肝配蛋白B2在牙龈卟啉单胞菌诱导单核细胞黏附人脐静脉内皮细胞中的作用

目的 检测肝配蛋白B2 （erythropoietin producing hepatomocellular receptor interacting protein B2,Ephrin B2）及其受体在单核细胞THP-1黏附人脐静脉内皮细胞（human umbilical vein endothelial cell,HUVEC）中的作用,揭示牙龈卟啉单胞菌（Porphyromonas gingivalis,Pg）感染增强THP-1黏附HUVEC的分子机制.方法 应用厌氧罐培养Pg,以感染复数1∶100感染人单核细胞株THP-1,感染8和24 h后,收集部分样品分别用于检测THP-1细胞Ephrin B2及其受体表达水平的变化;其余样品与转染空载体或过表达Ephrin B2的HUVEC细胞共培养,用实时荧光定量和蛋白质印迹法检测HUVEC细胞Ephrin B2的表达水平,并观察Ephrin B2对THP-1与HUVEC黏附的影响.结果 Pg感染24 h后,THP-1细胞Ephrin B2受体EphB3、EphB4和EphA4的mRNA表达水平分别提高至5.169±0.152、11.040± 1.195和4.976±0.122,与未感染对照组（结果数据为1）相比差异均有统计学意义（P＜0.01）;与经Pg感染的THP-1共培养后,HUVEC细胞Ephrin B2的表达提高至8.938±0.962,与未感染对照组相比差异均有统计学意义（P=0.008）;不经过感染,HUVEC直接过表达Ephrin B2后,THP-1对HUVEC黏附性显著增加.结论 感染Pg的THP-1黏附HUVEC的数量增多与Ephrin B2及其受体的相互作用有关,提示动脉血管内皮细胞特异性表达的Ephrin B2分子参与动脉粥样硬化的发生.

结直肠癌组织SDF-1、Ephrin B2、ZNF545表达与EMT标志物、临床病理特征和预后的关系

目的研究结直肠癌组织基质细胞衍生因子-1(SDF-1)、肝配蛋白B2(Ephrin B2)、锌指蛋白545(ZNF545)表达与上皮间质转化(EMT)标志物、临床病理特征和预后的关系。方法选择2020年3月至2021年5月该院收治的结直肠癌患者63例,术中取其结直肠癌组织及癌旁正常组织,采用免疫组织化学法检测SDF-1、Ephrin B2、ZNF545及EMT标志物蛋白[包括神经性钙黏附素(N-cadherin)、波形蛋白(Vimentin)和上皮性钙黏附素(E-cadherin)]表达情况;采用Spearman相关分析SDF-1、Ephrin B2、ZNF545表达与EMT标志物蛋白表达的相关性;绘制Kaplan-Meier生存曲线分析SDF-1、Ephrin B2、ZNF545阴性、阳性表达患者无复发生存率与总生存率情况。结果结直肠癌组织SDF-1、Ephrin B2阳性率均高于癌旁正常组织,ZNF545阳性率低于癌旁正常组织,差异均有统计学意义(P<0.05)。结直肠癌组织N-cadherin、Vimentin、E-cadherin蛋白阳性率分别为50.79%(32/63)、61.90%(39/63)、33.33%(21/63)。SDF-1、Ephrin B2表达与N-cadherin、Vimentin蛋白表达均呈正相关,与E-cadherin蛋白表达呈负相关,ZNF545与N-cadherin、Vimentin蛋白表达均呈负相关,与E-cadherin蛋白表达呈正相关,差异均有统计学意义(P<0.05)。不同分化程度、TNM分期、淋巴结转移及远处转移患者SDF-1、Ephrin B2、ZNF545阳性率比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。SDF-1、Ephrin B2阳性表达患者无复发生存率和总生存率均较阴性表达患者低,ZNF545阳性表达患者无复发生存率和总生存率均较阴性表达患者高,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论SDF-1、Ephrin B2、ZNF545在结直肠癌中表达异常,与EMT标志物、病理特征及预后有关,可作为辅助检测手段,为评估患者预后提供参考依据。

沉默Ephrin B2基因表达对结直肠癌细胞侵袭和迁移的影响及其机制

目的探讨沉默肝配蛋白B2(Ephrin B2)基因表达对结直肠癌SW480细胞(以下称SW480细胞)侵袭和迁移的影响及其机制。方法体外培养SW480细胞,随机分为Ephrin B2组、阴性对照组、空白对照组。Ephrin B2组、阴性对照组分别转染Ephrin B2-siRNA、NC-siRNA,空白对照组不予转染。转染8 h再培养48 h,收集细胞。分别采用Transwell侵袭实验、划痕修复实验检测细胞侵袭和迁移能力,采用Western blotting法和qRT-PCR法检测E-cadherin、N-cadherin、Vimentin蛋白和mRNA表达。结果 Ephrin B2组细胞侵袭和迁移能力均明显低于阴性对照组和空白对照组(P均<0.05),而阴性对照组与空白对照组比较P均>0.05。与阴性对照组和空白对照组比较,Ephrin B2组N-cadherin、Vimentin蛋白和mRNA表达均明显降低,E-cadherin蛋白和mRNA表达均明显升高(P均<0.05),而阴性对照组与空白对照组比较P均>0.05。结论沉默Ephrin B2基因表达能抑制结直肠癌细胞侵袭和迁移能力,其机制可能与调控上皮间质转化过程有关。

结直肠癌组织Ephrin B2表达变化及其对上皮间质转化的影响

目的探讨结直肠癌组织肝配蛋白B2(Ephrin B2)表达变化及其对上皮间质转化(EMT)的影响。方法选择结直肠癌组织、癌旁组织及正常结直肠组织各45例份,采用qRT-PCR法、Western blotting法检测Ephrin B2 mRNA和蛋白表达。采用免疫组化法检测Ephrin B2蛋白及EMT标记物N-cadherin、Vimentin、E-cadherin蛋白阳性表达。分析Ephrin B2蛋白阳性表达与结直肠癌患者临床病理参数的关系及其与N-cadherin、Vimentin、E-cadherin蛋白阳性表达的关系。结果结直肠癌组织及癌旁组织Ephrin B2 mRNA和蛋白相对表达量均高于正常结直肠组织(P均<0.05);结直肠癌组织Ephrin B2 mRNA及蛋白相对表达量与癌旁组织比较差异无统计学意义(P均>0.05)。Ephrin B2蛋白阳性表达与结直肠癌患者性别、年龄无关(P均>0.05),与肿瘤临床分期、组织分化程度、淋巴结转移及远处转移有关(P均<0.05)。结直肠癌组织Ephrin B2蛋白阳性表达与E-cadherin蛋白阳性表达呈负相关关系(r=-0.216,P<0.05),与N-cadherin、Vimentin蛋白阳性表达均呈正相关关系(r分别为0.401、0.379,P均<0.05)。结论结直肠癌组织中Ephrin B2高表达,其表达变化能促进EMT,增强肿瘤的侵袭、转移能力。

基于生物信息学筛选非肌层浸润性膀胱癌复发关键基因并验证

目的利用生物信息学筛选非肌层浸润性膀胱癌复发关键基因,并进一步对其在膀胱尿路上皮癌中的作用及临床意义进行实验验证。方法从NCBI GEO数据库中下载数据,筛选复发性非肌层浸润性膀胱尿路上皮癌与正常膀胱黏膜差异表达基因,按差异表达倍数(logFC)及P值排序,前250个(Top250)基因在Metascape数据库进行富集分析并可视化,Top54基因在GEPIA2数据库做生存分析取P值最低基因作为关键基因;免疫组织化学检测关键基因在临床膀胱癌样本中复发性非肌层浸润性膀胱癌组织和癌旁组织的表达,样本来源于该院病理科;实时荧光定量PCR(qRT-PCR)、Western blot检测关键基因及蛋白在膀胱尿路上皮癌细胞系中与膀胱黏膜上皮细胞中的表达,集落形成实验、CCK-8、划痕实验和Transwell等实验检测敲低该基因表达对膀胱癌细胞系中T24细胞的增殖、迁移与侵袭等生物学功能的影响。结果差异表达基因Top250富集分析显示差异表达基因主要参与细胞周期调控、细胞分裂DNA生物合成、染色质结合蛋白泛素化的正调控等,筛选出54个显著差异表达基因(上调14个,下调40个),关键基因是促癌基因肝配蛋白B2(EFNB2)。验证试验结果显示,与对应癌旁组织比较,EFNB2高表达于复发性非肌层浸润性膀胱癌组织(P<0.01),与对照组T24细胞比较,EFNB2敲低组T24细胞的增殖、迁移、侵袭均显著降低(P<0.05)。结论EFNB2是促进非肌层浸润性膀胱癌复发的关键基因,是一个潜在的复发性非肌层浸润性膀胱癌的治疗靶点。