肝X受体激动剂对人THP-1细胞三磷酸腺苷结合盒转运体A1和肝X受体α、β亚型表达的影响

目的 研究肝X受体激动剂3β- 羟基- 5α,6α- 环氧胆烷酸甲酯和进口肝X受体激动剂激动剂T 0 90 1317对THP 1细胞三磷酸腺苷结合盒转运体A1、肝X受体激动剂α和肝X受体激动剂β亚型mRNA表达的影响。方法 应用逆转录—聚合酶链反应检测- 3β- 羟基- 5α,6α- 环氧胆烷酸甲酯和T 0 90 1317作用前后THP 1细胞源性巨噬细胞三磷酸腺苷结合盒转运体A1、肝X受体激动剂α和肝X受体激动剂β的mRNA表达,免疫组织化学检测三磷酸腺苷结合盒转运体A1蛋白水平的表达。结果 3β- 羟基- 5α,6α- 环氧胆烷酸甲酯和T 0 90 1317均能显著上调THP 1细胞中三磷酸腺苷结合盒转运体A1和肝X受体激动剂α的mRNA表达(P <0 .0 1) ,并呈时间和剂量依赖性;在对肝X受体激动剂β表达的影响方面,低浓度的T 0 90 1317能明显上调肝X受体激动剂β的表达,而3β- 羟基- 5α,6α-环氧胆烷酸甲酯只有在较高浓度时(10 μmol/L)才表现出上调肝X受体激动剂β表达的作用(P <0 .0 5 )。结论 3β羟基- 5α,6α-环氧胆烷酸甲酯以激动肝X受体激动剂α为主,并与T 0 90 1317一样,可上调THP 1细胞中三磷酸腺苷结合盒转运体A1和肝X受体激动剂α的表达。

肝X受体激动剂对RAW 264．7细胞ABCA1蛋白表达和TNF-α、IL-6产生和分泌的影响

目的:研究肝X受体激动剂3β-羟基-5α,6α-环氧胆烷酸甲酯和(MHEC)T-0901317对小鼠巨噬细胞株RAW264．7细胞三磷酸腺苷结合盒转运体A1(ABCA1)蛋白表达和TNF-α、IL-6产生和分泌的影响。方法:应用免疫细胞化学染色法检测 RAW264．7细胞ABCA1蛋白表达的影响;应用夹心法ELISA检测细胞培养上清波中TNF-α和IL-6的浓度,分析肝X受体激动剂对氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)诱导的巨噬细胞TNF-α、IL-6产生和分泌的影响。结果:3β-羟基-5α,6α-环氧胆烷酸甲酯和T-0901317均可显著促进RAW264．7细胞．ABCA1蛋白的表达;与维甲酸X受体激动剂9-顺式视黄酸联合作用时,ABCA1 蛋白表达增加更为显著。氧化低密度脂蛋白可促进RAW264．7细胞TNF-α、IL-6的产生和分泌,而这一促进作用可部分地被 3β羟基-5α,6α-环氧胆烷酸甲酯和T-0901317所抑制。结论:肝X受体激动剂MHEC和T-0901317均可上调RAW264．7细胞 ABCA1蛋白表达,并可减少氧化低密度脂蛋白诱导的巨噬细胞中TNF-α、IL-6的产生和分泌。

肝X受体激动剂TO901317对糖尿病视网膜病变大鼠视网膜的保护作用

目的探讨肝X受体激动剂TO901317对糖尿病视网膜病变(DR)大鼠视网膜的保护作用。方法取24只健康SPF级SD大鼠,随机分为正常组、模型组、TO901317组,每组各8只。正常组大鼠不做任何处理;模型组、TO901317组大鼠在禁食24 h后测量空腹血糖浓度,腹腔内注射链脲佐菌素60 mg·kg-1,1周后采尾静脉血检测空腹血糖浓度。此后每月检测空腹血糖浓度1次,以空腹血糖浓度持续24周高于16.7 mmol·L-1作为造模成功的标准;TO901317组大鼠在第25周时一次性双眼玻璃体内注射5μL TO901317(3.125 g·L-1),正常组、模型组大鼠此阶段不做任何处理。造模成功后取各组大鼠视网膜组织行HE染色,观察各组大鼠视网膜形态结构和微血管变化情况,测量各组大鼠视网膜厚度。ELISA法检测大鼠视网膜白细胞介素(IL)-1β、IL-6含量,实时荧光定量PCR检测大鼠视网膜ABCA1、IL-1β、IL-6、VEGF的mRNA相对表达量,Western blot检测大鼠视网膜ABCA1、VEGF、IL-1β、IL-6蛋白表达水平。结果正常组大鼠视网膜各层组织间连接紧密,细胞排列整齐,各细胞形态及微血管结构正常。模型组和TO901317组大鼠视网膜可见内界膜肿胀断裂严重,部分内皮细胞突出内界膜;两组大鼠视网膜厚度均较正常组明显增加,差异均有统计学意义(均为P<0.05);TO901317组大鼠视网膜各层结构改变介于正常组与模型组之间,视网膜厚度较模型组明显减小,差异有统计学意义(P<0.05)。与正常组相比,模型组大鼠视网膜IL-1β和IL-6含量均明显升高,差异均有统计学意义(均为P<0.05);TO901317组大鼠视网膜IL-1β和IL-6含量较模型组均明显下降,差异均有统计学意义(均为P<0.05)。模型组大鼠视网膜ABCA1 mRNA相对表达量较正常组和TO901317组均显著降低,差异均有统计学意义(均为P<0.05);模型组大鼠视网膜IL-1β、IL-6、VEGF的mRNA相对表达量较正常组和TO901317组均显著升高,差异均有统计学意义(均为P<0.05)。模型组大鼠视网膜ABCA1蛋白相对表达量较正常组和TO901317组均显著降低,差异均有统计学意义(均为P<0.05);模型组大鼠视网膜IL-1β、IL-6和VEGF蛋白相对表达量较正常组和TO901317组均显著升高,差异均有统计学意义(均为P<0.05)。结论肝X受体激动剂TO901317可以上调ABCA1表达,下调IL-1β、IL-6和VEGF表达,抑制DR大鼠视网膜炎症反应和新生血管形成,对DR大鼠视网膜有一定的保护作用。

肝X受体激动剂对RAW264．7细胞摄取Ac-LDL能力的影响

目的:研究肝X受体激动剂3β-羟基-5α,6α-环氧胆烷酸甲酯(MHEC)和T-0901317对小鼠巨噬细胞株RAW264.7细胞摄取乙酰化低密度脂蛋白(Ac-LDL)能力的影响。方法:以5×10~5/孔培养的RAW264.7细胞为巨噬细胞模型,实验分为5组:①空白对照组;②MHEC组;③MHEC+9-顺式视黄酸(9-cRA)组;④T-0901317组;⑤T-0901317+9-cRA组。药物终浓度均为10μmol·L^(-1),作用24h,用Dil荧光标记的Ac-LDL(Dil-Ac-LDL,10 mg·L^(-1))孵育RAW 264.7细胞4h,应用流式细胞仪检测RAW 264.7细胞的荧光强度。结果:MHEC和T-0901317均可抑制RAW264.7细胞对Ac-LDL的摄取。维甲酸X受体(RXR)激动剂9-cRA与T-0901317联合作用时,RAW 264.7细胞对Ac-LDL的摄取受到更明显的抑制。结论:肝X受体激动剂MHEC和T-0901317均可抑制巨噬细胞对Ac-LDL的摄取。

肝X受体激动剂对EGFR下游通路的抑制作用

表皮生长因子受体-酪氨酸激酶抑制剂(EGFR-TKI)是目前应用最广泛的肺癌靶向药物,但几乎所有治疗有效的患者最终都会对EGFR-TKI产生继发耐药,耐药机制主要为EGFR下游通路被再度激活。肝X受体(LXR)属于核受体家族,多项研究表明LXR激动剂对EGFR最重要的下游通路PI3K/AKT/NF-κB多个主要环节均有不同程度的抑制作用。因此,LXR激动剂可能是逆转EGFR-TKI继发耐药的新选择。本文主要对近年来LXR激动剂对PI3K/AKT/NF-κB通路的抑制作用进行综述。

肝X受体激动剂在肿瘤治疗中的研究进展

肝X受体(liver X receptors,LXRs)是孤儿核受体转录因子超家族成员,当LXRs被激活后,可调节靶基因的转录表达,不但参与胆固醇、脂肪、糖的代谢以及炎症等过程,并且在许多恶性肿瘤组织中均有表达。为全面了解肝X受体激动剂在治疗癌症中的研究现状,本文将从肝X受体激动剂与胃癌、肝癌、卵巢癌、乳腺癌、子宫内膜癌、肺癌以及结直肠癌的相关性方面进行综述。

肝X受体激动剂T0901317对小鼠肺上皮细胞衰老的影响

目的探讨肝X受体(LXRs)激动剂T0901317对TNF-β1诱导的小鼠肺上皮细胞衰老相关基因表达的影响。方法将培养的MLE-12细胞分为A组(MLE12+PBS)、B组(MLE-12+10 ng/m L TGF-β1)、C组(MLE-12+100 n M T0901317)、D组(MLE-12+10 ng/m L TGF-β1+100 n M T0901317)。流式细胞术检测各组细胞端粒长度、细胞周期及ROS;RT-q PCR检测LXRα、LXRβ、p-16、p-21、ABCA1、ABCG1、SREBP-1的mRNA表达情况;Westernblot检测LXRα、LXRβ、p-16、p-21、ABCA1、ABCG1、SREBP-1的蛋白表达情况。结果端粒酶长度流式测定结果显示,与A组比较,B组、D组的荧光强度减弱,D组荧光强度较B组增强(P<0.05);细胞周期结果显示,与A组比较,B组细胞的G0/G1期比例增加,G2期比例减少,与B组比较,D组细胞的G0/G1期比例降低,G2期比例增加(P均<0.05);DCFH-DA荧光探针流式检测结果显示,与A组比较,B组、D组产生的ROS含量增加,D组较B组减少(P<0.05);RT-q PCR检测结果显示,与A组比较,p21和p16mRNA在B组表达显著升高,LXRα、LXRβ、ABCA1、ABCG1、SREBP-1 mRNA表达均降低(P均<0.05);LXRα和LXRβmRNA在C组表达较A组显著升高(P<0.05);Western-blot检测结果显示,与A组比较,p21和p16蛋白在B组表达显著升高,LXRα、LXRβ、ABCA1、ABCG1、SREBP-1的蛋白表达均降低(P<0.05);LXRα和LXRβ蛋白在C组表达较A组显著升高(P<0.05)。结论T0901317可活化LXRs,抑制上皮细胞衰老基因的表达,明显减少端粒长度缩短,延缓衰老。

肝X受体激动剂通过上调NPC1基因的表达减轻apoE基因敲除小鼠动脉粥样硬化病变程度

本文研究肝X受体(LXR)激动剂对apoE基因敲除小鼠NPC1表达的影响.52只雄性apoE基因敲除小鼠被随机分成4组:(a)基础组(baseline group,n=10);(b)对照组(control group,n=14);(c)LXR激动剂治疗组(treatment group,n=14);(d)LXR激动剂预防组(prevention group,n=14).各组小鼠均被给予高脂/高胆固醇饲料喂养;基础组小鼠被赋形剂灌胃处理8周;对照组小鼠被赋形剂灌胃处理14周;LXR激动剂治疗组小鼠在前8周被赋形剂灌胃处理,后6周被T0901317灌胃处理;LXR激动剂预防组小鼠被T0901317灌胃处理14周.采用实时定量PCR,Western blot和免疫组织化学方法分别检测组织中NPC1 mRNA和蛋白质的表达;采用酶法测定血清中总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、载脂蛋白A-Ⅰ(ApoA-Ⅰ)和载脂蛋白B(ApoB)含量.另外,我们采用RNA干扰技术沉默人THP-1巨噬细胞NPC1基因表达,并将细胞诱导成泡沫细胞,检测T0901317对该细胞胆固醇流出的影响.结果显示,LXR激动剂治疗组和预防组小鼠的血浆TC,TG,HDL-C和ApoA-Ⅰ水平都较对照组明显增高(P<0.05);LXR激动剂治疗组和预防组小鼠的主动脉粥样硬化斑块和脂质条纹明显少于对照组(P<0.05),其中治疗组减少了58.3%,预防组减少了64.2%;LXR激动剂治疗组和预防组小鼠的小肠组织、肝脏组织和主动脉NPC1表达上调(P<0.05);和正常THP-1巨噬细胞源性泡沫细胞比较,RNA干扰组胆固醇流出明显减少,T0901317处理组胆固醇流出明显增加.总之,LXR激动剂T0901317能减轻高脂高胆固醇饲料喂养的apoE基因敲除小鼠动脉粥样硬化病变程度并上调肝脏组织、小肠组织和主动脉NPC1的表达,NPC1基因沉默能使细胞胆固醇流出减少。

肝X受体激动剂可改善间充质干细胞移植治疗小鼠急性心肌梗死的疗效

目的 探讨肝x受体（LXR）激动剂对脂肪来源的间充质干细胞移植治疗小鼠急性心肌梗死（MI）的影响。方法酶消化法分离出稳定表达报告基因萤火虫荧光素酶（firefly lueiferase，Fluc＋）小鼠的脂肪间充质干细胞（AD-MSC^Fluc），流式细胞术检测CD90、CD44、CD34、CD45等细胞表面标志物。雄性近交系小鼠（无报告基因表达）随机分成以下4组（每组10只）：（1）假手术组；（2）MI＋PBS组；（3）MI＋AD-MSC^Fluc＋组；（4）MI＋AD-MSC^Fluc＋LXR激动剂（T0901317）干预组，每组分别进行相应的干预。生物发光成像（BLI）检测移植后AD．MSC的存活情况，小动物超声检查评价小鼠心脏功能。结果流式细胞术结果显示脂肪间充质干细胞CD44、CD90阳性，CD34、CIM5阴性。光学成像结果显示AD-MSC^Fluc的光学信号强度与细胞数量呈正相关（r^2=0．98）。术后在体生物发光成像结果显示术后第7、14、2l、28天MI＋AD-MSC^Fluc＋＋319901317组BLI信号强度依次为（1．60±0．11）×10^3、（0．934-0．08）×10^5、（0．554-0．07）×10^5和（0．274-0．05）×10^5P·S^-1·CIll^-2·sr^-1，MI＋AD-MSC^Fluc＋组的BLI信号强度依次为（1．284-0．08）×10^5、（0．56±0．07）×10^5、（0．25±0．05）×10^5和（0．054-0．03）×10^5 P·s^-1·cm^-2·sr^-1，MI＋AD-MSC^Fluc＋。＋39901317组BLI信号强度明显强于MI＋AD-MSC^Fluc＋组相同时间点（P均〈0．05）。小动物超声检测结果显示术后第28天，MI＋PBS组、MI＋AD-MSC^Fluc＋组和MI＋AD-MSC^Fluc＋＋T0901317组小鼠LVEF依次为（27．874-1．81）％、（30．334-1．06）％和（40．494-1．31）％，FS依次为（16．544-0．83）％、（17．83±1．01）％和（25．24±0．99）％，MI＋AD-MSC^Fluc＋＋T0901317组小鼠LVEF和Fs均明显高于其他两组（JP均〈0．05）。结论LXR激动NT0901317可提高移植到小鼠梗死心肌的AD-MSC^Fluc＋的存活率，并能明显改善心功能。

肝X受体激动剂抑制NLRP3炎性体活化

为探讨肝X受体激动剂对NLRP3配体ATP诱导小鼠巨噬细胞炎性复合体活化的影响,应用荧光定量PCR方法测定肝X受体激动剂对LPS诱导的Pro-IL-1β、NLRP3等基因表达的影响,并用免疫蛋白印迹的方法检测Caspase-1的活化片段。结果证明,肝X受体(LXRs)激动剂能抑制NLRP3炎性体的活化。LXRs激动剂T0901317和GW3965显著抑制LPS联合ATP诱导的Caspase-1剪切成熟和IL-1β分泌,并且LXRs激动剂对NLRP3炎性体的抑制作用,部分源于其抑制NLRP3和IL-1β的基因转录。

肝X受体激动剂TO-901317对急性肺损伤炎症反应中NF-κB信号通路的影响

目的探讨肝X受体激动剂TO-901317在大鼠急性肺损伤(acute lung injury,ALI)中对NF-κB信号通路中可能的调控作用。方法将60只雄性SD大鼠随机分为3组:对照组、赋形剂组、TO-901317组。用肝X受体激动剂TO-901317和赋形剂灌胃一周后,LPS尾静脉注射赋形剂组和激动剂组复制大鼠ALI模型,对照组注射等量生理盐水。分别在LPS处理1、2、4、8h后处死大鼠。观察肺组织病理形态学的改变,测定动脉血气和肺组织W/D值以及支气管肺泡灌洗液NF-κB蛋白含量。结果与赋形剂组小鼠相比,TO-901317组大鼠肺组织病理改变明显减轻;W/D均明显降低;动脉血氧分压(PaO2)均显著升高;支气管肺泡灌洗液NF-κB蛋白含量明显降低。结论肝X受体激动剂TO-901317能抑制NF-κB信号传导通路,从而减轻ALI。

LXR异常激活上调p27蛋白致胰岛β细胞周期阻滞

目的探讨肝X受体(liver X receptors,LXR)激动剂对小鼠胰岛β细胞系MIN6的作用。方法 LXR激动剂T0901317作用于MIN6细胞后,CCK-8法检测细胞活力;流式细胞仪检测细胞周期变化;实时定量RT-PCR法检测S期激酶相关蛋白2(Skp2)和p27 mRNA的表达水平;western blot检测Skp2和p27蛋白的表达情况。结果与control组相比,1、5和10μmol/L药物处理后的细胞存活率分别为(98.54±0.94)%、(87.03±0.93)%和(75.57±1.85)%,各组间差异有统计学意义(F=301.90,P<0.01)。与control组G1期(35.93±2.25)%和S期(52.87±1.19)%相比,1、5和10μmol/L药物处理组G1期细胞比例分别为(38.45±0.91)%、(45.46±1.34)%和(53.28±1.14)%,差异有统计学意义(F=80.83,P<0.01)。S期细胞比例分别为(48.65±0.85)%、(36.31±1.37)%和(31.45±1.22)%,差异有统计学意义(F=221.30,P<0.01)。10μmol/L T0901317处理组p27蛋白表达水平(2.84±0.14)明显高于control组(2.28±0.10),差异有统计学意义(t=4.54,P<0.05)。但两组间p27 mRNA水平差异无统计学意义(t=0.28,P>0.05)。10μmol/L T0901317下调Skp2 mRNA(0.52±0.02,t=29.22,P<0.01)和蛋白质水平(相对灰度值为0.98±0.12,control组为1.89±0.01,t=10.98,P<0.01)。以对照组(100%)为参照,转染组、药物处理组和干扰组的细胞存活率分别为(100.97±1.08)%、(75.03±1.83)%和(86.67±2.45)%,与对照组比较,转染组间差异无统计学意义(t=1.542,P>0.05),药物处理组细胞活力下降(t=23.58,P<0.01);药物处理组和干扰组间差异亦有统计学意义(t=7.77,P<0.01)。结论 LXR异常激活可导致胰岛β细胞增殖抑制,p27蛋白表达量增加,其机制可能为降解调控p27蛋白的Skp2 mRNA和蛋白质表达水平下降。

T0901317对apoE基因敲除小鼠肝脂质蓄积及肝固醇调节元件结合蛋白-1c表达的影响

目的本文研究肝X受体(LXR)激动剂T0901317对apoE基因敲除小鼠肝脏脂质蓄积及肝脏固醇调节元件结合蛋白1-c(SREBP-1c)表达的影响。方法52只雄性apoE基因敲除小鼠被随机分成4组:基础组(n=10)对照组(n=14)、LXR激动剂治疗组(n=14)、d.LXR激动剂预防组(n=14)。各组小鼠均被给予高脂/高胆固醇饲料喂养;基础组小鼠被赋形剂灌胃处理8周;对照组小鼠被赋形剂灌胃处理14周;LXR激动剂治疗组小鼠在前8周被赋形剂灌胃处理,后6周被T0901317灌胃处理;LXR激动剂预防组小鼠被T0901317灌胃处理14周。使用HE和油红O染色方法观察小鼠肝脏脂质蓄积情况;采用实时定量PCR和蛋白质印迹方法分别检测肝脏SREBP-1cmRNA和蛋白质的表达。结果实验结果显示LXR激动剂治疗组和预防组小鼠肝脏脂质滴较对照组明显增多,组织结构排列逐渐紊乱(P<0.05);LXR激动剂治疗组和预防组小鼠肝脏SREBP-1cmRNA和蛋白质表达上调(P<0.05)。结论LXR激动剂T0901317能增加高脂高胆固醇饲料喂养的apoE基因敲除小鼠肝脏脂质蓄积并上调SREBP-1c表达。