含离子液体[bmim]Cl的反应介质中马肝醇脱氢酶的催化特性

研究了马肝醇脱氢酶(HLADH)在含离子液体1-丁基-3-甲基咪唑氯酸盐([bmim]Cl)的反应介质中的催化特性.以乙醇为底物时,该酶在[bmim]Cl含量≤0.15 g/ml的体系中的活力高于在不含离子液体的体系中的活力;离子液体浓度过高(>0.15 g/ml)对酶活性有明显的抑制作用.反应温度和pH对含离子液体的反应介质中酶活力的影响规律与不含离子液体时的规律相似.与不含离子液体的反应介质相比,HLADH在含0.05 g/ml[bmim]Cl的体系中催化乙醇氧化的活化能下降,酶反应的Vmax和Km均升高.反应体系中低浓度(≤0.1 g/ml)的离子液体能提高酶的热稳定性,但高浓度(>0.1 g/ml)的离子液体可降低酶的热稳定性.紫外二阶导数光谱显示,在含不同浓度离子液体的反应介质中酶分子构象的变化有较大的差异.

马肝醇脱氢酶催化有机硅酮不对称还原反应动力学

探讨了马肝醇脱氢酶 (HLADH)催化三甲基硅乙酮及其碳结构类似物不对称还原反应动力学 .结果表明 ,在酶浓度低于 15 0mg/L时 ,底物浓度与反应初速度的关系符合米氏动力学方程 ;HLADH催化三甲基硅乙酮不对称还原反应的Km、vmax和Ea 分别为 2 67mmol/L、 0 118mmol/ (L·min·mg)和 3 7kJ/mol,其碳结构类似物的相应值分别为 3 5 6mmol/L、 0 0 84mmol/ (L·min·mg)和 61kJ/mol.

肝醇脱氢酶催化乙醇氧化生成乙醛反应机理的理论研究

采用B3LYP方法研究了肝醇脱氢酶催化烟酰胺腺嘌呤二核苷酸氧化乙醇生成乙醛的反应机理.优化得到了反应物、过渡态、中间体和产物的几何构型,并计算了在蛋白质或水环境下有或没有肝醇脱氢酶时的反应势垒.结果表明,没有催化剂时,乙醇负离子的形成及其被氧化生成乙醛的反应势垒都很高,常温下反应难以进行;当肝醇脱氢酶存在时,乙醇负离子可以与肝醇脱氢酶中的Zn2+配位形成络合物,从而极大地降低了这两步的反应势垒,使得反应在常温下容易进行.

马肝醇脱氢酶基因的克隆及其在大肠杆菌中的表达

利用RT-PCR技术从马肝扩增HLADH-E和HLADH-S基因,通过基因工程方法构建表达质粒pLY115E和pLY115S,在大肠杆菌中表达,并利用Ni柱分离纯化。利用紫外检测辅酶NADH在340nm的吸光值,来考察表达产物转化环己醇的活性。试验结果证明马肝醇脱氢酶HLADH-E和HLADH-S基因均能在大肠杆菌中表达,并且可溶性表达产物都具有氧化环己醇的活性,为马肝醇脱氢酶的进一步研究开发奠定了基础。

电泳法检测肝和血清中醇脱氢酶同工酶

目的:建立琼脂糖凝胶电泳法检测人血清醇脱氢酶(alcoholdehydrogenase isoenzymes ADH EC 1.1.1.1)同工酶。方法:采用自制琼脂糖凝胶板,摸索实验条件,在pH8.6,74mmol/L巴比妥电泳缓冲系统中进行20mA、20min电泳,可清晰地分离出ADH同工酶三条区带。结果:检测了67例患者血清ADH总活性0.013-0.021Kat/L,同工酶ADHⅠ占ADH总活性0.0l-0.30,ADHⅡ占ADH总活性0.12-0.31,ADHⅢ占ADH总活性0.39-0.80。检测了10例人健康肝组织匀浆的ADH总活性为0.136-0.196Kat/L,同工酶ADHⅠ占总活性的0.07-0.25,同工酶ADHⅡ占总活性的0.19-0.27和同工酶ADHⅢ占总活性0.56-0.73。结论:正常人血清中ADH酶活性很低,为0-1.8×10^(-3)Kat/L,其同工酶不易被检测出。而肝脏组织中含有大量ADH酶活性,当肝脏受到严重损伤时,ADH即从肝细胞内逸出,进入血液,使血清中ADH酶活性明显升高,同时通过琼脂糖电泳对其同工酶的检测可测出三条区带,帮助临床进一步了解肝细胞损伤程度,对患者预后和病程的监测具有一定的临床意义。

底物中的硅原子对酶反应的影响

在酶工程学的研究史上，人们一方面不断地研制开发新的酶种；一方面利用固定化、酶分子改造和修饰等技术来提高酶的活性和稳定性；另一方面，则不断地开拓酶的新用途。酶催化非天然化合物的生物合成和转化（正是这一方面研究的新进展）。由于有机硅化合物在有机合成，尤其...