胰高血糖素样肽-1受体激动剂改善高果糖饮食诱导的胰岛素抵抗大鼠肝脏脂质沉积机制研究

背景 非酒精性脂肪性肝病发病率逐年升高但无特效药物,临床和基础研究显示降糖药物胰高血糖素样肽-1(GLP-1)受体激动剂能改善肝脏脂质沉积,但具体机制不明确。目的 探讨GLP-1受体激动剂改善高果糖诱导的胰岛素抵抗大鼠肝脏脂质沉积的机制。方法 2016年1—4月选取Wistar大鼠36只随机分为对照(ND)组和造模组,ND组给予普通饲料、造模组给予高果糖饲料喂养,8周后行高胰岛素-正葡萄糖钳夹实验证实造模组胰岛素抵抗形成,继续将造模组大鼠随机分为高果糖(HFD)亚组和高果糖+艾塞那肽(HFD+Ex)亚组,HFD+Ex亚组给予艾塞那肽注射液腹部皮下注射4周后,观察糖脂水平、胰岛素抵抗、肝脏脂质沉积、β-catenin表达和核转位以及脂质合成通路因子的变化。进一步用转染技术在HepG2细胞用小干扰RNA抑制β-catenin的表达观察细胞脂质沉积和脂质合成通路相关因子的变化,将HepG2细胞用25 mmol/L果糖和100 nmol/L exendin-4处理,未转染的细胞用作对照,全部细胞分为正常对照(Con)组、高果糖(HF)组、高果糖+exendin-4(HF+Ex4)组、高果糖+exendin-4+对照siRNA(HF+Ex4+Si-control)组、高果糖+exendin-4+β-catenin siRNA(HF+Ex4+Si-β-catenin)组。实验结束后收集大鼠体质量、肝指数、三酰甘油(TG)、肝脏TG、总胆固醇(TC)、游离脂肪酸(FFA)、丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天冬氨酸氨基转移酶(AST)、空腹血糖(FBG)、空腹胰岛素(FINS)、葡萄糖曲线下面积(AUC_(glu))、葡萄糖输注速率(GIR)、肝脏油红O染色,并测定大鼠肝脏及HepG2细胞固醇调节元素结合蛋白1(SREBP-1)和下游脂质合成的关键酶脂肪酸合成酶(FAS)、乙酰辅酶A羧化酶(ACC)、硬脂酰CoA脱饱和酶1(SCD-1)以及β-catenin的蛋白表达水平。结果 (1)高果糖喂养8周后造模组大鼠体质量、肝指数、肝脏TG水平均高于ND组,GIR低于ND组(P<0.05);药物干预4周后HFD亚组大鼠体质量、肝指数、TG、FFA、ALT、FBG、FINS、AUC_(glu)高于ND组,GIR低于ND组(P<0.05);HFD+Ex亚组大鼠体质量、肝指数、FFA、ALT、FBG、FINS、AUC_(glu)低于HFD亚组,GIR高于HFD亚组(P<0.05)。(2)HFD亚组大鼠肝脏TG水平高于ND组(P<0.05),油红O染色肝细胞内可见大量红色脂滴聚集;HFD+Ex亚组大鼠肝脏TG水平低于HFD亚组(P<0.05),肝细胞内红色脂滴减少。(3)HFD亚组大鼠肝脏SREBP-1、FAS、SCD-1、ACC蛋白表达均高于ND组(P<0.05);HFD+Ex亚组大鼠肝脏SREBP-1、FAS、SCD-1、ACC蛋白表达均低于HFD亚组(P<0.05)。(4)HFD亚组大鼠肝脏β-catenin的总蛋白及核内蛋白表达低于ND组(P<0.05);HFD+Ex亚组大鼠肝脏β-catenin的总蛋白及核内蛋白表达高于HFD亚组(P<0.05)。(5)HF+Ex4组、HF+Ex4+Si-control组HepG2细胞β-catenin总蛋白、核内蛋白表达均高于HF组,TG水平低于HF组(P<0.05);HF+Ex4+Si-β-catenin组HepG2细胞β-catenin总蛋白、核内蛋白表达低于HF+Ex4组,TG水平高于HF+Ex4组(P<0.05)。(6)HF+Ex4组、HF+Ex4+Si-control组HepG2细胞SREBP-1、ACC、FAS、SCD-1蛋白表达均低于HF组(P<0.05);HF+Ex4+Si-β-catenin组HepG2细胞SREBP-1、ACC、FAS、SCD-1蛋白表达高于HF+Ex4组(P<0.05)。结论 GLP-1受体激动剂可能通过调控β-catenin表达改善胰岛素抵抗大鼠肝脏脂质沉积,是治疗非酒精性脂肪性肝病的潜在新药,β-catenin可能是药物治疗的重要靶标。

绞股蓝皂苷调控长链非编码RNA TUG1/miR-26a干扰线粒体凋亡对ApoE^(-/-)AS小鼠肝脏脂质沉积的影响及机制研究

为探讨绞股蓝皂苷通过影响长链非编码RNA TUG1/miR-26a干扰线粒体凋亡改善ApoE^(-/-)AS小鼠肝脏脂质沉积防治AS机制,本实验将10只C57BL/6J小鼠作为正常对照组,20只健康ApoE^(-/-)小鼠随机分为模型组、绞股蓝皂苷组(高脂饲料喂养12周),灌胃给药4周。HE染色观察小鼠肝脏脂质沉积情况,全自动生化分析仪检测血脂水平,实时荧光定量Q-PCR检测长链非编码TUG1、miRNA-26a表达,实时荧光定量Q-PCR及Wes全自动蛋白质印迹定量分析系统检测Bcl2、Bax、Cytc、cleaved caspase-3、cleaved caspase-9、cleaved PARP基因及蛋白表达。结果显示模型组ApoE^(-/-)小鼠血脂水平发生紊乱,肝细胞体积变大,脂肪空泡明显,小鼠肝脏Lnc-TUG1表达显著升高,miRNA-26a显著下降(P<0.01);Bax、Cyt-c、cleaved caspase-3、cleaved PARP mRNA及蛋白表达显著升高,Bcl2 mRNA及蛋白显著下降(P<0.01或P<0.05);cleaved caspase-9蛋白表达显著升高(P<0.01或P<0.05),cleaved caspase-9 mRNA仅有上升趋势;绞股蓝皂苷干预后血脂紊乱得以改善,肝细胞脂肪变性程度减轻,脂肪空泡明显减少,小鼠肝脏Lnc TUG1表达有所下降,miRNA-26a表达有所上调(P<0.05),小鼠肝脏Bax、Cyt-c、cleaved caspase-3、cleaved caspase-9 mRNA及蛋白表达显著下调,Bcl2 mRNA及蛋白显著上调(P<0.01或P<0.05),cleaved PARP蛋白表达显著下调(P<0.05),cleaved PARP mRNA仅有下调趋势;研究结果提示绞股蓝皂苷可能通过影响长链非编码RNA TUG1/miR-26a干扰线粒体凋亡改善ApoE^(-/-)AS小鼠肝脏脂质沉积,进而防治动脉粥样硬化。

吡格列酮对非乙醇性脂肪肝大鼠肝脏脂质沉积的影响

目的观察吡格列酮对非乙醇性脂肪肝(NAFLD)大鼠肝脏内质网应激(ERS)的影响,为其在肝脏脂质代谢中的作用提供理论依据。方法 30只Sprague-Dawley大鼠随机分为正常对照组、生理盐水组和吡格列酮组,每组10只。生理盐水组和吡格列酮组大鼠用高脂饮食饲养12周成功建立NAFLD模型。吡格列酮组大鼠用吡格列酮治疗12周,生理盐水组大鼠给予生理盐水处理。肝脏病理切片行苏木精-伊红及油红O染色。测量大鼠体质量、肝湿质量,计算肝质量/体质量(肝/体比),检测血清谷氨酸氨基转移酶(AST)、丙氨酸氨基转移酶(ALT)、总胆固醇(TC)、三酰甘油(TG)及肝脏组织中TC、TG水平;Western blot法检测大鼠肝脏组织ERS相关蛋白葡萄糖调节蛋白78(GRP78)的表达情况。结果生理盐水组大鼠肝细胞均出现不同程度脂肪变性,伴小叶内、汇管区炎性细胞浸润;吡格列酮组多数肝细胞结构恢复正常,细胞质内脂滴空泡明显减少。生理盐水组与正常对照组比较大鼠体质量、肝脏质量、肝/体比、血清及肝脏组织中TC、TG水平、血清AST、ALT水平、肝脏组织GRP78表达水平显著增加,差异有统计学意义(P<0.05);吡格列酮组与生理盐水组比较大鼠体质量、肝脏质量、血清及肝脏组织中TC和TG水平、血清AST和ALT水平、肝脏GRP78水平均显著下降,差异有统计学意义(P<0.05)。结论吡格列酮可能通过改善高脂饮食诱导大鼠肝细胞的ERS水平来纠正脂质代谢异常。

绞股蓝皂苷调控铁死亡途径对ApoE-/-小鼠肝脏脂质沉积的影响及机制研究

目的探究绞股蓝皂苷改善ApoE-/-小鼠肝脏脂质沉积的可能作用机制。方法24只健康ApoE-/-小鼠采用随机数字表法分为绞股蓝皂苷组、辛伐他汀组和模型组,每组8只;将8只C57BL/6J小鼠作为正常对照组。正常对照组给予普通饲料喂养;模型组、绞股蓝皂苷组、辛伐他汀组给予高脂饲料喂养,喂养8周。8周后,绞股蓝皂苷组给予绞股蓝皂苷灌胃,辛伐他汀组给予辛伐他汀灌胃,正常对照组和模型组使用0.2 mL/10 g生理盐水灌胃,灌胃4周。灌胃期间正常对照组继续给予正常饲料喂养,模型组、绞股蓝皂苷组、辛伐他汀组继续给予高脂饲料喂养。12周后,全自动生化分析仪检测小鼠血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天门冬氨酸氨基转移酶(AST)、甘油三酯(TG)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、总胆固醇(TC)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、肝脏TC、TG水平;HE染色和油红O染色观察小鼠肝脏病理形态变化与脂质沉积情况;ELISA法检测肝脏组织过氧化脂质(LPO)和还原型谷胱甘肽(GSH)水平;Wes全自动蛋白质印迹定量分析系统检测GPX4、xCT和p53蛋白表达水平;RT-qPCR检测GPX4、xCT和p53 mRNA表达水平。结果与正常对照组相比,模型组小鼠血清血脂TC、LDL-C、TG水平升高、HDL-C水平降低(P<0.01);血清肝功能AST、ALT水平升高(P<0.01);肝细胞体积变大,细胞内可见大量大小不等的脂肪空泡,脂质沉积明显,肝窦狭窄或消失;肝脏组织TC、TG和LPO水平显著升高,GSH水平显著下降(P<0.01);p53蛋白和mRNA表达增高,GPX4、xCT蛋白和mRNA表达降低(P<0.01)。与模型组比较,绞股蓝皂苷组和辛伐他汀组小鼠血清血脂TG、LDL-C、TC水平降低(P<0.01),HDL-C水平没有显著变化(P>0.05);血清肝功能AST、ALT水平降低(P<0.01);肝细胞体积大小有所恢复,细胞内脂肪空泡显著减少,脂质沉积情况减轻,肝窦狭窄有所缓解;肝脏组织TC、TG和LPO水平显著降低,GSH水平显著升高(P<0.01);p53蛋白和mRNA的表达降低,GPX4、xCT蛋白和mRNA表达升高(P<0.05或P<0.01)。结论绞股蓝皂苷能明显改善肝脏脂质沉积和降低肝脏脂质过氧化反应,其机制可能与抑制肝细胞铁死亡有关。

加味二至丸通过抑制铁死亡减轻高脂血症小鼠肝脏脂质沉积

目的:观察加味二至丸对高脂血症模型小鼠肝脏脂质沉积及铁死亡相关蛋白表达的影响。方法:30只ApoE-/-小鼠随机分为模型组、辛伐他汀组和加味二至丸组,每组10只,另取10只相同背景的C57BL/6J小鼠作为正常对照组。模型组及各治疗组均给予高脂饲料喂养,正常对照组给予普通饲料喂养。造模12周后按分组分别给予相应的药物灌胃,正常对照组和模型组给予等体积的生理盐水灌胃。药物干预10周以后取小鼠血清及肝组织,全自动生化分析仪检测血清甘油三酯(TG)、总胆固醇(TC)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)和低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)的含量;HE染色和油红O染色观察小鼠肝组织形态及脂质沉积;试剂盒检测肝组织及血清中还原型谷胱甘肽(GSH)水平及肝组织中的铁含量;RT-qPCR及Western blot检测肝组织中铁死亡相关因子GPx4、SLC7A11、p53、NOX1、COX2和FTH1的mRNA及蛋白表达。结果:与模型组相比,加味二至丸组小鼠血清TC、TG和LDL-C明显降低,HDL-C含量明显升高(P<0.05);血清及肝组织GSH水平明显升高(P<0.05),肝脏铁沉积明显缓解(P<0.05);肝组织脂滴变小且脂肪变性程度明显减轻;加味二至丸组小鼠肝组织p53、COX2和NOX1的mRNA及蛋白表达水平明显下降(P<0.05),SCL7A11、GPx4和FTH1的mRNA及蛋白表达水平明显升高(P<0.05)。结论:加味二至丸可以减轻高脂血症模型小鼠肝脏脂质沉积,可能与抑制肝脏铁死亡途径相关。

黄芪甲苷激活AMPK改善非酒精性脂肪肝病小鼠肝脏脂质沉积

目的:探讨黄芪甲苷(AS-Ⅳ)是否通过腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)改善高脂高糖饮食诱导的非酒精性脂肪肝病(NAFLD)小鼠肝脏脂质沉积。方法:高脂高糖饮食构建NAFLD小鼠模型,用AS-Ⅳ进行灌胃干预。蛋白免疫印迹法检测肝脏AMPK的蛋白表达水平。高通量芯片技术筛选肝细胞(L02)中与AS-Ⅳ作用的潜在靶蛋白,并通过分子对接技术模拟AS-Ⅳ与靶蛋白的相互作用模式。结果:与正常饮食组小鼠对比,高脂高糖诱导的NAFLD小鼠肝脏脂质沉积增加,AS-Ⅳ干预后可减轻小鼠肝脏脂质沉积;高脂高糖诱导后,可下调肝脏AMPK的蛋白表达水平,AS-Ⅳ干预后AMPK表达增加;高通量芯片技术结果显示:AS-Ⅳ能与AMPKα1直接结合;进一步分子对接模拟显示:AS-Ⅳ相互作用区域位于AMPKα亚基的自抑制多肽片段位置。结论:AS-Ⅳ可能通过直接激活AMPK改善NAFLD小鼠肝脏脂质沉积。

二氢杨梅素经激活SIRT1-AMPK通路抑制高脂饮食诱导的肥胖小鼠肝脏脂质沉积

目的探究二氢杨梅素(dihydromyricetin,DHM)对高脂饮食诱导的肥胖小鼠肝脏脂质蓄积的作用及其机制。方法C57BL/6J小鼠60只,随机分为6组(n=10):①ND组:正常饲料;②ND+L-DHM组:正常饲料+低剂量DHM(125 mg·kg^-1·d^-1);③ND+H-DHM组:正常饲料+高剂量DHM(250 mg·kg^-1·d^-1);④HFD组:高脂饲料;⑤HFD+L-DHM组:高脂饲料+低剂量DHM;⑥HFD+H-DHM组:高脂饲料+高剂量DHM。记录小鼠体重;16周后,测空腹血脂;计算体脂重量;肝脏HE和油红O染色;荧光定量PCR和Western blot检测肝脏SIRT1、AMPK、ACC、FAS、SREBP-1和PPARα、CPT1的表达。结果与ND组相比,HFD组小鼠体重、体脂、血清TG、TC、HDL水平明显增加;肝脏内脂肪蓄积增加,肝脏SREBP-1c、FAS、ACC1表达增加,而PPARα、CPT1、SIRT1和AMPK表达下降。经DHM处理后,HFD小鼠上述指标发生逆转;但ND小鼠上述指标无明显改变。结论DHM可能通过激活SIRT1-AMPK通路抑制脂质合成,促进脂质分解,改善高脂饮食诱导的肥胖小鼠肝脏脂质沉积。

虎杖苷相关AMPK信号通路对非酒精性脂肪肝病小鼠肝脏脂质沉积的作用研究

目的探讨虎杖苷(PD)相关单磷酸腺苷激活蛋白激酶(AMPK)信号通路对非酒精性脂肪肝病(NAFLD)小鼠肝脏脂质沉积的作用。方法2021年1月至6月,采用高脂高糖喂养将SPF级昆明雄性小鼠(4~6周龄,15~19 g)构建NAFLD小鼠模型,并以常规饲养作为对照(NC组),将小鼠模型分为高剂量组(HFD+200PD组)[200 mg/(kg·d)]、中剂量组(HFD+100PD组)[100 mg/(kg·d)]、低剂量组(HFD+50PD组)[50 mg/(kg·d)]和模型组。模型组和NC组均采用等剂量生理盐水进行灌胃,均连续给药4周。采用苏木素-伊红染色法检测肝脏形态变化;采用逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)检测SREBP-1c、ACC、FAS、Akt的mRNA相对表达水平;采用蛋白质印迹法检测P-AMPK、AMPK蛋白相对表达水平;并常规检查总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、低密度脂蛋白(LDL-C)的表达水平。结果HFD+200PD组P-AMPK、AMPK蛋白相对表达量显著高于HFD+100PD组、HFD+50PD组和模型组[(0.89±0.02)比(0.78±0.02)、(0.68±0.03)、(0.53±0.12)和(0.84±0.02)比(0.67±0.03)、(0.58±0.04)、(0.47±0.06),均P<0.05],且HFD+100PD组显著高于HFD+50PD和模型组,但4组均显著低于NC组(均P<0.05)。HFD+200PD组SREBP-1c、ACC、FASmRNA相对表达量显著低于HFD+100PD组、HFD+50PD组和模型组,而AktmRNA显著高于HFD+100PD组、HFD+50PD组和模型组(均P<0.05)。HFD+200PD组TC、TG和LDL-C表达量显著低于HFD+100PD组、HFD+50PD组和模型组(均P<0.05),且HFD+100PD组显著低于HFD+50PD组和模型组,但4组均显著高于NC组(均P<0.05)。结论PD可通过调控AMPK信号通路和抑制脂肪合成相关基因的表达改善NAFLD小鼠肝脏脂质沉积情况。

2型糖尿病肝脏脂质沉积的治疗

肝脏脂质沉积是2型糖尿病患者的一个典型特征。清除肝脏脂质沉积是治疗2型糖尿病胰岛素抵抗的关键。改变生活方式、口服药物及手术治疗对肝脏脂质沉积行之有效,但这些治疗策略的持久性及安全性有待进一步明确。本文就2型糖尿病肝脏脂质沉积的治疗综述如下。

肝脏脂质沉积对非酒精性脂肪肝影响的研究进展

近年来,随着经济的发展,人民生活水平日益提高,生活方式的改变及饮食结构的变化,非酒精性脂肪肝（non-alcoholic fatty liver disease,NAFLD）的发病率逐年增加,发展成为一种危害人类健康的常见慢性肝脏疾病。据流行病学调查表明,NAFLD发病率已达到10%～24%,而肥胖及2型糖尿病患者的NAFLD发病率可达25%～75%[1]。

丹蒌片通过PTP1B/PP2A/SP1途径影响甘油三酯合成改善ApoE^(-/-)AS小鼠肝脏脂质沉积的机制研究

目的 探讨丹蒌片对Apo E^(-/-)AS小鼠肝脏脂质沉积及甘油三酯合成的影响及可能机制。方法 将16只ApoE^(-/-)小鼠随机分为模型组、给药组各8只,8只C57BL/6J小鼠作为空白对照组。空白对照组给予基础饲料喂饲,其余小鼠给予高脂饲料喂饲,8周后给药组予丹蒌片连续灌胃4周,空白对照组和模型组给予等体积生理盐水灌胃。利用全自动生化分析仪检测各组小鼠血清血脂水平;比色法试剂盒测定各组小鼠肝脏中甘油三酯(TG)水平,HE染色、油红O染色观察小鼠肝脏病理及脂质沉积情况;RT-qPCR法检测肝脏组织蛋白酪氨酸磷酸酶-1B(PTP1B)、固醇调节元件结合蛋白-1c(SREBP-1c)、脂肪酸合成酶(FASN)、硬脂酰辅酶A去饱和酶1(SCD1)、甘油-3-磷酸酰基转移酶(GPAT)的mRNA表达水平,WB法检测PTP1B、蛋白磷酸酶2A(PP2A)、P-PP2A、特异性蛋白1(SP1)、P-SP1、SREBP-1c、FASN、SCD1、GPAT蛋白表达情况。结果 与空白对照组相比,模型组小鼠血清中的HDL-C水平显著降低(P<0.05),血清TC、TG、LDL-C及肝组织TG含量显著升高(P<0.01),病理结果显示肝脏组织存在脂肪变性,以及明显的脂质沉积;小鼠肝脏PTP1B、SREBP-1c、FASN、SCD1、GPAT mRNA及蛋白表达水平显著升高(P<0.05,P<0.01);P-PP2A/PP2A、P-SP1/SP1比值显著降低(P<0.01)。经丹蒌片治疗后,小鼠血清的TC、TG、LDL-c及肝脏TG水平显著降低(P<0.05,P<0.01);肝脏脂肪变性及脂质沉积程度改善,小鼠肝脏PTP1B、SREBP-1c、FASN、SCD1、GPAT mRNA及蛋白表达水平显著降低(P<0.05,P<0.01);P-PP2A/PP2A、P-SP1/SP1比值显著升高(P<0.01)。结论 丹蒌片可能通过PTP1B/PP2A/SP1途径影响肝脏甘油三酯合成而缓解Apo E^(-/-)AS小鼠肝脏脂质沉积进而达到防治动脉粥样硬化的目的。

香菇多糖拮抗亚砷酸钠诱导小鼠肝脏脂质沉积的实验研究

目的探讨香菇多糖对亚砷酸钠(sodium arsenite,SA)诱导小鼠肝脏脂质沉积的改善作用。方法以C57BL/6小鼠为实验对象,分别为对照组、SA染毒组、LNT+SA染毒组、LNT对照组。实验结束后收集血液和肝组织样本,应用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测血清谷丙转氨酶(ALT)和谷草转氨酶(AST)水平,肝组织一部分进行苏木精-伊红(HE)染色或油红O染色,观察肝脏病理损伤与脂质沉积特征,另一部分肝组织以ELISA法检测三酰甘油(TG)和脂联素(APN)水平。结果相比对照组或LNT对照组,SA染毒组血清AST、ALT含量升高,肝组织呈现病理损伤和脂质沉积特征,APN水平下降而TG水平升高(P<0.05)。相比SA染毒组,LNT+SA染毒组小鼠血清AST、ALT含量降低,肝组织病理损伤和脂质沉积程度明显减轻,APN水平上调而TG水平下调(P<0.05)。结论慢性SA染毒诱导C57BL/6小鼠肝功能损害、APN水平下调和脂质沉积,LNT干预明显改善SA诱导小鼠肝脏损伤和脂质沉积,可能与APN水平升高有关。

丹蒌片对ApoE^(-/-)小鼠肝脏脂质沉积自噬及脂质代谢的调节作用

目的探讨丹蒌片对肝脏脂质沉积小鼠脂质代谢及自噬的影响,为临床治疗动脉粥样硬化提供新的靶点与理论基础。方法将小鼠分成正常对照组、模型组、给药组。利用全自动生化分析仪检测小鼠的血脂水平;HE染色判断肝脏病变程度;RT-qPCR、Western Blot方法检测PPAR-γ、LXR、ULK1、Beclin-1、LC3mRNA及蛋白的表达情况;免疫组化检测PPAR-γ表达。结果经丹蒌片治疗后,下调了小鼠血清的TC、TG及LDL-c水平(P<0.05),上调了HDL-c水平(P<0.05);脂质代谢相关基因与蛋白PPAR-γ与LXR-α/β水平升高(P<0.05);促进LC3、ULK1、Beclin-1、PPAR-γ等自噬相关基因与蛋白高表达(P<0.05)而缓解高脂饮食引发的肝脏脂质沉积。结论丹蒌片可能通过改善脂质代谢,提高自噬流,防治动脉粥样硬化。

安石榴苷经AMPK/ACC通路抑制肥胖小鼠肝脏脂质沉积

肝脏脂质沉积是肥胖症的一个表现,现今药物治疗是最重要的手段。安石榴苷(punicalagin,PU)是石榴皮中提取的一种多酚类物质,是一种潜在的抗肥胖物质。该研究将60只C57BL/6J小鼠随机分为正常组和模型组2组,以高脂饲料对模型组建立单纯肥胖模型12周后,将成功建立的肥胖模型再重新分组为模型组、奥利司他组、PU低剂量组、PU中剂量组、PU高剂量组。正常组持续喂养常规饲料,其他组喂养高脂饲料,并每周记录各组小鼠体质量和摄食情况;8周后,全自动生化仪测定各组小鼠血清中血脂四项的含量水平;检测口服葡萄糖耐量性和腹腔注射胰岛素敏感性;苏木素-伊红(hemoxylin-eosin,HE)染色观察各组小鼠肝脏及脂肪组织病理变化;实时定量PCR(Q-PCR)法和蛋白印迹方法检测肝脏中PPARγ、C/EBPα的mRNA表达及AMPK、ACC、CPT1A的mRNA和蛋白表达水平。最后模型组小鼠的体质量,Lee′s指数,血清甘油三酯(total glyceride,TG)、胆固醇(total cholesterol,TC)和低密度脂蛋白胆固醇(low density lipoprotein-cholesterol,LDL-C)含量较正常组显著升高,高密度脂蛋白胆固醇(high density lipoprotein-cholesterol,HDL-C)含量较正常组明显降低;肝脏内脂肪沉积显著增加;肝脏PPARγ、C/EBPαmRNA含量和ACC蛋白表达量明显增加,AMPK、CPT-1αmRNA表达量明显减少,AMPK和CPT1A蛋白表达量明显减少。经PU处理后,干预组小鼠上述指标显示明显反转。总之,PU可降低肥胖小鼠体质量,且较有效地抑制其摄食量,同时具有调节与肥胖相关的血脂和糖代谢异常的作用,能够显著改善肝脏脂肪沉积,从机制分析PU可能通过活化AMPK/ACC通路下调脂质合成,上调脂质分解,调控肥胖小鼠肝脏脂质的沉积。

化瘀祛痰方对动脉粥样硬化家兔肝脏脂质沉积的影响

目的探讨化瘀祛痰方治疗动脉粥样硬化的可能作用机制。方法将60只雄性新西兰白兔随机分为空白组、模型组、化瘀祛痰方组、辛伐他汀组,每组15只。空白组普通饲料喂养,其他组高脂饲料喂养同时结合免疫损伤法建立动脉粥样硬化模型。造模8周后,化瘀祛痰方组给药剂量16 g/(kg·d),辛伐他汀组给药剂量1. 4 mg/(kg·d),空白组和模型组给予8 ml/(kg·d)生理盐水。4周后苏木素-伊红(HE)和油红O染色观察肝组织形态学改变;Elisa法检测家兔肝脏及血清中白细胞介素18 (IL-18)和白细胞介素1β(IL-1β)含量;Western blot法检测家兔肝脏含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶1 (Caspase-1)、含NLR家族Pyrin域蛋白3 (NLRP3)、黑素瘤缺乏因子2 (AIM2)、gasdermin D蛋白(GSDMD)蛋白表达。结果与空白组相比,模型组家兔肝组织肿胀明显、脂肪空泡清晰可见,胞浆内有大量脂滴蓄积;血清及肝脏组织内IL-18、IL-1β含量升高,细胞焦亡相关Caspase-1、GSDMD、NLRP3、AIM2蛋白表达水平上升(P <0. 05或P <0. 01)。与模型组相比,化瘀祛痰方组及辛伐他汀组脂肪空泡明显减少或消失,肝组织形态恢复或部分恢复正常;血清及肝脏组织内IL-18、IL-1β含量下降,细胞焦亡相关蛋白Caspase-1、GSDMD、NLRP3表达水平下降(P <0. 05或P <0. 01),AIM2蛋白表达水平无明显改变(P> 0. 05)。结论化瘀祛痰方可能通过调控NLRP3/Caspase-1通路影响细胞焦亡,从而改善动脉粥样硬化家兔肝脏脂质沉积。

α-硫辛酸对2型糖尿病大鼠肝脏脂质沉积的改善作用

目的探讨α-硫辛酸(α-lipoic acid,ALA)对高脂联合链脲佐菌素(STZ)诱导的SD大鼠肝脏脂质沉积的影响。方法健康雄性8周龄SD大鼠45只,随机分为正常对照组15只,造模组30只,造模组应用高糖高脂饮食加30 mg/kg STZ诱发2型糖尿病模型,成模大鼠再随机分成非药物干预糖尿病组(DM组,n=15)和α-硫辛酸干预组(ALA组,60 mg/kg,n=15),干预8周。干预结束后留取血清和肝脏组织,行生化及氧化应激指标检测,组织形态学检测,并应用Western blot的方法测定大鼠肝脏组织脂代谢相关蛋白固醇调节元件结合蛋白-1(sterol regulatory element binding protein-1,SREBP-1)的表达。结果造模组大鼠血清TG[(1.6±0.69)mmol/L]和TC[(3.14±1.1)mmol/L]含量明显升高。ALA治疗后,血清TG[(0.69±0.13)mmol/L]和TC[(1.67±1.0)mmol/L]明显降低,肝功能和氧化应激得到了改善,肝脏中的脂质沉积明显减少。SREBP-1的蛋白表达水平明显减低。结论 ALA干预可改善高脂饮食联合STZ诱导的SD大鼠的肝脏脂质沉积,其机制可能与改善氧化应激及减少SREBP-1的表达有关。

四君子汤通过miR-375/xCT/GPX4途径改善ApoE^(-/-)动脉粥样硬化小鼠肝脏脂质沉积的分子机制

目的观察四君子汤通过调节铁死亡途径对ApoE^(-/-)动脉粥样硬化小鼠肝脏脂质沉积的影响。方法ApoE^(-/-)小鼠20只饲喂高脂饲料8周,随机分为模型组和四君子汤组,四君子组给予四君子汤[130mg/(kg·d)]灌胃,连续4周;另选10只C57BL/6J小鼠作为正常组;全自动生化分析仪检测血清甘油三酯(TG)、总胆固醇(TC)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)和低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)的含量;HE和油红O染色观察肝脏组织病理变化;ELISA法检测Fe^(2+)及GSH水平;Wes全自动蛋白质印迹定量分析系统检测xCT(SLC7A11)及GPX4蛋白表达;RT-qPCR法检测miR-375﹑xCT(SLC7A11)及GPX4 mRNA表达。结果四君子汤能降低动脉粥样硬化小鼠血清TG、TC和LDL-C含量,提升HDL-C含量;抑制Fe^(2+)水平,提高GSH水平;铁死亡相关蛋白检测结果显示四君子汤可以使动脉粥样硬化小鼠GPX4、xCT/SLC7A11蛋白水平显著升高;RT-qPCR结果显示四君子汤组小鼠肝脏xCT、GPX4 mRNA表达上升(P<0.01,P<0.05),miR-375 mRNA表达显著下降(P<0.01)。结论四君子汤能够改善ApoE^(-/-)小鼠肝脏脂质沉积,可能与干预肝细胞铁死亡相关蛋白作用有关。

二甲双胍治疗2型糖尿病大鼠非酒精性脂肪肝疗效

目的探讨二甲双胍（metformin,Met）对高脂联合链脲佐菌素（STZ）诱导的SD糖尿病大鼠肝脏沉积代谢的影响.方法健康雄性7-8周龄SD大鼠随机分为高脂组（HF组,n=20）和普通饲料组（NC组,n=10）,喂养8周后,以35 mg/kg的剂量一次性腹腔注射STZ得到2型糖尿病（T2 Diabetes Mellitus,T2DM）模型.成模大鼠再随机分成生理盐水组（DM＋saline组,n=10）和二甲双胍干预组（Met,500 mg/（kg.d）,n=10）,干预时间8周.干预结束后留全血标本并分离血清,收取肝脏组织并称重;检测全血和肝脏组织中的脂质水平;采用Western blot的方法测定小鼠肝脏组织脂代谢相关蛋白的表达.结果模型组大鼠血清甘油三酯和胆固醇含量明显升高（P〈0.05）;二甲双胍治疗后,血清胆固醇和甘油三酯明显降低（P〈0.05）;DM大鼠肝功能和氧化应激得到了改善.肝脏组织学检测显示二甲双胍明显降低了肝脏中的脂质沉积;蛋白表达水平,二甲双胍治疗后改善了小鼠肝脏SREBP1及FAS表达水平.结论二甲双胍干预可改善高脂饮食联合链脲佐菌素（STZ）诱导的SD大鼠的肝脏脂质沉积.

6-姜烯酚通过抑制SCD1表达改善db/db小鼠肝脏脂肪变性的研究

目的探讨6-姜烯酚对db/db小鼠肝脏脂质代谢的影响及机制。方法将24只db/db小鼠随机分为模型组、6-姜烯酚低剂量组(10 mg·kg^-1)和6-姜烯酚高剂量组(40 mg·kg^-1),每组8只,雌雄各半;另取8只BKS小鼠(雌雄各半)作为正常对照组;灌胃给药,每日1次,连续21 d。采用酶法检测肝脏组织甘油三酯(TG)含量;采用油红O染色法检测肝脏组织脂质沉积情况;采用实时荧光定量聚合酶链式反应(qPCR)法检测碳水化合物反应元件结合蛋白(ChREBP)、固醇调节元件结合蛋白-1c(SREBP-1c)、脂肪酸合酶(FAS)、乙酰辅酶A羧化酶(ACC)、二酰基甘油酰基转移酶2(DGAT2)、硬脂酰辅酶A去饱和酶1(SCD1)、酰基辅酶A氧化酶(ACOX)及肉碱棕榈酰基转移酶1a(CPT1a)的mRNA表达;采用Western Blot法和免疫荧光染色法检测肝脏组织SCD1蛋白的表达情况。结果与正常对照组比较,模型组小鼠肝脏组织的TG含量和油红O染色面积以及SREBP-1c、ACC、FAS、DGAT2、SCD1 mRNA表达显著上调(P<0.05,P<0.01),ACOX、CPT1a mRNA表达显著下调(P<0.05)。与模型组比较,6-姜烯酚高剂量组的小鼠肝脏组织TG含量和油红O染色面积明显减少(P<0.01),SCD1在mRNA水平和蛋白水平的表达均显著下调(P<0.05,P<0.01),与免疫荧光染色法检测结果一致。结论6-姜烯酚能够改善db/db小鼠的肝脏脂质沉积,其机制可能与下调SCD1的表达有关。