基于血清药理学的肝龙胶囊含药血清制备方法的初步探究

目的:利用血清药理学,探究用于肝细胞脂肪变性药效观察的肝龙胶囊(GLC)含药血清的最佳取血时间和含药血清体积分数。方法:C57BL/6J小鼠60只,灌胃GLC(90 mg/kg),每日两次,连续7 d,分别在末次给药0.5、1、2和4 h心脏采血,收集血清。对照组小鼠灌胃同体积的生理盐水。LC-MS/MS技术检测空白血清及不同采血时间含药血清肌苷含量,确定最佳采血时间。应用0%、1%、3%和10%GLC血清处理棕榈酸(PA)刺激的小鼠肝细胞NCTC1469,尼罗红染色检测细胞脂滴生成,RT-qPCR检测细胞内脂肪酸生成基因Fabp1和Scd1,及脂肪酸β-氧化基因Pparα的表达。结果:(1) LC-MS/MS检测发现在末次给药2 h后血清中肌苷浓度最高。(2)尼罗红染色显示GLC血清对PA诱导的肝细胞脂质积累具有剂量依赖性的减少趋势。(3) 1%和3%和10%GLC血清处理均能显著下调PA刺激的肝细胞内Fabp1和Scd1的表达,且具有剂量依赖性的减少趋势;1%、3%和10%GLC血清处理均能显著上调PA刺激的肝细胞内Pparα的表达,且具有剂量依赖性的增加趋势。结论:小鼠给药后2 h的10%GLC血清是用于肝细胞脂肪变性药效观察的最佳血清干预浓度。

肝癥口服液人含药血清对人肝癌细胞SMMC—7721细胞凋亡及细胞周期的影响

本文就肝口服液人含药血清对人肝癌细胞SMMC - 772 1细胞凋亡及细胞周期的影响进行了研究。通过荧光显微镜观察及流式细胞仪检测表明 ,肝口服液可以促进人肝癌细胞SMMC - 772 1细胞凋亡 ,且对正常人的免疫系统影响不大。

肝癥口服液含药血清对人肝癌BEL-7402细胞系侵袭和转移的影响

目的:探讨肝癥口服液含药血清对人肝癌BEL-7402细胞系侵袭和转移的影响及其机制.方法:应用细胞培养技术培养人肝癌细胞株BEL-7402,采用血清药理学的方法,以原发性肝癌患者服用肝癥口服液前后血清处理肝癌细胞,通过Boyden小室模型测定其侵袭力和黏附力,细胞迁移实验测定细胞运动能力,同时观察细胞形态,流式细胞术测定肝癌细胞基质金属蛋白酶2(MMP2),基质金属蛋白酶抑制剂2(TIMP2),整合素β_1(integrinβ_1)和上皮钙黏附素(E-cd)表达的改变.结果:肝癥口服液含药血清能明显抑制肝癌细胞侵袭力(25.79±2.31 vs 49.54±4.32,P<0.05)、黏附力(42.38±3.19 vs 68.67±5.36,P<0.05)及运动能力(34.72±3.43 vs 54.16±5.35,P<0.05).形态学观察发现,服药后血清组细胞形态较圆,伪足数目较少,MMP2阳性表达细胞减少(289.61±25.32 vs 439.28±22.45,P<0.05),TIMP2阳性表达细胞增多(348.75±34.58 vs 250.53±16.48,P<0.05),MMP2/TIMP2比值下降(0.83 vs 1.76,P<0.05);integrinβ_1表达减少(286.05±28.47 vs 389.57±21.23,P<0.05),E-cd的表达则增加(385.57±26.36 vs 230.72±13.41.P<0.05).结论:肝癥口服液含药血清能抑制肝癌BEL-7402细胞侵袭与转移,其机制可能与直接抑制细胞迁移运动,抑制细胞基质溶解相关基因蛋白MMP2表达,促进TIMP2表达;抑制黏附分子integrinβ_1的表达,促进E-cd表达有关.

肝癥口服液含药血清对肝癌细胞SMMC-7721细胞增殖的影响

目的:探讨肝口服液含药血清对肝癌细胞SMMC-7721细胞增殖的影响,为临床应用肝口服液治疗肝癌提供实验室依据。方法:选取Ⅱb或Ⅲ期肝癌病人和健康志愿者各5例,分别在用药前及用药后8周采集血清,与SMMC-7721细胞共同培养24h、48h后,应用噻唑氮蓝(MTT)比色法测定肝癌细胞SMMC-7721增殖水平。结果:HCC患者含药血清对SMMC-7721细胞增殖抑制率在24h、48h分别为45.00%3、9.32%;而健康志愿者为4.58%、7.70%,HCC患者含药血清对肝癌细胞增殖抑制作用明显高于健康志愿者。结论:肝口服液含药血清对SMMC-7721细胞的增殖有明显的抑制作用并促进其凋亡,表明肝口服液有抗肿瘤作用。

肝癌患者肝癥口服液含药血清对SMMC-7721肝癌细胞TGFβ受体表达的影响

目的:观察肝癥口服液含药人血清对SMMC-7721肝癌细胞TGFβ1/Sm ads信号转导通路中TGFβ受体(TGFβR)的影响。方法:以健康志愿者和肝癌患者用药前后血清培养人SMMC-7721肝癌细胞,应用RT-PCR和W estern B lotting技术观察含药血清对肝癌细胞TGFβRⅠ和TGFβRⅡmRNA和蛋白表达的影响。结果:健康志愿者服用肝癥口服液前后血清对SMMC-7721细胞的TGFβRⅠ和TGFβRⅡ蛋白和mRNA表达无显著影响;肝癌患者肝癥口服液的含药血清可使明显受到抑制的TGFβRⅠ和TGFβRⅡ表达恢复,尤其以TGFβRⅡ表达显著上调。结论:肝癌患者肝癥口服液含药血清可增加肝癌细胞TGFβR的表达,使受到抑制的TGFβ1/Sm ads信号转导通路功能恢复。

枳葛口服液含药血清对乙醇诱导L-02肝细胞氧化损伤的抗氧化作用

目的探讨枳葛口服液含药血清对乙醇诱导L-02肝细胞氧化损伤的抗氧化作用及其机制。方法将接种于6孔板上的L-02肝细胞分为6组:对照组(10%正常大鼠血清培养)、模型组(2.5%乙醇处理)及4组不同浓度的含药血清组(2.5%乙醇+不同浓度枳葛口服液含药血清),24 h后测定各组细胞活力及细胞内氧化应激指标及抗氧化酶活力变化。结果与对照组比较,模型组的细胞活力、氧化应激指标丙二醛(MDA)、活性氧自由基(ROS)及抗氧化酶超氧化物歧化酶(SOD)等指标差异均有统计学意义(P <0.05);与模型组比较,各枳葛口服液含药血清组的以上指标均有所逆转改善,且改善程度与枳葛口服液含药血清浓度呈负相关,即浓度最小组逆转效果最佳,且与对照组比较差异无统计学意义(P> 0.05)。结论一定浓度的枳葛口服液含药血清能显著降低L-02肝细胞中氧化应激指标MDA、ROS含量,增加胞内抗氧化酶SOD活力,从而减轻或抑制乙醇诱导的氧化应激损伤。

枳葛口服液含药血清对L-02肝细胞酒精性损伤乙醇代谢酶活性的影响

目的:观察枳葛口服液含药血清对酒精性损伤L-02肝细胞内乙醇代谢酶活性的影响,探讨枳葛口服液对酒精性肝病的防治机制。方法:将正常L-02肝细胞接种于6孔板,贴壁后分为正常对照组、模型组(2.5%乙醇处理)和不同浓度枳葛口服液含药血清(2.5%乙醇+2.5%、5%、10%枳葛口服液含药血清)干预组,24 h后测定各组细胞上清液中AST、LDH水平及细胞内ADH1、ALDH2 mRNA和CYP2E1蛋白的表达。结果:与正常对照组比较,模型组上清液中AST、LDH含量及细胞内CYP2E1蛋白表达显著升高,细胞内ADH1、ALDH2 mRNA表达显著降低(P<0.01)。与模型组比较,各干预组以上指标均呈现不同程度的逆转,其中10%枳葛口服液含药血清作用最显著(P<0.01)。结论:一定浓度的枳葛口服液含药血清可逆转或阻止酒精性损伤L-02肝细胞内ADH1、ALDH2、CYP2E1等活性的改变,从而抑制氧自由基、乙醛等毒性产物生成,避免肝细胞受损。

清肺口服液含药血清对呼吸道合胞病毒抑制作用的实验研究

目的研究清肺口服液含药血清对呼吸道合胞病毒(RSV)感染细胞的抑制作用。方法用不同剂量的清肺口服液制成含药血清处理呼吸道合胞病毒感染后的Hep-2细胞,用组织细胞培养法,采用细胞病变(CPE)观察和四氮唑盐还原法(MTT法)检测清肺口服液含药血清对RSV感染细胞的增殖抑制作用。结果在Hep-2细胞上,清肺口服液的最大无毒浓度为1∶9。100TCID50RSV攻击后Hep-2细胞的OD值明显降低,加入中高剂量含药血清后OD值升高。结论清肺口服液含药血清对RSV有抑制作用。

强肌健力口服液含药血清对大鼠骨髓间充质干细胞体外增殖的影响

目的观察强肌健力口服液含药血清对大鼠骨髓间充质干细胞(MSCs)体外增殖的影响。方法使用密度梯度离心法分离大鼠MSCs,5-溴脱氧嘧啶(Brdu)和CD44、CD54双重免疫组化鉴定,传3代后的MSCs分为强肌健力口服液含药血清组和空白血清对照组,四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测2组MSCs的生长情况。结果强肌健力口服液含药血清组以浓度依赖方式促进MSCs的增殖活力,与相应浓度的空白血清对照组比较差异有显著性意义(P<0.05,P<0.01)。结论补脾法(强肌健力口服液含药血清)能促进干细胞的生长。

癌平口服液含药血清对人胃癌细胞凋亡的影响

目的:研究中药复方癌平口服液对人胃癌细胞凋亡的影响。方法:采用癌平口服液含药血清,温育体外培养的人胃癌细胞BGC-823,通过流式细胞仪细胞周期DNA含量分析,研究该方对体外培养的人胃癌细胞BGC-823凋亡的影响。结果:癌平口服液药物血清有诱导体外培养的人胃癌细胞BGC-823凋亡的作用。结论:诱导胃癌细胞凋亡是癌平口服液抗癌作用的机制之一。

癌平口服液含药血清对人胃癌细胞分化的影响

目的:研究中药复方癌平口服液对人胃癌细胞分化的影响。方法:采用癌平口服液含药血清,温育体外培养的人胃癌细胞BGC-823,通过细胞缝隙连接通讯功能观察,研究该方对体外培养的人胃癌细胞BGC-823分化的影响。结果:癌平口服液药物血清能抑制人胃癌细胞BGC-823的增殖,增加细胞间的连接通讯。结论:癌平口服液药物血清可抑制人胃癌细胞BGC-823的增殖,使其再分化,并能增加细胞间的连接通讯是其抗癌的分子机制之一。

金欣口服液含药血清对呼吸道合胞病毒黏附、膜融合影响的实验研究

目的:研究金欣口服液含药血清对呼吸道合胞病毒(RSV)黏附、膜融合的影响。方法:在病毒和细胞接触期间采用转换温度方法观察金欣口服液含药血清对RSV黏附、侵入的影响。结果:温度转换前(黏附阶段)加入金欣口服液含药血清,实验组和对照组OD值无差异;温度转换后(侵入阶段)加入金欣口服液含药血清组OD值明显升高,与对照组比有显著性差异。结论:金欣口服液含药血清的抗病毒作用在呼吸道合胞病毒黏附后的膜融合及侵入阶段。

清肺口服液含药血清组织培养抗病毒作用研究

目的:观察不同稀释度的含清肺口服液的血清在组织培养上对仙台病毒、腺病毒3型和腺病毒7型致细胞病变作用的影响。方法:采用组织培养体外抗病毒实验方法,比较不同组之间细胞病变。结果:清肺口服液及含药血清均有抑制病毒感染后细胞病变的作用。结论:清肺口服液和含清肺口服液的血清作1∶2、1∶4稀释后均能不同程度抑制病毒感染后的细胞病变。

阿胶强骨口服液含药血清对胎鼠成骨细胞护骨素及护骨素配体mRNA表达的影响

目的研究阿胶强骨口服液含药血清对胎鼠成骨细胞中OPG、RANKL表达的影响,探讨阿胶强骨口服液治疗骨质疏松的分子机制。方法 3月龄Wistar大鼠(雌雄各半)30只,随机分为阿胶强骨口服液,雌激素,及生理盐水对照组,灌胃7d后,制备实验组和对照组的含药血清。将新生SD大鼠分离的颅骨成骨细胞,制成单细胞悬液,消化传代,取二代培养的成骨细胞,制成细胞悬液。培养细胞被分为5组,分别加同体积药液,对照组仅加培养液,继续培养。采用MTT比色分析、3H-胸腺嘧啶核苷(3H-TdR)渗入法测定成骨细胞增殖,用放免法测定细胞内BGP含量,RT-PCR测定胎鼠成骨细胞中OPG、RANKL mRNA的表达。结果阿胶强骨口服液含药血清以剂量依赖方式促进成骨细胞的增殖,与对照组相比,差异显著(P<0．05)。成骨细胞OPG基因mRNA表达在阿胶强骨口服液含药血清100ml／L时最强,与雌激素组比较无显著性差异(P>0 05),且明显高于对照组(P<0．05)。成骨细胞RANKL基因mRNA表达在1000ml／L阿胶强骨口服液含药血清与雌激素组比较无显著性差异(P<0 05),且明显低于对照组(P<0．05)。结论阿胶强骨口服液可在细胞水平上促进骨的合成代谢及前成骨细胞的有丝分裂,分子水平上调节 OPG／RANKL表达而治疗骨质疏松。

清肺口服液含药血清对呼吸道合胞病毒感染细胞超微结构改变影响的实验研究

目的观察清肺口服液含药血清对呼吸道合胞病毒（RSV）感染后细胞超微结构改变的影响。方法制备清肺口服液含药血清，应用细胞培养技术，将培养的人胚肺成纤维细胞（Hep-2）分组，利用电镜观察呼吸道合胞病毒攻击后各组人胚肺成纤维细胞超微结构的变化。结果病毒攻击组细胞核增大，核质比增加，核仁凝聚，核膜凹陷成夹层，包涵体形成，线粒体凝聚，粗面内质网扩张，溶酶体增多，核染色质浓缩，细胞外可见病毒颗粒。含药血清感染时给药组细胞核大小基本正常，有的轻度增大，无核仁凝聚，无包涵体形成，粗面内质网形态正常，线粒体基本正常，偶有凝聚现象，细胞间很少找到病毒颗粒。含药血清感染后给药组细胞核增大，核仁凝聚，粗面内质网扩张，线粒体凝聚，但程度较轻。结论RSV感染人胚肺成纤维细胞后，细胞可出现超微结构的改变，清肺口服液含药血清可以减轻这种改变。感染时给药比感染后给药作用更明显。

呼吸道合胞病毒感染细胞超微结构的改变及清肺口服液含药血清对其作用的研究

目的：观察呼吸道合胞病毒（RSV）感染细胞超微结构改变及清肺口服液含药血清对其的影响。方法：细胞分为正常细胞组、病毒攻击组、空白血清组、感染后和感染时含药血清组，病毒攻击后3～5h，利用电镜观察各组人胚肺成纤维细胞超微结构的变化。结果：病毒感染组，细胞核增大，核质比增加，核仁凝聚，核膜凹陷成夹层，包涵体形成，线粒体凝聚，粗面内质网扩张，溶酶体增多，核染色质浓缩，细胞外可见病毒颗粒。含药血清感染时给药组，细胞核大小基本正常，有的轻度增大，无核仁凝聚，无包涵体形成，粗面内质网形态正常，线粒体基本正常，偶有凝聚现象，细胞间很少找到病毒颗粒。含药血清组感染后给药组，细胞核增大，核仁凝聚，粗面内质网扩张，线粒体凝聚，但程度较轻。结论：RSV感染人胚肺成纤维细胞后，细胞可出现超微结构的改变，清肺口服液含药血清可以减轻这种改变，感染时给药比感染后给药作用更明显。

8种壮瑶药提取物含药血清对肝星状细胞增殖作用研究

目的:研究8种壮瑶药提取物含药血清对肝星状细胞增殖的影响。方法:健康家兔18只,随机分为9组,对照组,8个壮瑶药提取物组(火炭母提取物、犁头草提取物、青钱柳提取物、拳卷地钱提取物,美丽胡枝子提取物、蝙蝠草提取物、锡叶藤提取物、白背三七多糖提取物,采用同一剂量40 g/kg)。对照组家兔按10 mL/kg灌胃给予纯净水,壮瑶药提物组灌胃相同浓度的壮瑶药提取物(0.4 g/mL,10 mL/kg),每天1次,连续给药6 d。采血并分离获得8种壮瑶药提取物的含药血清。采用结晶紫染色法测定8种壮瑶药提取物20%含药血清的细胞毒性,经共培养48 h后,用肉眼观察和拍照记录,测定肝星状细胞T6的吸光度值(A值),并计算细胞生长抑制率。结果:与对照组相比,8种壮瑶药提取物20%含药血清共培养48 h后,肝星状细胞T6数目明显减少,A值显著降低(P<0.01),细胞生长抑制率显著提高(P<0.01),8种壮瑶药提取物按对肝星状细胞T6生长抑制率由高到低排列依次为白背三七多糖(65.04%)、美丽胡枝子提取物(56.63%),锡叶藤提取物(43.03%)、犁头草提取物(41.67%)、蝙蝠草提取物(35.21%),拳卷地钱提取物(34.37%),青钱柳提取物(22.89%)和火炭母提取物(15.81%)。结论:8种壮瑶药提取物含药血清对肝星状细胞T6均有较好的生长抑制作用,其中白背三七多糖和美丽胡枝子提取物被认为作用效果最佳。

金欣口服液含药血清抗呼吸道合胞病毒间接抑制作用实验研究

目的:研究金欣口服液对呼吸道合胞病毒(RSV)感染的人喉癌上皮细胞(Hep-2)细胞的间接抑制作用。方法:含药血清先作用细胞一段时间再感染RSV。用MTT法测病变抑制率及测上清滴度观察金欣口服液含药血清对RSV的间接抑制作用。结果:MTT法测定病毒抑制率均大于50%,含药血清组上清滴度与空白血清组和病毒对照组比较有显著差异,滴度低于后两组。结论:金欣口服液含药血清可能有抑制RSV胞膜上的吸附蛋白与细胞表面受体结合的作用。

复方五仁醇胶囊含药血清指纹图谱与保肝作用的谱效关系

目的:阐明复方五仁醇胶囊保肝作用的药效物质基础.方法:将大鼠灌胃给药分别制备复方五仁醇胶囊及五味子、三七、柴胡、叶下珠4味药的阴性制剂和单味制剂含药血清,对获得的9组含药血清按已经建立的指纹图谱条件进行HPLC测定,同时考察它们对CCL4诱导的损伤肝细胞的增值(MTT法)及丙氨酸氨基转移酶(ALT)泄漏的影响,最后进行谱效关系分析.结果:指纹图谱显示,单味五味子及三七、柴胡、叶下珠阴性制剂含药血清中均检测到大鼠灌服全方制剂后血液中产生的13个药源性成分,而五味子阴性制剂及单味三七、柴胡、叶下珠含药血清中均未检测到药源性成分;药效结果显示,全方、单味五味子及三七、柴胡、叶下珠阴性制剂含药血清对肝细胞损伤均具有明显的保护作用,而单味三七、柴胡、叶下珠含药血清及五味子阴性制剂含药血清作用不明显,且单味五味子与全方制剂含药血清组之间药效无显著差异.谱效之间具有很好的相关性.结论:复方五仁醇胶囊保肝作用的药效物质基础主要来自君药五味子所含有的木脂素类成分.