基于血清药理学的肝龙胶囊含药血清制备方法的初步探究

目的:利用血清药理学,探究用于肝细胞脂肪变性药效观察的肝龙胶囊(GLC)含药血清的最佳取血时间和含药血清体积分数。方法:C57BL/6J小鼠60只,灌胃GLC(90 mg/kg),每日两次,连续7 d,分别在末次给药0.5、1、2和4 h心脏采血,收集血清。对照组小鼠灌胃同体积的生理盐水。LC-MS/MS技术检测空白血清及不同采血时间含药血清肌苷含量,确定最佳采血时间。应用0%、1%、3%和10%GLC血清处理棕榈酸(PA)刺激的小鼠肝细胞NCTC1469,尼罗红染色检测细胞脂滴生成,RT-qPCR检测细胞内脂肪酸生成基因Fabp1和Scd1,及脂肪酸β-氧化基因Pparα的表达。结果:(1) LC-MS/MS检测发现在末次给药2 h后血清中肌苷浓度最高。(2)尼罗红染色显示GLC血清对PA诱导的肝细胞脂质积累具有剂量依赖性的减少趋势。(3) 1%和3%和10%GLC血清处理均能显著下调PA刺激的肝细胞内Fabp1和Scd1的表达,且具有剂量依赖性的减少趋势;1%、3%和10%GLC血清处理均能显著上调PA刺激的肝细胞内Pparα的表达,且具有剂量依赖性的增加趋势。结论:小鼠给药后2 h的10%GLC血清是用于肝细胞脂肪变性药效观察的最佳血清干预浓度。

肝龙胶囊对Balb/c裸鼠腋下移植瘤的影响

目的探讨肝龙胶囊对Balb/c裸鼠腋下移植瘤的影响。方法将人肝癌敏感株BEL-7402接种于裸鼠腋下造模,造模成功后将其分为模型组、索拉非尼组、CII-3组、脱脂膏组、肝龙胶囊高、中、低剂量组,正常裸鼠为空白组,连续给药14d。比较各组的抑瘤率、脏器指数、生化指标、缺氧微环境相关蛋白及其mRNA表达水平。结果各药物治疗组均能抑制肿瘤生长,其中肝龙胶囊中剂量组的平均抑瘤率最高;与模型组相比,各药物治疗组裸鼠的心脏指数、肾脏指数、肝脏指数、肺脏指数均有所升高,脾脏指数均有所下降,但多数变化不大;各项生化指标显示,肝龙胶囊安全性良好,并未出现明显的组织损伤;索拉非尼组、肝龙胶囊中剂量组裸鼠的低氧诱导因子1α(hypoxia-inducible factor-1α,HIF-1α)、血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)和血管内皮生长因子受体2(vascular endothelial growth factor receptor 2,VEGFR2)的mRNA表达均显著低于模型组(P<0.05);免疫组织化学结果显示,各药物治疗组的VEGFR2、HIF-1α、VEGF、Ki-67和CD31蛋白表达均表现出不同程度的抑制,其中以索拉非尼组、肝龙胶囊中剂量组及CII-3组的抑制作用较强。结论肝龙胶囊可有效抑制Balb/c裸鼠腋下移植瘤的生长,并下调移植瘤中缺氧微环境相关蛋白及其mRNA表达水平。

愈肝龙胶囊联合替诺福韦酯治疗乙型肝炎肝纤维化的临床效果

目的 探究乙型肝炎肝纤维化采用愈肝龙胶囊联合替诺福韦酯治疗的临床效果以期为临床治疗乙型肝炎肝纤维化提供参考依据。方法 将2021年3月至2022年9月河南省汝州市第一人民医院收治的68例乙型肝炎肝纤维化患者按治疗方法分为对照组(34例)与研究组(34例),对照组进行替诺福韦酯治疗,研究组进行愈肝龙胶囊联合替诺福韦酯治疗,治疗周期均为6个月。对比2组治疗6个月后临床效果,治疗前后免疫功能(外周血CD3^(+)、CD4^(+)、CD8^(+)百分比及CD4^(+)/CD8^(+)比值),肝功能指标[丙氨酸转氨酶(alanine aminotransferase,ALT),γ-谷氨酰氨转氨酶(γ-glutamyl aminotransferase,GGT)、天门冬氨酸转氨酶(aspartate aminotransferase,AST)]、肝纤维化指标[Ⅳ型胶原(typeⅣcollagen,Ⅳ-C)、Ⅲ型前胶原(typeⅢprocollagen,PC-Ⅲ)、透明质酸(hyaluronic acid,HA)、层黏连蛋白(laminin,LN)]水平。结果 研究组经过临床治疗6个月后的临床有效率为94%(32/34),相较于对照组的76%(26/34)升高;2组治疗后CD3^(+)、CD4^(+)百分比、CD4^(+)/CD8^(+)比值相较于治疗前均升高[(71±4)%和(65±4)%,(37±4)%和(34±4)%,(1.50±0.35)和(1.24±0.31),t=5.711,P<0.01;t=2.758,P=0.008;t=3.243,P=0.002];而CD8^(+)百分比、ALT、GGT、AST、Ⅳ-C、PC-Ⅲ、HA、LN水平相较于治疗前降低,研究组与对照组比较降低[(24.7±2.6)%和(27.6±3.0)%;(71±7)U/L和(88±6)U/L;(36±3)U/L和(52±4)U/L;(45±5)U/L和(56±4)U/L;(87±8)μg/L和(111±9)μg/L;(96±9)μg/L和(101±9)μg/L;(90±8)μg/L和(111±8)μg/L;(117±10)μg/L和(146±8)μg/L,t=4.185,P<0.01;t=10.511,P<0.01;t=17.905,P<0.01;t=9.596,P<0.01;t=11.712,P<0.01;t=2.506,P=0.015;t=10.349,P<0.01;t=13.269,P<0.01]。结论 在替诺福韦酯治疗的基础上增加愈肝龙胶囊治疗乙型肝炎肝纤维化的临床疗效较好,患者机体免疫力得到提升,同时改善患者的肝功能、肝纤维化,可为临床治疗乙型肝炎肝纤维化提供参考依据。

治疗乙型肝炎新药肝龙胶囊的药效学初步研究

目的观察肝龙胶囊对鸭乙型肝炎病毒的抑制效果和对实验性肝损伤的保护作用。方法(1)以鸭乙型肝炎病毒(DHBV)静脉注射感染雏鸭为模型,于感染第7天后分组灌胃肝龙(GL)胶囊浸膏0.5,1.5,3.0 g.k-g1.d-1,阳性对照组给予无环鸟苷(ACV)或磷羧基甲酸钠(PFA)。采用斑点杂交方法检测鸭血清DHBV-DNA,以病毒抑制率为疗效指标;(2)以昆明种小鼠腹腔注射CC l4肝损伤为模型,给予GL浸膏(200 mg.kg-1)。测定SGPT值,并取肝脏作病理形态学观察。结果(1)GL三个不同剂量组对DHBV均有不同程度的抑制作用,有一定的量效关系;(2)GL降低CC l4肝损伤小鼠血清SGPT值并减轻肝细胞损伤。结论肝龙胶囊可抑制雏鸭体内DHBV-DNA的复制并能保护CC l4所致的小鼠肝损伤。

愈肝龙胶囊联合恩替卡韦治疗慢性乙型肝炎肝纤维化30例

目的观察愈肝龙胶囊联合恩替卡韦治疗慢性乙型肝炎肝纤维化的临床疗效。方法将57例慢性乙型肝炎肝硬化患者随机分为治疗组30例和对照组27例,对照组给予恩替卡韦,治疗组给予愈肝龙胶囊联合恩替卡韦。观察两组患者治疗前和治疗96周后Fibroscan肝硬度值,血清肝纤维四项(HA、LN、C-Ⅳ、PC-Ⅲ),肝功能指标(ALT、AST、GGT、TBi L),超声影像学指标(门脉内径、脾脏厚度)。结果治疗前两组各项指标均差异无统计学意义(P>0.05);治疗96周后,治疗组Fibroscan值、肝纤维化指标(HA、LN、C-Ⅳ),ALT,AST较治疗前显著降低(P<0.05),且与对照组治疗后比较,差异有统计学意义(P<0.05)。结论愈肝龙胶囊联合恩替卡韦治疗慢性乙型肝炎肝纤维化效果优于单用恩替卡韦。

肝龙胶囊治疗HBeAg阳性慢性乙型肝炎的疗效观察

肝龙胶囊是利用地球上最古老、生命力最强、最能适应环境变化的昆虫类药材——美州大蠊通过提取及分离精制而成。其有效成份是粘糖氨酸（暂名）。具有抗乙型肝炎病毒活性和免疫活性。我科自2006年5月～2007年11月，采用肝龙胶囊治疗慢性乙型肝炎患者30例，取得一定疗效，现报告如下。

新药肝龙胶囊对雏鸭体内鸭乙型肝炎病毒的抑制效果

目的:研究新药肝龙胶囊对鸭乙型肝炎病毒的体内抗病毒作用。方法:以鸭乙型肝炎病毒(DHBV)静脉注射感染雏鸭为模型,于感染第7天后分组灌喂肝龙(GL)胶囊浸膏0.5、1.5、3.0g.kg-1.d-1及生理盐水(对照组),阳性对照组腹腔注射无环鸟苷(0.4g.kg-1.d-1)或磷羧基甲酸钠(0.5g.kg-1.d-1)。给药每天2次,连续10d。分别于给药前、给药后第5天、第10天和停药后第3天取血清,采用斑点杂交方法检测不同时间鸭血清DHBV-DNA,观察其动态变化,以病毒抑制率为疗效指标。结果:三次重复的结果表明,与给予生理盐水的病毒对照组比较,肝龙的三个不同剂量组均有不同程度的疗效,且不同剂量组之间有一定的量效关系,其中GL3.0g.kg-1.d-1组疗效明显(P<0.01),与阳性对照组无环鸟苷或磷羧基甲酸钠组的疗效无显著性差异,而且作用持续时间较长。结论:肝龙(GL)胶囊可抑制DHBV感染雏鸭体内DHBV-DNA的复制。

肝龙胶囊及美洲大蠊脱脂膏对小鼠急性结肠炎的影响

目的:初步探讨肝龙胶囊及美洲大蠊脱脂膏对小鼠急性结肠炎的作用及可能的作用机制。方法:采用DSS造模法,通过测定小鼠的DAI并检测结肠组织的MPO含量和观察结肠组织TNF-α免疫组化表达来评价肝龙胶囊及美洲大蠊脱脂膏对急性结肠炎的影响。结果:肝龙胶囊及美洲大蠊脱脂膏能够减轻小鼠急性结肠炎的炎性因子的浸润、减少粘膜出血溃疡、降低TNF-α表达、腺体消失等现象并降低结肠组织中的MPO含量(P<0.05)。结论:肝龙胶囊及美洲大蠊脱脂膏对DSS所致的小鼠急性结肠炎有很好的保护作用。

肝龙胶囊中总肽含量及其分子量分布的研究

目的：建立高效空间排阻色谱（ high performance size exclusion chromatography，HPSEC）分析方法，测定肝龙胶囊中分子量分布并采用Lowry法测定其总肽含量。方法采用superdex peptide 10／300 GL（10 mm ×300 mm）色谱柱，以pH＝6．0、0．05 mol／L的磷酸盐缓冲液为流动相，其中含有0．1 mol／L的NaCl；流速为0．7 mL／min；柱温25℃；检测波长214 nm。结果总肽含量测定的线性范围为0．08～0．4 mg，r＝0．9996；含量精密度试验的RSD为0％（n＝6），重复性试验的RSD为1．1％（n＝6）。标准物质分子量的回归方程为logMr ＝5．1455－0．0871tR，r＝0．9983，分子量的线性范围为2．68×102～5．73×103 Da，分子量精密度试验 RCD为0．08％，重复性试验RSD为1．3％。结论该方法准确、简便、快速，可作为肝龙胶囊的质量控制方法。

愈肝龙胶囊联合恩替卡韦治疗乙型肝炎肝纤维化临床观察

目的:研究愈肝龙胶囊联合恩替卡韦治疗慢性乙型肝炎肝纤维化的临床疗效。方法:将符合纳入标准的116例慢性乙型肝炎肝纤维化患者随机分为观察组64例和对照组52例,两组患者均给予恩替卡韦抗病毒治疗,观察组加用愈肝龙胶囊。观察两组患者治疗前与治疗36个月后肝硬度值(LSM)、超声影像学指标(门静脉内径、脾脏厚度)、血清肝纤维化指标4项(HA、LN、C-Ⅳ、PC-Ⅲ)、肝功能(ALT、AST、PLT、Alb、TBil)、APRI指数的变化。结果:两组患者治疗36个月后,观察组的LSM值、肝纤维化指标(C-Ⅳ)、肝功能(ALT、AST、PLT、Alb、TBil)以及APRI指数优于治疗前(P<0.05),且与对照组比较差异有显著性意义(P<0.05)。结论:复方中成药愈肝龙胶囊联合恩替卡韦改善慢性乙型肝炎肝患者肝纤维化与肝功能的效果优于单用恩替卡韦。

肝龙胶囊联合水飞蓟宾胶囊在体外对大鼠肝星状细胞增殖活性的影响研究

目的研究临床常用抗肝纤维化药物水飞蓟宾胶囊单用及联合肝龙胶囊对大鼠肝星状细胞(HSC)增殖活性的影响,评价肝龙胶囊在体外对水飞蓟宾抗肝纤维化作用的影响。方法采用2因素5水平完全实验,单独或联合使用不同剂量水飞蓟宾胶囊和肝龙胶囊在不同时间作用于HSC,并用MTT比色法测定HSC增殖影响。结果水飞蓟宾胶囊与肝龙胶囊合用增强水飞蓟宾胶囊对HSC的抑制作用,尤其是0.063、0.125和0.250 mg/ml浓度的水飞蓟宾胶囊与不同浓度肝龙胶囊合用后,水飞蓟宾胶囊的作用明显增加,与单用水飞蓟宾胶囊组比较差异均有统计学意义(P<0.05)。水飞蓟宾胶囊联合不同浓度肝龙胶囊的IC50值与单用水飞蓟宾胶囊的IC50值相比较,在24、48和72 h时均有降低,且水飞蓟宾胶囊与不同浓度肝龙胶囊联合后,其合用指数CI<1.0,呈现出协同作用,增强了水飞蓟宾胶囊对HSC细胞的抑制作用。结论肝龙胶囊在体外能增强水飞蓟宾胶囊的抗肝纤维化作用。

肝龙胶囊对小鼠血糖浓度的影响

目的:研究肝龙胶囊对正常小鼠血糖及肾上腺素致高血糖模型小鼠的血糖浓度的影响。方法:采用葡萄糖氧化酶法测定正常小鼠的血糖浓度及肾上腺素诱导小鼠高血糖不同处理后的血糖浓度变化。结果:肝龙胶囊对正常小鼠血糖浓度无影响,而对肾上腺素高血糖模型小鼠有显著的降糖作用(P<0.01,P<0.05)。结论:肝龙胶囊能降低肾上腺素性高血糖小鼠的血糖浓度,对正常小鼠血糖浓度无影响。

愈肝龙胶囊联合抗病毒药物治疗基因1b型慢性丙型肝炎肝纤维化疗效观察

目的:观察愈肝龙胶囊联合以索磷布韦为基础的直接抗病毒药物(DAAs)治疗基因1b型慢性丙型肝炎肝纤维化的疗效。方法:82例基因1b型慢性丙型肝炎肝纤维化患者随机分为观察组42例和对照组40例,两组均给予以索磷布韦为基础的直接抗病毒药物治疗(索磷布韦+利巴韦林24周或索磷布韦+达拉他韦12周),观察组患者另加用愈肝龙胶囊治疗96周。比较两组患者病毒学应答情况,治疗前后肝脏瞬时弹性扫描仪(Fibroscan)、血清肝纤维化指标、肝肾功能及肝脏超声影像学指标。结果:两组患者HCV RNA转阴率及病毒学应答情况比较差异无统计学意义(P>0.05)。与对照组相比,观察组患者治疗后肝硬度测定值(LSM)、透明质酸(HA)、Ⅲ型前胶原(PC-Ⅲ)、Ⅳ型胶原(Ⅳ-C)、谷丙转氨酶(ALT)、总胆红素(TBil)、门静脉内径结果均明显优于对照组,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论:愈肝龙胶囊联合以索磷布韦为基础的DAA治疗基因1b型慢性丙型肝炎肝纤维化疗效优于单用以索磷布韦为基础的DAAs。

肝龙胶囊和美洲大蠊脱脂膏对正常大鼠胆汁分泌的影响

目的:研究肝龙胶囊和美洲大蠊脱脂膏对正常大鼠胆汁分泌的影响。方法:取80只大鼠随机分组,各组均按20 m L/kg进行灌胃给药,1次/d,连续给药7 d。采用大鼠胆汁流量实验、胆汁成分分析观察受试药的利胆作用。结果:肝龙胶囊无利胆作用,对胆汁成分无影响;而美洲大蠊脱脂膏具有利胆作用,其胆汁流量与对照组比较差异有统计学意义(P<0.05),使胆汁中TBL、DBL、IBL的含量降低(P<0.05)。结论:肝龙胶囊对正常大鼠无利胆作用;美洲大蠊脱脂膏则有利胆作用。

肝龙胶囊对离体在体肠肌收缩活动的影响

目的:观察肝龙胶囊对豚鼠离体回肠收缩活动和对小鼠小肠推进运动的影响。方法:BL-420E+生物机能系统记录肝龙胶囊对豚鼠离体回肠收缩活动的影响;碳末推进法观察肝龙胶囊对小鼠小肠推进运动的影响。结果:肝龙胶囊能明显促进豚鼠离体肠肌和小鼠在体肠肌收缩运动,与N.S组比较具有显著性差异(P<0.05)。结论:肝龙胶囊体内外均能促进肠肌收缩,可能与其激动了H1受体、M胆碱受体和促进Ca+通道开放有关。

肝龙胶囊治疗慢性乙型肝炎疗效分析

自1999年5月起,国内学者对肝龙胶囊治疗慢性乙型病毒性肝炎进行二期临床疗效观察,我们协作观察了12例,报道如下.

肝龙胶囊联合水飞蓟宾胶囊对肝纤维化大鼠的治疗作用

观察肝龙胶囊联合水飞蓟宾胶囊对肝纤维化大鼠的治疗效果,探讨肝龙胶囊是否对水飞蓟宾胶囊抗肝纤维化具有增效的作用。用猪血清制备大鼠肝纤维化模型,水飞蓟宾胶囊临床给药剂量单用及联合不同剂量肝龙胶囊处理肝纤维化大鼠,通过试剂盒及酶联免疫吸附试验(ELISA)检测大鼠血清和肝组织内肝纤维化标志物透明质酸(hyaluronic acid,HA)、层黏素(laminin,LN)、血清Ⅲ型前胶原氨基端肽(procollagenⅢN-termi,PCⅢ)、Ⅳ型胶原(typeⅣcollagen,Ⅳ-C)及转化生长因子β1(transforming growth factor-β,TGF-β1)、Ⅰ型胶原(collagen typeⅠ,Col-Ⅰ)的含量,以及肝脏内丙二醛(malondialdehyde,MDA)、谷草转氨酶(glutamic oxaloacetic transaminase,AST)、谷丙转氨酶(Cereal third transaminase,ALT)、γ-谷氨酰转肽酶(γ-glutamyl transpeptidase,γ-GT)的含量。与模型组比较,各治疗组中大鼠血清肝纤维化标志物的含量均低于模型组(P<0.05);肝龙胶囊与水飞蓟素联合用药与单用水飞蓟宾组相比,可使大鼠血清内HA和TGF-β1的含量显著降低(P<0.05);大鼠肝脏组织中除PCⅢ外,其余血清肝纤维化标志物的含量治疗组均低于模型组。肝组织中的γ-GT和ALT高剂量联合给药组显著降低,AST无显著差异,MDA中剂量联合给药组显著升高。说明肝龙胶囊可增强水飞蓟宾胶囊对猪血清性肝纤维化大鼠的抗肝纤维化作用。

肝龙胶囊对猪血清诱导的肝纤维化大鼠的治疗作用

目的:探讨肝龙胶囊对猪血清诱导的肝纤维化大鼠的治疗作用。方法:猪血清诱导大鼠肝纤维化模型建立后,用不同浓度的肝龙胶囊治疗肝纤维化大鼠。称重并计算肝脏、脾脏、胸腺指数;试剂盒检测肝功能指标:γ-谷氨酰转肽酶(γ-GT)、丙二醛(MDA);酶联免疫吸附测定(ELISA)法检测肝纤维化指标:层粘连蛋白(LN)、透明质酸(HA)、Ⅲ型前胶原(PCⅢ)、Ⅳ型胶原(Ⅳ-C)、Ⅰ型胶原(COL-Ⅰ)、转化生长因子β1(TGF-β1)。结果:肝龙胶囊降低肝纤维化大鼠血清及肝脏组织中LN、PCⅢ、Ⅳ-C含量,降低肝组织中γ-GT、HA含量,增加肝脏组织中的COL-Ⅰ含量。结论:肝龙胶囊对肝纤维化大鼠有一定的治疗作用。

肝龙胶囊联合水飞蓟素体外抗肝纤维化的实验研究

目的观察肝龙胶囊联合水飞蓟素对人肝星状细胞系(LX-2)转化生长因子-β1(TGF-β1)、肝纤维化指标表达的影响,以及体外抗肝纤维化作用。方法体外培养LX-2细胞,将对数期细胞分为水飞蓟素用药组、肝龙胶囊联合水飞蓟素用药组、阴性组。采用酶联免疫吸附法检测TGF-β1、Ⅰ型胶原(Col-Ⅰ)、Ⅲ型前胶原(PCⅢ)、Ⅳ型胶原(Ⅳ-C)、层粘连蛋白(LN)、透明质酸(HA)水平的变化;逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测Col-I、基质金属蛋白酶抑制剂1(TIMP-1)mRNA的表达。结果与水飞蓟素用药组相比,肝龙胶囊联合水飞蓟素用药组TGF-β1水平降低(P <0.05);24和48 h时,LX-2细胞LN、HA、Col-Ⅰ水平降低(P <0.05);24 h时,PCⅢ、Ⅳ-C水平降低(P <0.05)。与阴性组比较,肝龙胶囊联合水飞蓟素用药组在高浓度联合时可降低LN、HA、Col-Ⅰ、Ⅳ-C的含量(P<0.05),在低浓度时则增加LN、HA、Col-Ⅰ、Ⅳ-C的含量(P <0.05),对PCⅢ、TGF-β1的水平无影响(P>0.05)。与水飞蓟素用药组相比,肝龙胶囊联合水飞蓟素用药组降低TIMP-1 mRNA的表达(P <0.05),在高浓度联合并在72 h时降低Col-ⅠmRNA的表达(P <0.05),在低浓度联合时则增加Col-ⅠmRNA的表达(P <0.05)。结论肝龙胶囊联合水飞蓟素可通过减少细胞外基质的生成,增强水飞蓟素体外抗肝纤维化作用。

HPLC法测定肝龙胶囊中肌苷的含量

目的：建立肝龙胶囊中肌苷的含量测定方法，为肝龙胶囊的质量控制提供依据。方法：采用Gemini5uC18110A（250mm×4.6mm）色谱柱，流动相水（含0.05%TFA）：乙腈（含0.05%TFA），采用梯度洗脱方式，流速0.8mL/min，柱温30℃，DAD检测器，检测波长为214nm，进样量10μL。结果：肌苷在0.202~2.020μg范围之间峰面积值与进样量（μg）线性关系良好，平均回收率（n=9）为96.9%，RSD为2.18%。结论：建立的肝龙胶囊中肌苷含量测定方法科学、简便、结果准确，可作为提高肝龙胶囊质量标准的检测项目。