抗肝癌重组免疫毒素对荷人肝癌裸鼠移植瘤生长的抑制作用

目的:观察二硫键稳定人源化抗肝癌单链抗体(humanized disulfide stabilization single chain antibody,hdsFv)融合牛蛙核糖核酸酶(rana catesbeiana ribonuclease,RC-RNase)重组免疫毒素(hdsFv-RC-RN-ase)对荷人肝癌裸鼠移植瘤生长的抑制作用。方法:将人肝癌细胞系SMMC-7721细胞接种于裸鼠皮下,建立荷人肝癌裸鼠移植瘤动物模型,随机分为3组,分别经尾静脉注射给予生理盐水、盐酸多柔比星和抗肝癌hdsFv-RC-RNase治疗,疗程为2周。通过测量各实验组裸鼠肿瘤体积及瘤质量变化,绘制肿瘤生长曲线并计算抑瘤率。治疗结束后取各组裸鼠肿瘤组织及重要器官HE染色,光学显微镜下观察。结果:治疗后hdsFv-RC-RNase组与空白对照组相比较,荷人肝癌裸鼠移植瘤生长速度显著减慢,肿瘤体积和瘤质量明显减小,P<0·01;同样,与盐酸多柔比星组相比较差异有统计学意义,P<0·01。hdsFv-RC-RNase组和盐酸多柔比星组抑瘤率分别为(78·9±4·1)%和(70·3±6·6)%,P<0·01。光学显微镜下观察hdsFv-RC-RNase组和盐酸多柔比星组肿瘤组织出现明显坏死,尤以前者更为显著。各实验组裸鼠重要器官未见明显异常。结论:抗肝癌hdsFv-RC-RNase重组免疫毒素对荷人肝癌裸鼠移植瘤生长具有良好的抑制作用。

肝细胞癌中VEGF,HPA的表达与肿瘤微血管密度的关系及意义

目的:探讨血管内皮生长因子(VEGF),乙酰肝素酶(HPA)在肝细胞癌(HCC)组织中的表达与肿瘤微血管密度(MVD)的关系及其意义。方法:应用免疫组织化学二步法联合检测72例HCC,62例肝硬化和23例正常肝组织中VEGF,HPA的表达和进行MVD计数,结合临床病理资料进行分析。结果: HCC中VEGF,HPA的表达率均明显高于肝硬化及正常肝,HCC中MVD值也显著高于肝硬化及正常肝。VEGF,HPA的表达率在TNMⅠⅡ期、无转移复发组、AFP<400μg/L组、无门脉癌栓组均明显低于ⅢⅣ期、转移复发组、AFP≥400μg/L组、有门脉癌栓组。在TNMⅠⅡ期、无转移复发组、AFP<400μg/L组、无门脉癌栓、单个肿瘤结节以及肿瘤直径<5cm组MVD计数亦明显低于ⅢⅣ期、转移复发组、AFP≥400μg/L组、有门脉癌栓、多个肿瘤结节以及肿瘤直径≥5cm组。VEGF,HPA的表达率与MVD值三者两两之间显示明显正相关。结论: VEGF,HPA在促进肿瘤微血管生成中起重要的作用,联合检测VEGF,HPA,CD34在肝癌中的表达,对肝癌患者的预后评估有一定的辅助意义。

高强度聚焦超声治疗肝癌后免疫功能的变化

目的了解高强度超声聚焦热疗(HIFU)治疗后原发性肝癌患者的免疫功能变化情况。方法应用FEP BY01型肿瘤超声治疗机对42例原发性肝癌患者进行治疗。分别取HIFU治疗前和HIFU治疗后4周外周血10ml,检测T细胞亚群:CD4、CD8、CD4/CD8;Th细胞因子:IFNγ、IL2、IL4、Il10。结果42例肝癌患者治疗前和治疗后CD4、CD8T细胞百分数、CD4/CD8比值分别为(29.5±4.8)%和(38.2±5.1)%(P<0.05);30.2±6.4%和24.4±3.7%(P<0.05);0.9±0.3和1.7±0.2(P<0.01);治疗前和治疗后IL2、IFNγ、IL4、IL10含量(pg/ml)分别为93.5±28.3和110.5±24.2(P<0.05);73.2±18.6和92.8±20.1(P<0.05);82.3±14.2和60.2±11.3(P<0.01);74.8±21.9和56.2±19.1(P<0.01)。结论经HIFU治疗后肝癌患者的CD4T细胞百分数和CD4/CD8比值明显升高,CD8T细胞百分数下降;IL2和IFNγ水平明显升高,而IL4和IL10水平明显下降。应用HIFU技术治疗原发性肝癌可以改善患者体内的细胞免疫功能和Th1向Th2漂移的状态。

β-榄香烯对脂质体瘤苗抗小鼠H_(22)肝癌的免疫增强作用

目的:制备榄香烯脂质体瘤苗,观察对抗小鼠H22肝癌作用,寻找有效的抗肝癌生物疗法。方法:用改进的机械分散法制备β-榄香烯修饰脂质体瘤苗,使磷脂酰胆碱∶胆固醇∶十八烷氨∶β-榄香烯摩尔比为4∶4∶1∶1.5,并通过腹腔接种将脂质体包裹的H22抗原(LA g组)及脂质体共包裹β-榄香烯与H22抗原的制剂(LEA g组)分别免疫荷瘤小鼠,观察小鼠的生存期,M TT法测定淋巴细胞对H22肝癌细胞的杀伤作用。结果:LEA g组的生存期和淋巴细胞毒活性均优于LA g组(P<0.05)。结论:β-榄香烯可增强脂质体瘤苗的抗肝癌免疫效应。

原发性肝癌的免疫状态与预后的相关性分析

目的 :探讨原发性肝细胞癌 (hepato cellularcarcinoma ,HCC )的细胞免疫学状态及其与预后的相关性。方法 :应用流式细胞仪和ELISA方法测定 3 5例HCC患者和 2 0位正常献血员的CD+3 、CD+4、CD+8、CD+4/CD+8、NK细胞和AFP。结果 :1)HCC患者CD+3 、CD+4、CD+4/CD+8、NK细胞活性明显低于正常人 ,P <0 0 1,CD+8高于正常人 ,P <0 0 5 ;2 ) 3 5例中伴有门静脉癌栓或肝内转移者 10例 ,T细胞亚群及NK细胞活性明显低于不伴有门静脉癌栓者 2 5例 ,P <0 0 5 ;3 )机体的细胞免疫学状态与AFP无明显相关性。结论 :HCC患者的细胞免疫功能处于抑制状态 ,且与肿瘤细胞的侵袭活性有关。

微波制备IFN-γ处理的小鼠H22肝细胞疫苗免疫对小鼠腹腔巨噬细胞功能的影响

目的观察H22肝癌肿瘤细胞疫苗(MITTV-H22)免疫在小鼠抗肿瘤免疫中的作用。方法用IFN-γ和微波处理H22肿瘤细胞,制备MITTV-H22,用MITTV-H22免疫小鼠3次,末次免疫后第7天流式细胞仪检测腹腔巨噬细胞表面抗原MHC-Ⅱ表达,吉姆萨染色测定腹腔巨噬细胞吞噬活性,流式细胞仪检测脾淋巴细胞CD69的表达和细胞周期。结果实验组MHC-Ⅱ表达率、巨噬细胞吞噬率、脾淋巴细胞CD69表达率、脾淋巴细胞S+G2-M期细胞比例均明显高于对照组,P均=0.000。结论 MITTV-H22免疫接种可以提高巨噬细胞的功能,使其更好的在抗肿瘤免疫中发挥作用。

IL-1β反义RNA在肝癌细胞中对NK细胞固有免疫杀伤的影响

目的:探讨将所获IL-1β反义RNA真核表达载体导入H epG 2细胞后,肝癌细胞对NK细胞杀伤敏感性的变化。方法:转染后用RT-PCR法检测反义基因片段的表达,M TT比色法分析NK-92细胞杀伤活性的变化。结果:转染后反义RNA均得到高水平表达,并使NK细胞的杀伤活性提高约15%。结论:IL-1β反义RNA可在一定程度上恢复肝癌细胞对NK细胞的杀伤敏感性。

肝动脉灌注(TACE)术后使用小牛脾提取物对晚期肝癌患者免疫功能影响研究

目的:探讨小牛脾提取物辅助肝动脉灌注(TACE)治疗晚期原发性肝癌及对患者免疫功能的影响。方法:选择晚期原发性肝癌患者150例将其随机分成两组各75例。对照组接受肝动脉灌注化疗栓塞治疗,术后配合护肝等一系列对症处理,观察组接受肝动脉灌注化疗栓塞治疗的同时使用小牛脾提取物辅助治疗。结果:观察组的CD3+、CD4+、CD4+/CD8+以及NK细胞水平均高于对照组,差异均有统计学意义;观察组VEGF、APF、ICAM-1均低于对照组VEGF、APF、ICAM-1,差异均有统计学意义;观察组躯体功能分、认知功能分、整体生活质量分、角色功能分、情绪功能分均高于对照组躯体功能分、认知功能分、整体生活质量分、角色功能分、情绪功能分,差异均有统计学意义。观察组总有效率93.3%高于对照组总有效率80.0%,差异具有统计学意义。结论:小牛脾提取物辅助肝动脉灌注治疗晚期原发性肝癌可以增强患者的免疫功能,显著提高患者的生活质量。

微波消融联合DC-CIK细胞免疫序贯治疗原发性肝癌的近远期效果分析

【目的】探讨微波消融联合DC-CIK细胞免疫序贯治疗原发性肝癌的近远期效果。【方法】本院收治的68例晚期原发性肝癌患者,随机分为两组,每组34例。对照组采用微波消融治疗,观察组采用微波消融联合DC-CIK细胞免疫序贯治疗。比较两组患者的近期疗效、血清学指标、免疫功能、远期生存率以及不良反应发生情况。【结果】观察组疾病控制率高于对照组(88.24%vs 67.65%,P<0.05)。治疗7 d后,两组血清甲胎蛋白(AFP)、血管内皮生长因子(VEGF)、碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)水平均较治疗前均降低(P<0.05),且观察组明显低于对照组(P<0.05)。对照组治疗前后CD3、CD3/CD4、CD3/CD8、CD3/CD56、CD4/CD8的比值无明显变化(P>0.05),而观察组治疗后各项指标较治疗前显著升高(P<0.05),且与对照组治疗后比较差异有显著性(P<0.05)。两组半年生存率相比较差异无显著性(P>0.05),观察组1年、3年生存率均高于对照组(P<0.05)。两组不良反应发生率比较差异无显著性(P>0.05)。【结论】微波消融联合DC-CIK细胞免疫序贯治疗原发性肝癌的效果较好,能够改善患者免疫功能,延长远期生存,且不良反应较少。

射频消融联合DC-CIK免疫治疗中晚期原发性肝癌的临床效果和安全性研究

【目的】探讨射频消融(RFA)联合树突状细胞-细胞因子诱导的杀伤细胞(DC-CIK)免疫治疗中晚期原发性肝癌患者的效果和安全性。【方法】选取2018年1月至2019年6月本院收治的86例中晚期原发性肝癌患者,采用随机数表法将其分为对照组(采用RFA治疗)和观察组(采用RFA联合DC-CIK免疫治疗),每组各43例。观察两组治疗前后血清学指标、免疫功能、肝功能以及患者存活情况,并比较两组近期疗效以及治疗后不良反应发生率。【结果】观察组患者疾病控制率为79.07%(34/43).显著高于对照组的41.86%(18/43),差异有统计学意义(P<0.05)。治疗后,观察组患者血清甲胎蛋白(AFP)、癌胚抗原(CEA)、血管内皮生长因子(VEGF)水平均显著下降(P<0.05),且低于对照组(P<0.05);而观察组血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天冬氨酸氨基转移酶(AST)、总胆红素(TBIL)水平较治疗前升高,且低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。观察组外周血T细胞亚群中CD3T、CD4^(+)、CD4^(+)/CD8T较治疗前显著升高,且显著高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。观察组不良反应发生率为27.91%(12/43),高于对照组的23.26%(10/43).差异无统计学意义(P>0.05)。观察组1年、3年存活率均显著高于对照组,差异均有统计学意义(均P<0.05)。【结论】RFA联合DC-CIK免疫治疗中晚期原发性肝癌患者疗效显著,可降低血清肿瘤标志物水平,提高免疫功能.降低肝功能损害程度.延长存活率,且安全性较好,值得临床推广应用。

白花蛇舌草对小鼠活体腹水H22肝癌细胞及T细胞的影响

【目的】观察白花蛇舌草对小鼠腹水H22肝癌细胞形态学及腹水CD4+、CD8+T细胞表达的影响。【方法】将SPF级昆明种小鼠随机分成4组,每组10只,分别为模型组、白花蛇舌草组(剂量为25 g/kg)、党参对照组(25 g/kg)、热休克处理组;均采用活体腹水H22肝癌细胞腹腔移植法复制模型;采用涂片、瑞氏—姬姆萨染色及免疫组织化学标记方法观察各组荷瘤小鼠腹水H22肝癌细胞形态学变化及腹水CD4+、CD8+T细胞的表达。【结果】白花蛇舌草组及热休克处理组小鼠活体腹水H22肝癌细胞变形较为严重,胞膜不完整、发泡;部分细胞核见偏移或固缩。白花蛇舌草组腹水CD4+及CD8+T细胞表达均呈增高趋势,党参对照组及热休克处理组分别以CD4+和CD8+T细胞表达为主。【结论】白花蛇舌草能一定程度抑杀小鼠活体腹水H 22肝癌细胞,其机理可能与提高荷瘤小鼠的T细胞免疫功能及具有一定的细胞毒作用有关。

白藜芦醇对裸鼠移植性肝癌的抑制作用

目的:探讨白藜芦醇对裸鼠移植性肝癌的抑制作用。方法:利用HepG2细胞裸鼠移植瘤模型,研究白藜芦醇的体内抑瘤作用以及其对移植瘤微血管密度的影响。结果:白藜芦醇治疗组能不同程度抑制裸鼠肝脏移植瘤的生长,Res腹腔注射2周后,50mg/kgRes处理组瘤体显著小于生理盐水(NS)组和0.1%DMSO组且无明显的毒性反应;Res50mg/kg处理组MVD值(18.5±3.2)与对照组的MVD值(44.2±4.1)相比明显降低,差异有统计学意义。结论:Res可抑制人肝癌HepG2裸鼠移植瘤生长,降低移植瘤MVD,从而抑制肝癌的侵袭转移,对裸鼠的主要脏器无明显毒副作用。

uPA在肝癌细胞株及肝癌组织中的表达及意义

目的:从mRNA水平探讨uPA在不同转移潜能肝癌及恶性黑色素瘤细胞株中的表达,从蛋白水平探讨uPA在肝癌组织中的代表表达及其与肝癌转移的关系。方法:检测uPA在不同转移潜能人肝癌及恶性黑色素瘤细胞株中的mRNA表达,用免疫组织化学方法检测uPA在肝癌组织中的蛋白表达。结果:uPAmRNA在高转移潜能肝癌和恶性黑色素瘤细胞株呈高表达,在相应低潜能转移细胞株呈低表达;uPA蛋白在肝癌组织中的表达明显高于癌旁组织和正常对照组,在有转移及静脉癌栓形成的肝癌组织阳性表达高于无转移及无癌栓者,癌巢边缘的癌细胞表达强于癌巢中央,血管内癌栓呈强阳性表达。结论:uPA在肝癌的的生长、侵袭和转移中起重要作用,可能作为治疗的操作、预防转移复发的对象。

原发性肝癌组织中SSTR亚型1-3mRNA的表达

目的了解肝细胞肝癌组织中生长抑素受体(SSTR)亚型1-3基因的表达情况。方法采用RT-PCR法检测了48例肝细胞肝癌患者癌组织和癌旁组织中生长抑素受体亚型1-3mRNA的表达。结果48例肝细胞肝癌患者的癌组织和癌旁组织中SSTR1mRNA表达的阳性率分别为18.7%(9/48)和31.3%(16/48);SSTR2mRNA表达的阳性率分别为91.6%(44/48)和93.7%(45/48);SSTR3mRNA表达的阳性率分别为20.8%(11/48)和50.0%(24/48)。结论肝细胞肝癌组织中大多数有一种以上生长抑素受体亚型的表达,其中SSTR2为主要表达亚型。

HIFU治疗后肿瘤抗原对树突状细胞的活化及其抗肿瘤效应

目的:探讨HIFU治疗小鼠H22抑制性肝癌后产生的肿瘤抗原对机体抗肿瘤免疫功能增强的机制。方法:正常小鼠骨髓中提取骨髓细胞,在rmIL-4、rmGM-CSF条件下培养7 d,制备小鼠骨髓树突状细胞,用HIFU治疗小鼠移植性肝癌后产生的肿瘤抗原活化树突状细胞,再用活化后的树突状细胞激活T淋巴细胞为细胞毒性T细胞,用MTT法检测CTL在体外特异性杀伤肿瘤靶细胞的能力。结果:B16肿瘤HSP70-肽复合物组和H22肿瘤HSP70-肽复合物组的脾淋巴细胞的增殖率均高于阴性对照组、H22肿瘤粗提物组和HIFU后H22肿瘤粗提物组,P<0.001;但两组之间差异无统计学意义,P>0.05。H22肿瘤HSP70-肽复合物组CTL对H22肿瘤细胞的杀伤率为70.0%,明显高于阴性对照组、H22肿瘤粗提物组和HIFU后H22肿瘤粗提物组(P<0.001),但对非靶细胞B16肿瘤的杀伤率与上述各组的差异无统计学意义;B16肿瘤HSP70-肽复合物组CTL对B16肿瘤细胞的杀伤率为78.5%,对H22细胞的杀伤率为21.4%,表明CTL对肿瘤细胞的杀伤作用具有特异性。结论:HIFU治疗后坏死肿瘤组织中的HSP70-肽复合物作为肿瘤疫苗,通过活化DC和刺激T淋巴细胞增殖为CTL,发挥特异性抗肿瘤免疫功能。

TIG2在原发性肝癌中的表达及意义

目的:研究TIG2(Tazarotene induced gene-2)在原发性肝癌中的表达及意义。方法:用免疫组化和原位杂交的方法检测正常肝组织、病毒性肝炎组织、肝硬化组织原发性肝癌组织细胞中TIG2的表达变化。结果:正常肝组织、病毒性肝炎组织、肝硬化组织中TIG2蛋白和mRNA呈高表达,而肝癌组织中低表达或沉默。结论:TIG2可能参与肝癌的发生和发展,可能是一种新的肝癌肿瘤抑制基因。

HIF-1α在肝癌组织中表达及临床意义

目的:探讨缺氧诱导因子-1α(H IF-1α)在肝癌组织中表达的意义。方法:采用免疫组化S-P法检测75例石蜡包埋的人体肝癌组织(术前均未行放疗及化疗)H IF-1α的表达。结果:H IF-1α主要表达于肝癌细胞浆,部分于胞核,肿瘤间质细胞也可见少量表达。肿瘤坏死区周围及肿瘤浸润边缘部的癌细胞H IF-1α表达明显增多。H IF-1α的表达强度与肝癌细胞恶性程度、淋巴结转移及预后有关,而与病人年龄、性别及原发肿瘤大小均无关。其阳性强度随癌细胞分化程度的降低、淋巴结转移、术后生存期短而增高。结论:H IF-1α可作为评估肝癌淋巴结转移和预后的重要指标之一。

肝癌抗原肽(EPVTKAEML)与人HSP70融合基因的构建及原核表达

目的:构建及原核表达肝癌抗原肽(EPVTKAEML)与人热休克蛋白70(HSP70)的融合基因。方法:采用加端PCR方法,将EPVTKAEML的基因序列融合到人HSP70基因的3′端;将融合基因克隆入原核表达载体pET-28a(+)中,构建重组质粒pET-28a(+)/EPVTKAEML-HSP70。经限制性内切酶BamHI、XhoI双酶切鉴定及序列测定后,转化E.coliBL21(DE3),经IPTG诱导表达融合蛋白,SDS-PAGE检测表达结果。结果:应用加端PCR方法扩增出约2.0kb的目的片段,序列测定结果证实,EPVTKAEML的基因序列成功地融合到人HSP70基因的3′端。经BamHI、XhoI酶切鉴定证实,融合基因成功地克隆到原核表达载体pET-28a(+)上;转入重组质粒的E.coliBL21(DE3)经IPTG诱导后,SDS-PAGE分析发现在相对分子质量(Mr)约72000处有表达量明显增多的蛋白条带。结论:成功地构建并表达了肝癌抗原肽(EPVT-KAEML)与人HSP70的融合基因。

抑癌基因PTEN在肝细胞肝癌中的表达及意义

目的:探讨肝细胞肝癌中抑癌基因PTEN的表达情况及临床病理意义。方法:应用免疫组织化学(S-P法)技术检测了42例肝细胞肝癌及其相应的癌旁组织中PTEN和的表达情况。结果:42例癌旁组织PTEN全部阳性表达,肝细胞肝癌组织中PTEN阳性表达率47.6%。42例肝细胞肝癌组织中高分化癌的阳性率为68.7%,低分化癌阳性率38.5%,PTEN蛋白在肝癌组织中的阳性表达与组织分化程度明显相关。结论:肝细胞肝癌组织中存在较高比例的PTEN蛋白阴性表达,说明在肝细胞肝癌的发生发展中PTEN基因失活起着重要作用,它的阳性表达可能有一定的预后意义。