肝脏脱细胞支架与MIN6细胞三维共培养移植治疗Ⅰ型糖尿病实验研究

目的:通过体外制备小鼠肝脏脱细胞支架并种植MIN6细胞,观测其定植生长并检测其功效发挥,为体外构建胰岛素分泌器官提供理论基础。方法:灌注法制备全肝脏脱细胞支架,将小鼠MIN6细胞种植入支架中于三维培养体系中培养,通过苏木精-伊红染色、胰岛素免疫组化分析及荧光定量聚合酶链反应检测其功效。检测MIN6细胞功能基因Insulin表达。将种植MIN6细胞的肝脏脱细胞支架移植入糖尿病小鼠体内,监测其功能发挥并初步评估其疗效。结果:体外成功制备肝脏脱细胞支架,在保留其原有脉管网络基础上,未见组织残留。HE染色显示肝脏脱细胞支架内没有细胞核染,且脉管结构保存完整。扫描电镜未见细胞结构,支架保存完整胶原纤维形态。MIN6细胞在脱细胞支架中三维培养后,检测胰岛素基因表达水平,结果和平面培养相比较,差异具有统计学意义(P<0.05)。将种植MIN6细胞的肝脏脱细胞支架移植入糖尿病小鼠体内能够较好的发挥降血糖作用。结论:通过将MIN6细胞种植入肝脏脱细胞支架并三维培养,可构建体外胰岛素分泌体系。

脱细胞肝脏支架制备及再细胞化:生物人工肝离我们还有多远?

背景:临床上已展开了大量生物人工肝脏的相关研究,其中肝脏脱细胞支架是已知最有前景的人工肝脏支架材料。目的:对现阶段3D肝脏脱细胞支架的制备、鉴定、应用等研究现状进行总结,并展望其未来在临床上的发展方向。方法:检索PubMed数据库、中国知网数据库(CNKI)2001年1月至2016年11月期间有关3D肝脏脱细胞支架的相关文献。中文检索词为脱细胞支架,种子细胞,再细胞化,动物实验;英文检索词为decellularized liver scaffolds,recellularization,bioengineered liver。共64篇文献纳入分析并进行引用及讨论。结果与结论:采用化学方法、物理方法或酶消化法将细胞从肝脏组织中移除,保留完整的细胞外基质三维结构,然后对该支架进行再细胞化,可制得生物人工肝。研究显示将生物人工肝移植入动物体内,可短时间代偿肝脏功能,在未来,将这类生物人工肝真正应用于临床仍需要面临巨大挑战。