肝细胞癌微环境中肿瘤相关巨噬细胞代谢重编程的研究进展

肿瘤相关巨噬细胞(tumor-associated macrophages,TAMs)是肝癌微环境中数量最多的免疫细胞,具有高度可塑性与异质性,是造成肝癌抑制性免疫微环境的重要亚群之一。为满足自身快速增殖、侵袭和迁移的需要,肿瘤细胞提高其代谢速率,进而造成了缺氧和酸性的肿瘤微环境(tumor microenvironment,TME)。随着肝细胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC)的发生发展,TAMs不断进行代谢重编程以调节其表型和功能,从而适应TME的变化。此外,TAMs代谢重编程中产生的代谢物质对TME免疫特性的重塑及对其他免疫细胞的作用,如抑制T淋巴细胞和自然杀伤细胞的抗肿瘤活性,进而促进HCC的发生发展及转移。本文对HCC微环境中TAMs代谢重编程的研究进展进行了简要综述。

基于代谢组学木蝴蝶总黄酮抗肝肿瘤作用机制研究

目的初步阐释木蝴蝶总黄酮抗肝肿瘤的作用机制,为木蝴蝶总黄酮作为抗肝癌药物的开发和临床应用提供实验依据。方法采用二乙基亚硝胺(DEN)诱发大鼠肝癌模型,随机分为空白组,模型组,阳性对照组,木蝴蝶总黄酮高、中、低剂量组,从造模第6周开始给药,每日1次,连续10周。第17周眼球取血,分离各组血浆。采用HPLC-QTOF-MS联用技术分析木蝴蝶总黄酮干预后各组大鼠血浆中代谢物的变化,利用Agilent Mass Profiler Professional 12.6软件结合相关数据库进行主成分分析(PCA)、差异代谢物分析及代谢通路分析。结果与模型组比较,木蝴蝶总黄酮干预后共有285种代谢物发生变化,其中上调的有41种,下调的有244种。主要与色氨酸代谢、丝氨酸代谢、胆汁酸合成、花生四烯酸代谢、亚油酸代谢等途径有关。结论木蝴蝶总黄酮发挥抗肝肿瘤作用可能与调节氨基酸代谢、脂肪酸代谢、胆汁酸合成等代谢途径有关。

基于代谢组学方法探讨刺五加多糖对免疫性肝损伤小鼠的保护作用

目的运用代谢组学方法探讨刺五加多糖对免疫性肝损伤小鼠的保护作用,寻找潜在的生物标志物并分析其代谢途径,探讨其作用机制。方法将30只KM种小鼠随机分为3组,即空白组、刀豆蛋白A(Con A)模型组及刺五加多糖给药组(14.5 mg·mL^(-1)),空白组和模型组给予生理盐水(10 mg·mL^(-1)),刺五加多糖给药组给予刺五加多糖(14.5 mg·mL^(-1)),连续灌胃7 d。除空白组外,各给药组于第7天末次给药4 h后,尾静脉注射Con A水溶液(2.5 mg·m L^(-1)),禁食不禁水8 h后取肝脏及脾脏,样品经处理供UPLC-Q-TOF/MS分析。本实验采用Micromass Marker Lynx软件进行色谱峰识别以及峰匹配,并采用主成分分析法(PCA)和正交偏最小二乘-判别分析法(OPLS-DA)对获得的多维复杂数据进行降维处理,并通过变量重要性投影(VIP)在肝脾中选取生物标志物及查找其代谢途径。结果从肝脾中共鉴定出谷胱甘肽、左旋肉碱等22个潜在生物标志物,并且与半胱氨酸和蛋氨酸代谢、柠檬酸循环及胆汁的分泌等代谢通路有关。结论刺五加多糖对免疫性肝损伤小鼠具有一定的保护作用,其作用机制可能与氧自由基和一些细胞因子等相关。

29例肝细胞肝癌患者的肿瘤组织代谢组学研究

目的:运用组织代谢组学方法,探讨肝细胞肝癌的发病机制与治疗策略。方法:采用GC-MS分析肝细胞肝癌(Hepatocellular Carcinoma,HCC)患者癌组织和癌旁组织中的内源性小分子代谢产物,进行单维和多维统计分析,寻找差异代谢物。通过KEGG和HMDB数据库检索和分析,获得相关代谢通路。结果:经PCA、PLS-DA分析得知癌组织和癌旁组织的代谢轮廓具有显著性差异,经OPLS-Loading plot分析寻找到25个差异性代谢产物,与之相关代谢通路有36条,多属于糖代谢、氨基酸代谢和线粒体转移代谢。25个差异物中ROC曲线下面积大于0.8的差异物有16个,经分析该16个差异物与三磷酸腺苷结合盒(ATP-binding Cassette,ABC)转运体代谢、半乳糖代谢、氨基糖和核苷酸代谢有关。结论:肝癌组织细胞中存在沃伯格效应(Warburg effect),即糖酵解异常增强,三羧酸循环减弱。线粒体转运功能异常、钴含量的升高,均可能与Warburg effect相关。能量代谢异常是肝癌的发病机制之一,阻断相关代谢通路有望成为靶向治疗的新途径。

肝细胞癌PD-1免疫治疗敏感性的靶基因分析

目的探究肝细胞癌(HCC)患者程序性死亡受体1(PD-1)免疫治疗敏感性的特征基因。方法通过加权基因共表达网络分析(WGCNA)及差异性分析筛选与PD-1免疫治疗敏感性相关数据集GSE202069及ERP117672中共同差异基因,将上述共同差异基因通过Lasso回归筛选PD-1免疫治疗敏感性的特征基因;通过GEPIA及Ualcan数据库预测特征基因在HCC的表达水平,通过实时荧光定量反转录聚合酶链反应(RT-qPCR)、蛋白质印迹(WB)及免疫组织化学染色(IHC)实验验证其表达。构建过表达3-羟基丁酸脱氢酶1(BDH1)细胞系,通过肿瘤功能学实验细胞计数试剂盒8(CCK-8)、平板克隆、EdU染色、细胞划痕、Transwell实验探究其对肿瘤细胞增殖、迁移及侵袭能力的影响。结果通过WGCNA及差异性分析筛选出两项数据集共有118个共同差异基因,Lasso回归筛选出共同差异基因中与PD-1免疫治疗敏感性特征基因(含黄素二甲基苯胺单加氧酶3(FMO3),过氧化物酶体反式-2-烯酰辅酶A还原酶(PECR),BDH1,溶质载体家族7成员1(SLC7A1),细胞色素b5 A型(CYB5A)和磷酸烯醇丙酮酸羧激酶1(PCK1));生存分析表明BDH1与HCC最为相关(总体生存率:P<0.001;复发:P=0.007)。GEPIA及Ualcan数据库分析显示BDH1在HCC组织中低表达,通过RT-qPCR、WB及IHC对本中心收集的HCC样本进一步证实BDH1在HCC中低表达。CCK-8、平板克隆、EdU染色、细胞划痕、Transwell实验结果显示,与Hep3B pCDH组相比,过表达BDH1使得HCC细胞吸光度降低(t=4.766,P<0.01),克隆形成数目减少(t=16.02,P<0.0001),增殖细胞比例下降(t=23.13,P<0.0001),细胞迁移率减慢(t=25.28,P<0.0001),穿过小室数目减少(t=10.78,P=0.004)。结论BDH1是观察HCC患者PD-1免疫治疗敏感性的特征基因;BDH1具有抑制HCC细胞增殖、迁移和侵袭的能力。

影像学技术与免疫学技术在评估肝泡型包虫病病灶代谢活性中的现状研究

肝泡型包虫病(HAE)是一种寄生性人畜共患病。此病患者若未接受系统性治疗或治疗不及时,可危及其生命。HAE患者在接受治疗后其病情的复发率较高。临床上在对此病患者进行治疗的过程中,应采取有效的手段监测其病灶的代谢活性,以便于调整治疗方案,提高其疗效,降低其病情的复发率。本文主要是论述用影像学技术与免疫学技术评估HAE病灶代谢活性的研究现状。

代谢组学技术在筛选肝癌标志物中的应用

肝癌的早期诊断是提高患者生存率的一项重要措施。代谢组学通过对某些代谢产物进行"全景式"分析,并与正常人的代谢产物比较,筛查肝癌潜在的生物标志物,可能为一种较好的肝癌诊断方法。本文就近年来代谢组学技术在筛选肝癌标志物中的应用作一综述。

肿瘤免疫学的热点与潜在方向——第98届美国免疫学年会相关报道之启示

第98届美国免疫学年会于2011年5月13-17日在美国旧金山市成功召开,年会在抗体、B细胞免疫、疫苗、肿瘤免疫学、免疫细胞代谢学等方面进行了重点研讨。聚焦年会上肿瘤免疫学相关的报道,其热点集中在肿瘤免疫抑制、肿瘤免疫治疗新的理念及exosome在肿瘤免疫中的两面性等方面。综观年会众多热门话题,免疫细胞代谢学极有可能成为今后免疫学发展的重要方向;与之相呼应,肿瘤细胞的代谢改变被认为是肿瘤的第8大特征,可能是未来肿瘤免疫学研究的潜在方向。

肝细胞移植的免疫学研究现况

肝细胞移植为急慢性肝功能衰竭和肝脏相关遗传代谢疾病提供了一种新的治疗途径。近年来该技术取得了重大的进展,在临床和基础研究中广泛应用。但移植肝细胞在受体内的免疫排斥问题仍是影响该技术进一步发展的重要原因。本文就目前对肝细胞移植免疫排斥反应发生机制及防止对策的研究现况进行综述。

基于多种判别分析的原发性肝肿瘤代谢谱研究

目的应用判别分析方法研究临床样本,比较不同的判别方法对疾病代谢谱的分类性能。方法应用线性判别分析(LDA)、二次判别分析(QDA)和逻辑判别分析(LogDA)对临床109例健康人、87例良性肝肿瘤患者以及31例恶性肝肿瘤患者的血清样本代谢谱数据进行分析;从健康对照和原发性肝肿瘤(包括良性和恶性)以及良性和恶性肝肿瘤两个类别,对3种方法的诊断性能进行比较。结果对于临床代谢谱数据,3种方法对正常与肝肿瘤的区分效果均优于恶性肿瘤与良性肿瘤的区分。QDA的总体性能优于LDA和LogDA,对正常和肝肿瘤的诊断精密度达到87.67%,对良性和恶性肝肿瘤的诊断精密度达到67.80%。结论 LDA、QDA和LogDA 3种方法中,QDA最适于原发性肝肿瘤代谢谱数据的分析。

肝外胆管癌围手术期胆汁代谢组学变化与预后分析

目的根据围手术期胆汁代谢组学差异,筛选出与肝外胆管癌根治性切除术后相关的胆汁分子标志物。方法选择27例肝外胆管癌患者(19例肝门部胆管癌,8例远端胆管癌),分别收集其外科切除术前、切除术后第1和第7天的胆汁。采用基于气相色谱-质谱联用(GC-MS)的代谢组学方法,分别对比分析术后第1天与术前、术后第7天与术前胆汁中的差异代谢物,并对共同的差异代谢物与患者预后进行相关性分析。结果术后第1天与术前相比,胆汁内有5种代谢物升高,无代谢物降低;术后第7天与术前相比,胆汁内有3种代谢物升高,3种代谢物降低。以上两组差异代谢物中,有2种相同物质:苯甲酸和甲基丙二酸。术后第7天与术前比较苯甲酸升高≥2倍的患者1年内复发率低于升高<2倍的患者(P=0.04),而手术前后甲基丙二酸的变化与术后1年内早期复发无相关性。通过对苯甲酸在术后第7天较术前变化倍数与CA19-9分级、术前年龄分级、术后TNM病理分期进行双变量相关性分析,提示均无明显相关性(P>0.05)。结论围手术期胆汁内苯甲酸代谢水平的变化程度有助于预测肝外胆管癌患者根治性切除术后早期复发。

代谢组学在肝细胞肝癌标志物中的研究进展

肝细胞肝癌(HCC)发病率、死亡率高,预后极差,临床监测和早期诊断是降低其死亡率的主要方法。由于早期无症状,发现往往已是晚期,现有的肿瘤标志物尚无法满足临床的要求。代谢组学致力于研究生物体系受刺激产生的所有代谢产物的变化,它的提出为发现潜在HCC肿瘤标志物提供新思路。已有学者利用色谱、质谱、磁共振等技术平台从患者血液、尿液、粪便、组织等标本中寻找代谢产物差异,发现潜在的HCC标志物,并探讨其诊断价值。本文就近年来应用代谢组学研究HCC标志物的相关进展作一综述。

FasL表达在肝癌肿瘤免疫逃避中的意义

目的 :探讨肝癌中FasL表达在肿瘤免疫逃避中的意义。方法 :采用免疫组织化学法和脱氧核糖核酸末端转移酶介导的缺口末端标记 (TUNEL)技术 ,对 4 1例肝癌组织中FasL表达及其肿瘤浸润淋巴细胞凋亡的关系进行研究。结果 :肝癌FasL表达阳性率为 4 1 4 6% ,FasL阳性组肝癌肿瘤浸润淋巴细胞 (tumorinfiltratinglymphocytes ,TIL )凋亡指数约是FasL阴性组肝癌的 2倍 ,两组差异有显著意义。结论

移植肿瘤学与抗肿瘤效应免疫抑制剂

近几年,器官移植学与肿瘤学在临床实践中不断交汇与融合,并催生了移植肿瘤学概念的确立与衍生[1-5]。肝移植治疗肝细胞肝癌的成功实践与核心问题是移植肿瘤学的内在动力或原因。其成功实践,促使肝移植治疗各种难治性肝脏恶性肿瘤的移植肿瘤学技术改进。而核心问题--肿瘤复发,促使免疫抑制背景下肿瘤演进机制的移植肿瘤学的学术深化。实践证实,肝移植是治愈肝细胞癌的主要手段,肿瘤复发是影响肝癌肝移植远期疗效的首要原因[6-7]。

免疫应激介导的朝藿定B协同补骨脂甲素导致特异质肝损伤的拟靶向代谢组学研究

补骨脂和淫羊藿是临床常用药对,既往研究显示两药可能引起特异质肝损伤,然而其物质基础以及发生机制尚不清楚。该研究基于肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)介导的免疫应激小鼠模型,以补骨脂及淫羊藿中2个主要化学成分补骨脂甲素和朝藿定B为研究对象,通过检测细胞上清液中乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)释放量和小鼠血浆中丙氨酸氨基转氨酶(alanine aminotransferase,ALT)、天冬氨酸氨基转氨酶(aspartate transaminase,AST)含量,苏木精-伊红(hematoxylin-eosin,HE)染色观察肝脏病理学变化情况,分别在细胞及动物水平评估补骨脂甲素联合朝藿定B引起肝损伤的程度。借助拟靶向代谢组学技术和多元统计分析方法,考察给药前后小鼠血浆中内源性代谢物的影响,筛选差异代谢标志物,并进行京都基因与基因组百科全书(Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes,KEGG)富集通路分析。结果表明,在细胞水平,使用TNF-α刺激2 h后,相较于正常组及单独给药组,补骨脂甲素可以使HepG2细胞中LDH释放量显著增加;补骨脂甲素联合朝藿定B后,LDH释放量在原来基础上进一步显著增加。在动物水平,对于正常小鼠,单独或联合补骨脂甲素均不引起肝损伤;对于免疫应激模型小鼠,单独给药补骨脂甲素或者朝藿定B均可引起肝损伤,补骨脂甲素或者朝霍定B联合给药时肝损伤进一步增强,表现为小鼠血浆中ALT、AST含量显著升高,并伴随肝脏组织大量炎性免疫细胞浸润。基于拟靶向代谢组学技术,筛选得到7个共有差异代谢物,根据受试者操作特性(receiver operating characteristic,ROC)曲线分析结果,其中曲线下面积(area under curve,AUC)大于0.9的包括D-氨基葡萄糖6-磷酸、N1-甲基-2-吡咯-5-甲酰胺、17β-硝基-5a-雄甾烷、葛花苷元-7-O-葡萄糖醛酸苷、N-(1-脱氧-1-果糖基)缬氨酸。因此,这5个差异代谢物可能是潜在的生物标志物。此外,烟酸盐和烟酰胺代谢及亚油酸代谢通路可能是补骨脂甲素联合朝藿定B诱导特异质肝损伤的关键代谢通路。综上,在TNF-α介导免疫应激的条件下,朝藿定B联合补骨脂甲素导致机体代谢扰动可能是二者协同导致特异质性药物性肝损伤(idiosyncratic drug-induced liver injury,IDILI)的重要机制。

化学发光免疫分析法与酶联免疫吸附试验应用于乙型肝炎病毒血清学检验中的有效性评价

乙型肝炎是我国常见传染病之一,此病症主要是因乙型肝炎病毒(HBV)感染所致,以恶心乏力、头晕畏食、肝脾肿大、肝功能异常为主要症状表现,部分患者伴发黄疸、发热症状[1]。少数HBV携带者临床症状表现不明显,如治疗不及时,将导致病情持续发展为肝硬化或肝脏恶性肿瘤,甚至迅速发展为重型肝炎,严重威胁患者的生命健康安全[2]。HBV传播包括母婴、血液、医源性传染、精液、密切接触等不同途径。在日常生活中,乙型肝炎患者往往需面对健康人群的歧视,对患者的身心健康造成较大的威胁。如想对HBV传播和扩散、病毒感染率进行有效控制,需对HBV的诊断和有效检测予以充分重视[3]。

肝细胞癌基因组学免疫分型的鉴定及临床意义

目的基于基因组学分析建立肝细胞癌免疫分型,并进一步探索其临床应用价值。方法分别从GEO和TCGA收集基因表达谱和相应的临床信息。cBioPortal用于可视化和比较基因改变。一致性聚类分析用于确定免疫亚型。结果肝细胞癌患者被分为两种免疫亚型,具有不同的分子、细胞和临床特征。C1肿瘤患者的生存率低于C2肿瘤患者。此外,C1免疫亚型中观察到免疫检查点基因和HLA的高表达。结论肝细胞癌免疫分型能够判断患者的预后,C1型患者的预后较差,并具有较差的免疫原性和抗肿瘤活性。

肿瘤-睾丸抗原联蛋白α2在肝细胞癌中的表达及临床意义的多组学研究

目的:借助多组学策略观察肿瘤-睾丸抗原联蛋白α2(catenin alpha 2,CTNNA2)在肝细胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC)中的表达情况,探讨其在HCC免疫治疗中的潜在价值及临床意义。方法:分析CTNNA2在159例乙型肝炎病毒(HBV)相关HCC和配对癌旁组织中,mRNA和蛋白的表达水平及差异,并进一步采用免疫蛋白质组学检测与主要组织相容性复合体Ⅰ(major histocompatibility complex,MHC-Ⅰ)结合的CTNNA2抗原多肽。采用反转录多聚酶链反应(RT-PCR)验证33对HCC和癌旁组织cDNA及12种HCC细胞株中CTNNA2的表达情况,同时探讨CTNNA2参与肿瘤调控的可能机制。结果:转录组测序技术(RNA sequencing,RNA-Seq)定量转录组学和串联质谱标签(tandem mass tag,TMT)定量蛋白质组学结果均提示,CTNNA2在HCC组织中显著高表达。RNA-seq结果提示,CTNNA2表达阳性率为80.5%,较癌旁表达高11.24倍(P<0.001),TMT定量蛋白组学显示,HCC癌组织中CTNNA2表达阳性率为54.7%,较癌旁表达高2.66倍(P<0.001)。经免疫蛋白质组学检测,本研究发现30种可能与MHC-Ⅰ结合的CTNNA2抗原多肽。结论:多组学研究结果提示,CTNNA2在HCC中高表达,CTNNA2可能是新的肝癌疫苗靶分子。

肝癌(H_(22))固化瘤苗的免疫实验研究

应用高温固化结合手术切除治疗肝癌曾作介绍，随访发现温免疫远位效应。为研究此种治疗方法与免疫的关系，应用小鼠移植性肝癌Ｈ２２在６５℃／６５ｍｉｎ射频条件下制备成固化瘤苗。用该瘤苗免疫小鼠（ＢＡＬＢ／Ｃ）发现能特异性主动免疫抗同源Ｈ２２３×１０＾８癌细胞的攻击，抗癌率为８６．６％，未出现瘤苗促癌生长现象。与对照组鼠比较，具有显著细胞免疫效应。认为固化瘤苗的实验有临床应用研究价值。