在某特定概率阈值上的净收益明显高于AJCC分期在某特定概率时净收益。与AJCC分期比较,列线图具有较好的识别高风险人群的能力。结论:血清中AFP表达是HCC患者的预后指标之一,对于部分血清中AFP阴性表达的HCC患者应区别对待,基于多个风险因素建立的列线图模型有望成为临床评估AFP阴性HCC患者CSS的有效工具。

结直肠锯齿状腺瘤、传统腺瘤及结直肠癌中鼠类肉瘤滤过性病毒致癌基因同源体B1和促红素人肝细胞蛋白表达差异比较

结直肠癌是严重威胁人类健康的消化道恶性肿瘤之一，有研究表明缺乏对锯齿状病变的正确认识是结直肠癌发病率持续增加的原因之一。据报道，2007年仅10％～15％的结直肠癌来自锯齿状病变，但2011年 Snover提出35％的结直肠癌来自锯齿状病变。本研究检测鼠类肉瘤滤过性病毒致癌基因同源体 B1（v-Raf murine sarcoma viral oncogene homolog B1，BRAF）、促红素人肝细胞（erythropoietin-producing hepatoma cell line B2，EphB2）蛋白在锯齿状腺瘤（serrated adenomas，SA）、传统腺瘤、结直肠癌中的表达量，观察各蛋白的表达部位，并与传统腺瘤及结直肠癌比较，旨在加强对 SA 的认识，提高诊断的正确率。

胆绿素还原酶A rs699512和肝细胞溶质载体有机阴离子转运蛋白家族成员1B1 rs4149015位点基因多态性与新生儿不明原因高胆红素血症易感性相关性研究

目的:分析胆绿素还原酶A(BLVRA)rs699512和肝细胞溶质载体有机阴离子转运蛋白家族成员1B1(SLCO1B1)rs4149015位点基因多态性与新生儿不明原因高胆红素血症(HB)易感性的相关性。方法:选取不明原因HB新生儿90例为HB组,另选取同期健康新生儿90例为对照组。比较两组临床资料以及BLVRA rs699512、SLCO1B1 rs4149015位点基因型分布和等位基因频率。比较不同BLVRA rs699512、BLVRA rs699512基因型患儿血清胆红素水平。分析BLVRA rs699512、SLCO1B1 rs4149015位点基因多态性与HB易感性的关系。结果:HB组患儿总胆红素和结合胆红素水平明显高于对照组(均P<0.05)。两组BLVRA rs699512、SLCO1B1 rs4149015位点基因型分布比较差异有统计学意义(均P<0.05)。HB组患儿BLVRA rs699512位点GG基因型分布高于对照组,AA基因型分布低于对照组,G等位基因频率高于对照组(均P<0.05)。HB组患儿SLCO1B1 rs4149015位点AA基因型分布高于对照组,GG基因型分布低于对照组,A等位基因频率高于对照组(均P<0.05)。BLVRA rs699512中GG基因型总胆红素和结合胆红素水平高于AA基因型(均P<0.05)。SLCO1B1 rs4149015中AA基因型总胆红素和结合胆红素水平均高于GG基因型(均P<0.05)。BLVRA rs699512位点GG基因型与HB发生呈正相关,AA基因型与HB发生呈负相关(r=0.671、-0.608,均P<0.05)。SLCO1B1 rs4149015位点AA基因型与HB发生呈正相关,GG基因型与HB发生呈负相关(r=0.695、-0.633,均P<0.05)。结论:不明原因HB新生儿BLVRA rs699512位点GG基因型与SLCO1B1 rs4149015位点AA基因型会增加易感性,临床可建立早期防治体系以改善患儿预后。

丙型肝炎病毒核心蛋白结合蛋白6基因转染肝癌细胞的基因表达谱芯片分析

目的:筛选并克隆丙型肝炎病毒(HCV)核心蛋白的肝细胞结合蛋白基因,并对新基因转染肝癌细胞的基因表达谱进行分析,探索该基因表达对肝细胞基因表达的调节机制。方法:应用酵母双杂交技术,以HCV的核心蛋白作为“诱饵(bait)”,筛选鉴定与其结合的肝细胞中蛋白的编码基因。应用生物信息学(bioinformatics)技术,分析其中筛选得到的人HCV核心蛋白结合蛋白6(HCBP6)基因的全长编码序列,并构建HCBP6基因的真核表达载体pcDNA3.1(-)-HCBP6。应用基因表达谱芯片技术对重组表达质粒pcDNA3.1(-)-HCBP6转染的HepG2细胞和空载体处理的相同细胞差异表达的mRNA进行检测。结果:通过酵母双杂交技术的筛选和鉴定,结合生物信息学分析,确定人的HCBP6基因由456 nt组成,编码152 aa的蛋白。基因表达谱芯片所检测的1 152条目的基因均为GenBank中登录的基因,HCBP6表达质粒转染的细胞有20条差异表达基因,其中13条基因表达增强,7条基因表达降低。这些差异表达的基因与细胞信号转导、增生、分化及生长调节密切相关。结论:酵母双杂交技术结合生物信息学技术,是克隆蛋白结合蛋白的有效方法,基因表达谱芯片技术对于初步全面探索新基因的功能提供重要的资料。本实验结果为进一步阐明HCV核心蛋白与Hcbp6相互作用后的肝细胞生物大分子变化提供了理论依据。

乙型肝炎病毒e抗原肝细胞结合蛋白新基因E-36基因表达谱芯片分析

目的:为了研究未知功能的HBeAg结合蛋白E-36的生物学功能,我们应用基因芯片技术对于pcDNA3.1(-)和pcDNA3.1 (-)-E-36分别转染的HepG2细胞的基因表达谱进行分析, 筛选能被E-36反式调节的靶基因. 方法:应用反转录聚合酶链反应(RT-PCR)技术从HepG2细胞中扩增E-36蛋白编码基因片段,以常规的分子生物学技术构建表达载体pcDNA3.1(-)-E-36.以脂质体技术转染肝母细胞瘤细胞系HepG2,提取总mRNA,逆转录为cDNA,与转染空白表达载体pcDNA3.1(-)的HepG2细胞进行DNA芯片分析并比较. 结果:构建的表达载体经过限制性内切酶分析和DNA序列测定鉴定正确.提取转染细胞的总mRNA并进行逆转录成为cDNA,进行DNA芯片技术分析.在1 159个基因表达谱的筛选中,发现有20个基因表达水平显著上调,包括甲状旁腺激素应答的骨肉瘤B1蛋白、SLIT2、核因子κB、白介素受体3、白介素6、血管紧张素Ⅰ转换酶、急性髓细胞性白血病1b、caspase 2、低密度脂蛋白1、T细胞受体重组β链、肿瘤坏死因子受体、肿瘤抑制亚转化因子、细胞周期相关激酶-2、亲代谢性谷氨酸盐受体-7、唾液酸转移酶-8及5个未知蛋白;真核细胞翻译延伸因子2基因的表达水平显著下调. 结论:E-36基因的表达对于肝细胞基因表达谱有显著影响DNA芯片技术是分析反式激活靶基因的有效技术途径.

调肝导浊汤对实验性动脉粥样硬化家兔肝脏脂质含量及体外培养肝细胞脂蛋白受体的影响

目的 :观察中药调肝导浊汤对家兔实验性AS模型肝脏脂代谢及体外培养肝细胞膜脂蛋白受体的影响 ,探讨中药防治AS的机制。方法 :高胆固醇饮食饲喂家兔 10W造成AS模型 ,给药 6W结束实验 ,取肝脏匀浆测定TC、TG变化。此外 ,体外培养大鼠肝细胞 ,原位杂交法计数膜LDL受体阳性表达。结果 :调肝导浊汤可有效降低肝组织脂质含量 ,中药可以显著增强肝细胞膜LDL受体mRNA表达。结论 :调肝导浊汤具有良好的保护肝脏、调整脂代谢的作用 ,从而防治AS。

重组人源肝星状细胞激活相关蛋白体外生物活性的研究

文章表达、纯化了重组人源肝星状细胞激活相关蛋白,研究了其抗氧化的生物活性和对次氮基三乙酸铁造成的大鼠肝星状细胞氧化应激的抑制作用。结果显示重组人源肝星状细胞激活相关蛋白具有抗氧化的生物活性,活性为(80.0±3.0)U/mg;可抑制次氮基三乙酸铁对肝星状细胞造成的氧化应激,具体表现为可以降低丙二醛、羟脯氨酸的含量,提高超氧化物歧化酶、谷胱甘肽过氧化物酶的活力,并且抑制肝星状细胞的增殖。重组人源肝星状细胞激活相关蛋白对肝星状细胞氧化应激的抑制作用具有剂量依赖关系,浓度大于或等于10μg/mg,即有明显的作用。

12周跑台训练对非酒精性脂肪肝小鼠肝脏肝细胞癌下调的线粒体转运蛋白表达的改变及其对线粒体功能的影响

目的:研究12周跑台训练后非酒精性脂肪肝(NAFLD)小鼠肝脏肝细胞癌下调的线粒体转运蛋白(HDMCP)的变化及其对肝脏线粒体功能的影响。方法:雄性8周龄ApoE-/-小鼠48只,随机分为4组,对照组(C,n=12),14周西方膳食组(模型组,M,n=12),继续西方膳食+12周跑台运动组(ME,n=12);西方膳食26周组(MM,n=12)。跑台训练12周,坡度为0°,跑速13m/min,60min/次,每周5次。测定肝脏HDMCPmRNA的表达,线粒体活性氧及H2O2生成,线粒体ATP合成活力,肝脏ATP含量,线粒体态3呼吸、态4呼吸及呼吸控制比(RCR)。结果:耐力训练组(0.53±0.09)肝脏HDMCPmRNA表达显著低于C组(0.72±0.10)、M组(1.24±0.16)、MM组(1.32±0.17);耐力训练组肝脏线粒体ATP合成活力(11.23±2.53)及肝脏组织ATP含量(10.57±2.12)均显著高于MM组(7.36±1.22,8.32±1.41);耐力训练组肝脏线粒体ROS(42.51±4.12)及H2O2生成(18.33±3.10)均显著低于MM组(68.94±5.99,24.31±3.56);耐力训练组线粒体态3呼吸(12.21±1.32)与RCR(2.78±0.89)均显著高于MM组(10.76±1.11,1.75±0.69),而态4呼吸(4.40±1.32)显著低于MM组(6.14±1.45)。结论:12周跑台训练可以显著降低肝脏HDMCP表达,可能进而减少线粒体质子漏,增强线粒体ATP合成,改善线粒体功能。

肝细胞生成素——一种非经典分泌蛋白

肝细胞生成素(hepatopoietin ,HPO)是一种分泌蛋白.为了研究肝细胞生成素的分泌途径,利用SignalP软件分析了HPO的氨基酸序列,但HPO序列中没有经典分泌蛋白的信号肽.Western印迹实验证明,HPO能以双体形式从细胞中分泌出来.特异性体外阻断实验表明,布雷菲尔德菌素A(brefeldinA)和莫能菌素(monensin)都不能阻断HPO的分泌,说明HPO并不通过经典的内质网 高尔基体(ER -Golgi)途径分泌;优降糖(glyburide)对HPO的分泌没有抑制作用,说明HPO的分泌并不是由ABC1(ATP bindingcassette)转运子介导的;DNP和NH4Cl也不能刺激HPO的分泌,说明内体 溶酶体系统不参与HPO的分泌.上述结果表明,HPO是一种非经典分泌蛋白(non classicalsecretoryprotein) ,能以双体形式从细胞中分泌出来.但和已知的非经典分泌蛋白IL -1β不同,HPO的分泌并不是通过ABC1转运子介导的,内体 溶酶体系统也不参与其分泌.

纤维蛋白原/前白蛋白比值、γ-谷氨酰转肽酶/血小板比值在甲胎蛋白阴性肝细胞癌中的应用价值

目的评估纤维蛋白原/前白蛋白比值(FPR)、γ-谷氨酰转肽酶/血小板比值(GPR)在甲胎蛋白阴性肝细胞癌(AFP-N HCC)患者中的应用价值。方法 2018年3月至2020年3月AFP-N HCC患者(AFP-N HCC组)80例(男58例、女22例),年龄(50.2±9.8)岁。另选取同期健康体检患者(健康组)100例(男60例、女40例),平均年龄(49.8±6.2)岁。Logistic回归分析确定影响AFP-N HCC独立预测因素;ROC曲线确定诊断AFP-N HCC的截断点,计算诊断效能。结果 AFP-N HCC组、健康组PLT、Hb、FIB、PA、ALT、AST、TBil、γ-GT、FPR及GPR具有显著性差异(P<0.05)。以患者是否存在AFP-N HCC为分类标准,将PLT、Hb、FIB、PA、ALT、AST、TBil、γ-GT、FPR及GPR纳入多因素Logistic回归分析。结果显示,ALT、FPR、GPR是评估是否存在AFP-N HCC的独立影响因素(P<0.05)。FPR诊断AFP-N HCC时AUC及95%CI、截断点、敏感度及特异度分别为0.94(0.90~0.96)、11.60、86.5%及88.4%;GPR诊断AFP-N HCC时AUC及95%CI、截断点、敏感度及特异度分别为0.89(0.85~0.92)、0.21、68.4%及94.8%;FPR联合GPR诊断AFPN HCC时AUC及95%CI、敏感度及特异度分别为0.97(0.95~0.99)、91.0%及96.2%。结论 FPR、GPR可作为AFPN HCC诊断的生物学指标,两者联合诊断时效能优异。

重组人肝星状细胞激活相关蛋白抗大鼠肝纤维化的作用

为了观察重组人肝星状细胞激活相关蛋白(rhSTAP)对四氯化碳(CCl4)致肝纤维化大鼠肝功能及病理形态学的影响。建立大鼠CCl4肝纤维化模型,从早期干预组自造模开始起注射给药,持续12周,治疗组自造模6周后开始给药,维持6周,造模周期结束后测定大鼠血清中谷丙氨转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)、透明质酸(HA)的含量及肝组织中羟脯氨酸(Hyp)含量并对肝组织进行病理组织学检查。结果显示重组人源肝星状细胞激活相关蛋白能显著降低大鼠血清中ALT、AST、HA及肝组织中羟脯氨酸含量的升高,明显改善大鼠肝组织病理变化。因此重组人源肝星状细胞激活相关蛋白能有效干预CCl4诱导的大鼠肝纤维化,值得深入研究。

促红细胞生成肝细胞激酶及其受体相互作用蛋白双向传导信号在骨稳态中的作用

破骨细胞介导的骨吸收活动与成骨细胞介导的成骨活动是一个重要且复杂的生命过程,其中常伴有多种偶联及信号传导,以维持骨稳态。目前,越来越多的学者关注促红细胞生成肝细胞激酶(Eph)与促红细胞生成肝细胞激酶受体相互作用蛋白(ehprin)介导的双向信号传导在骨稳态中的作用。本文就Eph-ephrin家族,Eph-ephrin家族在骨稳态中的作用等研究进展作一综述。

溶酶体相关膜蛋白3过表达促进肝细胞脂质沉积

目的探讨溶酶体相关膜蛋白3(lysosome associated membrane protein 3,LAMP3)对肝细胞脂质代谢的作用。方法以肝癌细胞系Huh7为研究对象,利用qRT-PCR及Western blot法检测游离脂肪酸(free fatty acids,FFAs)0.4 mmol/L处理后肝细胞LAMP3表达变化;过表达LAMP3后,分别使用油红染色及甘油三酯检测试剂盒检测肝细胞内脂滴及甘油三酯沉积情况;采用ATP及β-羟基丁酸检测试剂盒检测细胞内ATP及β-羟基丁酸含量变化;过表达LAMP3,使用qRT-PCR、Western blot法检测脂质合成相关基因PPARγ与SCD-1及脂质分解相关基因CPT1A与PGC-1α表达变化。结果 FFAs处理后肝细胞Huh7中LAMP3表达显著上调(P<0.05);过表达LAMP3可显著促进肝细胞内脂滴和甘油三酯的沉积(P<0.05);过表达LAMP3对肝细胞内ATP及β-羟基丁酸含量的影响差异无统计学意义(P>0.05);过表达LAMP3可促进PPARγ及SCD-1表达(P<0.05),但对CPT1A、PGC-1α表达的影响差异无统计学意义(P>0.05)。结论 LAMP3可通过调控脂肪合成促进肝细胞内脂质沉积。

甲胎蛋白阴性肝癌患者血清外泌体circ RNA100338和CRNDE表达水平及预后预测价值研究

目的 研究甲胎蛋白阴性肝细胞癌(AFP-NHCC)患者血清外泌体环状RNA(circ RNA)100338,长链非编码RNA结直肠肿瘤差别表达(colorectal neoplasia differentially expressed,CRNDE)基因表达及临床预后价值。方法 选取自2018年1月~2019年7月期间联勤保障部队第九四二医院诊治的AFP-NHCC患者98例为研究对象,以同期健康体检的70例健康人作为对照组。实时荧光定量PCR检测血清外泌体circ RNA 100338和CRNDE水平。比较不同临床病理特征AFP-NHCC患者血清外泌体circ RNA 100338和CRNDE水平。受试者工作特征曲线(ROC)分析外泌体circ RNA 100338,CRNDE评估BCLC分期B~C期、低分化程度及肝内淋巴结转移的临界值。Kaplan-Meier生存分析(Log-Rank检验)分析血清外泌体circ RNA 100338,CRNDE对AFP-NHCC患者生存预后的影响。单因素及多因素COX回归分析影响AFP-NHCC患者预后的因素。结果 AFP-NHCC组患者血清外泌体circ RNA100338(2.78±0.67),CRNDE的相对表达量(3.05±0.70)高于对照组(0.92±0.31,1.06±0.29),差异具有统计学意义(t=21.619,22.435,均P <0.05)。AFP-NHCC组患者血清外泌体circ RNA100338与CRNDE表达呈显著正相关性(r=0.657,P <0.05)。BCLC分期B~C期(3.43±0.69,3.71±0.75)、低分化程度(3.64±0.73,4.27±0.74)及并发肝内淋巴结转移(3.96±0.79,4.39±0.76)AFP-NHCC患者血清外泌体circ RNA100338,CRNDE表达分别高于BCLC分期0~A期(1.87±0.60,2.13±0.61)、高中分化程度(2.02±0.64,1.97±0.61)及无肝内淋巴结转移(2.03±0.60,2.20±0.65)患者,差异均有统计学意义(t=11.648,11.707,13.699;11.100,16.857,15.211,均P <0.05)。外泌体circ RNA100338评估BCLC分期B~C期、低分化程度及肝内淋巴结转移的临界值分别为3.51,3.69和4.06,外泌体CRNDE评估BCLC分期B~C期、低分化程度及肝内淋巴结转移的临界值分别为3.79,4.31和4.45。circ RNA100338高表达组和低表达组患者三年总体生存率分别为52.08%(25/48)和86.00%(43/50)。circ RNA 100338高表达组患者累积生存率低于低表达组患者,差异有统计学意义(Log-Rankχ2=12.490, P <0.05)。CRNDE高表达组和低表达组患者三年总体生存率分别为51.06%(24/47)和86.27%(44/51)。CRNDE高表达组患者累积生存率低于低表达组患者,差异有统计学意义(Log-Rankχ2=15.050, P <0.05)。肿瘤BCLC分期B~C(OR=1.405,P <0.05)、低分化程度(OR=1.921,P <0.05)、有肝内淋巴结转移(OR=1.508,P <0.05),circ RNA100338高表达(OR=1.906,P <0.05)及CRNDE高表达(OR=1.733,P <0.05)是影响AFP-NHCC患者预后的独立危险因素。结论 AFP-NHCC患者血清外泌体circ RNA 100338,CRNDE表达升高,两者表达与肿瘤BCLC分期、病理分化程度及肝内淋巴结转移有关,是影响AFPNHCC患者生存预后的独立危险因素。

血清外泌体LncRNA 00853、LncRNA FAM72D-3在AFP阴性肝细胞癌患者中的表达及临床预后价值

目的探讨血清外泌体长链非编码RNA(LncRNA)00853、LncRNA FAM72D-3在甲胎蛋白(AFP)阴性肝细胞癌(AFP-NHCC)患者中的表达及临床预后意义。方法选取2018年12月至2019年6月该院诊治的AFP-NHCC患者102例为AFP-NHCC组,以同期于该院行健康体检的体检健康者80例为对照组。实时荧光定量PCR检测血清外泌体LncRNA 00853、LncRNA FAM72D-3水平;比较两组血清外泌体LncRNA 00853、LncRNA FAM72D-3水平,分析血清外泌体LncRNA 00853、LncRNA FAM72D-3水平与临床病理特征的关系;采用Kaplan-Meier生存分析血清外泌体LncRNA 00853、LncRNA FAM72D-3对AFP-NHCC患者生存预后的影响;采用单因素及多因素Cox回归分析影响AFP-NHCC患者生存预后的因素。结果AFP-NHCC组血清外泌体LncRNA 00853、LncRNA FAM72D-3相对表达水平分别为3.12±0.86、2.95±0.78,明显高于对照组的1.22±0.36、1.16±0.28(t=17.546、19.552,P<0.05)。血清外泌体LncRNA 00853、LncRNA FAM72D-3与AFP-NHCC患者BCLC分期、病理分化程度及肝内淋巴结转移有关(P<0.05)。LncRNA 00853高表达组患者中位生存时间为29.31个月(95%CI 26.36~32.26)明显低于低表达组患者的32.41个月(95%CI 32.55~34.51),差异有统计学意义(Log-rankχ^(2)=4.844,P=0.028)。LncRNA FAM72D-3高表达组患者中位生存时间为30.43个月(95%CI 27.81~33.04),明显低于低表达组患者的32.61个月(95%CI 30.64~34.76),差异有统计学意义(Log-rankχ^(2)=4.576,P=0.032)。BCLC分期B~C期、病理低分化程度、伴有肝内淋巴结转移、LncRNA 00853高表达及LncRNA FAM72D-3高表达是影响AFP-NHCC患者生存预后的独立危险因素。结论AFP-NHCC患者血清外泌体LncRNA 00853、LncRNA FAM72D-3水平升高,是影响AFP-NHCC生存预后的独立危险因素。

自身免疫性肝炎大鼠外周血CD4^+细胞、肝细胞特异性脂蛋白抗体及Th细胞因子水平之间的相关性

目的:建立自身免疫性肝炎大鼠模型,分析其外周血CD4+细胞、肝细胞特异性脂蛋白抗体及Th细胞因子水平之间的相关性。方法:实验于2004-10/2006-10在南京军区肝病中心实验室完成。①实验动物:雄性3月龄Wistar大鼠80只,随机数字表法分为4组:正常对照组、模型对照组、褪黑素治疗组、猪促肝细胞生长素治疗组,20只/组。②实验方法:除正常对照组外,其余各组大鼠均给予弗氏完全佐剂+肝细胞特异性脂蛋白建立自身免疫性肝炎模型。褪黑素用含0.01%乙醇的生理盐水配制成1g/L的溶液,褪黑素治疗组腹腔注射2mg/kg;猪促肝细胞生长素用含0.01%乙醇的生理盐水配制成2g/L的溶液,猪促肝细胞生长素治疗组腹腔注射2mg/kg;正常对照组和模型对照组均腹腔注射含0.01%乙醇的生理盐水,1次/d,连续60d。③实验评估:检测各组大鼠外周血淋巴细胞亚群浓度、肝细胞特异性脂蛋白抗体水平及Th细胞因子的浓度,并分析三者之间的关系。结果:80只大鼠均进入结果分析。模型对照组CD4+细胞百分比、肝细胞特异性脂蛋白抗体水平、白细胞介素4,6水平均显著高于其余3组(P<0.01),白细胞介素2和干扰素γ水平均显著低于其余3组(P<0.01)。与正常对照组比较,褪黑素治疗组、猪促肝细胞生长素治疗组CD4+细胞百分比无明显变化(P>0.05),肝细胞特异性脂蛋白抗体水平显著升高(P<0.001)。与猪促肝细胞生长素治疗组比较,正常对照组、褪黑素治疗组白细胞介素2和干扰素γ水平显著升高(P<0.01),白细胞介素4,6水平均显著降低(P<0.01)。结论:①CD4+细胞百分比与肝细胞特异性脂蛋白抗体水平有关,当CD4+细胞百分比达到正常水平时肝细胞特异性脂蛋白抗体表达虽受到明显抑制却并未停止表达。②褪黑素调节Th细胞因子水平的作用强于猪促肝细胞生长素。③Th细胞因子水平变化与肝细胞特异性脂蛋白抗体水平有一定关系。

家蚕BmLHep_59蛋白的表达和亚细胞定位

肝细胞癌相关抗原-59(hepatocellular carcinoma-associated antigen59,Hep_59)属于哺乳动物中一类含有约100个氨基酸残基的保守结构域家族,这类蛋白主要存在于真核生物细胞中,大多为假想蛋白。从家蚕蛹cDNA文库中筛选的一个新基因,其编码蛋白含有一个和Hep_59高度同源的保守结构域,将其命名为BmLHep_59(GenBank登录号:DN985181)。PCR扩增该基因的ORF,经EcoRⅠ/XhoⅠ双酶切重组到原核表达载体pET-28a(+),并转入E.coli Rosetta(DE3)感受态细胞中表达。通过镍柱亲和层析得到纯化的重组蛋白BmLHep_59,并以此纯化重组蛋白作为抗原免疫新西兰大白兔制备多克隆抗体,经ELISA检测抗血清效价可达1∶12 000以上。用Western blotting检测到家蚕5龄幼虫的表皮、丝腺和血淋巴中均有BmLHep_59表达,其中在血淋巴的表达量较高,暗示该蛋白可能参与调控家蚕的造血机能。该蛋白在蛹期中也有表达。亚细胞定位显示BmLHep_59在家蚕Bm5细胞的细胞质和细胞核中均有分布。