参桃软肝颗粒抑制肝癌的分子机制及调控RBPJ的探索

目的肝细胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC)是全球第四大常见癌症,严重威胁着国民健康。参桃软肝颗粒(STR)是国医大师周岱翰教授治疗肝癌的临床经验方,在临床实践中取得了良好的疗效,阐明其抑制肝癌生长和转移的机制是亟需解决的问题。方法Transwell侵袭迁移实验检测STR对HepG2细胞侵袭能力的影响,蛋白质印迹法(Western blot,WB)检测STR对Huh7细胞株RBPJ蛋白的表达影响。观察STR对Huh7荷瘤小鼠移植瘤生长的影响。RNA-seq鉴定STR处理的Huh7移植瘤组织中差异表达基因(differentially expressed genes,DEGs)。结果STR可显著抑制HepG2细胞的迁移和侵袭能力,STR可通过蛋白泛素化降解的途径减少RBPJ蛋白的表达;STR给药后,肝癌模型小鼠移植瘤体积以及瘤体重量均下降,肿瘤生长明显受到抑制。在对照组和STR给药组组间共发现2961个DEGs,其中上调和下调基因分别为1884和1077个。基因本体论(gene ontology,GO)、京都基因与基因组百科全书(Kyoto encyclopedia of genes and genomes,KEGG)和疾病本体论(disease ontology,DO)通路富集分析分别展示了STR可能作用的信号通路。结论Notch信号在肝癌中频繁发生异常表达及激活突变,转录因子RBPJ是Notch信号通路主要的下游靶基因,可以增强Notch信号通路中下游基因的表达。STR对肝细胞癌的抑制作用显著,其分子机制可能与抑制RBPJ的蛋白表达相关。

保肝颗粒对大鼠酒精性肝损伤的早期干预作用

观察保肝颗粒对大鼠酒精性肝损伤的早期干预作用。将144只大鼠随机分为空白组、模型组、联苯双酯组、保肝颗粒低、中、高剂量组,给药1 h后除空白组外,其余各组按10 mL/kg灌胃50%乙醇,1 h后重复灌胃50%乙醇一次,空白组灌胃等体积蒸馏水,连续6 d。于实验开始的第2、3、4、6天每组分别随机处死大鼠6只,腹主动脉取血,检测血清中丙氨酸氨基转移酶(alanine aminotransferase,ALT)、天门冬氨酸氨基转移酶(aspartate aminotransferase,AST)、碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)、总胆红素(total bilirubin,TBIL)、肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)、白介素-6(interleukin-6,IL-6)、α-谷胱甘肽-S-转移酶(α-glutathione S-transferase,α-GST)、谷氨酸脱氢酶(glutamate dehydrogenase,GLDH)、精氨酸酶1(arginase 1,Arg-1)、嘌呤核苷酸磷酸化酶(purine nucleotide phosphorylase,PNP)水平;肝匀浆中超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)、丙二醛(malondialdehyde,MDA)水平。结果表明:与空白组比,模型组大鼠血清AST、ALT、ALP、TBIL、TNF-α、IL-6、α-GST、GLDH、Arg-1、PNP水平明显升高(P<0.05,P<0.01),肝组织MDA水平明显升高、SOD水平明显降低(P<0.05,P<0.01);与模型组比,保肝颗粒可以明显降低血清AST、ALT、ALP、TBIL、TNF-α、IL-6、α-GST、GLDH、Arg-1、PNP的水平,提高肝组织中SOD的活性,降低MDA的含量(P<0.05,P<0.01)。说明保肝颗粒早期干预大鼠酒精性肝损伤有较好的保肝作用。

扶正挽肝颗粒水提工艺及质量标准研究

目的:优选扶正挽肝颗粒的水提工艺,并建立扶正挽肝颗粒的质量标准控制方法。方法:通过正交L_(9)(3^(4))试验选取加水量、煎煮时间及煎煮次数三个因素的最佳指标,选择干膏出膏率作为评价指标,确定扶正挽肝颗粒的最佳水提工艺。以薄层色谱法(TLC),对白芍和柴胡两味药材进行定性鉴别,开展剂型的粒度、水分、溶化性、装量差异、微生物限度等常规项检查。结果:扶正挽肝颗粒的最佳水提工艺为加8倍水量、煎煮3次,每次煎煮时间为1.0 h;白芍、柴胡样品薄层色谱斑点清晰,阴性无干扰;该水提工艺提取的颗粒样品粒度、水分、溶化性、装量差异和微生物限度等常规项检查均符合2020版《中华人民共和国药典》第四部“颗粒剂”项下相关规定。结论:该研究优选出的水提工艺符合扶正挽肝颗粒的生产需要,所制定的扶正挽肝颗粒质量控制方法稳定、可行。

化滞柔肝颗粒对湿热中阻型非酒精性脂肪性肝病患者的临床疗效及对炎症因子的影响

目的探讨化滞柔肝颗粒对湿热中阻型非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)的临床治疗效果,并观察其对外周血清中炎症因子的干预作用。方法选取2021年1月至12月武汉市第三医院就诊的湿热中阻型NAFLD患者90例作为研究对象,采用随机数字表法将其分为治疗组和对照组,每组45例。对照组在基础治疗的基础上加用多烯磷脂酰胆碱胶囊,治疗组在基础治疗的基础上加用化滞柔肝颗粒,两组均连续治疗3个月。比较两组治疗前后的体重指数、血脂、肝功能及炎症指标(Toll样受体-4、髓样分化因子88、核因子κB)。结果治疗后,两组甘油三酯,丙氨酸转氨酶,天冬氨酸转氨酶水平均低于治疗前,且治疗组低于对照组(P<0.05)。治疗后,治疗组体重指数低于治疗前,且治疗组低于对照组(P<0.05)。治疗后,两组Toll样受体-4、髓样分化因子88、核因子κB、肿瘤坏死因子-α、白细胞介素-1β水平均低于治疗前,且治疗组低于对照组(P<0.05)。两组不良反应总发生率比较,差异无统计学意义(P>0.05)。两组治疗前后体温、心率等生命体征,及心电图等安全性指标未发现明显变化。结论化滞柔肝颗粒治疗湿热中阻型NAFLD临床效果显著,可减轻体重,下调体重指数,改善血脂与肝功能,下调炎症因子,抑制炎症反应。

基于超高效液相色谱-四级杆-静电场轨道阱和网络药理学技术的清肝颗粒质量评价研究

目的:阐明清肝颗粒治疗黄疸性肝炎的物质基础,建立科学的质量控制方法。方法:采用超高效液相色谱-四级杆-静电场轨道阱(UPLC-Q-Exactive-Orbitrap-MS)技术对清肝颗粒的活性成分进行表征分析;以清肝颗粒中鉴定出的活性成分为目标对象,进行网络药理学和分子对接研析,并建立多成分含量测定方法。结果:共鉴定出134个成分,其中黄酮类50个、糖苷类8个、苯丙素类17个、三萜类11个、萜类6个、氨基酸类11个、有机酸类9个、脂肪酸类7个、生物碱类8个、挥发油类5个、醌类1个,并解析了黄酮类、萜类、有机酸类、生物碱类以及糖苷类代表性化合物的裂解规律。通过网络药理学分析筛选出8个核心靶点。预测了主要活性成分为异甘草素、腺苷、甘草素、鸟苷、4,5-二咖啡酰奎宁酸等。其次,依据可测性、特征性以及活性相关性的原则,建立了3,4-二咖啡酰奎宁酸、(R,S)-告依春、甘草素、4,5-二咖啡酰奎宁酸和甘草酸铵等5个潜在活性成分的含量测定方法。结论:筛选出了清肝颗粒治疗黄疸性肝炎的主要药效活性成分,并展开定量研究,可为清肝颗粒质量控制水平的提高提供了依据。

舒肝颗粒联合盐酸舍曲林片治疗脑卒中后抑郁症的疗效观察

目的:观察舒肝颗粒联合盐酸舍曲林片治疗脑卒中后抑郁症的疗效与安全性。方法:选取2019年12月~2021年12月某院收治的97例脑卒中后抑郁症患者为研究对象,采用随机数字表法分为对照组(n=48)与观察组(n=49)。对照组给予盐酸舍曲林片,观察组在对照组治疗基础上加用舒肝颗粒。比较两组临床疗效、汉密尔顿抑郁量表(HAMD)及抑郁自评量表(SDS)评分变化、斯堪的那维亚卒中量表(SSS)评分变化、匹兹堡睡眠质量指数(PSQI)评分变化与日常生活能力评定量表(ADL)评分变化、中医证候总积分变化和药物不良反应。结果:观察组治疗总有效率(97.96%)高于对照组(83.33%,P<0.05);治疗后,两组HAMD评分、SDS评分、SSS评分、PSQI评分、ADL评分与中医证候总积分均改善,且观察组各项评分均优于对照组(P<0.05);观察组不良反应发生率(4.08%)低于对照组(18.76%,P<0.05)。结论:舒肝颗粒与盐酸舍曲林片治疗脑卒中后抑郁症的临床疗效更佳,且用药安全可靠。

抗纤软肝颗粒对肝纤维化大鼠Hedgehog通路核转录因子Gli1的影响

目的观察抗纤软肝颗粒对肝纤维化模型大鼠Hedgehog通路核转录因子Gli1的影响。方法将60只SPF级Wistar大鼠随机分成空白对照组,模型组,抗纤软肝颗粒低、中、高剂量组和环靶明对照组。除空白对照组外,所有实验大鼠均以四氯化碳(CCl4)复合因素法诱导肝纤维化模型8周。第9周开始给药干预,抗纤软肝颗粒低、中、高剂量组分别给予1.125 g/kg、2.5 g/kg、5 g/kg相应药物灌胃,环靶明对照组给10 mg/kg环靶明灌胃;均连续灌胃2周,灌胃期间造模继续。采用酶联免疫吸附试验检测各组大鼠肝功能指标及Ⅰ型胶原水平;采用Gomori银染法观察各组肝脏组织病理学改变;采用Real-time PCR法检测各组大鼠肝组织Gli1 mRNA表达水平,Western-blot法检测各组大鼠肝组织Gli1蛋白质表达水平,免疫组化法检测各组大鼠肝组织Gli1表达。结果Gomori银染显示,模型组大鼠肝组织中胶原纤维广泛增生,纤维间隔相互连接,假小叶形成;抗纤软肝颗粒各剂量组大鼠肝脏组织纤维化程度较模型组减轻,但不如环靶明对照组。与模型组比较,抗纤软肝颗粒中、高剂量组、环靶明组血清丙氨酸氨基转移酶(alanine aminotransferase,ALT)、天冬氨酸氨基转移酶(aspartate aminotransferase,AST)水平显著降低(P<0.05),且高剂量组显著低于低剂量组(P<0.05);与模型组比较,抗纤软肝颗粒低、中、高剂量组Ⅰ型胶原含量明显降低(P<0.01),且高剂量组明显低于低、中剂量组(P<0.05);与环靶明对照组比较,抗纤软肝颗粒高剂量组ALT、AST水平及I型胶原含量差异无统计学意义(P>0.05)。与模型组比较,抗纤软肝颗粒各剂量组Gli1 mRNA及蛋白表达均降低(P<0.01);与环靶明对照组比较,抗纤软肝颗粒中、高剂量组Gli1 mRNA差异无统计学意义(P>0.05),而抗纤软肝颗粒各剂量组Gli1蛋白表达均增加(P<0.05)。免疫组化结果显示,抗纤软肝颗粒各剂量组大鼠肝脏组织Gli1的表达较模型组出现不同程度减少,其中以高剂量组减少最显著,但各剂量组减少程度均不如环靶明对照组。结论抗纤软肝颗粒对CCl4复合因素法所致的大鼠肝纤维化有保护作用,其作用机制可能与下调Hedgehog通路核转录因子Gli1有关。

柔肝颗粒联合恩替卡韦治疗肝硬化的回顾性对照研究

目的:回顾性研究柔肝颗粒辅助治疗肝硬化的疗效,以扶正化瘀胶囊为对照,分析两者优势及特点,为指导临床合理用药提供参考。方法:分析2021年3月~2023年6月就诊于江苏省中医院感染科肝硬化患者的病案,分为研究组(柔肝颗粒,105例)及对照组(扶正化瘀胶囊,106例),比较两组患者治疗3个月后肝功能与肾功能的变化,及免疫细胞、肝纤维化、肝硬度及门静脉血流等指标的差异。结果:柔肝颗粒与扶正化瘀胶囊治疗3个月均能显著改善患者肝功能(P <0.05),降低肝纤维化生化指标(P<0.05);此外,柔肝颗粒还能显著降低肝硬度值(P<0.05),提高门静脉流速(P<0.05),改善肾功能(P<0.05),改善中性粒细胞淋巴细胞比值(P<0.01);而扶正化瘀胶囊能够显著改善免疫功能(P<0.05)。结论:柔肝颗粒治疗肝硬化预后良好,对并发肝肾综合征的肝硬化患者更推荐使用柔肝颗粒。

化滞柔肝颗粒减轻非酒精性脂肪性肝炎相关肝纤维化的机制研究

目的结合网络药理学研究方法,探讨化滞柔肝颗粒(HZRG)减轻非酒精性脂肪性肝炎(NASH)相关肝纤维化的作用机制。方法借助网络药理学分析聚焦HZRG治疗NASH的潜在靶点。将雄性C57BL/6小鼠随机分为对照组、模型组和HZRG低、高剂量组,每组8只。除对照组外,其余各组小鼠给予蛋氨酸胆碱缺乏饮食诱导NASH相关纤维化模型,造模的同时给予相应药物干预,连续4周。HE染色观察肝组织病理变化,并行非酒精性脂肪性肝病活动度评分(NAS);天狼猩红和Masson染色法观察肝脏胶原沉积情况;免疫组化法观察肝组织中α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)和Ⅰ型胶原蛋白α1链(Col1a1)的表达情况,并用ImageJ软件分析阳性表达面积。试剂盒检测肝组织总胆固醇(TC)、三酰甘油(TG)水平。采用生化分析仪检测各组小鼠血清丙氨酸转氨酶(ALT)、天冬氨酸转氨酶(AST)、乳酸脱氢酶(LDH)、碱性磷酸酶(ALP)水平,ELISA试剂盒检测血清肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平。Western blot法和免疫荧光法检测α-SMA、Col1a1、p53蛋白表达水平;RT-qPCR法检测p53 mRNA相对表达量。不同浓度转化生长因子-β1(TGF-β1)或Tenovin-6处理人源性肝星状细胞系LX2细胞24 h,检测相关指标。结果①网络药理学研究结果提示,p53是HZRG发挥效应的潜在靶点。②HE染色、Masson染色和天狼猩红染色结果显示,模型组小鼠肝脏脂质累积、炎细胞浸润、纤维化形成,与对照组比较,模型组小鼠肝组织病理α-SMA、Col1a1阳性表达面积增加(P<0.05),NAS评分升高(P<0.05);HZRG低、高剂量组小鼠肝细胞内脂滴减少,肝脏脂肪变和炎细胞浸润程度明显减轻,与模型组比较,HZRG低、高剂量组肝组织病理α-SMA、Col1a1阳性表达面积减少(P<0.05),NAS评分降低(P<0.05)。③与对照组比较,模型组小鼠血清ALT、AST、LDH、ALP水平升高(P<0.05);与模型组比较,HZRG低、高剂量组小鼠血清ALT、AST、LDH、TNF-α水平降低(P<0.05),HZRG低剂量组小鼠血清ALP水平降低(P<0.05)。④与对照组比较,模型组小鼠肝组织TG、α-SMA蛋白水平升高(P<0.05);与模型组比较,HZRG高剂量组小鼠肝组织α-SMA蛋白水平降低(P<0.05),HZRG低、高剂量组小鼠肝组织TG、Col1a1蛋白水平降低(P<0.05)。⑤各组小鼠肝组织p53 mRNA表达水平比较,差异无统计学意义(P>0.05)。⑥p53蛋白在NASH小鼠肝组织及活化的LX2细胞中表达降低,HZRG及Tenovin-6可上调其表达;p53蛋白表达升高,可缓解NASH小鼠肝组织纤维化进展、抑制LX2细胞活化。结论HZRG减轻NASH相关肝纤维化的机制可能与上调p53蛋白表达有关。

双虎清肝颗粒中4种成分在大鼠血浆中体内药动学研究

目的考察双虎清肝颗粒中马钱苷酸、獐牙菜苷、虎杖苷、甘草苷在大鼠血浆中的体内药动学。方法10只大鼠随机分为2组,分别灌胃给予10.5、21.0 g生药/kg药物溶液,于0、5、15、30、45、60、120、240、360、480、600、1440 min采血,UHPLC-Q-Exactive Orbitrap HRMS法测定4种成分血药浓度,计算主要药动学参数。结果双虎清肝颗粒不同剂量组中各成分C max依次为獐牙菜苷>甘草苷>马钱苷酸>虎杖苷,T max依次为獐牙菜苷>马钱苷酸>甘草苷>虎杖苷,AUC 0~t、AUC 0~∞依次为獐牙菜苷>马钱苷酸>甘草苷>虎杖苷。结论本实验可为双虎清肝颗粒临床应用和效应物质基础研究提供参考。

天钩平肝颗粒质量标准研究

目的建立天钩平肝颗粒的质量标准。方法采用薄层色谱(TLC)法对天钩平肝汤及颗粒样品中川芎、首乌藤、葛根药材进行定性鉴别;采用高效液相色谱(HPLC)法测定煎剂、颗粒及其药材样品中天麻素、栀子苷、葛根素、黄芩苷的含量,并计算转移率。结果川芎、首乌藤、葛根的TLC图斑点清晰,分离度高,阴性对照无干扰。天麻素、栀子苷、葛根素、黄芩苷进样量分别在12.68~608.52 ng、75.00~180.00 ng、17.75~425.88 ng、50.00~1200.00 ng范围内与峰面积线性关系良好(r=0.9999);精密度、稳定性、重复性试验结果的RSD均小于3.0%;平均加样回收率分别为100.26%,98.80%,99.11%,98.57%,RSD分别为1.24%,1.84%,1.07%,1.46%(n=6);颗粒各活性成分平均转移率分别为67.52%,78.78%,71.16%,76.62%,明显高于煎剂。结论所建立的标准可用于天钩平肝颗粒的质量控制。

软肝颗粒联合恩替卡韦对乙肝肝硬化代偿期活动期患者肝功能相关指标的影响研究

目的分析对乙肝肝硬化代偿期活动期患者应用恩替卡韦联合软肝颗粒治疗的效果。方法选取2018年12月—2021年3月高安市人民医院收治的66例乙肝肝硬化代偿期活动期患者,依据随机数字表法分组,对照组33例使用恩替卡韦治疗,在此基础上研究组33例结合软肝颗粒治疗。比较2组患者治疗效果、肝功能水平。结果研究组患者有效率为96.97%,显著高于对照组的78.79%,(P<0.05)。治疗后,2组患者肝功能各指标均下降,且研究组ALT、TBiL、AST均低于对照组(P<0.05)。治疗后2组肝纤维三项水平均显著降低,且研究组LN、IV-C、HA均低于对照组(P<0.05);。治疗后2组门、脾静脉内径和Fibroscan肝脏硬度值均显著降低,且研究组低于对照组(P<0.05)。结论乙肝肝硬化代偿期活动期患者采用恩替卡韦联合软肝颗粒治疗效果显著优于单纯西药治疗,同时可显著改善肝功能水平,降低肝纤维化程度,值得推广。

正交试验优选天钩平肝颗粒的成型工艺

目的基于正交试验法优选天钩平肝颗粒的成型工艺。方法以颗粒的成型率、溶化时间、流动性的综合得分为评价指标,采用L_(9)(3^(4))正交试验法优化药辅比、润湿剂的体积分数和用量,筛选出天钩平肝颗粒的成型工艺。结果天钩平肝颗粒的最佳药辅比为稠膏∶糊精∶淀粉=1∶1∶1(g∶g∶g),以85%乙醇作润湿剂,润湿剂用量为润湿剂∶稠膏=74∶100(mL∶g)。结论优选出的天钩平肝颗粒成型工艺重复性好,质量稳定可靠,为其大批量生产提供依据。

夏枯草口服液联合舒肝颗粒对乳腺增生患者乳腺超声指标及激素水平的影响

目的探究夏枯草口服液联合舒肝颗粒对乳腺增生患者乳腺超声指标及激素水平的影响。方法按随机数字表法将2020年01月-2022年01月收治的80例乳腺增生患者分为两组,各40例。对照组予以逍遥丸治疗,研究组予以夏草枯口服液联合舒肝颗粒治疗,对比两组临床疗效、症状缓解时间、超声指标、激素水平[血清雌二醇(E2)、催乳素(PRL)、孕酮(P)]、疼痛评分及不良反应情况。结果研究组治疗后临床疗效高于对照组,疼痛评分、不良反应发生率低于对照组,症状缓解时间短于对照组(P<0.05);治疗后两组超声指标、E2、PRL水平均低于治疗前,且研究组低于对照组(P<0.05);治疗后两组P水平高于治疗前,且研究组高于对照组(P<0.05);两组不良反应对比,差异无统计学意义(P>0.05)。结论乳腺增生患者应用夏枯草口服液联合舒肝颗粒临床症状可得到有效缓解,利于改善超声指标,调节内分泌激素,减轻疼痛乳房疼痛程度,且安全性较高。

基于网络药理学和分子对接技术探讨清肝颗粒治疗慢性肝炎的作用机制

目的:利用网络药理学分子对接技术探讨清肝颗粒治疗慢性肝炎的作用机制。方法:首先利用TCMSP数据库收集清肝颗粒的中的化学成分以及靶点,利用OB、DL筛选候选活性化合物成分,然后通过CTD数据库、TTD数据库筛选出慢性肝炎相关的靶点;通过DAVID数据库对靶点进行GO富集分析和KEGG通路分析。运用Cytoscape3.6.1构建化合物-靶点、靶点-通路网络图;慢性肝炎通路整合与分析,最后通过AutoDock软件对主要活性成分及核心作用靶点进行分子对接验证。结果:检索得到清肝颗粒的化合物成分487个、靶点466个;筛选得到候选活性成分101个、慢性肝炎相关靶点115个,GO富集分析得到GOCC、GOMF、GOBP条目(p≤0.05)分别46、49、207个;KEGG通路富集筛选得到相关的通路23条,涉及钙信号通路、非酒精性脂肪肝、T细胞受体信号通路等。构建“慢性肝炎通路”,揭示了清肝颗粒在通路水平上协同发挥治疗慢性肝炎的效果,分子对接结果显示潜在的活性成分与核心靶点PTGS2、PPARG和NOS2均有较好的结合。结论:该研究通过运用网络药理学的研究方法发现清肝颗粒治疗慢性肝炎具有多成分、多靶点、多通路的作用特点,从抗炎、修复损伤的肝细胞、提高机体免疫力等多个方面协同发挥治疗作用。为后续的实验研究提供了理论依据,为其他中成药的研究提供了新的思路。

杞枣养肝颗粒对大鼠酒精性肝损伤模型的影响

研究杞枣养肝颗粒对大鼠酒精性肝损伤模型的影响。采用56°二锅头灌胃法建立大鼠酒精性肝损伤模型,将大鼠随机分为6组,分别灌服杞枣养肝颗粒混悬液、护肝宁片混悬液和相同体积的生理盐水,连续给药5 d,于第5 d后开始测定。检测各组大鼠血清中AST、ALT以及大鼠肝匀浆中的MDA、SOD的含量,显微镜下观察各给药组大鼠肝组织切片病理组织学变化。实验结果显示:与模型组对照,杞枣养肝颗粒中剂量组、低剂量组和护肝宁片对照组血清中AST、ALT水平及肝匀浆中MDA水平显著下降(P<0.01),肝匀浆中SOD水平明显升高(P<0.01)。各给药组肝组织病理切片显示:阳性对照组、杞枣养肝颗粒低剂量组和中剂量组能显著对抗56°二锅头。杞枣养肝颗粒能明显降低大鼠酒精性肝损伤血清中AST、ALT水平及肝匀浆中MDA水平,升高肝匀浆中SOD水平,各组间差异具有显著的统计学意义,结合病理切片说明此中成药能改善肝损伤细胞的结构、形态、炎细胞浸润程度从而起到保护肝脏的作用。

化脂复肝颗粒对糖尿病非酒精性脂肪性肝病小鼠胃肠功能及肠道菌群的影响

目的探讨化脂复肝颗粒对糖尿病非酒精性脂肪性肝病小鼠胃肠功能及肠道菌群的影响。方法制备自发性2型糖尿病db/db小鼠非酒精性脂肪性肝病模型,将其随机分为对照组、模型组、化脂复肝颗粒组、非诺贝特组、西沙必利组,行血清学指标检测及肠道粪便基因测序,观察肠道组织病理形态。结果与对照组相比,模型组总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)水平有所升高,高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、胰岛素水平有所降低;化脂复肝颗粒在降低TG、LDL-C,升高HDL-C方面的效果较西沙必利更好;化脂复肝颗粒组、非诺贝特组、西沙必利组的ALT、AST水平低于模型组(P<0.01);化脂复肝颗粒组、非诺贝特组的胰岛素水平高于模型组(P<0.0001)。高通量测序结果显示,在门分类学水平上有拟杆菌门、厚壁菌门、放线菌门、疣微菌门等8类主要细菌。与对照组相比,化脂复肝颗粒组、非诺贝特组、西沙必利组拟杆菌门的丰度偏高,厚壁菌门丰度偏低(P<0.001)。模型组小鼠肠道组织结构紊乱,黏膜及黏膜下层糜烂,严重部位可见溃疡、出血及肉芽组织形成,隐窝结构紊乱,可见隐窝炎和隐窝脓肿形成,腺体排列不规则,出现萎缩,有大量炎症细胞、中性粒细胞浸润,杯状细胞减少;化脂复肝颗粒组与西沙必利组病变有不同程度的改善,非诺贝特组病变减轻不明显。结论在降脂、保肝降酶及改善胰岛素水平、肠道组织结构、肠道功能、黏膜屏障等方面,化脂复肝颗粒具有一定优势。

HPLC法测定舒肝颗粒中多个成分的含量

目的:采用HPLC法测定舒肝颗粒中多成分的含量,为其质量标准建立提供依据。方法:采用迪马C_(18)(250 mm×4.6 mm, 5μm)色谱柱;以甲醇-0.05%甲酸溶液为流动相,梯度洗脱;流速为0.8 mL/min;检测波长为260 nm;柱温为40℃;进样量为10μL。结果:芍药内酯苷、芍药苷、栀子苷、丹皮酚、甘草苷、西红花苷Ⅰ、西红花苷Ⅱ、甘草酸铵分别在2.2~220μg/mL、0.7~70μg/mL、1.1~110μg/mL、0.9~90μg/mL、1.4~140μg/mL、0.8~80μg/mL、0.75~75μg/mL、1.2~120μg/mL的浓度范围内与峰面积的线性关系良好,r>0.9990,上述8个成分的平均含量分别为0.8306、0.5457、1.5524、1.2707、1.4915、0.4878、0.3912、1.2577 mg/g。结论:该研究建立的多成分测定方法快速便捷,重复性好,可为舒肝颗粒质量评价提供依据。

黄甲软肝颗粒解酒护肝药效学研究

目的研究黄甲软肝颗粒对小鼠醉酒的解酒作用和CCl_(4)诱导小鼠急性肝损伤的护肝作用。方法取SPF级雄性昆明小鼠60只,按体质量随机分为正常组,模型组,低、中、高剂量黄甲软肝颗粒组,谷胱甘肽组,每组10只。除正常组与模型组灌服相同体积的蒸馏水外,其余各组给予相对应剂量的药物,正常组和模型组给予20 mL/kg蒸馏水,1次/d,连续7 d。末次给药前各组小鼠禁食12 h,末次给药60 min后,除正常组外的各组按14 mL/kg给予60°红星二锅头白酒灌胃。60 min后,取小鼠血液及肝脏组织,测定血中乙醇浓度,测定肝脏组织中谷胱甘肽、MDA含量及ADH活力,观察黄甲软肝颗粒解酒作用。另取SPF级雄性昆明小鼠60只,按体质量随机分为正常组,模型组,低、中、高剂量黄甲软肝颗粒组,阳性对照药谷胱甘肽组,每组10只,连续给药14 d,动物末次给药后禁食16 h,模型组及各给药组灌胃0.5%CCl_(4)植物油溶液5 mL/kg,正常组灌胃植物油5 mL/kg。24 h后,摘眼球取血及分离保存肝脏组织用于指标检测和组织病理学检查。观察黄甲软肝颗粒护肝作用。结果与模型组比较,黄甲软肝颗粒高剂量组和谷胱甘肽组小鼠血液中乙醇浓度显著降低(P<0.05)。与模型组比较,黄甲软肝颗粒高剂量组谷胱甘肽组的谷胱甘肽含量显著增加(P<0.05);黄甲软肝颗粒中剂量组和谷胱甘肽组MDA含量显著降低(P<0.05);黄甲软肝颗粒高剂量组和谷胱甘肽组ADH活性显著增加(P<0.05)。与模型组比较,黄甲软肝颗粒中剂量组和谷胱甘肽组血清ALT、AST活性均显著降低(P<0.05或P<0.01);黄甲软肝颗粒中剂量组和谷胱甘肽组肝脏组织MDA含量显著降低(P<0.05)。谷胱甘肽组的谷胱甘肽含量显著增加(P<0.05)。与模型组比较,黄甲软肝颗粒中、高剂量组和谷胱甘肽组小鼠肝细胞结构有一定改善,细胞浆和细胞核溶解程度有所减轻。结论黄甲软肝颗粒能降低急性酒精性肝损伤小鼠血液中乙醇浓度水平,减轻肝组织氧化损伤;能降低CCl_(4)急性肝损伤小鼠的肝功能损伤和氧化损伤,改善肝组织细胞病变,黄甲软肝颗粒具有较好的解酒护肝作用。

黄甲软肝颗粒对阿尔茨海默病的药效学研究

目的探讨黄甲软肝颗粒治疗阿尔茨海默病的药理作用。方法选取8只C57BL/6J小鼠作为正常对照组,40只APP/PS1小鼠随机分为模型组,多奈哌齐组(3 mg·kg^(-1)),黄甲软肝颗粒低、中、高剂量组(1.16、2.32、4.64 g·kg^(-1))。采用Y迷宫、新物体识别和Morris水迷宫测试小鼠认知功能及记忆损伤的情况,同时取材检测各小鼠脑内海马组织中Aβ、pTau/Tau、BACE、GSK3β蛋白表达的变化,通过HE染色、尼氏染色等观察神经元排列及结构变化。结果与模型组比较,黄甲软肝高剂量组自发交替比率和目标象限穿越次数显著升高。与正常对照组比较,模型组小鼠在目标象限停留时间显著下降,黄甲软肝各剂量组均显著高于模型组。与模型组比较,黄甲软肝中、高剂量组小鼠Aβ蛋白表达显著降低;各剂量组小鼠pTau/Tau蛋白表达显著降低,海马BACE、GSK3β蛋白表达差异无统计学意义,各剂量组均显著逆转了Aβ沉积显现,尼氏小体均有所增加。结论黄甲软肝颗粒具有显著抗阿尔茨海默病作用。