药物预处理在肝脏缺血再灌注损伤中的保护作用研究进展

肝部分切除术和肝移植术是治疗肝脏良恶性肿瘤及终末期肝病的重要方法。肝脏缺血再灌注损伤(HIRI)则是此两类手术中不可避免的难题之一,直接影响手术效果、术后并发症及预后。大量基础及临床研究提示,预处理可以有效减轻HIRI。其中,经典缺血预处理效果确切,但临床实际应用受限;远程缺血预处理临床效果仍存争议;而药物预处理受到更多重视,包括减轻炎症反应或氧化应激反应的药物、抑制特异性酶的药物、改善肝脏微循环的药物、拮抗Ca^(2+)超载的药物等。目前最具临床应用前景的药物包括甲基强的松龙、右美托咪定、乌司他丁、七氟醚、褪黑素等。联合用药可能具有更大潜在价值,但需要更多临床高等级证据支持。本文对临床可减轻HIRI的药物预处理方法进行综述,为接受肝部分切除术或肝移植术患者的早期肝脏功能恢复和远期预后改善提供证据。

线粒体自噬在肝脏缺血再灌注损伤中的作用

肝脏缺血再灌注损伤(HIRI)时,线粒体自噬可通过PINK1-Parkin、线粒体自噬受体等途径激活,并与线粒体动态平衡调节蛋白的表达密切相关。线粒体自噬是一把双刃剑,适度的线粒体自噬通过减轻氧化应激和维持线粒体稳态,起到减少肝细胞凋亡和坏死,抑制炎性反应,减轻HIRI的作用;而过度的线粒体自噬会加重HIRI。了解HIRI中线粒体自噬的调节机制和作用将为HIRI的防治提供新策略。

瑞香素激活Keap1/NRF2通路减轻小鼠肝脏缺血再灌注损伤的实验研究

目的:探讨瑞香素对小鼠肝脏缺血再灌注损伤(IRI)的保护作用及机制。方法:构建小鼠70%肝脏IRI模型,将小鼠随机分为假手术组(Sham组)、瑞香素组(Dap组)、缺血再灌注组(IRI组)、缺血再灌注+瑞香素组(IRI+Dap组),每组8只。Sham组和IRI组小鼠腹腔注射0.9%氯化钠溶液,Dap组和IRI+Dap组小鼠肝脏缺血前1 h腹腔注射Dap(1.5 mg/kg)。IRI术后12 h处死小鼠收集标本,检测血清转氨酶及炎症因子的表达水平,取肝组织行苏木紫-伊红(HE)染色观察肝组织病理损伤,通过免疫荧光检测肝组织炎症因子的表达,通过ELISA检测肝组织氧化应激相关因子表达,通过蛋白印迹实验检测肝组织NRF2/HO-1通路相关蛋白的表达。结果:和IRI组小鼠相比,IRI+Dap组小鼠肝脏IRI 12 h后,血清中ALT、AST、TNFα、CCL2的表达显著降低,肝组织坏死面积显著减小,肝组织中CD11b、Ly6g阳性炎症细胞浸润属相显著减少,肝组织中MDA水平显著降低、SOD、GSH水平显著升高,同时肝组织中Keap1表达显著降低、HO-1、p-NRF2表达显著升高。结论:瑞香素能够显著抑制小鼠肝脏IRI后的炎症和氧化应激。瑞香素对肝脏IRI的保护作用可能是通过激活Keap1-NRF2通路实现。

麻醉药物调控铁死亡抑制肝脏缺血再灌注损伤的研究进展

肝脏缺血再灌注损伤(HIRI)是肝脏手术中常见的并发症,严重影响患者预后。HIRI机制复杂,与氧化应激、线粒体损伤等相关。近年来发现,铁死亡在HIRI中发挥重要作用。麻醉是肝脏手术不可或缺的一部分,不同麻醉药物的应用对患者预后具有不同的影响。一些麻醉药物如丙泊酚、右美托咪定、依托咪酯、舒芬太尼、氯胺酮、七氟烷及利多卡因等可以通过调控铁死亡抑制HIRI,但目前绝大部分的研究还只是停留在动物及细胞模型阶段,尚未进入临床试验。

右美托咪定对大鼠肝脏缺血再灌注损伤的影响

为了探讨右美托咪定对肝脏缺血再灌注损伤的影响及其可能的分子机制,本试验将45只清洁级成年雄性SD大鼠随机分为空白组、假手术组、损伤组(肝脏缺血再灌注组)、预给药组(缺血前30 min给予右美托咪定)和后给药组(再灌注后30 min给予右美托咪定)。建立大鼠肝脏缺血再灌注模型,于再灌注后6 h和12 h取样。用全自动生化分析仪检测谷丙转氨酶(ALT)水平;光镜下观察肝细胞的形态学改变;TUNEL法检测肝细胞凋亡率;实时荧光定量PCR(RT-PCR)法检测内质网应激和凋亡相关基因PERK、ATF-6、GRP-78和Caspase-12 mRNA表达水平。结果显示,与空白组相比,损伤组ALT含量极显著升高(P<0.01),肝组织病理学评分和肝细胞凋亡率均极显著上升(P<0.01),内质网应激相关基因PERK、ATF-6、GRP-78和Caspase-12的mRNA相对表达量均极显著上调(P<0.01);与损伤组相比,预给药组、后给药组ALT含量和肝组织病理学评分极显著降低(P<0.01),预给药组肝细胞凋亡率极显著下降(P<0.01),后给药组肝细胞凋亡率显著下降(P<0.05),预给药组、后给药组PERK、GRP-78和Caspase-12的mRNA相对表达量极显著下调(P<0.01);预给药组和后给药组相比,上述指标均无显著差异(P>0.05)。结果表明,右美托咪定能有效减轻肝脏缺血再灌注损伤,其机制可能与降低内质网应激有关。

细胞焦亡与肝脏缺血再灌注致远隔脏器损伤的研究进展

细胞焦亡是机体一种特殊的免疫防御反应,参与多种疾病的发生发展,过度的免疫防御反应会给机体带来巨大伤害。肝脏缺血再灌注损伤(IRI)是肝脏切除、肝脏移植和低血容量性休克等一系列临床过程中不可避免的并发症,导致肝功能障碍和细胞死亡,同时也会使远隔脏器遭受不同程度损伤。细胞焦亡与肝脏IRI存在密切联系,多种炎症因子释放不仅加重肝脏损伤,还影响远隔脏器。因此,明确细胞焦亡与肝脏IRI之间的关系,可为减轻肝脏和远隔脏器损伤提供新的研究方向。

中药党参及黄芪改善肝脏缺血再灌注损伤的机制研究

肝脏缺血再灌注损伤(HIRI)是指肝脏组织缺血一段时间后血流再次恢复,损伤没有好转,反而进一步加重的现象,临床上常见于失血性休克、肝脏严重创伤手术、肝脏肿瘤切除术、肝脏移植等情况。中药党参和黄芪均有清除氧自由基、抗氧化、保肝等功效,且具有副作用小、毒性低、治疗效果好等优点,临床需更为深入地探析中药党参和黄芪对HIRI的治疗机制,明确党参和黄芪作用机理,以期提升治疗HIRI的针对性。基于此,本文将对中药党参及黄芪改善HIRI的机制进行综述。

肝脏缺血再灌注损伤与氧化应激及炎症反应的研究进展

缺血再灌注损伤(IRI)是一个多因素介导的、加重的肝细胞损伤的病理过程。在肝脏IRI过程中导致肝细胞损伤甚至死亡的机制多样而复杂,涉及多种类型的细胞与生物分子之间的相互作用。其中,氧化应激与炎症反应是加重肝脏IRI的关键过程。研究肝脏IRI相关损伤的机制对于探索治疗策略是至关重要的。本文总结了氧化应激及炎症反应参与肝脏IRI的发生机制,并基于这些机制讨论了减少肝脏IRI的防治策略。

异丙酚和白藜芦醇预处理对大鼠肝脏缺血再灌注损伤时细胞凋亡的影响及机制

目的探讨异丙酚与白藜芦醇单独应用及联合应用预处理对大鼠肝脏缺血再灌注损伤细胞凋亡的影响及可能的作用机制。方法 144只健康成年雄性SD大鼠随机分为8组,18只/组,分别为:假手术组(SO组)、生理盐水预处理组(NS组)、Tween80预处理组(TW组)、低剂量异丙酚预处理组(PROⅠ组)、高剂量异丙酚预处理组(PROⅡ组)、低剂量白藜芦醇预处理组(RESⅠ组)、高剂量白藜芦醇预处理组(RESⅡ组)、异丙酚联合白藜芦醇预处理组(PRO+RES组)。参照Pringle法建立大鼠全肝缺血再灌注模型。SO组仅游离肝门,不作肝门阻断,经股静脉输注生理盐水(2 ml/kg);NS组、TW组分别于肝门阻断前10 min经股静脉输注生理盐水(2 ml/kg)、Tween80(2 ml/kg);PROⅠ组、PROⅡ组、RESⅠ组、RESⅡ组及PRO+RES组分别于肝门阻断前10 min经股静脉输注异丙酚10 mg·kg-1·h-1、异丙酚20 mg·kg-1·h-1、白藜芦醇10 mg/kg、白藜芦醇20 mg/kg、异丙酚10 mg·kg-·1h-1+白藜芦醇10 mg/kg。各实验组均于再灌注后1、3、6 h分别处死6只动物,留取肝组织标本,常规石蜡包埋后切片。HE染色观察肝组织形态学改变,原位细胞凋亡检测技术(TUNEL法)检测肝组织细胞凋亡情况;免疫组织化学技术检测肝组织凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax及caspase-3蛋白的表达。结果与NS组、TW组比较,PROⅠ组、PROⅡ组、RESⅠ组、RESⅡ组及PRO+RES组肝组织病理损害减轻,细胞凋亡指数降低(P<0.05),Bcl-2蛋白表达增多(P<0.05),Bax及caspase-3蛋白表达减少(P<0.05)。相较于PROⅠ组及RESⅠ组,PRO+RES组肝组织病理损伤减轻,细胞凋亡指数降低(P<0.05),Bcl-2蛋白表达增多(P<0.05),Bax蛋白及caspase-3蛋白表达减少(P<0.05)。PROⅡ组、RESⅡ组与PRO+RES组间肝组织病理损伤程度、细胞凋亡指数及细胞凋亡相关蛋白表达无显著差异。结论异丙酚与白藜芦醇通过上调Bcl-2蛋白的表达,下调Bax及caspase-3蛋白的表达,抑制细胞凋亡,对HIRI产生一定的保护作用。异丙酚与白藜芦醇联合应用可以明显减少用药剂量。

大鼠肝脏缺血再灌注后所致脑组织超微结构的改变与自由基的作用

目的观察大鼠肝脏缺血再灌注后脑组织超微结构的变化,并探讨其可能的机制。方法wistar大鼠32只随机分为假手术组(S组)、缺血再灌注3h组(IR3)、6h组(IR6)、和24h组(IR24)。脾静脉—股静脉转流下通过夹闭肝动脉门静脉建立大鼠全肝缺血40min后复灌的模型。电镜观察S组和IR6组脑组织的超微结构。比色法测定各组脑组织丙二醛(MDA)含量和超氧化物歧化酶(SOD)活性。结果电镜下可见IR6组脑组织水肿,以胶质细胞和毛细血管周为重,形成宽亮带,毛细血管基底膜疏电子性,内皮细胞变性。IR6组SOD活性较S、IR3组显著降低(50.89±5.46vs61.7±7.28,63.41±5.44,P<0.05),而MDA含量IR6组和IR24组则明显高于S组及IR3组(9.30±1.23,10.05±1.19vs5.79±0.89,5.72±0.45,P<0.05)。结论肝脏缺血再灌注后可以导致脑组织超微结构的改变,氧化应激可能是肝脏缺血再灌注所致脑损伤机制之一。

线粒体通路、氧化应激在肝脏缺血再灌注损伤细胞凋亡中作用机制的研究进展

在肝脏缺血再灌注损伤导致的细胞凋亡过程中,线粒体通路和氧化应激是两条非常重要的机制。当肝脏发生缺血再灌注时,线粒体通透性转换孔的开放、细胞凋亡相关蛋白的释放以及B淋巴细胞瘤-2基因家族蛋白的调控作用共同组成线粒体通路,导致细胞凋亡;氧化应激则通过脂质过氧化、内质网应激、氧化应激调节分子表达变化等途径在肝脏缺血再灌注损伤细胞凋亡中发挥作用。

缺血预处理对大鼠肝脏缺血再灌注损伤的保护作用及对缺氧诱导因子1α蛋白表达的影响

目的探讨缺血预处理(IP)对肝脏缺血再灌注(IR)损伤的保护作用及对缺氧诱导因子1α(HIF-1α)蛋白表达的影响。方法将120只Sprague-Dawley大鼠分为假手术(SO)组、IR组和IP组,每组40只。SO组术中只牵拉分离肝十二指肠韧带,操作完成后关腹;IR组阻断十二指肠韧带,造成缺血30 min后解除阻断;IP组在阻断肝十二指肠韧带前30 min进行持续5 min缺血及5 min再灌注。IR和IP组分别于再灌注2、6、12和24 h时间点各处死10只动物,取肝脏标本;SO组于术后2 h取肝组织标本。检测血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天门冬氨酸氨基转移酶(AST)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-10(IL-10)水平,免疫组织化学法测HIF-1α蛋白表达水平,用末端脱氧核苷酸转移酶介导的dUTP缺口末端标记测定法(TUNEL)测定肝细胞凋亡,并计算细胞凋亡指数(AI)。结果再灌注后,IR组及IP组大鼠各时点的ALT、AST、TNF-α、IL-10与SO组相比均升高,差异均有统计学意义(P<0.05)。IP组大鼠各时间点TNF-α明显低于IR组,IL-10明显高于IR组(P<0.05)。IP组大鼠ALT和AST在2、6、12 h低于IR组,差异均有统计学意义(P<0.05)。IR组和IP组大鼠细胞AI较SO组增加,差异有统计学意义(P<0.05);IP组大鼠各时间点AI低于IR组,差异均有统计学意义(P<0.05)。在IR及IP组内,不同时点HIF-1α蛋白表达两两比较差异均有统计学意义(P<0.05);除24 h外其他各时间点IP组大鼠HIF-1α蛋白表达明显高于IR组,差异均有统计学意义(P<0.05)。IR组和IP组大鼠肝组织的HIF-1α蛋白表达与AI、TNF-α、IL-10均呈正相关(r=0.624,0.470,0.312,P<0.05)。结论 IP通过上调HIF-1α蛋白表达,抑制细胞凋亡,减少促炎性因子的释放,增加抗炎性因子的表达,对大鼠肝IR损伤有明显的保护作用。

橘皮苷通过激活Nrf2/HO-1通路增强自噬保护肝脏缺血再灌注损伤

目的橘皮苷(HDN)具有清除氢自由基和过氧化氢的活性。探讨HDN在肝脏缺血再灌注(I/R)损伤中的作用及机制。方法使用C57BL/6J野生型(WT)小鼠建立肝脏I/R损伤模型。检测血浆转氨酶(ALT)水平,肝组织氧化应激产物、病理切片以及肝组织自噬指标。检测Nrf2/HO-1通路表达水平。结果 HDN明显缓解肝脏I/R损伤,表现为ALT明显下降,肝组织坏死面积明显缩小。HDN使肝脏病变组织的MDA含量明显下降,SOD、GSH明显增多。HDN可增强肝细胞自噬功能,激活Nrf2/HO-1通路。使用HO-1抑制剂ZnPP可消除HDN的保护作用。结论 HDN可通过激活Nrf2/HO-1通路增强细胞的自噬,清除细胞内氧化物质,进而保护肝脏I/R损伤。

生长激素预处理保护大鼠肝脏缺血再灌注损伤的研究

目的:探讨重组人生长激素(rhGH)预处理对肝脏缺血再灌注损伤的保护作用及其可能机制。方法:16只雄性W istar大鼠随机等分为rhGH组和对照组,分别用rhGH或盐水预处理后以Pringle法阻断入肝血流15m in,于再灌注1 h末测定血清AST、ALT、LDH水平,肝组织谷胱甘肽(GSH)与超氧化物歧化酶(SOD)水平以及肝组织病理学改变。结果:rhGH组再灌注后1 h血清AST、ALT、LDH水平显著低于对照组(P<0.05)。rhGH组肝组织GSH、SOD水平均显著高于对照组(P<0.05)。rhGH组肝组织损伤程度明显轻于对照组。结论:生长激素预处理通过提高肝组织中GSH、SOD水平减轻大鼠肝脏缺血再灌注损伤。

注射用复合辅酶在肝脏缺血再灌注损伤中的作用

肝缺血再灌注损伤常见于肝创伤、手术、肝移植、肿瘤及肝硬化过程，其过程为肝组织因各种原因经过一个缺血时期后重新恢复血液灌注的过程。注射用复合辅酶（商品名：贝科能）是一种对多种脏器具有保护作用，利于肝细胞物质和能量代谢，对抗自由基对机体组织产生激发性损害。本实验采用犬肝脏缺血再灌注损伤模型，观察贝科能对肝脏的保护作用，进一步探讨其作用的机制。

大鼠肝脏缺血再灌注损伤中TNF-α的变化

肝脏缺血再灌注损伤是肝脏和创伤外科疾病中常见的病理过程,许多疾病均涉及到这一过程,如处理严重的肝外伤、施行广泛的肝叶切除、肝移植以及休克、感染等[1-5].导致肝脏缺血再灌注损伤的原因众多,确切机制目前仍不十分清楚.既往研究证实氧自由基及钙超载参与了肝脏缺血再灌注损伤[6,7],近年来,细胞因子在肝脏缺血再灌注损伤中的作用受到了国内外学者的关注[8-10],其中肿瘤坏死因子-α(tuimor necrosisfactor alpha,TNF-α)为最具代表性的一种[11],它在烧伤、急性肝坏死以及梗阻性黄疸中的作用已有研究[12-14],而在肝脏缺血再灌注损伤中的作用研究较少.我们在实验中制作肝脏缺血再灌注损伤模型,观察了肝脏缺血再灌注后血浆TNF-α,透明质(hyaluronic acid, HA),丙氨酸氨基转移酶( glutamicpyruvic transaminase enzyme, ALT )和肝组织丙二醛(malondialdehyde, MDA)含量的变化以及肝组织病理学变化,以探讨TNF α在肝脏缺血再灌注损伤中的作用.

白藜芦醇通过高迁移率族蛋白B1抗大鼠肝脏缺血再灌注损伤的作用及机制

目的:探讨白藜芦醇对大鼠肝脏缺血再灌注损伤中高迁移率族蛋白B1(HMGB1)表达的影响及机制。方法:健康雄性SD大鼠30只随机分为3组,假手术对照(SC)组、肝脏缺血再灌注(HIR)组、白藜芦醇(Res)组。各组分别采集血液标本,处死动物收集肝组织标本。检测血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)、门冬氨酸氨基转移酶(AST)和碱性磷酸酶(AKP)及炎症因子IL-6、TNF-α的变化。应用Western Blot及RT-PCR方法检测HMGB1、Toll样受体4(Toll-like receptor4,TLR4)蛋白及基因表达情况。光镜下观察经HE染色肝组织形态学变化。结果:与HIR组相比,Res使大鼠肝组织病理学变化明显改善,血清中反映肝脏功能学的指标ALT、AST及AKP的浓度明显降低,同时肝组织HMGBl、TLR4蛋白及mRNA的表达降低,血清中炎症因子IL-6和TNF-α含量亦显著降低。结论:白藜芦醇对肝脏缺血再灌注损伤的保护作用可能与其通过抑制HMGB1-TLR4信号通路,从而减少其下游促炎细胞因子表达,减轻再灌注过程中炎性反应有关。

促红细胞生成素对大鼠肝脏缺血再灌注损伤的抗炎作用

目的观察促红细胞生成素对大鼠肝脏缺血再灌注损伤的抗炎作用。方法将雄性SD大鼠随机分为假手术组、模型组及促红素组。假手术组仅解剖分离肝十二指肠韧带;模型组采用无创血管夹夹闭肝左叶及中叶血流(约70%肝缺血),缺血时间为45 min;促红素组于缺血前30 min门静脉注射促红细胞生成素(3 000 IU/kg)。采集各组再灌注1、6、12 h血液及肝组织标本。全自动生化分析仪测定血清ALT、AST;ELISA测定血浆TNF-α、IL-1蛋白含量;Western blot免疫印迹检测肝组织NF-κB蛋白表达。结果与模型组比较,促红素组ALT、AST水平显著下调(P<0.05)。血浆TNF-α和IL-1含量自再灌注6 h明显升高,至12 h达最高;与模型组相比,促红素组各时间点血浆TNF-α和IL-1含量均明显降低(P<0.05)。再灌注后早期肝内组织NF-κB表达量开始增加,于6 h表达最高峰,其后开始下降;与模型组相比,促红素组各时间点肝组织NF-κB表达量均明显降低(P<0.05)。结论促红细胞生成素能有效减轻大鼠肝缺血再灌注损伤,其作用机制可能是通过抑制NF-κB的表达,减少TNF-α、IL-1的释放,从而减轻肝脏缺血再灌注过程中的炎症反应。