大黄鱼肝表达抗菌肽2基因的克隆和原核表达

抗菌肽是在多种细胞中表达具有抗菌活性的肽类物质的总称,在免疫反应中发挥着非常重要的作用。通过同源克隆法克隆到大黄鱼肝脏表达的抗菌肽2(liver-expressed antimicrobial peptide-2,LEAP-2)基因的完整开放阅读框(Opening Reading Frame,ORF)。克隆到的大黄鱼LEAP-2全长2236 bp,包含外显子Ⅰ78 bp,内含子Ⅰ880 bp,外显子Ⅱ179 bp,内含子Ⅱ1044 bp,外显子Ⅲ55 bp,编码序列312 bp,编码103个氨基酸。推断的氨基酸序列羧基端区域存在高度保守的4个半胱氨酸残基,符合LEAP-2超家族的结构特征。同源性对比后显示LEAP-2基因在进化上高度保守,大黄鱼LEAP-2推断的氨基酸序列与牙鲆、黄颡鱼、蓝色鲶鱼和斑点叉尾鮰等鱼类之间的同源性均在95%以上。将大黄鱼LEAP-2 cDNA连接到pET-32a(+),构建了重组表达质粒pET-32a-LEAP-2,将其转化到大肠杆菌BL21上并用1.0 mmol/L IPTG诱导表达,获得了大小约为27 kDa的重组蛋白,与预期的一致。

小鼠LEAP-2成熟肽基因在毕赤酵母中的分泌表达

实验利用已构建的分泌型重组表达质粒pPIC9-mmLEAP-2,氯化锂转化表达宿主菌GS115毕赤酵母;应用表型和PCR技术筛选高拷贝转化株。经摇瓶发酵和甲醇诱导,SDS-PAGE分析重组mmLEAP-2表达量,为进一步研究mmLEAP-2的活性奠定了基础。

LEAP-2和Ghrelin在代谢相关疾病的研究进展

肝表达抗菌肽-2(LEAP-2)最近被发现是生长激素促分泌素受体1α(GHSR1α)的内源性配体,可拮抗胃促生长素(Ghrelin)的激活作用,后续发现还可以反向激动GHSR1α,降低GHSR1α的基础活性。这种拮抗关系,不仅在调节生长激素分泌方面发挥关键作用,还在调节食物摄入、肥胖、葡萄糖稳态等复杂功能方面发挥重要作用,并有望成为糖尿病、肥胖症、恶病质等代谢相关疾病诊断及治疗的新靶点。该文将结合Ghrelin来分析LEAP-2的作用,阐述其基本生物学功能和在相关疾病发生发展中的作用以及作为治疗靶点的潜力。