解整合素-金属蛋白酶10及肝细胞配体B2在乙肝-肝纤维化-肝癌患者中的表达

目的探讨解整合素-金属蛋白酶10(ADAM10)、肝细胞配体B2(Ephrin-B2)在“肝炎-肝纤维化-肝癌”轴中的表达以及二者与肝纤维化之间的相关性。方法选取400例HBV感染患者为研究对象,以病情的严重程度分为肝纤维化组(200例)、肝细胞癌组(200例),将肝纤维化组进一步分为以下4个亚组:乙型肝炎组(56例)、轻度纤维化组(87例)、中度纤维化组(34例)、肝硬化组(23例),另外选取200例健康体检患者为健康对照组,对比组间血清ADAM10、Ephrin-B2、肝功能指标、肝纤维化指标;免疫组化检测健康肝组织、乙肝不同分级肝纤维化肝组织、肝癌组织间ADAM10与Ephrin-B2表达。采用t检验进行单因素分析,二元logistic进行多因素分析,皮尔逊相关性检测相关性,受试者工作特征(ROC)曲线进行诊断价值分析。结果ADAM10、Ephrin-B2、天冬氨酸氨基转移酶(AST)、丙氨酸氨基转移酶(ALT)、凝血酶原时间(PT)、白蛋白(ALB)、层粘连蛋白(LN)、Ⅳ型胶原(Ⅳ-C)、透明质酸(HA)、Ⅲ型前胶原(PC-Ⅲ)水平在乙型肝炎组、轻度肝纤维化组、中度肝纤维化组、肝硬化、肝细胞癌组依次升高,且均显著高于健康对照组(P<0.05),免疫组化检测显示ADAM10、Ephrin-B2二者阳性表达在乙肝肝纤维化组织与肝癌组织中显著高于健康肝组织,且随着乙肝肝纤维化的进展Ephrin-B2、ADAM10表达显著升高。ADAM10高表达组和Ephrin-B2高表达组AST、ALT、PT、ALB、LN、Ⅳ-C、HA、PC-Ⅲ显著高于ADAM10低表达组和Ephri-B2低表达组(P<0.05)。患者血清ADAM10与Ephrin-B2呈显著正相关(P<0.05),ADAM10、Ephrin-B与血清AST、ALT、PT、ALB、LN、Ⅳ-C、HA、PC-Ⅲ以及肝纤维化分期呈显著正相关(P<0.05)。ADAM10、Ephrin-B2、AST、ALT、PT、ALB、LN、Ⅳ-C、HA、PC-Ⅲ为HBV感染患者患“肝炎-肝纤维化-肝癌”轴进展的影响因素。ADAM10诊断肝纤维化、肝细胞癌曲线下面积(AUC)分别为0.680、0.713,敏感度为0.821、0.794,特异度为0.577、0.639;Ephrin-B2诊断肝纤维化、肝细胞癌AUC为0.663、0.730,敏感度为0.757、0.834,特异度为0.651、0.693。结论ADAM10、Ephrin-B2与“肝炎-肝纤维化-肝癌”轴进展呈递增表达关系,ADAM10、Ephrin-B2可能在HBV感染患者肝纤维化和肝细胞癌发生和发展进程中发挥了重要作用,ADAM10、Ephrin-B2有希望成为“肝炎-肝纤维化-肝癌”轴疾病诊断和病情监测的重要血清标记物。

低氧环境下EphrinB2/EphB4调控MC3T3⁃E1细胞成骨分化的实验研究

目的探讨低氧环境下促红细胞生成素肝细胞激酶受体配体B2/促红细胞生成素肝细胞激酶受体B4(erythropoietin producing hepatocyte kinase receptor ligand B2/erythropoietin producing hepatocyte kinase receptor B4,EphrinB2/EphB4)对MC3T3-E1细胞成骨分化的影响,为低氧调控成骨细胞分化提供实验依据。方法设置对照组与氯化钴诱导的低氧组,对MC3T3-E1细胞进行分组培养,应用qRT-PCR检测细胞成骨标志物碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)、runt相关转录因子2(runt related transcription factor 2,RUNX2)、I型胶原(collogen-1,COL I)、骨钙素(osteocalcin,OCN)的mRNA表达变化,ALP染色检测细胞成骨诱导7 d后ALP活性。同时通过qRT-PCR与Western blot检测两组MC3T3-E1细胞缺氧诱导因子-1α(hypoxia inducible factor-1α,HIF-1α)、EphrinB2、EphB4的mRNA和蛋白表达。然后增设氯化钴+EphB4磷酸化抑制剂组(加入EphB4磷酸化抑制剂NVP-BHG712)阻止EphrinB2与EphB4结合,通过qRT-PCR与Western blot检测三组成骨标志物ALP、RUNX2、COL I、OCN的mRNA与蛋白表达,ALP染色、茜素红染色检测细胞成骨诱导后ALP活性及矿化情况。结果与对照组相比,在氯化钴诱导的体外细胞低氧环境下,MC3T3-E1成骨标志物ALP、RUNX2、COL 1、OCN mRNA表达增加,ALP活性增强,矿化增强(P<0.05)。同时,在氯化钴诱导的低氧环境下,HIF-1α、EphrinB2、EphB4的mRNA和蛋白水平表达增加(P<0.05)。使用NVP-BHG712阻止EphrinB2和EphB4的结合后,细胞的成骨标志物表达下降,ALP活性及矿化能力降低(P<0.05)。结论低氧环境可通过EphrinB2/EphB4信号通路促进MC3T3-E1细胞的成骨分化,增加成骨标志物的表达及组织矿化。

过表达ephrinB2调控犬牙周膜干细胞的成骨能力

目的观察促红细胞生成素肝细胞激酶受体B4/促红细胞生成素肝细胞激酶受体配体B2(EphB4/ephrinB2)信号通路中过表达ephrinB2在比格犬来源的牙周膜干细胞(cPDLSCs)中成骨分化的能力。方法采用Beagle犬前磨牙及磨牙中分离PDLSCs,用EfnB2-GFP-Bsd载体和空载体(GFP-Bsd)转染细胞后进行成骨诱导分化,Western blot检测转染后ephrinB2蛋白表达水平,行CCK-8实验、茜素红S染色实验、碱性磷酸酶染色实验(ALP)、反转录聚合酶链反应(RT-PCR)分别检测EfnB2-cPDLSCs组、空载体对照组(Vector-cPDLSCs)的成骨分化效果。结果CCK-8显示:EfnB2-cPDLSCs组和Vector-cPDLSCs组在细胞增殖上没有差异。茜素红染色实验和ALP染色实验证实:EfnB2-cPDLSCs组较Vector-cPDLSCs显示更高的ALP活性和矿化能力。RT-PCR显示:EfnB2-cPDLSCs组成牙本质/成骨标志物的表达高于Vector-cPDLSCs组。结论通过过表达犬牙周膜细胞中的ephrinB2可提高其成骨分化的能力。

TNF-α对牙周膜成纤维细胞ephrinB2/EphB4表达量的影响

目的:检测不同浓度TNF-α对牙周膜成纤维细胞ephrinB2/EphB4表达量的影响。方法:收集因正畸需要拔除的健康牙齿,培养原代牙周膜成纤维细胞;用不同浓度TNF-α分别刺激24 h,48 h后检测牙周膜细胞ephrinB2/EphB4 mRNA及蛋白表达量。结果:24 h组ephrinB2与EphB4 mRNA浓度均降低,差异有统计学意义(P<0.05);48 h低浓度组对ephrinB2 mRNA表达量无影响,0.1μg/L使EphB4 mRNA表达量增加,高浓度组使ephrinB2/EphB4 mRNA表达量下降;24 h组,TNF-α浓度为0.1~1μg/L时,ephrinB2/EphB4蛋白表达量无明显变化,TNF-α浓度为10~1000μg/L时ephrinB2/EphB4蛋白表达量下降;48 h组,0.1μg/L TNF-α作用后使EphB4蛋白表达量上升,ephrinB2蛋白表达量无明显变化,1μg/L作用后,ephrinB2/EphB4蛋白表达量均无明显变化,10~1000μg/L刺激后ephrinB2/EphB4蛋白表达量均下降。结论:24 h时TNF-α使ephrinB2/EphB4 mRNA与蛋白表达量均降低,但在48 h时,低浓度作用下EphB4表达量上升,是否可以为低浓度炎症状态下骨改建的研究提供参考。