正-丁苯酞在大鼠和人体内、外代谢产物的初步鉴定及与肝CYP450同工酶的相互作用

目的：对正-丁苯酞（n-Butylphthalide，NBP）进行系统的药物代谢和与药酶相互作用的研究。方法：采用稳定同位素示踪和LC-MS／MS相结合的技术，研究NBP在大鼠、人体外和体内的代谢产物，利用体外肝微粒体法配合体内实验鉴定了参与NBP代谢的CYP450同工酶类型，探讨其与CYP450主要同工酶之间的代谢性相互作用。结果：初步鉴定了NBP在人体外肝微粒体孵育液、尿液和血浆中的9种I相代谢产物及相关Ⅱ相结合产物，新发现NBP在大鼠体外肝微粒体孵育液、尿液和粪便中的7种I相代谢产物。大鼠和人体参与NBP代谢的主要CYP450同工酶是CYP2E、3A和2C；发现NBP在大鼠和人体内各产物的生成均由多个同工酶催化完成，同一种同工酶也参与了多个NBP产物的生成，但参与各个产物生成的同工酶的种类和比例略有不同。当大鼠体外NBP浓度达到50μM时对CYP2C有一定抑制作用，达到200μM时对CYP1A、2C和2D有一定抑制作用；人体外NBP浓度达到15μM时对CYP2C19有一定抑制作用；大鼠NBP灌胃给药160mg·kg-1（连续5日）和静脉给药20mg·kg-1（连续4日）对肝脏CYP450主要同工酶不存在具有临床意义的诱导和抑制效应。结论：本研究较全面地获得了NBP在大鼠和人体内的代谢途径信息，为安全、合理用药、预测药物代谢性相互作用，以及新药的进一步开发提供了有价值的参考依据。

FB2与大鼠和人肝微粒体CYP450同工酶的相互作用

目的：FB2是新型Abl／Scr双重酪氨酸激酶抑制剂，拟用于治疗慢性髓细胞性白血病。本研究选择大鼠和人肝微粒体体外温孵系统，应用特异性探针底物法／抑制剂法，探讨参与FB2代谢的主要CYP450s以及FB2对CYP450s的抑制作用。

刺五加注射液对大鼠肝微粒体四种CYP450亚型酶活性的影响

目的:研究刺五加注射液在大鼠体外肝微粒体中对CYP2C9、CYP2D6、CYP2E1和CYP3A4活性的影响,为临床合理联合用药提供参考。方法:在大鼠体外肝微粒体中分别加入四种亚型酶的探针药物甲苯磺丁脲(TB)、右美沙芬(DM)、氯唑沙宗(CLZ)、睾酮(TS)和低、中、高剂量的刺五加注射液,温孵后用HPLC法测定各空白对照组和不同剂量刺五加注射液给药组中各探针药物代谢产物的浓度并比较代谢率的差异,以评价刺五加注射液对各亚型酶活性的影响;中剂量组活性显著降低的亚型酶进一步考察抑制作用的强弱(即IC50和Ki值)。结果:与空白对照组比较,刺五加注射液低、中、高剂量给药组对CYP3A4活性的影响均有统计学意义(P<0.01),抑制率分别为10.22%、19.00%、30.29%,其IC50和Ki值分别为3.96%和2.74%(V/V);低、中、高剂量给药组对CYP2D6活性的影响均无统计学差异(P>0.05);低剂量给药组对CYP2C9、CYP2E1活性的影响无统计学差异(P>0.05),中、高剂量给药组对两个亚型的抑制作用有统计学差异(P<0.05),但中剂量给药组抑制率均小于8.50%,高剂量给药组抑制率均小于12.00%。结论:刺五加注射液对大鼠体外肝微粒体CYP3A4有抑制作用,且符合混合型抑制模型;对CYP2C9、CYP2E1抑制作用较弱;对CYP2D6活性无影响。

甲基原薯蓣皂苷对人肝微粒体中7种CYP450酶活性的影响

目的研究甲基原薯蓣皂苷对CYP450酶的7种亚型酶活性的影响。方法将MPD和CYP450酶7种亚型的特异性探针底物咖啡因（CYP1A2）、右美沙芬（CYP2D6）、甲苯磺丁脲（CYP2C9）、s-美芬妥因（CYP2C19）、氯唑沙宗（CYP2E1）、香豆素（CYP2A6）及咪达唑仑（CYP3A4）与人肝微粒体进行孵化反应，采用HPLC和LeMS／MS法测定对应的7种代谢产物（1，7-二甲基黄嘌呤、去甲右美沙芬、4-羟基甲苯磺丁脲、4-羟基美芬妥因、6-羟基氯唑沙宗、7-羟基香豆素和1-羟基咪达唑仑）的浓度，通过与对照组比较，确定MPD对以上7种酶活性的影响。结果MPD在1～10μmol·L^-1时对7种酶均无明显抑制作用，在100／μmol·L^-1时对CYP2D6有抑制趋势，但对其他6种酶无抑制作用，均无统计学意义（P〉0．05）。结论MPD在与以上6种酶（CYP1A2、CYP2E1、CYP2C19、CYP3A4、CYP2C9和CYP2A6）代谢的药物联合用药时，发生药物相互作用的可能性较小。

浙江不同产地浙贝配伍乌头对大鼠肝细胞色素P450重要同工酶含量的影响

研究浙江不同产地浙贝配伍乌头对大鼠肝细胞色素P450重要同工酶活性的影响。方法:应用HPLC-UV测定CYP450三种同工酶的特异性探针底物咖啡因(CYP1A2)、氨苯砜(CYP3A4)和氯唑沙宗(CYP2E1)的代谢速率,评价各实验组对大鼠肝细胞色素P450重要同工酶的诱导或抑制作用。结果:①与乌头组比较,磐安浙贝及缙云浙贝配伍乌头后,都显著性诱导了CYP1A2,但鄞州浙贝配伍乌头后对CYP1A2活性的诱导作用不明显。浙江不同产地浙贝单用组对CYP1A2的影响两两间比较无统计学差异;浙江不同产地浙贝配伍乌头组两两间比较发现,鄞州浙贝配伍乌头组的CYP1A2活性显著性弱于其它两个产地浙贝配伍乌头组。②与乌头组比较,浙江不同产地浙贝配伍乌头组都明显抑制了CYP3A4,并且两两间比较无统计学差异。鄞州浙贝单用组CYP3A4的活性较缙云浙贝单用组弱,有统计学差异。③与乌头组比较,浙江不同产地浙贝配伍乌头组对CYP2E1都具有明显诱导作用,但是两两间比较无统计学差异。三种产地浙贝单用组对CYP2E1活性的影响两两间无统计学差异。结论:浙江不同产地的浙贝配伍乌头对CYP1A2和CYP2E1的活性有明显的诱导作用,而对于CYP3A4有明显的抑制作用。

白屈菜碱在大鼠肝微粒体中代谢的酶动力学及CYP450酶特异性抑制剂对其代谢的影响

目的研究白屈菜碱在大鼠肝微粒体中代谢的酶动力学及CYP450酶特异性抑制剂对其代谢的影响。方法将系列浓度的白屈菜碱与大鼠肝微粒体进行体外共孵育,采用HPLC法测定孵育液中剩余白屈菜碱的浓度,利用Graph Pad Prism 6.0软件进行数据拟合并计算酶动力学参数;分别将5种CYP450酶的特异性抑制剂与白屈菜碱进行共孵育,考察抑制剂对白屈菜碱代谢的影响,探讨参与其代谢的酶亚型。结果在大鼠肝微粒体中,白屈菜碱的Vmax为(3.52±0.18)mmol·min-1·kg-1;Km为(12.02±2.92)μmol·L-1;CLint为292.4 L·min-1·kg-1;CYP450酶特异性抑制剂酮康唑、α-萘黄酮、氟康唑和奎尼丁可以显著地抑制白屈菜碱的代谢,而噻氯匹定对白屈菜碱的代谢没有明显影响。结论白屈菜碱在大鼠肝微粒体中广泛代谢,CYP3A4、CYP1A2、CYP2D6、CYP2C9是参与其代谢的主要代谢酶。

一种HPLC同时测定大鼠血浆中CYP450五种同工酶探针药物浓度的新方法

目的:建立HPLC法同时测定大鼠血浆中5种同工酶探针药物浓度的方法。方法采用氯仿提取五种探针药物,Topsil C18色谱柱(250mm×4.6mm 5μm),流动相以甲醇-磷酸氢二铵缓冲液(pH值3.4)梯度洗脱。检测波长230nm,流速1.0mL·min^-1,柱温35℃。结果:5种探针药物在0.2~50μg·m L^-1范围内线性关系良好,方法提取回收率咖啡因98.08%~98.25%,美托洛尔97.81%~101.61%,氯唑沙宗99.92%~102.53%,甲苯磺丁脲98.83%~105.82%,咪达唑仑96.58%~101.47%.结论:该方法样品处理简便,专属性好,快速、准确、经济,可应用于五种同工酶探针药物的同时测定,适合进行药物对CYP450酶同工酶(CYP1A2、2D4、2E1、2C11和3A2)活性的影响及药物相互作用研究。

慢性肝疾病对肝CYP450酶活性的影响

慢性肝疾病是临床常见疾病之一,CYP450s基因是由一组超家族的P450同工酶基因编码,主要在肝脏中合成和表达。慢性肝疾病对CYP450s的合成和表达均会产生影响,从而影响肝脏CYP450s对内源性物质和外源性物质的代谢。而且肝疾病对CYP450的各个酶的影响不很一致,具有选择性。肝硬化患者的给药需要临床医生根据实际情况进行调节。

SPMG和AOSC对不同性别中国人肝药酶CYP450活性的影响

目的研究不同结构的海洋新药对人类肝药酶的影响及性别差异,从而对这些新药进行安全性评价,并预测它们与其他药物合用的不良相互作用。方法通过研究肝药酶专属探针药物的体外代谢过程的变化,判断不同结构药物对这些酶有无诱导或抑制作用。结果SPMG和AOSC对CYP3A4均无影响,AOSC可诱导男性CYP2E1但对CYP1A2无影响,SPMG抑制男性CYP1A2但对CYP 2E1无影响。结论结构不同的药物对不同性别人CYP450的影响存在明显差异,此药物在与各种与CYP1A2或CYP 2E1酶代谢有关的药物合用时,应充分考虑其对肝药酶的不同影响,以避免潜在的毒性或不良反应。

来氟米特对急性化学性肝损伤小鼠肝Cyt.P450酶含量及CYP2E1 mRNA表达的影响

目的观察来氟米特(Lef)作用前后急性化学性肝损伤小鼠肝微粒体细胞色素P450(Cyt.P450)、细胞色素b5(Cyt.b5)含量及P4502E1(CYP2E1)mRNA表达水平的变化,进一步研究其治疗机制。方法采用CCl4诱导小鼠急性化学性肝损伤模型,检测血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天冬氨酸氨基转移酶(AST)活性,肝匀浆丙二醛(MDA)、谷胱甘肽(GSH)含量以及肝微粒体细胞色素P450(Cyt.P450)和细胞色素b5(Cyt.b5)含量,RT-PCR法检测小鼠肝脏细胞色素P4502E1(CYP2E1)mRNA表达水平,并作肝组织切片病理观察。结果Lef明显降低CCl4急性肝损伤小鼠血清ALT、AST水平;降低肝匀浆MDA含量;提高GSH含量并提高肝微粒体Cyt.P450、Cyt.b5含量;抑制CYP2E1 mRNA表达;减轻肝脏病理损伤。结论Lef治疗CCl4所致小鼠急性化学性肝损伤,可能与其诱导肝微粒体Cyt.P450表达,抑制CYP2E1 mRNA转录及抗脂质过氧化有关。

羟基化多溴联苯醚(OH-PBDEs)在小鼠肝脏微粒体的体外代谢及对CYP450酶活性的影响

羟基化多溴联苯醚(OH-PBDEs)是一类具有内分泌干扰效应的酚类化合物,生物毒性要高于母体多溴联苯醚(PBDEs),研究OH-PBDEs的体外代谢行为对于理解其在生物体内的富集转化具有重要意义。以小鼠肝脏微粒体作为研究对象,考察了3-OH-BDE-47、5-OH-BDE-47、6-OH-BDE-47和2’-OH-BDE-68在小鼠肝脏中的体外代谢,并分别研究了浓度为0.1、0.2、0.4、0.6、1.0μmol·L-1条件下4种OH-PBDEs对细胞色素P450酶系中7-乙氧基香豆素-O-脱乙基酶(ECOD)、7-乙氧基异吩唑酮-O-脱乙基酶(EROD)和苯胺4-羟基化酶(ANH)活性的影响。结果表明,4种OH-PBDEs在小鼠肝脏微粒体中均能够快速代谢,代谢率分别为80%(3-OH-BDE-47)、42%(5-OH-BDE-47)、86%(6-OH-BDE-47)和63%(2’-OH-BDE-68)。实验所设OH-PBDEs各浓度对微粒体的ECOD活性无显著性抑制作用,但对EROD的活性均表现出相同的显著抑制作用;4种OH-PBDEs表现出不同的ANH活性影响,即3-OH-BDE-47对ANH活性具有抑制作用,5-OH-BDE-47具有诱导作用,而6-OH-BDE-47和2’-OH-BDE-68对ANH活性无显著性影响。

肝微粒体细胞色素CYP450研究进展

肝微粒体CYP450是一类主要负责内、外源性物质代谢的超家族酶系统,药物在肝微粒体CYP450作用下发生代谢转化、发挥药理学作用的同时,也会诱导或抑制CYP450的活性。CYP450具有复杂的功能,广泛地参与物质的生物转化,并且随着生物学技术的发展其研究对象也越来越广泛,是目前药物代谢研究的热点和重点。该文从肝微粒体CYP450的制备、组成,以及鱼类、哺乳动物类、禽类及昆虫类,等多种生物的CYP450研究现状作简要的综述。

穿破石对人肝微粒体CYP450酶的抑制活性研究

研究穿破石对人肝微粒体CYP450酶的抑制活性。将穿破石提取液与混合探针药物共同孵育,各探针药物的峰面积由超高效液相色谱进行测定,并与阳性抑制剂进行对照。穿破石提取液对CYP1A2,CYP3A4,CYP2C9和CYP2E1的IC 50值分别为0.3561,0.3324,0.4049,0.8615 mg/mL。对人肝微粒体CYP450酶的4种亚型酶来说,穿破石提取液对CYP3A4亚型酶的抑制程度最大,对CYP2E1的抑制程度最小,与阳性抑制剂对比,穿破石提取液总体抑制活性较弱。

盐酸小檗碱与环孢素A合用对大鼠肝P450同工酶和mdr1的影响

目的 阐明盐酸小檗碱 (berberinechloride ,Ber)及其与环孢素A (cyclosporin ,CsA)合用对大鼠肝脏P4 5 0同工酶和多药耐药基因的影响。方法 采用分光光度法测定大鼠肝微粒体红霉素N 脱甲基酶 (ERD)、氨基比林N 脱甲基酶(ADM )的活性 ,采用RT PCR法测定大鼠肝脏CYP3A1、CYP1A1、CYP2E1、mdr1a和mdr1b基因的水平。结果 灌胃给药 6d后 ,除外 10 0mg·kg-1Ber组 ,其余各组对ERD活性有明显的抑制作用 ;给药 12d时 ,所有用药组对ERD活性均有抑制作用。给药 6d后 ,CsA单用组、Ber与CsA合用组对ADM均有抑制作用 ;给药 12d后 ,除了 15 0mg·kg-1酮康唑组和 10 0mg·kg-1Ber组外 ,其余各用药组对ADM均有抑制作用。给药 12d时 ,除了 10 0mg·kg-1Ber组外 ,其余各用药组对大鼠肝脏CYP3A1、CYP2E1、mdr1a、mdr1b基因均有抑制作用。各组的CYP1A1基因均未能检出。结论 抑制CYP3A基因的表达及酶的活性 ,抑制mdr1a、mdr1b基因的表达 ,从而减少CsA在肝脏的代谢及消除 。

柴胡皂苷-白芍总苷对大鼠肝微粒体CYP450酶活性及肝功能的影响

目的研究柴胡皂苷白芍总苷对大鼠肝微粒体CYP450酶活性及肝功能的影响。方法将SD大鼠随机分为空白对照组、柴胡皂苷组(500mg/kg)、白芍总苷组(500 mg/kg)、柴胡皂苷白芍总苷配伍组(柴胡皂苷、白芍总苷各500mg/kg)、苯巴比妥组(80mg/kg)。除苯巴比妥组连续4d腹腔注射给药外,其他各组均连续15d灌胃给药。采用Cocktail探针底物与肝微粒体体外温孵法,HPLC测定肝微粒体中各探针底物的代谢消除率,评价各组对肝微粒体CYP450酶活性的影响;检测肝功能相关指标ALT、AST水平,测定肝组织内MDA、SOD水平。结果与空白组比较,柴胡皂苷组CYP2E1活性显著升高(P<0.05),而柴胡皂苷白芍总苷配伍组CYP450各同工酶的活性均无显著变化;柴胡皂苷组、白芍总苷组、柴胡皂苷白芍总苷配伍组血清ALT、AST水平显著增高,且肝组织内MDA水平增加,SOD水平下降(P<0.05)。结论柴胡皂苷可升高CYP2E1的活性,柴胡皂苷白芍总苷配伍后可影响柴胡皂苷提高CYP2E1活性的作用,柴胡皂苷、白芍总苷单独或配伍给药均有不同程度的肝功能损伤。

对羟基苯甲酸丙酯和对羟基苯甲酸丁酯对人和大鼠肝微粒体CYP450酶活性的抑制作用

本文目的是研究对羟基苯甲酸丙酯(羟苯丙酯;propylparaben,PP)和对羟基苯甲酸丁酯(羟苯丁酯;butylparaben,BP)对大鼠肝微粒体(rat liver microsomes,RLM)和人肝微粒体(human liver microsomes,HLM)细胞色素P450酶(cytochrome P450 enzyme,CYP)活性的抑制作用,并评价它们的相互作用潜能。在体外将系列浓度的羟苯丙酯和羟苯丁酯与大鼠和人肝微粒体孵育60 min,以非那西丁、安非他酮、甲苯磺丁脲、氯唑沙宗、香豆素、右美沙芬和咪达唑仑为CYP探针底物,应用质谱定量检测各探针底物的代谢产物生成量,计算得到IC_(50)和K_(i)值,评价2种化学受试物对大鼠和人肝微粒体CYP450酶的抑制活性和抑制类型,并对抑制强度进行分级。大鼠和人肝微粒体中羟苯丙酯是CYP1A2酶的中等强度抑制剂,羟苯丁酯在大鼠肝微粒体中是CYP1A2酶的弱抑制剂,在人肝微粒体中是CYP1A2酶的中等强度抑制剂,观察到对其他CYP450酶无抑制作用,这与用软件预测的羟苯丙酯和羟苯丁酯对CYP450酶的抑制种类结果一致,分子对接的结果也印证了羟苯丙酯和羟苯丁酯对CYP1A2酶活性的抑制作用,按照构效关系和同源CYP的物种敏感度预测模型,本文关于CYP的研究结果可以类推到其他哺乳动物和人类。

LC-MS/MS法同时评价吲达帕胺对大鼠肝微粒体中6种CYP450酶活性的影响

目的建立同时测定大鼠肝微粒体孵育体系中6种探针底物的LC-MS/MS方法,并应用于体外快速评价吲达帕胺对CYP450酶活性的影响,预测潜在药物相互作用。方法孵育样品经甲醇沉淀蛋白预处理,采用多反应监测模式对咖啡因、右美沙芬、咪达唑仑、奥美拉唑、氯唑沙宗和甲苯磺丁脲等6种探针底物进行测定;以吲达帕胺为模型药物,使用已建立的方法考察模型药物对CYP450酶活性的影响。结果6种探针底物在标准曲线范围内与峰面积线性关系良好(相关系数r均>0.995),方法准确度为93.66%~107.59%,批内批间RSD≤7.9%,符合生物样本测定要求。吲达帕胺对CYP3A4、CYP2D6、CYP1A2、CYP2C9和CYP2E1无抑制作用,但对CYP2C19存在抑制作用。结论该LC-MS/MS方法简单、准确、快速、可靠,可用于评价吲达帕胺对CYP450酶活性的影响。

头花蓼水提取物对CYP450酶诱导和抑制作用研究

目的 考察头花蓼水提取物对人肝微粒体CYP4505种亚型酶的体外抑制作用和对小鼠的体内诱导作用,从而预测发生药物相互作用的可能性,为临床合理用药提供科学依据。方法 以探针底物代谢物生成法,考察头花蓼水提取物体外对人肝微粒体主要I相代谢酶CYP1A2、CYP2E1、CYP2C9、CYP2C19和CYP3A4活性的影响;采用微粒体体外孵育法,考察小鼠经高、低剂量（1.16、0.58g·kg-1）头花蓼水提取物分别连续灌胃7d和14d后,小鼠肝微粒体中主要I相代谢酶活性的变化,以评价头花蓼水提取物对小鼠肝微粒体主要CYP450酶是否有诱导作用。结果 头花蓼水提取物对人肝微粒体中主要的CYP450I相代谢酶的抑制作用均不强,IC50值在849.6~2287mg·L-1;与空白对照组比较,1.16g·kg-17d组小鼠CYP2C9和CYP3A4活性分别增加了49.9%和21.1%（P〈0.01和P〈0.05）,0.58g·kg-114d组小鼠CYP2C9和CYP3A4活性分别增加了27.6%和15.5%（P〈0.01和P〈0.05）,1.16g·kg-114d组小鼠CYP2C9和CYP3A4活性分别增加了67.5%和32.1%（P〈0.01）,头花蓼提取物对其余CYP亚型活性未见明显影响。结论 在临床剂量下,头花蓼水提取物对人肝微粒体CYP1A2、CYP2E1、CYP2C9、CYP2C19和CYP3A4无明显抑制作用,对小鼠肝微粒体CYP2C9和CYP3A4显示诱导作用。

基于CYP450酶的复方苦参注射液代谢及其与紫杉醇相互作用的研究

目的基于细胞色素P450酶(CYP450s)的代谢,考察复方苦参注射液体外与紫杉醇的相互作用,为临床应用提供参考。方法将不同体积百分比浓度的复方苦参注射液与CYP2C8同工酶的探针底物紫杉醇及人肝微粒体共同孵育,采用LC-MS/MS检测特异性探针底物代谢物6α-羟基紫杉醇的生成量,计算半数抑制浓度(IC_(50))。结果复方苦参注射液在0.600g/mL时对CYP2C8的抑制率为100.0%,其IC50值为0.052 8g/mL。结论复方苦参注射液在体外与紫杉醇注射液之间存在基于CYP2C8的代谢性相互作用,为临床应用两药抗肿瘤提供了参考。