两种诱导方法制备大鼠肝S9在两种遗传毒性试验中活性比较

目的:通过比较联合诱导法和多氯联苯诱导法制备的S9的活化作用,探讨两种S9活化作用的差异对两种试验阳性结果的影响。方法:采用Ames试验方法和染色体畸变试验方法对两种S9活化的阳性结果进行比较。Lowry法测定两种S9的蛋白含量,Omura法测定P450含量。结果:Ames试验和染色体畸变试验中两种S9在阳性组中都显示出明显活化作用,同一条件下,Ames试验中使用两种S9所得阳性结果并无较大差异,染色体畸变试验中两种S9活化的阳性组畸变率间差异无统计学意义(P>0·05)。多氯联苯诱导法S9的蛋白含量13·25g·L-1,P450含量为3·92nmol·mg-1蛋白,联合诱导法S9蛋白含量为15·25g·L-1,蛋白含量P450含量为2·94nmol·mg-1蛋白。结论:两种S9在Ames试验和染色体畸变试验中对相应阳性诱变剂都有明显的活化作用。可以认为两种S9在Ames试验和染色体畸变试验中对于相应的阳性化学物活化作用无较大差异,联合诱导法可以替代多氯联苯诱导法制备肝匀浆S9。

基于肝微粒体和肝S9成分的食品接触材料中五氯苯酚体外代谢分析

目的通过体外代谢方法,研究五氯苯酚(pentachlorophenol,PCP)的代谢情况。方法采用肝微粒体和肝S9成分2种体外代谢试剂模拟体内代谢模式,通过优化代谢反应条件,建立PCP、四氯苯醌(Cl4BQ)2种目标物的气相色谱-质谱联用(GC-MS)检测方法,对PCP进行体外代谢研究分析。结果体外代谢分析的最佳反应条件为代谢试剂浓度0.75 mg/m L、代谢反应时间4 h。结论在最优反应条件下分析比较2种试剂对PCP的代谢情况,验证了PCP的代谢产物为Cl4BQ,且在肝微粒体和肝S9成分中的代谢没有显著差异。

HPLC-MS法检测大鼠肝S9蛋白中T-2毒素及一种羟基代谢产物

目的应用HPLC-MS技术,建立高灵敏度的大鼠肝S9蛋白中T-2毒素及其一种羟基化代谢产物的分析方法。方法以XDB-C18色谱柱（4.6 mm×50 mm,1.8μm）分离,以5 mmol·L-1的乙酸铵水溶液和甲醇溶液为流动相进行梯度洗脱,以玉米赤霉酮为内标,在正离子多反应监测模式下对各分析物进行定性和定量分析。结果 T-2毒素、3＇-OH-T-2分别在5~5000 nmol·L-1、25~5000 nmol·L-1的浓度范围内具有良好的线性。检测限分别为2、5 nmol·L-1,定量限分别为5、25 nmol·L-1,回收率介于72.6%~125.8%。结论方法学验证表明本方法快速、重复性好、灵敏度高,已成功应用于T-2毒素羟基化产物制备的监测。

抗球虫新药纳川珠利在大鼠肝S9中的代谢稳定性研究

以大鼠肝S9系统为体外代谢模型,利用高效液相色谱法检测抗球虫新药纳川珠利与大鼠肝S9孵育后的含量,研究纳川珠利在大鼠肝S9系统中的代谢稳定性及可能存在的代谢产物。结果显示,大鼠肝S9系统中,纳川珠利药物浓度在0～1h范围内呈线性消除,符合一级反应的特征,速率常数K=0.004 719min-1,半衰期t 1/2=146.88min,说明纳川珠利在大鼠肝S9系统中具有较高的代谢稳定性;此外,该系统中还监测到纳川珠利的一种代谢产物,它的量也随着时间的增加而增加,约占纳川珠利代谢总量的36%。

柱前衍生化HPLC法测定大鼠肝S9组分中川丁特罗对映体

目的:建立柱前衍生化HPLC法研究大鼠肝S9组分中川丁特罗对映体体外代谢的立体选择性。方法:以二-O-乙酰基-L-酒石酸酐(DATAAN)为衍生化试剂,采用反相高效液相色谱法拆分川丁特罗对映体,测定大鼠肝S9组分中川丁特罗对映体的浓度。结果:川丁特罗对映体达到基线分离,分离度为2.24,线性范围2.50～200μmol·L^(-1),平均回收率(S)-川丁特罗为89.3%,(R)-川丁特罗为91.3%。平均日内、日间RSD均小于15%。在大鼠肝S9组分中川丁特罗的代谢呈现立体选择性。结论:此法专属性强、准确可靠,可用于大鼠肝S9组分中川丁特罗代谢的立体选择性研究。

肝微粒体和肝S9转化藜芦酸葡萄糖酯比较研究

目的比较2种体外肝代谢模型转化藜芦酸葡萄糖酯的转化样式和转化率差异。方法通过大鼠肝微粒体和肝S9体外转化模型对藜芦酸葡萄糖酯进行生物转化,采用HPLC检测转化底物及产物的含量,检测波长254 nm,流动相为乙腈(A)-1%乙酸溶液(B),梯度洗脱(0~6 min,5%~40%A;6~9 min,40%~50%A;9~11 min,50%~5%A),流速1.0 m L/min。结果 2种模型均可将藜芦酸葡萄糖酯转化为藜芦酸,但应用肝S9模型得到的代谢产物多于肝微粒体模型,且肝S9模型对酯类的转化率高于肝微粒体模型。结论肝S9模型对酯类的转化能力高于肝微粒体模型。

反义寡核苷酸药物AD00510-AS在小鼠、大鼠、猴、人肝S9和血浆中的代谢产物研究

目的:建立反义寡核酸药物AD00510-AS的LC-UV-Q-TOF方法,并探索小核酸药物AD00510-AS在体外肝S9和血浆中的代谢产物和代谢途径.方法:基于固相萃取的方法对孵育24h后的肝S9和血浆样品进行处理,采用SCIEX OS进行数据采集,采用Molecule ProfilerTM软件分析空白样品和给药后孵育24h样品的提取离子流图(XIC)的差异,得到可能的代谢产物,并推测代谢途径.结果:AD00510-AS分别与小鼠、大鼠、猴、人肝S9孵育24h后,共检测到3个代谢产物(M1,M4和M5),母药的相对丰度分别为73.9%,87.1%,78.4%和81.3%;AD00510-AS分别与小鼠、大鼠、猴、人血浆孵育24h后,共检测到4个代谢产物(M2,M3,M4和M5),母药的相对丰度分别为69.1%,94.5%,67.8%和68.1%;通过MS及MS/MS的测定,鉴定的代谢产物如下:M1:3'末端丢失9个核苷酸代谢产物(MW=4544);M2:3'末端丢失2个核苷酸代谢产物(MW=6857);M3:3'末端丢失1个核苷酸代谢产物(MW=7232);M4:双脱硫代谢产物(MW=7559);M5:脱硫代谢产物(MW=7575).结论:采用确认的LC-UV-Q-TOF方法可以检测到AD00510-AS及其5个代谢产物,AD00510-AS在体外肝S9和血浆中主要通过降解(丢失核苷酸)和脱硫进行代谢.

关注肝脏分段第S9段的临床价值和意义

Couinaud于1994年首次提出肝S9段的命名,刘允怡于2016年在他的著作《肝切除与肝移植应用解剖学》中进一步推介了这一命名,但是长期以来在肝脏外科界并没有获得广泛认可及支持。近年来,由于腔镜技术的推广与逐步成熟,对肝脏的解剖和肝脏管道走行有了更精细的了解和需求,因此本文对肝S9段的临床价值和意义作进一步的探讨。

不同方法诱导大鼠非酒精性单纯性脂肪肝模型的CYP酶活性比较研究

目的研究四氯化碳(CCl4)诱导大鼠非酒精性单纯性脂肪肝(nonalcoholic simple fatty liver,NAFL)模型在不同时间段对主要细胞色素P450 (cytochrome P450 proteins,CYP)酶活性的影响,并与高脂饲料诱导大鼠NAFL模型相比较。方法将实验动物分为模型组和溶媒/空白对照组,模型组采用每周2次皮下注射40%CCl4,连续9周(CCl4模型)或连续给予高脂饲料9周(高脂模型)。通过组织病理学观察,测定肝脏脂质含量及肝脏系数(肝脑比)等确认大鼠NAFL造模成功,并测定血生化谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST),测定主要CYP酶活性变化。结果两种模型的组织病理学所见符合NAFL特点,肝内脂质含量及肝脑比均有显著性增加。在不同周龄,CCl4模型组的主要CYP酶活性(第4周CYP2B6除外)与溶媒组相比,有显著性下降(P <0. 001),且随时间延长有加重趋势;高脂模型的主要CYP酶活性与空白对照组比较无明显变化。ALT和AST在CCl4模型组显著升高,而在高脂模型组无明显变化。结论肝脏组织中主要CYP酶活性可用于鉴别两种不同途径(CCl4或高脂饲料)诱导的大鼠NAFL模型。

人肝肿瘤细胞株及临床肝肿瘤组织S9中药物的Ⅰ相代谢酶动力学研究

目的研究人肝肿瘤细胞株及临床人肝肿瘤组织S9中的Ⅰ相代谢功能。方法采用体外培养人肝肿瘤细胞株与人正常肝细胞株,提取临床来源肝肿瘤组织与肿瘤旁组织S9,考察5种P450亚型(CYP1A2、CYP2C9、CYP2C19、CYP2D6和CYP3A4)的代谢水平,依次选用非那西丁、双氯芬酸、奥美拉唑、右美沙芬、咪达唑仑和睾酮等特异性探针药物,借助LC-MS/MS、HPLC等分析手段测定生成的特定代谢产物量,来对比和表征细胞株和组织中相应P450同工酶的活性大小。结果人肝肿瘤癌旁组织S9相代谢水平远高于人肝癌组织S9。在体外细胞系中,除去双氯芬酸、奥美拉唑的代谢产物低于定量限外,其余底物咪达唑仑、睾酮、非那西丁、右美沙芬在肝肿瘤细胞株中的代谢水平远高于在人正常肝细胞中(P<0.01)。肝肿瘤细胞株与临床组织S9中酶的表达和功能均一致。结论 2种体外代谢模型,即组织S9与细胞S9的Ⅰ相代谢规律并不一致。癌旁组织更能反映肿瘤在体状态对药物Ⅰ相代谢的规律。

双酚A和邻苯二甲酸二丁酯对人乳腺癌细胞株MCF-7细胞增殖的影响

目的研究环境内分泌干扰物双酚A、邻苯二甲酸二丁酯在经大鼠肝微粒体酶混合物(S9)作用后对雌激素受体阳性的人乳腺癌细胞株MCF-7增殖作用的影响。方法分别将不同浓度的阳性对照物(17β-雌二醇)以及受试物双酚A、邻苯二甲酸二丁酯经大鼠肝S9酶系作用后,用其代谢产物刺激体外培养的MCF-7细胞,用四甲基偶氮唑盐(MTT)法测定细胞增殖的量。结果17β-雌二醇和邻苯二甲酸二丁酯经S9代谢后,其促进MCF-7细胞增殖的活性降低,而经S代谢后的双酚A则表现为较强的促进MCF-7细胞增殖的活性。结论17β-雌二醇和邻苯二甲酸二丁酯经S9代谢后雌激素活性减弱,而双酚A经S代谢后雌激素活性增强。

食品包装材料中有害物质双酚A二缩水甘油醚体外代谢研究

目的通过模拟体内代谢,对双酚A二缩水甘油醚(BADGE)的体外基本代谢情况进行研究。方法采用肝微粒体、肝S9 2种体外代谢试剂,通过模拟体内肝脏代谢,对BADGE的代谢行为及其代谢产物进行研究。通过代谢试剂浓度及代谢时间条件的优化,采用高效液相色谱-串联质谱(HPLC-MS/MS)作为检测手段对BADGE的体外代谢产物进行分析确证。结果体外代谢最佳孵化时间为60 min,最佳体外代谢试剂浓度为0.5mg/m L,在肝S9及肝微粒体2种体外代谢试剂的作用下,BADGE发生显著的代谢反应。结论本研究与传统的动物试验相比,节约了时间、精力,对食品包装材料的毒理学研究和安全性评价有重要的推动作用。

食品接触材料中芘的体外代谢模拟分析

目的模拟体内代谢条件,分析芘的体外基本代谢情况。方法采用肝微粒体及肝S9成分2种代谢试剂,体外模拟了肝脏代谢条件,对代谢试剂浓度及代谢时间条件进行优化,采用气相色谱-质谱(GC-MS)法检测芘和羟基芘,比较分析2种代谢试剂对PYR的代谢情况。结果体外代谢最佳孵化时间为60 min,最佳体外代谢试剂浓度为0.5 mg/m L。结论 PYR在肝微粒体代谢试剂中无明显代谢反应发生,在肝S9成分的作用下,代谢生成羟基芘,推断参与PYR代谢的主要为二相酶类。

果纳芬和普丽康对胆固醇代谢影响的初步研究

目的初步研究促卵泡激素(果纳芬和普丽康)对胆固醇代谢的影响。方法建立肝S9体外孵育体系,向体系中加入浓度为0.025,0.25,2.5 IU/ml的两种重组促卵泡激素注射液,并运用UPLC-MS/MS测定胆固醇浓度。结果与空白组相比,两种FSH在加入浓度为0.25 IU/ml重组促卵泡激素后,胆固醇的浓度与空白组胆固醇浓度的差值随着作用时间的增加而增大,当加入2.5 IU/ml的重组促卵泡激素后,胆固醇的浓度与空白组胆固醇浓度的差值随着作用时间的增加呈先增加后减小的趋势。(0~40 min呈增加趋势,40~80 min呈减小趋势)。结论在该试验条件下,促卵泡激素能够促进胆固醇代谢,且低浓度促卵泡激素(0.25IU/ml)较高浓度促卵泡激素(2.5 IU/ml)促进胆固醇代谢作用更为显著。

汉黄芩素在FVB小鼠体内的磺酸化代谢特征研究

目的探讨汉黄芩素Ⅱ相代谢中主要的磺酸化代谢反应特征。方法采用FVB小鼠肠灌流模型及FVB小鼠肝脏S9体外反应体系,通过采用高效液相色谱-质谱法(HPLC-MS/MS)和高效液相色谱-二极管阵列检测器(HPLC-DAD)测定汉黄芩素及其代谢产物,研究汉黄芩素主要的Ⅱ相代谢反应之一磺酸化代谢反应的特征。结果汉黄芩素在FVB小鼠小肠均发生葡萄糖醛酸化与磺酸化代谢反应,其中磺酸化代谢产物的排出速率为[(3.46±0.16)nmol/30 min/10 cm]。而汉黄芩素在结肠中只检测出磺酸化代谢产物,其排出速率为[(1.40±0.24)nmol/30 min/10 cm]。体外试验显示,汉黄芩素的磺酸化代谢符合双相酶代动力学特征,由两种磺酸化转移酶(Sult)亚型介导。结论汉黄芩素的磺酸化代谢反应是汉黄芩素肠道代谢的重要组成部分,其在肝脏的磺酸化代谢由两种Sult酶催化完成。