自身免疫性肝炎肝肾微粒体Ⅰ型抗原的重组表达及其免疫识别

自身免疫性肝炎肝肾微粒体Ⅰ型抗原的重组表达及其免疫识别①王达仲人前孔宪涛（上海第二军医大学附属长征医院，上海２００００３）①本课题受国家自然科学基金资助作者简介：王达，男，２８岁，博士，主治医师，主要研究自身免疫性疾病与肿瘤免疫学；仲人前，男，３５岁...

浆细胞增生为首发肝肾微粒体合并cANCA阳性1例

自身免疫性肝炎(AIH)是由自身免疫反应介导的慢性进行性肝脏炎症性疾病,其临床特征为不同程度的血清转氨酶升高、高γ-球蛋白血症、自身抗体阳性,组织学特征为以淋巴细胞、浆细胞浸润为主的界面性肝炎,严重病例可快速进展为肝硬化和肝衰竭。其病因不明,在全世界范围内均有发生,目前呈逐年上升趋势。

肝肾微粒体1型抗原的制备及纯化

在1973年,Rizzetto用间接免疫荧光法发现了与近端肾小管和肝细胞胞浆反应的自身抗体[1].这些针对细胞内质网反应的自身抗体被命名为肝肾微粒体抗体（LKM）,随后鉴定出LKM抗体有3种亚型, LKM-1、LKM-2和LKM-3.LKM-1是Ⅱ型自身免疫性肝炎（AIH）的血清学标志[2].

丙型肝炎患者抗肝肾微粒体-1抗体的检测

抗肝肾微粒体-1抗体(anti-LKM-1)是自身免疫性肝炎Ⅱ型(AIH-Ⅱ)的特征,AIH-Ⅱ分为Ⅱa和Ⅱb.Ⅱa是指HCV阴性的患者(大多为女性),Ⅱb是指HCV阳性的患者(大多为年长男性).单纯丙型肝炎,用干扰素治疗,可取得较好的疗效,若伴有自身免疫性肝炎,则疗效受一定影响.因为,后者用免疫抑制剂治疗,作用与干扰素不同.

抗肝肾微粒体抗体在肝病患者中的临床意义评价

目的分析抗肝肾微粒体（LKM-1）抗体阳性肝病患者临床及实验室特点，为临床诊断及鉴别诊断提供参考。方法收集2006年至2016年住院及门诊患者中抗-LKM-1阳性患者病历资料，对其临床及实验室特点进行分析比较，并对其中特殊病例进行分析。结果在肝功能异常患者中检测相关自身抗体117452例次，发现抗-LKM-1阳性15例，其中诊断为2型自身免疫性肝炎（AIH）患者7例，年龄（11．0±9．0）岁，均为青少年，多急性起病；诊断为丙型肝炎患者8例，年龄（51．5±9．0）岁，其中7例为中年患者，1例12岁儿童患者，均隐匿起病。AIH患者丙氨酸氨基转移酶（1003．9土904．3）U／L、天冬氨酸氨基转移酶（410．7±660．3）U／L、总胆红素（98．0±191．0）μmol／L，明显高于丙型肝炎患者的（57．0±84．1）U／L、（34．9±42．9）U／L、（15．4±6．0）μmol／L，P值均〈0．05，差异均有统计学意义。免疫抑制剂治疗后免疫球蛋白G较基线值降低。8例丙型肝炎患者中共6例接受干扰素联合利巴韦林抗病毒治疗，5例完全应答，其中4例治疗后抗-LKM-1水平下降。但1例12岁儿童应用干扰素治疗过程中发生肝衰竭，最终病死。结论抗-LKM-1阳性患者主要见于2型AIH和丙型肝炎，但两组患者年龄、起病方式、肝功能、抗-LKM-1水平等存在差异；对诊断明确，可以排除自身免疫性肝炎的丙型肝炎患者，即使存在抗-LKM-1阳性，在密切监控下使用干扰素治疗，可以获得良好应答；对伴有抗-LKM-1阳性的青少年丙型肝炎患者，需进一步除外合并AIH。

儿童反复肝功能异常伴抗肝肾微粒体抗体阳性

患儿，女，8岁，辽宁省瓦房店人，学生。因“反复肝功能异常3年”到北京佑安医院就诊。2008年9月，患儿因“支气管肺炎”当地医院给予阿奇霉素静脉滴注、后口服罗红霉素，1周后出现乏力、食欲减退，尿黄如浓茶色，于当地医院就诊，查谷丙转氨酶（alaninetransarninase，ALT）993IU／L.

肝肾微粒体1型抗原在大肠杆菌中的表达

肝肾微粒体１型抗原在大肠杆菌中的表达王达仲人前马筠孔宪涛肝肾微粒体１型抗原（ＬＫＭ－１）被看作是自身免疫性肝炎（ａｕｔｏｉｍｍｕｎｅｈｅｐａｔｉｔｓ，ＡＩＨ）中的一种重要的自身抗原。已知它为位于肝细胞微粒体中的细胞色素Ｐ４５０的ⅡＤ６组分（ＣＹＰⅡＤ...

自身免疫性肝炎合并膜性肾病1例诊治分析

病例 患者，男，29岁，藏族。因“全身水肿伴腹胀10 d”于2012年6月1日入院。患者于10 d前无明显诱因出现全身水肿，腹胀，活动后心悸气促，伴有恶心、呕吐胃内容物，无发热腹痛及关节肌肉疼痛，8d前当地医院检查发现蛋白尿，水肿腹胀进行性加重，遂入我院。否认肝炎史，有大量饮酒史9年，每天半斤白酒。入院体检：T 36．8℃，P 83次／min，R 19次／min， BP 90／60 mmHg，神清。颜面水肿，口腔黏膜未见溃疡，全身皮肤无皮疹，右下肺叩诊呈浊音，呼吸音消失，双肺未闻及干湿罗音。腹部膨隆，剑下压痛，无反跳痛，肝脾未触及，肝、肾区无叩痛，移动性浊音（＋）。双下肢重度指凹性水肿。2012年5月30日查血常规：WBC 8．75×109／L，NEUT 0．903，Hb 211 g／L；尿常规：PRO（＋＋），尿蛋白定量15．9 g／24 h；血生化：TP 55．7 g／L，Alb 14．8 g／L，GLO 40．9 g／L，ALT 53 U／L，AST 44．7 U／L，ALP 96．1 U／L，γ-GGT 266．8 U／L，BUN 22．88 mmol／L， Scr 109μmol／L。病毒性肝炎、肿瘤标志物均阴性。腹水常规：乳糜性，浑浊，无凝块，李凡他试验（-），有核细胞计数0．01×109／L；腹水生化：蛋白7．8 g／L；腹部彩超：肝脏体积增大，结构欠清晰，左肝缘变钝，实质回声不均匀，弥漫性增粗，第二肝门静脉消失，门静脉主干内径1．2 cm，腹腔大量腹水。泌尿系彩超：双肾形态大小正常，皮实质回声均匀，皮髓质分界清楚。X线胸片：右侧胸腔少量积液；入院诊断：肾病综合征。予甲强龙80 mg每日1次静脉滴注，并给予抗凝，金水宝、黄芪颗粒等治疗。6月4日复查肝功：TP 34．8 g／L，Alb 15 g／L，GLO 19．8 g／L，总胆红素3．2μmol／L，DB 1．7μmol／L，ALT 495．8 U／L，AST 432．2 U／L，ALP 259．1 U／L，γ-GGT 659．4 U／L，血清总胆汁酸19．5μmol／L；肾功能：BUN 6．83 mmol／L，肌酐80μmol／L，胆固醇10．5 mmol／L，三酰甘油2．32 mmol／L，LDL-C 6．77 mmol／L，＆amp;nbsp；VLDL 2．07 mmol／L。免疫球蛋白：IgG 24．3 g／L，IgA ，IgM，C3， C4正常；血浆蛋白电泳：γ25．7，Alb、α1、α2、β正常；ANCA和抗GBM（-），血沉14 mm／h。抗核抗体谱：抗组蛋白抗体（＋）， u1-snRNP抗体（＋）。自身免疫性肝病标记物：Sp100抗体阳性（＋），SLA可溶性肝抗原（＋），gp210抗体（＋），LC 1抗肝细胞质液抗体（＋），LKM1抗肝肾微粒体抗体（＋），AMA-M2抗线粒体抗体（-）。凝血功能：PT 15．3 s，APTT 49．1 s，凝血酶时间22．7 s。6月8日复查肝功：TP 36．1 g／L，Alb 18．8 g／L， GLO 17．3 g／L，TB 3．0μmol／L，DB 1．2μmol／L，ALT 313．6 U／L， AST 153．2 U／L，ALP 323．1 U／L，γ- GT 981．4 U／L，TBA 13．2μmol／L；6月13日复查尿蛋白定量11．9 g／24 h；肾活检病理报告光镜：镜下见24个肾小球，未见肾小球球性硬化及节段性硬化；肾小球系膜细胞和基质轻度增生，毛细血管袢开放良好，外观显僵硬，基底膜略增厚，钉突样结构不明显，上皮下可见嗜复红蛋白沉积，未见纤维素样坏死，未见新月体形成；肾小管上皮细胞空泡及颗粒变性，无明显萎缩，肾间质无明显炎症细胞浸润及纤维化，小动脉管壁无明显病变；免疫荧光：IgA（＋），IgG（＋＋＋），IgM（＋＋），C3（＋），C1 q（＋）；电镜见：肾小球基底膜轻度不规则增厚，上皮下及基膜内见少量电子致密物沉积，足突弥漫融合；病理诊断：膜型肾病Ⅰ期。用甲泼尼龙25 d后，患者水肿腹胀消失，复查抗核抗体谱和自身免疫性肝病标记物均阴性，腹部彩超：肝胆胰脾未见异常，无腹腔积液。尿蛋白定量0．95 g／24 h，7月2日复查肝功：TP 52．1 g／L， Alb 33．8 g／L，GLO 18．3g／L，TB 6．2μmol／L，DB 3．7μmol／L， ALT 83．7 U／L，AST 25．1 U／L，ALP 121．3 U／L，γ-GT 305．9 U／L，病情好转出院。

血清ANA、ASMA、PANCA、LKM联合SLA检验用于自身免疫性肝炎诊断的价值

探究自身免疫性肝炎患者采用血清抗核抗体(ANA)、抗平滑肌抗体(ASMA)、核周型抗中性粒细胞胞质抗体(PANCA)、抗肝肾微粒体抗体(LKM)、抗可溶性肝抗原抗体(SLA)检验的诊断价值。方法 择取本院30例自身免疫性肝炎患者(2020.04-2023.05)作为观察组,同期选择30例其他肝病患者作为对照组,均给予常规生化检验、ANA、ASMA、PANCA、LKM、SLA,对比诊断效能。结果 两组常规生化检验结果对比无统计学意义(P>0.05);两组ANA、ASMA对比有统计学意义(P<0.05);两组PANCA、LKM、SLA对比无统计学意义(P>0.05)。结论 对自身免疫性肝炎疾病诊断时,血清ANA、ASMA、PANCA、LKM联合SLA检验价值高,可为后期治疗方案制定准确数据,可推广。

自身免疫性肝炎的诊断——附一例报告

为加强对自身免疫性肝炎的认识 ,报道一例除外其它肝损害病因 ,经血清生化学 (肝功能、免疫球蛋白 ,等 )、自身抗体和肝组织病理学证实的儿童自身免疫性肝炎。不明原因的肝脏损害 ,自身免疫性肝炎应作为鉴别诊断之一。及时检测血清生化学、自身抗体、肝组织病理并除外其它肝损害病因将有助于诊断。

抗自身免疫性肝病自身抗体组合检测在自身免疫性肝病诊断中的应用

目的应用抗自身免疫性肝病自身抗体组合四项"线粒体M2型(AMAM2)、肝肾微粒体1型(LKM-1)、肝溶质抗原1型(LC-1)、可溶性肝抗原/肝胰抗原(SLA/LP)",血清学诊断自身免疫性肝病。方法采用免疫印迹法检测抗自身免疫性肝病自身抗体组合四项,并进行回顾性分析。结果共检测356例抗自身免疫性肝病自身抗体组合四项中至少有一项阳性共62例,其中AMAM2阳性29例占46.8%,LKM-1阳性5例占8.0%,LC-1阳性7例占11.3%,SLA/LP阳性21例占33.9%。结论应用免疫印迹法检测抗自身免疫性肝病自身抗体组合四项,对不明原因的肝病患者,可提高自身免疫性肝病诊断的特异性,对这些疾病治疗及预后均有重要的临床价值。

病毒性肝炎患者抗肝抗原自身抗体的检测与分析

目的分析病毒性肝炎患者中几种抗肝抗原自身抗体的存在状况和临床意义。方法采用酶联免疫吸附试验和免疫印迹法检测941例病毒性肝炎患者和32例自身免疫性肝病患者血清中肝肾微粒抗体Ⅰ型(LKM-1)、肝细胞胞溶质抗原Ⅰ型(LC-1)、可溶性肝抗原(SLA)等自身抗体。结果 941例病毒性肝炎患者中,抗肝抗原自身抗体检测阳性率分别为LKM-1 0.9%(9/941)、LC-1 0.2%(2/941)、SLA 0.0%(0/941),其中153例丙型肝炎患者中,抗肝抗原自身抗体检测阳性率分别为LKM-1 4.5%(7/153)、LC-1 1.3%(2/153)、SLA 0%(0/153);552例乙型肝炎患者中,仅检测出2例(0.4%)LKM-1阳性,在甲型肝炎、戊型肝炎和丁型肝炎中未检测出抗肝抗原自身抗体。在32例自身免疫性肝病患者中,抗肝抗原抗体LKM-1、LC-1和SLA的检出率分别为9.4%、3.1%和9.4%,其中在11例自身免疫性肝炎中,LKM-1、LC-1和SLA阳性率分别为27.3%、9.1%和18.2%。病毒性肝炎患者抗肝抗原自身抗体检出率低,与自身免疫性肝病患者比较,LKM-1和SLA差异有统计学意义(P<0.01)。结论少数丙型病毒性肝炎患者血清中存在多种抗肝抗原自身抗体,对病毒性肝炎患者进行包括抗肝抗原在内的自身抗体检测有助于病毒性肝炎合并自身免疫性肝病的诊断。

乙型肝炎后肝硬化自身抗体检测及其对肝功能影响的研究

目的探讨乙型肝炎后肝硬化患者血清中自身抗体存在的情况及其对肝功能的影响。方法利用间接免疫荧光法及免疫印迹法分别检测89例乙型肝炎后肝硬化(HBC)患者及64例慢性肝炎患者(CHB)血清中自身抗体阳性率,将两组阳性率进行统计比较。将89例HBC患者按照自身抗体存在情况分成自身抗体阳性组和自身抗体阴性组,利用全自动生化分析仪分别检测两组患者的肝功指标,并与90例正常对照者(正常对照组)进行比较。结果乙型肝炎后肝硬化组自身抗体检出情况与慢性乙型肝炎组相比,AMA、AMA-M2升高最为明显(P<0.01),ANA检出率也显著增高(P<0.05),其他指标差异无统计学意义(P>0.05)。肝功能指标中,自身抗体阳性组与阴性组比较,ALP升高最为明显(P<0.01),AST、TBA值显著升高(P<0.05),其他指标差异无统计学意义(P>0.05)。自身抗体阳性组与正常对照组比较,ALT、AST、TBil、DBil、GGT、ALP、TBA值均显著升高(P<0.01)。自身抗体阴性组与正常对照组比较,ALT、AST、TBil、GGT、TBA及DBil显著升高(P<0.01或P<0.05),ALP值差异无统计学意义(P>0.05)。结论乙型肝炎后肝硬化患者合并自身免疫性肝病对肝脏损害更大,在肝病患者中检测自身抗体将有助于判断肝病患者病情的严重程度和预后。

自身免疫性肝病患者血清自身抗体检测意义

目的 探讨抗可溶性肝抗原/抗肝胰抗原(SLA/LP)抗体在自身免疫性肝病中的意义。方法 用间接免疫荧光法、免疫印迹法检测抗SLA/LP抗体,并与抗平滑肌抗体(SMA)、抗线粒体抗体(AMA M2)及抗肝肾微粒体(LKM 1)抗体之间的阳性率进行比较。结果 自身免疫性肝炎(AIH)组、原发性胆汁性肝硬化(PBC)组、原发性硬化性胆管炎(PSC)组抗SLA/LP抗体阳性率分别为41. 7%、5. 9%和0. 0%,与SMA、AMA M2及LKM 1抗体之间的阳性率差异有显著性(P<0. 01)。结论 抗SLA/LP抗体在AIH相关抗体中具有较高的诊断价值,可视为AIH新的血清学指标。

SLA和LKM-1的表达纯化及其在自身免疫性肝炎中的初步应用

目的表达SLA和LKM-1并纯化,初步应用于自身免疫性肝炎的临床诊断中。方法在已构建的CYPIID6、SLA原核表达载体的基础上表达SLA和LKM-1,并采用NI-NTA琼脂糖珠亲和层析的方法纯化,并将纯化后蛋白用于临床自身免疫性肝炎的筛查。结果经SDS-PAGE分析后,将两个重组质粒在大肠杆菌M15中表达的产物与控菌比较,含目的基因的转化菌在相对分子质量约47.5×103和50×103处各有一条极浓的蛋白带,将含有目的基因的阳性大肠杆菌筛出,并大量培养,可用IPTG诱导表达的即为目的蛋白。表达的融合蛋白需经过鉴定才可继续纯化,以保证纯化后蛋白的纯度,纯化产物经免疫印迹法鉴定具有抗原活性,即可将所得纯化产物用于临床自身免疫性肝炎患者的筛查。结论表达纯化的SLA和LKM-1蛋白用于临床自身免疫性肝病,可以为临床诊断提供更多帮助。

辣椒致妊娠期急性肝损伤1例

患者,女,32岁,因“恶心3d”入院,入院后查ALT 1321U/L,AST 1081U/L,ALP 113U/L,TBil58μmol/L,TBA 294μmol/L,IgG26.8g/L,IgM2.44g/L,抗核抗体ANA1：320,抗平滑肌抗体SMA（-）,抗肝肾微粒体抗体LKM（-）,抗线粒体抗体M2亚型AMA-M2（-）,甲、乙、丙、戊型肝炎病毒学检测（-）,巨细胞病毒、EB病毒均（-）.多次血常规检测未见嗜酸细胞百分比及绝对值增高.

自身抗体检测对自身免疫性肝炎的诊断研究

目的 检测抗核抗体(ANA)、抗平滑肌抗体(SMA)、抗肝肾微粒体抗体(LKM)、抗可溶性肝抗原抗体(SLA)、抗肝细胞膜抗体(LMA)、抗线粒体抗体(AMA)，来探讨自身抗体检测对诊断自身免疫性肝炎的临床意义。方法 应用ELISA方法筛选出肝炎病毒血清标志物阴性而谷丙转氨酶异常升高的病人血清。应用间接免疫荧光法检测自身抗体。结果38份血清中有9例存在一项或一项以上的自身抗体，其中ANA阳性5例，SMA阳性4例，LKM阳性4例，SLA阳性1例，LMA阳性2例，抗线粒体抗体阳性2例。结果 全为阴性的血清标本29例；而对照组健康人只有1例ANA呈阳性。结论 自身免疫性肝炎是一组以存在自身抗体为特点的肝损害疾病，通过检测自身抗体可对一部分AIH病人进行确诊。

丙型肝炎患者抗肝抗原自身抗体与病毒复制的相关性研究

目的研究丙型肝炎患者抗肝抗原自身抗体与HCV病毒复制的相关性。方法回顾性分析2009年9月至2010年9月的279例抗HCV阳性患者HCV RNA检测及抗肝抗原自身抗体谱检测结果,利用统计学方法研究HCV RNA与抗肝抗原自身抗体谱的相关性。结果 279例抗HCV阳性患者中,有162例(58.1%)患者HCV RNA阳性,其中抗线粒体抗体M2型(AMA-M2)阳性11例(6.8%)、抗可溶性肝抗原抗体(SLA)阳性16例(9.9%)、抗肝肾微粒体抗体(LKM-1)阳性29例(17.9%)、抗肝细胞溶质抗原1型(LC-1)阳性9例(5.6%);117例(41.9%)患者HCV RNA阴性,其中AMA-M2阳性3例(2.6%),SLA阳性3例(2.6%),LKM-1阳性15例(12.8%)、LC-1阳性4例(3.4%)。两者抗肝抗原抗体谱阳性率差异有统计学意义(χ2=92.8,P<0.05)。结论 HCV RNA阳性患者抗肝抗原自身抗体谱阳性率明显高于HCV RNA阴性患者。

六种肝抗原自身抗体检测在自身免疫性肝病诊断中的应用研究

采用免疫印迹法检测抗自身免疫性肝病自身抗体组合六项。共检测例数208例。自身免疫性肝病患者中,自身免疫性肝炎(AIH)组36例(未分型),原发性胆汁性肝硬化(PBC)组14例,原发硬化性胆管炎(PSC)组2例;非自身免疫性肝病组156例(肝功能异常,经排外自身免疫性肝病及病毒性肝炎患者);对照组:随机收集35名健康体检者血清作正常对照,男14例,女21例。AIH组中抗核抗体(ANA)阳性率61.11%,LKM1阳性率38.88%,LC1阳性率13.88%,SLA/LP阳性率19.44%;PBC组中ANA阳性率64.28%,AMA M2阳性率92.85%,Sp100阳性率57.14%,gp210阳性率31.25%;非自身免疫性肝病组中ANA阳性率2.56%,LC1阳性率0.64%;对照组未检出。自身免疫性肝病组的阳性检出率明显高于非自身免疫性肝病组,差异有统计学意义(χ2=11.9,P<0.05)。自身免疫性肝病抗体六项及抗核抗体,对自身免疫性肝病的诊断和分型及治疗和预后有价值。

自身免疫性肝炎的诊治进展

自身免疫性肝炎(AIH)是一类病因未明,具有自身免疫基础的慢性炎症坏死的肝脏疾病。此病发病率约为20～30/百万,占慢性肝炎的10%～20%,是除慢性病毒性肝炎外较常见的一种疾病,病理证实肝实质呈渐进性的损害,以汇管区和小叶间隔周围肝细胞呈小碎片样坏死以及炎性细胞浸润为特征,随着先进的分子生物学和病毒学诊断方法的应用,目前对自身免疫性肝炎有了进一步认识。