骨桥蛋白在大鼠肝缺血/再灌注损伤中的作用

目的研究大鼠肝缺血/再灌注损伤(HI/RI)过程中骨桥蛋白(OPN)的作用。方法将大鼠分为假手术组(sham)和缺血/再灌注(I/R)6、12和24 h组,每组6只。苏木精-伊红染色(HE染色)观察肝组织的形态学变化;比色法检测大鼠血浆中天门冬氨酸氨基转移酶(AST)、丙氨酸氨基转移酶(ALT)水平及肝组织中超氧化物歧化酶(SOD)活力和丙二醛(MDA)含量;RT-qPCR测定肝组织OPN mRNA表达;ELISA测定肝组织OPN含量。结果与sham组相比,HE染色提示I/R后肝细胞有明显的变性和坏死,以I/R 24 h组最为明显;血浆中AST和ALT水平增高,I/R 12 h时最显著(P<0.01);肝组织中MDA含量升高、SOD活力降低,I/R 24 h最显著(P<0.01);肝组织OPN mRNA表达量在I/R各组均有显著升高(P<0.01),OPN含量在I/R 24 h组显著增加(P<0.05)。结论OPN参与了大鼠HI/RI的发生,它可能是评价肝脏损伤的重要指标。

NOTCH1信号通路介导白藜芦醇抗肝缺血/再灌注所致大鼠心脏损伤保护作用的机制研究

目的:观察Notchl信号通路在肝缺血/再灌注损伤时对心脏损伤的保护作用并探讨其相关的机制。方法:36只健康雄性SD大鼠随机分为3组,假手术组(SC组)、肝缺血/再灌注组(HIR组)、白藜芦醇预处理组(Res处理组),每组12只。各组均与肝脏缺血40 min再灌注2 h(SC组旷置相等时间)后,记录左室血流动力学变化,测定血清肌酸激酶同工酶(CK-MB)、乳酸脱氢酶(LDH)、肿瘤坏死因子(TNF-α)和白细胞介素-6(IL-6)浓度,取心肌组织测定SOD活力及MDA含量,Western blot检测心肌组织反应Notch通路活化标志的NICD表达,以RT-PCR法从转录水平检测Notch1和TNF-α的表达水平。结果:与SC比较,HIR组左室收缩及舒张功能均显著降低(P<0.01),血清CK、LDH活力,TNF-α和Ⅱ-6浓度明显升高(P<0.01),心肌MDA含量明显升高而SOD活力明显降低(P<0.01),且Notch1表达下降,TNF-α表达增加;与I/R组相比,Res处理组左室舒缩功能明显升高,血清CK、LDH活力及TNF-α、IL-6浓度明显降低,同时心肌SOD活力明显升高而MDA含量明显降低,Notch1表达上升TNF-α表达降低。结论:白藜芦醇对肝缺血/再灌注大鼠心脏具有保护作用,其机制可能与Notch1信号通路的激活进而调节炎症反应及氧化应激有关。

黄芪甲苷对大鼠肝缺血/再灌注损伤的保护作用

[目的]研究黄芪甲苷对肝缺血/再灌注损伤的保护作用及其机制。[方法]将雄性SD大鼠36只,随机分为3组:假手术组(Sham组)、肝缺血/再灌注组(I/R组)、黄芪甲苷预处理组(AsIV组)。分光光度法测定大鼠血清谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)活性;苏木精-伊红(HE)染色观察肝组织形态学变化,蛋白印迹法(Western blot)检测心肌组织内Bax,Bcl-2蛋白表达。[结果]与假手术组比较,肝I/R组ALT、AST活性显著增高,Bax蛋白表达增加,Bcl-2蛋白表达降低,黄芪甲苷预处理可以降低肝缺血/再灌注损伤引起的ALT、AST活性增高,Bax蛋白表达增加,增加Bcl-2蛋白表达。[结论]黄芪甲苷预处理对肝缺血/再灌注损伤有一定的保护作用,其机制可能与黄芪甲苷抑制肝细胞凋亡有关。

大鼠肝缺血/再灌注损伤时心肌组织能量代谢的变化

目的:探讨大鼠肝缺血/再灌注损伤(ischemia/reperfusioninjury,I/RI)过程中心肌能量代谢的变化及其机制。方法:选健康雄性Wistar大鼠48只,建立肝脏缺血/再灌注动物模型,每组8只,共分6组。测肝组织LDH及心肌组织LDH、CPK、ATP酶活性。结果:在肝缺血/再灌注过程中,肝组织LDH在缺血组升高,与对照组比较差异有统计学意义(P<0.05);随着再灌注时间的延长,LDH活性逐渐降低,I/R2h组与I/R1h组、I/R4h组与I/R2h组比较差异均有统计学意义(P<0.05)。心肌组织LDH缺血组、I/R组与对照组比较差异无统计学意义(P>0.05),I/R1h组升高与I/R组比较差异有统计学意义(P<0.05),I/R4h组与I/R1h组比较差异有统计学意义(P<0.05)。心肌组织CPK在缺血组、I/R组、I/R1h组虽有波动,但无统计学意义(P>0.05);随着再灌注时间延长开始下降,I/R2h组与I/R1h组、I/R4h组与I/R2h组相比差异均有统计学意义(P<0.05)。心肌组织匀浆Na+-K+ATP酶和Ca2+ATP酶在I组、I/R组与对照组比较差异无统计学意义(P>0.05);I/R2h组降低,与I/R组比较差异有统计学意义(P<0.05);Na+K+ATP酶I/R4h组降低,与I/R1h组比较差异有统计学意义(P<0.05),与I/R2h组比较差异无统计学意义(P>0.05);而Ca2+ATP酶在I/R4h组降低,与I/R1h组、I/R2h组比较差异均有统计学意义(P<0.05)。

异丙酚对肝缺血/再灌注损伤时黄嘌呤氧化酶活性的影响

目的 探讨异丙酚对肝缺血 /再灌注损伤 (HIRI)时黄嘌呤氧化酶 (XO)活性的影响。方法 选择HIRI实验兔及肝癌手术患者 ,动态观察血浆XO活性的变化及异丙酚对它的影响。结果 HIRI期间 ,血浆及肝组织内XO活性明显增强(P<0 0 5和 P<0 0 1) ;使用异丙酚后 ,XO活性的异常变化显著减轻 ,其差异有显著性意义 (P <0 0 5和 P<0 0 1)。结论 异丙酚可有效地抑制HIRI时XO活性而减少氧自由基的形成。

肿瘤坏死因子在肝缺血/再灌注损伤中的作用及异丙酚的干预

目的 探讨肿瘤坏死因子(TNF)在肝缺血/再灌注损伤(HIRI)中的作用及异丙酚对其的影响。方法 选择HIRI实验兔及肝癌手术患者,观察血浆TNF含量、谷丙转氨酶(ALT)活性、肝形态学的变化及异丙酚对上述指标的影响。结果 HIRI期间,TNF和ALT明显升高(P均<0.01),两者呈显著正相关(实验兔r=0.912,P<0.01;患者r=0.535,P<0.01),肝形态学发生异常变化;使用异丙酚后,上述指标的异常变化显著减轻,其差异有显著性意义(P<0.05和P<0.01)。结论TNF是HIRI的重要发病因素,异丙酚可通过降低TNF减轻HIRI。

大鼠肝缺血/再灌注损伤时TNF-α和ICAM-1在心肌组织中的表达及意义

目的:观察大鼠肝缺血/再灌注损伤(ischemia/reperfusioninjury,I/RI)过程中肝组织TNF-α和心肌组织TNF-α、ICAM-1的表达;探讨肝脏缺血/再灌注过程对心脏的影响以及其机制。方法:选健康雄性Wistar大鼠48只,建立肝脏缺血/再灌注动物模型,每组8只,共分6组。应用免疫组织化学方法测定肝组织TNF-α和心肌组织中TNF-α、ICAM-1的表达。结果:在肝缺血/再灌注过程中,TNF-α在肝脏中的表达在I/R组就有升高(P<0.05),在I/R1h组增高明显,I/R2h、I/R4h组虽然略有波动,但I/R2h组与I/R1h组,I/R4h组与I/R2h组比较差异无统计学意义(P>0.05)。TNF-α在心肌组织中的表达随着再灌注时间的延长逐渐升高,I/R1h组与I/R组、I/R4h组与I/R1h组相比差异有统计学意义(P<0.05),但I/R2h组与I/R1h组、I/R4h组与I/R2h组差异均无统计学意义(P>0.05)。心肌组织ICAM1的表达随着再灌注时间的延长逐渐升高,I/R1h组与I/R组相比、I/R4h组与I/R2h组比较差异均有统计学意义(P<0.05)。肝组织TNF-α和心肌组织TNF-α的表达呈正相关(r=0.844,P<0.01),心肌组织TNF-α与ICAM-1的表达呈正相关(r=0.7544,P<0.01)。肝HE染色切片见I/R导致肝明显的损伤,随着再灌注时间的延长,肝细胞水肿,炎性细胞浸润,甚至肝细胞坏死。心肌HE染色见心肌部分横纹不清楚。

熊果酸通过调控PTGS2对小鼠肝缺血/再灌注损伤的保护作用

目的探索植物提取物熊果酸(ursolic acid,UA)减轻肝缺血/再灌注损伤(hepatic ischemia reperfusion injury,HIRI)的作用及初步作用机制。方法C57雄性小鼠分为假手术组、假手术组+UA组、HIRI组、HIRI低剂量组和HIRI高剂量组。通过动物实验、网络药理学和分子生物学等方法进行分析验证。结果动物实验显示UA显著降低HIRI小鼠血清中AST、ALT的活性。利用TCMSP、Pharm Mapper、Swiss Target Prediction、GeneCards等数据库获取熊果酸与HIRI对应的靶基因,再利用DAVID、STRING以及Cytoscape得到初步关键靶基因,它们是PPARG(peroxisome proliferator-activated receptor gamma,PPARG)、MAPK3(mitogen-activated protein kinase 3,MAPK3)及PTGS2(prostaglandin G/H synthase 2,PTGS2)。最后,根据分子对接得分、受体与配体结合的氢键数目,确定PTGS2为本研究的hub靶基因。后经免疫组化实验验证,与假手术组比较,PTGS2在HIRI组中高表达(P<0.01);与HIRI组比较,PTGS2在HIRI低剂量组及HIRI高剂量组的表达明显降低(P<0.01)。结论熊果酸通过调控PTGS2对小鼠肝缺血/再灌注损伤的保护作用,该研究为临床研制干预HIRI的新药提供了参考。

大鼠肝缺血/再灌注损伤时c-fos、Bcl-2在肝组织的表达及与肝细胞凋亡的关系

目的:观察大鼠肝缺血/再灌注损伤时c-fos、Bcl-2在肝组织中的表达及与肝细胞凋亡的关系,并探讨可能的机制。方法:选健康雄性Wistar大鼠48只,随机分为对照组、缺血30min组(I组)、缺血30min即刻再灌注组(I/R组)、缺血30min再灌注1h组(I/R1h组)、缺血30min再灌注2h组(I/R2h组)、缺血30min再灌注后4h组(I/R4h组),每组8只。应用免疫组化法分别测定各组大鼠肝组织c-fos、Bcl-2的表达,应用原位细胞凋亡法测定肝细胞凋亡的情况,同时观察肝脏组织病理变化。结果:肝脏I/R可出现肝细胞明显损伤、肝细胞水肿、炎性细胞浸润,甚至有细胞坏死。与对照组比较,cfos在I组表达就有增高(P<0.01),I/R4h组达到高峰。I/R组与I组、I/R4h组与I/R2h组相比差异有统计学意义(P<0.01)。肝组织Bcl2在I组表达增高(P<0.01),I/R2～4h达到高峰。I/R4h组与I/R2h组相比差异无统计学意义(P>0.01)。细胞凋亡指数:I组、I/R组与对照组比较明显增加(P<0.01),随着时间的延长细胞凋亡指数逐渐增加。c-fos与细胞凋亡指数呈正相关(r=0.889,P<0.01),Bcl-2与细胞凋亡指数呈正相关(r=0.901,P<0.01)。结论:肝缺血/再灌注损伤可引起肝组织的损伤及肝细胞凋亡。肝细胞凋亡与cfos的表达有关。Bcl2在缺血期发挥了其抑凋亡作用,随着再灌注时间的延长。

肝缺血/再灌注损伤对血浆及下丘脑orexin-A表达的影响

目的探讨肝缺血/再灌注(H-I/R)损伤对血浆和下丘脑orexin-A表达的影响。方法采用微型无损伤血管夹夹闭肝蒂左分叉的方法制备大鼠70%H-I/R模型,设立假手术组(sham)和缺血1 h后再灌注1 h、2.5 h、4 h、6 h损伤组。采用放射免疫法检测H-I/R损伤后血浆和下丘脑orexin-A的水平,并采用reverse transcription-PCR(RT-PCR)方法检测下丘脑orexin-A mRNA的表达。结果各再灌注组血浆和下丘脑orexin-A的水平与损伤后sham组比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。而血浆orexin-A水平在I/R1 h组显著高于I/R6 h组(P<0.05)。I/R4 h和I/R6 h组下丘脑orexin-A mRNA的表达水平显著高于sham和I/R1 h组(P<0.05)。结论 H-I/R可引起orexin-A表达水平一定程度的变化,orexin-A参与创伤应激后代谢紊乱的调控。

Orexin-A在肝缺血/再灌注损伤中的变化及与能量代谢的相关性

目的探讨增食欲素-A(Orexin-A)在肝缺血/再灌注(H-I/R)损伤中的变化及与能量代谢的相关性。方法建立大鼠H-I/R模型,分为假手术组(Sham)、缺血1 h后分别再灌注1 h、2.5 h、4 h、6 h损伤组(I/R1 h、I/R2.5 h、I/R4 h、I/R6 h)共5组,H-I/R损伤中血浆Orexin-A水平采用放射免疫法检测,并用试剂盒检测损伤后血清葡萄糖水平。结果 4个再灌注组血浆Orexin-A水平与Sham组比较,差异均无统计学意义(P>0.05),而I/R6h组Orexin-A水平显著低于I/R1h组(P<0.05);损伤后期血清葡萄糖水平显著升高(P<0.05);各组血浆Orexin-A水平与血清葡萄糖存在正相关(P<0.05)。结论 Orexin-A在H-I/R中有一定的表达变化,参与了创伤应激中内环境代谢紊乱的调控。

香叶木素预处理通过抗炎和抗氧化发挥对小鼠肝缺血/再灌注的保护作用

目的研究香叶木素(diosmetin,Dio)在肝脏缺血/再灌注(ischemia/reperfusion,I/R)中的作用及其可能的机制。方法32只小鼠随机分为假手术组、I/R组、低剂量Dio组和高剂量Dio组,每组8只。I/R组行肝I/R术,假手术组行假手术。低和高剂量Dio组行肝I/R术前30 min分别腹腔注射10 mg·kg^(-1)和40 mg·kg^(-1) Dio。再灌注后24 h,采集血液和肝脏样本。ELISA检测血清中白介素(IL)-1β、IL-6、乳酸脱氢酶(LDH)和天冬氨酸氨基转移酶(AST)的水平。测定肝匀浆中丙二醛(MDA)、活性氧(ROS)、还原性谷胱甘肽(GSH)和总胆红素(TBIL)的水平。HE染色观察肝损伤情况。免疫组化染色观察肝组织中IL-1β的表达。Western blot检测肝组织中cleaved-caspase-3、p-NF-κB p65和p-p38蛋白表达。结果与假手术组比较,I/R组小鼠肝损伤程度明显增加,血清中IL-1β、IL-6、LDH和AST水平、肝组织中MDA和ROS水平以及cleaved-caspase-3、p-NF-κB p65和p-p38蛋白水平均明显升高,而GSH和TBIL的水平明显下降,差异均具有统计学意义。与I/R组比较,低和高剂量Dio组中上述指标均得到明显改善(P<0.05),其中高剂量组的效果优于低剂量组。结论Dio预处理可减轻肝I/R损伤,这一作用可能与其减弱肝I/R诱导的氧化应激以及炎症相关通路有关。

瘦素在肝缺血/再灌注致肾损伤中作用的研究

目的:研究瘦素(Leptin)在肝缺血/再灌注(I/R)后肾组织中的表达变化,探讨其与肝I/R介导的肾损伤的关系。方法:建立大鼠70%肝I/R模型,设立假手术和缺血60min后再灌注60、150、240、360min组,观察肾脏的病理学变化,检测各组血清尿酸、总抗氧化能力,肾Leptin蛋白及其mRNA表达的变化。结果:与假手术组比较,缺血60min/再灌注150min及再灌注240min组血清尿酸显著升高,以再灌注240min升高最为显著;再灌注240min和360min组血清总抗氧化能力显著升高,以再灌注240min升高最为显著;再灌注150、240和360min组肾Leptin蛋白表达显著升高,再灌注60、240、360min组肾LeptinmRNA表达显著升高,而再灌注150min组LeptinmRNA显著降低。病理学观察提示肝I/R早期的肾损伤较重而后期显著减轻。结论:Leptin在肝I/R后肾组织内的表达变化与肾损伤密切相关,提示它可能作为一种保护因子对抗肝I/R介导的肾损伤。

4种急性肝缺血/再灌注损伤大鼠模型的建立及适用性比较

目的明确4种肝缺血/再灌注损伤(IRI)大鼠模型的制备方法,确定与临床情况相符、病理生理损伤程度稳定、易于操作的肝IRI动物模型。方法将160只雄性SD大鼠采用区间分组法随机分为70%IRI(A组)、100%IRI(B组)、70%IRI+30%肝切除(C组)、100%IRI+30%肝切除(D组)4种模型组,每组40只;每种模型再按缺血时间随机分为假手术组(s组)和缺血30、60、90 min组,每组10只。术后观察大鼠生存状态、苏醒时间;记录C、D组切除肝叶质量、出血量、止血时间。于再灌注6 h经心脏穿刺取血,检测血清天冬氨酸转氨酶(AST)、丙氨酸转氨酶(ALT)、碱性磷酸酶(ALP)、血尿素氮(BUN)、血肌酐(SCr)、γ-谷氨酰转肽酶(γ-GT)水平,判断肝肾功能损伤情况;采用苏木素-伊红(HE)染色、免疫组化巨噬细胞染色,从病理学角度分析肝组织结构损伤情况。结果A组大鼠苏醒早,精神尚可;余组大鼠苏醒晚且精神欠佳。D组止血时间平均较C组长1 s左右。70%肝缺血60 min组大鼠的死亡率为0。与假手术组比较,各实验组大鼠血清AST、ALT、ALP、BUN、SCr、γ-GT水平明显增高,提示肝IRI大鼠肝肾功能受损;A、B、C 3组中缺血90 min组较缺血30 min组AST、ALT、ALP、BUN、SCr、γ-GT升高更明显〔AST(U/L):A组为834.94±56.73比258.74±18.33,B组为547.63±217.40比277.67±57.92,C组为930.38±75.48比640.51±194.20;ALT(U/L):A组为346.78±25.47比156.58±13.25,B组为408.40±138.25比196.80±58.60,C组为596.41±193.32比173.76±72.43,ALP(U/L):A组为431.21±34.30比315.95±15.64,B组为525.88±62.13比215.63±17.31,C组为487.53±112.37比272.46±92.33,BUN(U/L):A组为18.35±5.63比14.32±2.30,B组为30.21±4.55比17.41±8.14,C组为20.50±3.64比15.93±3.22,SCr(U/L):A组为27.47±8.91比22.37±5.66,B组为43.60±15.57比36.80±7.95,C组为63.81±20.24比42.47±7.03,γ-GT(U/L):A组为15.64±3.57比6.82±1.48,B组为9.28±1.91比5.62±1.21,C组为10.98±3.18比5.67±1.10,均P<0.05〕;100%IRI 90 min组和100%IRI 90 min+30%肝切除组较相应70%IRI对照组上述指标升高更明显,说明血流阻断+肝切除的大鼠肝肾功能损害增加。HE染色可见假手术组肝组织结构清晰,细胞完整,排列整齐;各实验组细胞结构破坏,出现断裂或塌陷,细胞水肿,部分细胞有核固缩、胞质深染,脱落坏死,间质有炎症细胞浸润。免疫组化染色可见各实验组巨噬细胞多于假手术组。结论成功建立4种肝IRI大鼠模型,随着肝缺血时间延长和缺血程度加大,肝细胞缺血加重,肝细胞缺氧坏死增加,符合肝IRI的特点,能完美模拟肝外伤后的肝IRI,其中100%缺血+30%肝切除组肝损伤最为严重。该模型设计合理、操作简单、重复性好,可用于临床机制、药物疗效及诊疗方法的探究。

葡萄籽原花青素对大鼠肝缺血再灌注损伤的抗氧化作用研究

目的探讨葡萄籽原花青素对大鼠肝缺血再灌注损伤的抗氧化作用。方法建立大鼠肝缺血再灌注模型,随机分为3组,每组8只,分别为假手术组、缺血/再灌注组和原花青素预处理组。各实验组肝缺血30 min再灌120 min时采血和收集肝脏标本,分别检测血清、肝组织中超氧化物歧化酶(SOD)活性、丙二醛(MDA)含量和血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)和天门冬氨酸氨基转移酶(AST)的含量。结果(1)缺血/再灌注组血清、肝组织MDA高于假手术组(P<0.01)、SOD低于假手术组(P<0.01);缺血/再灌注组与原花青素预处理组比较,MDA升高(P<0.05),SOD降低(P<0.01);(2)缺血/再灌注组与假手术组比较AST、ALT含量升高(P<0.01);缺血/再灌注组与原花青素预处理组比较AST、ALT含量升高(P<0.05)。结论原花青素对肝缺血再灌注损伤具有保护作用,其机制可能与通过降低氧自由基水平、拮抗脂质过氧化有关,从而减轻肝脏缺血再灌注损伤。

高迁移率族蛋白B1在大鼠肝脏热缺血／再灌注损伤中的作用

目的探讨高迁移率族蛋白B1（HMGB1）在大鼠肝脏热缺血／再灌注（I／R）损伤中的作用。方法90只Wistar大鼠被随机分为正常对照组、林格液组、丙酮酸乙酯（EP）治疗组。采用夹闭左、右肝蒂使95％肝脏缺血90min再恢复血流并切除未缺血的尾叶肝脏制模。林格液组和EP治疗组制模前分别经阴茎背静脉注射林格液4ml或EP3．26g／L（溶于林格液4ml中），于术后2、8、24、48h取下腔静脉血检测血清丙氨酸转氨酶（ALT）、天冬氨酸转氨酶（AST）水平，处死动物后检测肝组织HMGB1、肿瘤坏死因子-α（TNF—α）、白细胞介素-10（IL-10）含量。结果林格液组和EP治疗组血清ALT、AST水平均显著高于正常对照组，EP治疗组各时间点ALT及术后2h、8hAST水平均显著低于林格液组（P〈0．05或P〈0．01）。林格液组8、24、48h肝组织HMGB1水平显著高于正常对照组，EP治疗组仅48h显著升高；EP治疗组在8h、24h时HMGB1水平显著低于林格液组；林格液组和EP治疗组在8h时TNF—α水平均高于正常对照组，而EP治疗组显著低于林格液组（P〈0．05或P〈0．01）。各组IL-10水平无明显差异。结论HMGB1参与了肝I／R损伤的病理过程。

N-乙酰半胱氨酸对小鼠肝部分缺血/再灌注后肝肺损伤的保护作用

目的 研究抗氧化剂N-乙酰半胱氨酸（NAC）对肝脏部分缺血/再灌注（I/R）后肝、肺损伤的保护作用及对Toll样受体2/4（TLR2/4）表达的影响。方法 以BALB/c小鼠复制肝脏部分I/R损伤模型,将小鼠随机分为假手术组、I/R组和NAC干预组（NAC组）,每组10只。于再灌注后1h和3h取门静脉血测定血清肿瘤坏死因子-α（TNF-α）浓度,取眼动脉血测定血浆丙氨酸转氨酶（ALT）水平;同时取受损肝、肺组织行逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）和蛋白质免疫印迹法（Western blotting）观察TLR2/4表达的变化。结果I/R后受损肝叶和肺组织内出现TLR2/4 mRNA和蛋白的高表达,NAC干预可抑制其表达水平（P〈0.05或P〈0.01）。I/R损伤后血中TNF-α和ALT水平均较假手术组明显升高;NAC干预后各时间点TNF-α和ALT均较I/R组明显下降（P〈0.05或P〈0.01）。结论 小鼠肝部分I/R后,TLR2/4不仅在受损肝组织内有表达,在远隔器官肺内也有表达。NAC可通过调整氧化还原状态,抑制再灌注后TLR2/4的活化和细胞因子TNF-α的表达,从而减轻肝、肺组织的损伤。

维拉帕米和生脉注射液抗大鼠肝脏缺血/再灌注损伤的作用研究

目的:观察维拉帕米和生脉注射液对大鼠肝脏缺血/再灌注(I/R)损伤的保护作用。方法:将40只大鼠随机分为假手术组、I/R组、维拉帕米组和生脉注射液组,每组10只。采用夹闭左肝蒂30min后开放再关腹制备大鼠肝I/R损伤模型。维拉帕米组开腹前10min经尾静脉注射维拉帕米1.25mg/kg;生脉注射液组开腹前3d每日向腹腔内注射生脉注射液5ml/kg。各组均在关腹48h后再开腹,每只大鼠取缺血肝组织并由腹主动脉抽血,检测丙氨酸转氨酶(ALT)、天冬氨酸转氨酶(AST)、丙二醛(MDA)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、热休克蛋白70(HSP 70)的变化;并在光镜下观察肝组织的形态变化。结果:与假手术组比较,I/R组ALT、AST、TNF-α和MDA水平均显著升高(P均<0.05);维拉帕米组和生脉注射液组ALT、AST、TNF-α和MDA均显著低于I/R组,但显著高于假手术组(P均<0.05);而维拉帕米组和生脉注射液两组之间除ALT有差异外,其余指标差异无显著性。维拉帕米组和生脉注射液组HSP 70的表达均明显少于I/R组,而维拉帕米组HSP 70的表达略少于生脉注射液组。肝组织切片观察显示,维拉帕米组和生脉注射液组肝细胞肿胀、坏死程度均较I/R组轻。结论:维拉帕米和生脉注射液可明显改善大鼠肝脏I/R后肝组织的损伤程度。

右美托咪定对大鼠移植肝缺血／再灌注所致急性肺损伤中细胞凋亡及CCAAT增强子结合蛋白同源蛋白的影响

目的探讨右美托咪定预处理对大鼠原位移植肝缺血／再灌注（I／R）所致急性肺损伤（ALI）中细胞凋亡及CCAAT增强子结合蛋白（C／EBP）同源蛋白（CHOP）的作用。方法选择雄性sD大鼠40只，按随机数字表法分为假手术组、I／R模型组、右美托咪定低剂量组和右美托咪定高剂量组，每组10只。采用二袖套法结扎并切断肝动脉，供体肝脏移植入后即可完全开放门静脉复制肝I／R模型；假手术组开腹后只游离肝周韧带，不进行其他特殊处理；右美托咪定低剂量组和高剂量组分别于I／R前1h静脉泵注右美托咪定2．5μg kg-1h-1和5．0μg kg-1h-1，1h内完成。实验结束后留取肺组织，检测肺组织湿／干质量（W／D）比值；光镜下观察肺组织病理学变化并进行肺泡损伤定量评估（IQA），电镜下观察肺组织超微结构变化；反转录一聚合酶链反应（RT—PCR）检测CHOPmRNA表达水平；蛋白质免疫印迹法（WesternBlot）检测CHOP的蛋白表达水平；原位末端缺刻标记法（TUNEL）检测肺组织细胞凋亡情况，并计算凋亡指数（AI）。结果与假手术组比较，I／R模型组肺w／D比值（4．94±0，84比2．29±0．54）、IQA[（40．52±5．15）％比（4．55±1．85）％]和AI[（36．57±5．85）％比（2．85±0．95）％]均明显升高（均P〈0．01）；光镜和电镜下均显示肺组织结构发生明显的损伤。与I／R模型组比较，右美托咪定低剂量组和右美托咪定高剂量组肺W／D比值（3．29±0．85，2．68±0．78比4．94±0．84）、IQA[（23．69±2．62）％，（15．86±3．61）％比（40．52±5．15）％J和AI[（25．73±3．71）％，（14．66±2．61）％比（36．57±5．85）％]均明显降低（均P〈O．01），光镜和电镜下可见肺组织结构损伤明显减轻。I／R模型组有大量肺血管内皮细胞和肺泡上皮细胞发生凋亡，而右美托咪定低剂量组和高剂量组细胞凋亡则明显减少。与假手术组比较，I／R模型组CHOPmRNA[吸光度（A）值：0．96±0．18比0．43±0．08]及蛋白（灰度值：2．79±0．74比1．02±0．27）表达水平均明显升高（均P〈0．01）。与I／R模型组比较，右美托咪定低剂量组和高剂量组CHOPmRNA（A值：0．69±0．13、0．56±0．12比0．96±0．18）及蛋白（灰度值：1．96±0．58、1．34±0．49比2．79±0．74）表达水平均明显降低，且以高剂量组的降低更显著（均P〈0．01）。结论右美托咪定对移植肝I／R肺组织具有保护作用，该作用可能与其抑制CHOP的活化、减少肺组织细胞凋亡有关。

超声微泡介导微小RNA-146a基因在缺血/再灌注肝损伤大鼠中的表达与作用

目的评价肝组织微小RNA-146a(miR-146a)表达与大鼠缺血/再灌注(I/R)肝损伤的关系.方法按随机数字表法将144只SD大鼠分为对照组(N组)、假手术组(S组)及I/R组,各组再分为4个亚组(n=12),分别在实验前1 h静脉给予220μL生理盐水(A组)、20μL miR-146a模拟剂+200μL生理盐水(B组)、20μL miR-146a模拟剂+200μL超声微泡造影剂(C组)、20μL miR-146a抑制剂+200μL超声微泡造影剂(D组).通过制备载miR-146a的超声微泡造影剂,运用超声靶向破坏微泡,于实验前及实验后24 h检测血浆丙氨酸转氨酶(ALT)、白细胞介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)含量,用反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测肝组织miR-146a表达,用蛋白质免疫印迹试验(Western Blot)检测肝组织Toll样受体4(TLR4)、白细胞介素-1受体相关激酶1(IRAK-1)、IL-6、TNF-α蛋白表达,光镜下观察肝组织细胞损伤情况.结果实验前各组以及实验后24 h N组和S组血浆ALT、IL-6、TNF-α含量差异均无统计学意义,病理观察也无明显肝组织细胞损伤.实验后24 h,与S组比较,I/R A组和D组肝组织miR-146a表达显著下降(miR-146a/U6 snRNA:0.51±0.13、0.22±0.09比1.01±0.02,均P<0.01),血浆ALT、IL-6、TNF-α含量及肝组织TLR4、IRAK-1、IL-6、TNF-α表达量显著升高〔ALT(U/L):103.23±26.64比44.16±18.55,176.46±7.26比49.74±6.83;IL-6(μg/L):64.28±16.19比17.68±7.54,88.49±3.23比15.58±2.38;TNF-α(μg/L):31.28±2.57比5.58±3.35,59.12±8.74比5.27±1.37;TLR4/GAPDH:2.43±0.36、3.23±0.71比0.96±0.24;IRAK-1/GAPDH:2.34±0.52、3.14±0.63比0.76±0.21;IL-6/GAPDH:1.02±0.22、1.11±0.16比0.98±0.37;TNF-α/GAPDH:2.05±0.48、2.86±0.27比0.59±0.16;均P<0.01〕,且以I/R D组升高更为显著(均P<0.01);病理显示肝组织细胞损伤明显;而I/R B组和C组转染miR-146a模拟剂后肝组织miR-146a表达量显著升高(miR-146a/U6 nsRNA:1.56±0.31、2.40±0.53比1.01±0.02,均P<0.01),肝组织TLR4、IRAK-1、IL-6、TNF-α的表达量显著下降(TLR4/GAPDH:0.77±0.18、0.65±0.27比0.96±0.24,IRAK-1/GAPDH:0.61±0.14、0.47±0.20比0.76±0.21,IL-6/GAPDH:0.80±0.13、0.54±0.22比0.98±0.37,TNF-α/GAPDH:0.41±0.14、0.16±0.03比0.59±0.16,均P<0.01),且以C组结合超声微泡后表达更为显著(P<0.01),病理显示肝组织细胞损伤也更为轻微,B组和C组血浆ALT、IL-6及TNF-α含量也与S组差异无统计学意义.结论超声微泡能高效转染miR-146a模拟剂和抑制剂于肝组织细胞;miR-146a可能负调控TLR信号通路介导的I/R肝损伤.