黄山毛峰茶多酚提取物对肝药酶Cyp3a11的调控作用

以黄山毛峰为原料,采用实时荧光定量反转录聚合酶链式反应法和蛋白免疫印迹法研究其茶多酚提取物对肝药酶Cyp3a11及孕烷X受体(pregnane X receptor,PXR)的mRNA和蛋白表达影响,在此基础上采用瞬时共转染报告基因技术进一步验证是否通过PXR实现对Cyp3a11表达调控。结果表明:黄山毛峰茶多酚提取物各剂量组(75、150、300 mg/(kg·d))均能显著调控小鼠肝Cyp3a11、PXR m RNA及其蛋白表达;报告基因实验结果显示,100、200、300μg/m L黄山毛峰茶多酚提取物经PXR通路使细胞色素P4503A4基因荧光素酶活力分别增加(3.86±0.05)、(4.82±0.72)、(5.38±0.11)倍。研究表明黄山毛峰茶多酚提取物可激活PXR通路调控肝药酶Cyp3a11的表达。

探针药咪哒唑仑评价肝药酶抑制状态下CYP3A体内外代谢活性的实验研究

目的 以咪哒唑仑为探针药，研究大鼠肝药酶CYP3A抑制状态下对药物体内外代谢活性的影响，以建立评价CYP3A药物代谢功能的药动学指标。方法 ①体内实验：以咪哒唑仑（MDZ）为CYP3A底物，酮康唑（KTZ）为CYP3A选择性抑制剂，通过静脉注射负荷剂量（1．2、10、30mg／kg）与恒速滴注（0．7、2．0、3．0mg／hr／ks）相结合的方法，使KTZ达到不同的稳态血药浓度（约1．49、7．16、36．25μg／ml），以实现对CYP3A的持续抑制。恒速滴注开始后2h，大鼠舌静脉注射MDZ10mg／kg，在不同时间点采集血和肝样品；

基于尿液代谢组学研究肝药酶抑制剂对何首乌致肝损伤的影响-以CYP3A4为例

目的探讨CYP3A4亚型的特异性抑制剂酮康唑对何首乌致肝损伤的影响。方法将21只大鼠随机分为3组,每组7只,即正常对照组,何首乌组以及何首乌+酮康唑组。连续给药28 d。4周后收集大鼠尿液采用UPLC-Q-TOF-MS进行代谢组学研究,同时辅以血清生化指标及组织病理分析。结果血清生化指标显示与正常组相比何首乌组总胆酸和直接胆红素均显著升高,而酮康唑组总胆酸显著降低。肝脏病理结果显示何首乌组较正常组肝脏有轻到中度病理性改变,而何首乌+酮康唑组较何首乌组有所缓解。LC-MS代谢组学技术筛选到13个与何首乌致肝毒性相关的潜在生物标志物以及抑制CYP3A4后显著回调的4种生物标志物;代谢通路分析得到与何首乌肝毒性显著相关的代谢通路分别为苯丙氨酸、酪氨酸和色氨酸的生物合成,苯丙氨酸代谢和甘油磷脂代谢,而抑制CYP3A4后影响到的通路为甘油磷脂代谢通路。结论 CYP3A4被抑制后甘油磷脂代谢的回调可能是何首乌肝毒性缓解的原因。

甘遂与甘草合用对大鼠肝药酶CYP1A2、CYP2C19和CYP2E1的影响

“十八反”则告诫人们,甘遂（Euphorbia kansui,EK）与甘草（Glycyrrhiza uralensis,GU）相对立不宜伍用.但有学者认为,反药同用能相反相成,产生较强的功效.故一直以来,甘遂与甘草组合在临床上仍有广泛的应用[1-3].近年来,中药用药的安全性问题越来越受到重视,阐明“反”的机制,已成为中医药理论自身发展的必然要求.药物相互作用中最常见的原因是CYP450的诱导和抑制[4-5].

灯盏乙素苷元在大鼠肝微粒体中酶促反应动力学和对CYP3A的影响

灯盏细辛是菊科飞蓬属柑物短葶飞莲[Erigeron breviscapus （ Vant. ） hand-Mazz.]的干燥全草，具有活血化瘀、通经活络等功效，为贵州少数民族常用药物。灯盏乙素是其主要活性成分，而灯盏乙素苷元为灯盏乙素的主要活性代谢产物。

硝苯地平探针高效液相色谱法测定大鼠肝微粒体CYP3A酶活性

以硝苯地平为探针药物,研究建立一种大鼠肝微粒体CYP3A酶活性定量测定的高效液相色谱方法,并优化色谱条件和肝微粒体样品预处理方法.在测定条件下,硝苯地平经CYP3A酶代谢转化为氧化硝苯地平,其色谱保留时间7.09min,无内源性物质干扰.方法的线性检测范围1.0～40.0μmol/L,定量下限1.0μmol/L,回收率94.03%～98.88%,日内、日间相对标准偏差均小于7.3%.方法学验证结果表明,该方法快速、灵敏、准确,具有良好的专属性、精密度和稳定性,适于生物样品中氧化硝苯地平的定量测定,可用于CYP3A酶活性评价及酶动力学研究.

中药骨康诱导兔肝细胞色素CYP3A表达及抗激素性股骨头坏死实验研究

目的:探讨中药骨康通过对CYP3A活性调控预防股骨头坏死的作用。方法:将SPF级大白兔40只随机分成对照组(CT组)、诱导剂组(ID组)、抑制剂组(IH组)、骨康组(GK组),每组10只。CT组生理盐水灌胃,ID组苯巴比妥肌肉注射,IH组伊曲康唑口服,GK组中药骨康灌胃。连续用药3周后测定肝脏CYP3A活性,肌注甲泼尼龙琥珀酸钠造模,继续3周后处死动物,测量股骨头坏死率和股骨头空骨陷凹率。结果:给药后GK组CYP3A活性显著升高(P<0.05),CYP3A活性明显高于CT组及IH组(P<0.05);GK组股骨头坏死发生率明显低于CT组和IH组(P<0.05);GK组股骨头空骨陷凹率明显小于CT组和IH组(P<0.05);CYP3A活性与兔股骨头坏死发生率及空骨陷凹率均呈负相关(P<0.05)。结论:肝细胞色素CYP3A水平在兔激素性股骨头坏死中起重要作用,中药骨康能显著诱导CYP3A高表达,对激素性股骨头坏死有预防作用。

肝药酶CYP2C19基因多态性与氯吡格雷及质子泵抑制剂药物相互作用的研究进展

氯吡格雷是目前临床用于抗血小板聚集最重要的药物之一,质子泵抑制剂（PPI）亦是近年来治疗酸相关性疾病最有效的药物。CYP2C19基因多态性与PPI、氯吡格雷的药效学、药代动力学密切相关,对临床治疗有重要的现实意义。

3'-大豆苷元磺酸钠对肝药酶活性的影响

目的:探讨3'-大豆苷元磺酸钠对肝药酶活性的影响。方法:(1)腹腔注射3'-大豆苷元磺酸钠(0.1 mg/kg、0.2 mg/kg),15 min后,腹腔注射阈上剂量的戊巴比妥钠(2.5 g/L,0.02 mL/g),观察小鼠翻正反射消失时间;(2)腹腔注射3'-大豆苷元磺酸钠(0.1 mg/kg、0.2 mg/kg),15 min后,腹腔注射阈下剂量的戊巴比妥钠(2.5 g/L,0.01 mL/g),观察小鼠翻正反射消失时间;(3)连续腹腔注射3'-大豆苷元磺酸钠(0.1 mg/kg、0.2 mg/kg),连续10 d。取肝脏观察小鼠肝脏系数和肝药酶(肝微粒体细胞色素P450的含量变化)含量的影响。结果:(1)3'-大豆苷元磺酸钠能显著加速阈上剂量戊巴比妥钠的入睡时间和延长戊巴比妥钠的睡眠时间。(2)3'-大豆苷元磺酸钠能显著加速阈下剂量戊巴比妥钠的入睡时间和延长戊巴比妥钠的睡眠时间。(3)3'-大豆苷元磺酸钠能提高小鼠肝药酶含量。结论:3'-大豆苷元磺酸钠对肝药酶具有诱导作用。

醛固酮合成酶基因CYP11B2在肝储脂细胞中的表达

目的:检测醛固酮合成酶基因CYP11B2在肝储脂细胞中的表达。方法:异硫氰酸胍法提取总RNA,逆转录扩增CYP11B2。原位杂交检测肝组织CYP11B2的表达。结果:CYP11B2的表达定位于肝储脂细胞。结论:肝储脂细胞能表达CYP11B2。

健脾和胃方对大鼠肝微粒体CYP3A1酶活性的影响

目的研究健脾和胃方对大鼠肝微粒体细胞色素P450同工酶3A1(CYP3A1)活性的作用。方法 25只大鼠随机分为5组:空白对照组(生理盐水1 mL·kg-1·d-1,14 d)、地塞米松组(100 mg·kg-1·d-1,3 d)和健脾和胃方高、中、低剂量组(7.146,3.573,1.786 mg·kg-1·d-1,14 d),每组5只,灌胃给予相应的药物。采用高效液相色谱-紫外检测法,以睾酮为探针,测定睾酮经大鼠肝微粒体温孵后转化的代谢产物6β-羟基睾酮(6β-OHT)的生成速率,以评价各组CYP3A1酶活性。结果空白对照组、地塞米松组和健脾和胃方高、中、低剂量组6β-OHT的生成速率分别为(7.29±0.66)、(27.46±2.35)、(3.51±0.48)、(4.90±1.18)、(6.52±1.23)nmol·mg-1·min-1,健脾和胃方高、中、低剂量组6β-OHT的生成速率与地塞米松组均有显著性差异(P<0.05)。高、中剂量组与空白对照组有显著性差异(P<0.05),低剂量组与空白对照组无显著性差异(P>0.05)。结论本实验结果表明健脾和胃方对大鼠肝药酶CYP3A1酶活性无诱导作用,健脾和胃方的高、中剂量组能使大鼠肝药酶CYP3A1酶活性下降。

肝药酶CYP2C19基因多态性与抗抑郁药所致肝功能改变的关系

目的:探讨肝药酶CYP2C19基因多态性与抗抑郁药所致肝功能改变的关系。方法:检测35例应用抗抑郁药稳定剂量(符合临床诊疗指南推荐剂量)持续2周的患者CYP2C19基因多态性及治疗前后各项肝功能指标,并进行各基因型肝功能指标变化的比较。结果:35例患者中,CYP2C19基因型为快代谢型8例,中代谢型26例,慢代谢型1例。入组者肝功能指标基线均在正常范围;治疗2周后血清碱性磷酸酶(ALP)(P=0. 016)、总蛋白(TP)(P=0. 025)、总胆红素(TBIL)(P=0. 029)、直接胆红素(DBIL)(P=0. 035)水平明显下降;丙氨酸氨基转移酶(ALT)/天冬氨酸氨基转移酶(AST)(P=0. 032)、前白蛋白(PA)(P=0. 16)水平显著升高;各代谢型间治疗前后肝功能各项指标差值比较差异无统计学意义。结论:肝药酶CYP2C19基因多态性可能与抗抑郁药所致肝功能改变无关。

基于荧光探针技术检测30种农兽药及其二元、三元组合对CYP3A4酶的联合毒性

在农业生产中混合使用多种农药或兽药越来越普遍,但因药剂联合毒性效应的不确定性而对人体健康产生严重威胁。本文基于酶抑制法原理,利用荧光探针NEN(N-乙基-1,8-萘二甲酰亚胺)直接检测CYP3A4酶的活性,建立了广谱筛查混合农兽药联合毒性效应的方法,并以常用的30种农兽药及其典型的23种二元和26种三元组合为研究对象,检测了农兽药混合物对CYP3A4酶的联合毒性效应,其中标准质量浓度根据食品安全国家标准规定的农兽药最大残留限量确定。结果表明:3种质量浓度梯度下对CYP3A4酶均具有协同作用的混合农兽药组合有克百威+多菌灵、克百威+吡虫啉、啶虫脒+烯酰吗啉、吡虫啉+多菌灵、氯氰菊酯+啶虫脒+烯酰吗啉、克百威+啶虫脒+多菌灵、吡虫啉+啶虫脒+多菌灵、吡虫啉+啶虫脒+烯酰吗啉、毒死蜱+啶虫脒+多菌灵和联苯菊酯+啶虫脒+多菌灵。当单一农兽药对CYP3A4酶活性的抑制率较高时,与其他农兽药混合后联合毒性效应呈拮抗作用,而当单一农兽药对酶活性的抑制率低于2%时,则与其他农兽药混合后联合毒性效应呈现不确定性。农兽药组合在低浓度下对CYP3A4酶的联合毒性往往存在较强的协同作用,但随着浓度的升高,联合毒性效应从协同变为拮抗作用。分析农兽药与CYP3A4酶之间的构效关系可知,含有芳氯基团的数量与对酶活性的抑制程度成正相关,含有3个芳氯及以上基团的农兽药对CYP3A4酶活性的抑制作用最为显著,抑制率在30%以上,如百菌清、毒死蜱、甲基毒死蜱、咪鲜胺等;含有2个芳氯或“强吸电子基团+1个芳氯”基团的农兽药,对CYP3A4酶活性的抑制作用较强,抑制率在18%以上,如苯醚甲环唑、哒螨灵和异菌脲等。具有氨基甲酸酯基团的农兽药单独作用于CYP3A4酶毒性较小或几乎没有毒性时,与其他农兽药混合后显示较强的协同作用。本研究建立的检测方法为广谱筛查混合农兽药联合毒性提供了新思路,检测结果可为进一步在细胞和动物水平制订农兽药混剂的风险评估方案提供依据。

3′-大豆苷元磺酸钠对四氯化碳所致小鼠肝损伤和肝药酶的影响

目的研究3′-大豆苷元磺酸钠(3′-DSS)对四氯化碳(CCl4)所致小鼠肝损伤的影响。方法取雄性昆明种小鼠60只,每组12只,随机分为对照组、模型组、联苯双酯阳性对照组、0.1 mg/kg 3′-DSS组和0.3 mg/kg 3′-DSS组。每星期进行2次腹腔注射10%CCl4植物油溶液0.1 ml/10 g,造成慢性肝损伤模型,期间给予灌服2.5 mg/kg联苯双酯、0.1 mg/kg 3′-DSS、0.3 mg/kg 3′-DSS,持续6周,给药结束后,分别取血和肝脏,分离血清,制备肝均浆,检测丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天冬氨酸氨基转移酶(AST)的活性和肝药酶含量。结果与对照组比较,模型组小鼠肝功能明显下降,ALT、AST水平明显升高,肝药酶含量明显下降;与模型组比较,0.1、0.3 mg/kg 3′-DSS治疗组ALT、AST水平均有明显下降;肝药酶含量也明显增加。结论 3′-DSS对CCl4所致小鼠肝损伤具有明显的保护作用。

双峰驼肝脏CYP3A亚酶活性的初步研究

CYP3A亚酶参与45％～60％常用药物的生物转化，在机体处置外源性物质的过程中发挥着重要作用。为了探讨双峰驼肝脏CYP3A亚酶活性，采用改进的钙离子沉淀法制备肝微粒悬液，并借助生物化学方法对双峰驼CYP3A亚酶活性进行了初步研究。结果表明，钙离子沉淀法制备的双峰驼肝微粒体蛋白含量为（1．541±0．264）mg／mL，CYP总酶含量为（0．412±0．063）nmol／mg，红霉素-N-脱甲基酶的活性为（1．159±0．001）nmol／（mg·min）。以上研究结果为今后借助探针药物检测双峰驼CYP3A亚酶的体外代谢活性的深入研究奠定了基础。

灯盏细辛注射液对大鼠肝微粒体CYP3A的抑制作用

目的:研究灯盏细辛注射液对大鼠肝微粒体CYP3A酶活性的抑制作用。方法:在体外大鼠肝微粒体孵育体系中加入底物睾酮和不同体积的灯盏细辛注射液,用高效液相色谱法测定睾酮的羟化代谢产物6β-羟基睾酮的生成量反映CYP3A酶的活性。酮康唑用作阳性对照药。结果:在体外孵育体系中,灯盏细辛注射液对大鼠肝微粒体CYP3A酶活性有抑制作用,IC50和Ki值分别为0.40%和0.24%(V/V)。结论:体外给药灯盏细辛注射液对大鼠肝微粒体CYP3A酶活性有抑制作用,符合混合型抑制模型。

体内代谢法研究糖类药物对大鼠CYP3A4的影响

目的研究不同结构的糖类药物对肝药酶的影响,从而对这些新药进行安全性评价,并预测它们与其他药物合用的不良相互作用。方法通过研究肝药酶的专属探针药物的体内代谢过程的变化,进而判断不同结构糖类药物对这些酶有无诱导或抑制作用。结果SPMG对雌雄大鼠均有显著的抑制作用,但AOSC对CYP3A4无影响。结论结构不同的药物对CYP3A4的影响存在明显的差异,药物与各种与CYP3A4酶代谢有关的药物合用时,应充分考虑其对肝药酶的不同影响,以避免潜在的毒性或不良反应。

大黄酸对大鼠肝细胞色素P_(450)3A酶活性的抑制

目的研究大黄酸对大鼠肝微粒体细胞色素P4503A(CYP3A)酶活性的影响。方法在体外大鼠肝微粒体孵育体系中加入底物睾酮和不同浓度的大黄酸,采用高效液相色谱仪测定睾酮的羟基化代谢产物6β羟基睾酮的含量,计算CYP3A酶活性来反映大黄酸对CYP3A酶的抑制效果。结果大鼠肝微粒体孵育体系中,大黄酸对CYP3A酶活性有抑制作用,其半数抑制浓度(IC50)和Ki值分别为36.74,20.73μmol·L-1。结论在大鼠肝微粒体体外孵育系统中,大黄酸对CYP3A酶具有抑制作用。

血塞通注射液对鼠肝CYP3A体外抑制作用研究

目的:研究血塞通注射液对大鼠肝微粒体CYP3A酶活性的体外抑制作用。方法:在大鼠肝微粒体体外孵育体系中加入CYP3A酶的底物睾酮和不同体积的血塞通注射液,用高效液相色谱法测定睾酮的羟化代谢产物6β-羟基睾酮的生成量反映CYP3A酶的活性。酮康唑为阳性对照药。结果:在大鼠肝微粒体体外孵育体系中,血塞通注射液对CYP3A酶的IC_(50)和K_1值分别为血塞通注射液原液的0.87%和0.43%。结论:血塞通注射液在体外对大鼠肝微粒体CYP3A酶活性有抑制作用,符合混合型抑制模型。