人肝脏再生增强因子cDNA的克隆、表达及产物活性鉴定

目的通过对人源肝脏再生增强因子穴Augmenterofliverregeneration熏ALR雪cDNA进行克隆、表达及表达产物活性的初步鉴定,为基因工程大量制备重组hALR穴humanAugmenterofliverregeneration熏ALR雪及其临床应用提供资料。方法提取人胎肝总RNA,通过RT-PCR获得全长hALRcDNA,构建原核融合表达质粒pGEX-4T-3/hALRcDNA,转化大肠杆菌诱导表达融合蛋白。MTT法及小鼠CCl4肝衰竭模型检测重组hALR的生物学活性。结果测序证实克隆得到的hALR序列完全正确。SDS-PAGE检测表达产物分子量约41kD,与融合蛋白GST-hALR的预期分子量相吻合。MTT比色结果为21.9ng/mlhALR对Hep3B细胞系的促增殖作用显著高于对照组(P<0.05)。体内活性检测结果表明hALR能显著提高CCl4诱导肝功能衰竭动物的存活率(χ2=3.923熏P<0.05)。结论重组hALR的制备过程简单易行,可通过基因工程方法大量生产。活性检测表明hALR具有促肝细胞增殖和肝功能修复的作用。

肝脏再生增强因子cDNA的克隆及稳定细胞株的建立

目的通过对人源肝脏再生增强因子(ALR)cDNA进行克隆及活性的初步鉴定,为基因工程制备重组人肝脏ALR(hALR)提供资料。方法提取人胎肝总RNA,通过RT-PCR获得hALR cDNA,构建真核表达质粒pcDNA3.1-ALR,转化大肠杆菌扩增质粒。将质粒pcDNA3.1与pcDNA3.1-ALR分别转染HepG2细胞,G418筛选建立稳定细胞株,MTT法检测hALR的生物学活性。结果测序证实克隆得到的hALR序列完全正确。MTT比色结果,转染hALR的细胞增殖高于转染空质粒和未转染细胞(P<0.05)。结论hALR具有促肝细胞增殖的作用。