一起肠产毒性大肠杆菌O128:H45引起的院内新生儿腹泻暴发

目的探讨一起院内新生儿腹泻暴发的病原及其特征。方法常规方法对可疑腹泻暴发住院新生儿患者粪便、医护人员肛拭子、婴儿奶粉和医院环境标本进行病原分离和鉴定,将分离到的病原菌进行毒力基因检测、药敏试验及PFGE和MLST分子分型分析。结果从12名住院新生儿腹泻患者黄色水样便和1份新生儿ICU病房配奶间的环境标本中分离出13株大肠杆菌O128∶H45和1株大肠杆菌O55,13株大肠杆菌O128∶H45耐热肠毒素基因st均为阳性、具有高度相似性的PFGE带型、MLST的型别均为ST2332型且具有相似的耐药谱。结论首次报道了由肠产毒性大肠杆菌O128∶H45引起的一起院内新生儿腹泻暴发。

中国肠产毒性大肠杆菌中耶尔森菌强毒力岛的检测

目的 了解耶尔森菌强毒力岛在中国肠产毒性大肠杆菌中的分布及插入位点。方法 使用PCR扩增、DNA打点杂交和DNA测序及分析方法。结果 在 94株分离自中国的肠产毒性大肠杆菌中 ,14株耶尔森菌强毒力岛核心区的 8个基因PCR扩增阳性 ,除 3株菌的整合酶基因外 ,PCR扩增产物长度均与预期一致 ,但天冬酰胺转运RNA(asnTtRNA)位点扩增阴性 ;上述 14株菌进行全菌DNA打点杂交试验 ,均与irp2和 fyuA探针杂交 ;选择上述 3株菌中的 1株 ,对其整合酶基因的PCR产物测序 ,并与鼠疫耶尔森菌强毒力岛的整合酶基因序列比较 ,发现该整合酶基因于 5’端缺失了 347bp的片段。 结论 14 %肠产毒性大肠杆菌携带的耶尔森菌强毒力岛 ,且均插入在天冬酰胺转运RNA位点处 ;部分菌株所携带的耶尔森菌强毒力岛的整合酶基因发生了缺失。

一起肠产毒性大肠杆菌腹泻爆发的流行病学调查

目的对深圳市近期发生的一起不明原因群体性腹泻进行现场流行病学调查和实验室检测,探讨该次群体性腹泻的原因,提出应对类似爆发流行的防制策略。方法描述性流行病学分析爆发过程的三间分布,对采集的18份肛拭子以细菌学培养、分子生物学分析和脉冲场凝胶电泳分型(PFGE)分析等方法进行实验室检测。结果18份肛拭子中检出4株肠产毒性大肠杆菌,证实为同一血清型O78:K80,菌株同源性达到96.3%。结论本次在居民小区发生的爆发的群体性腹泻致病菌为产毒性大肠杆菌(ETEC),小区二次供水系统的渗露和连续的暴雨可能是污染的来源,居民个人卫生习惯不良是导致爆发的重要因素。建议对二次供水系统开展季节性检修,并对居民实施有针对性的健康教育,将有利于预防此类疫情的发生。

94株肠产毒性大肠杆菌中耶尔森菌强毒力岛的检测

目的 检测 94株肠产毒性大肠杆菌中耶尔森菌强毒力岛。方法 对分离自中国腹泻病人的肠产毒性大肠杆菌 ,采用 PCR和 DNA打点杂交的方法 ,检测耶尔森菌强毒力岛核心区的 irp8、irp 2、irp 3、irp 4、irp 5及 fyu A基因。结果 分离的肠产毒性大肠杆菌 ,14 % (13/94 )的菌株 irp8、irp 2、irp 3、irp 4、irp 5及 fyu A基因扩增阳性 ,以 irp 2及 fyu A为探针进行 DNA打点杂交 ,上述菌株均为阳性。结论 14

一起由肠产毒性大肠杆菌所致两批就餐者食物中毒的调查

怀化市某酒店发生一起先后两批就餐人员共同食物中毒的事故,通过对分析两批就餐中毒人员的罹患率、潜伏期、临床表现和病原学调查分析,结果显示两批就餐中毒人员除罹患率呈现高度显著性差异之外,其潜伏期(χ2=4.36,P>0.05)、临床症状(χ2=0.76,P>0.05)均无明显区别。在剩余食物红扒肘子和患者大便中同时检出肠产毒性大肠杆菌O153血清型。确认两批就餐者均为肠产毒性大肠杆菌所致食物中毒。

哺乳仔猪轮状病毒和肠产毒性大肠杆菌混合感染病例的诊治

2022年8月中旬广西地区某规模化养猪场产房中7~15日龄哺乳仔猪发生严重腹泻和呕吐,甚至死亡,且死亡率较高。为查明病因和控制该病,试验首先根据临床症状和病理剖检结果进行初步判断;然后采集病料,分别对病毒性病原和细菌性病原进行进一步检测,并针对细菌性病原进行药敏试验;最后根据诊断结果进行有针对性的治疗。结果表明:腹泻哺乳仔猪小肠壁呈薄的半透明状,部分肠段呈灰黄色和灰黑色;肠壁充血,内容物为絮状的黄色或灰色液体;胃内充满黄色液体,可见少量凝乳块;初步判断为轮状病毒(RV)或猪德尔塔冠状病毒(PDCoV)和大肠杆菌的混合感染。进一步检测发现,病料中A群轮状病毒(RVA)呈阳性,猪流行性腹泻病毒(PEDV)、猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)和PDCoV呈阴性。从病料中分离到1株肠产毒性大肠杆菌(ETEC);该分离株对头孢曲松、庆大霉素和卡那霉素敏感,对氟苯尼考、多西环素和恩诺沙星中介,对阿莫西林、替米考星、泰万菌素和新霉素耐药。对产房腹泻仔猪按2~3 mL/头的剂量灌服10%庆大霉素进行治疗,每天1次,连续3 d,仔猪腹泻情况得到了有效控制。说明导致该场哺乳仔猪发生严重腹泻的主要原因为RV和ETEC混合感染,采取的治疗措施具有良好的效果。

L-茶氨酸对产肠毒性大肠杆菌引起的免疫应激小鼠肝脏的保护作用研究

以SPF级Balb/c雌性小鼠为实验动物,对其适应性饲养3 d后连续30 d灌喂不同剂量L-茶氨酸,然后腹腔注射产肠毒性大肠杆菌E44813诱导免疫应激,5 h后取样,分析研究了各组小鼠肝脏与脾脏系数,血清谷丙转氨酶(Alanine aminotranferease,ALT)与谷草转氨酶(Aspartate aminotransferase,AST)含量,肝组织匀浆丙二醛(Malondialdehyde,MDA)水平与谷胱甘肽过氧化物酶(Glutathione peroxidase,GSH-PX)、过氧化氢酶(Catalase,CAT)、超氧化物歧化酶(Superoxide Dismutase,SOD)活性,肝组织病理学变化,以及血清中γ-干扰素(γ-Interferon,IFN-γ)、白细胞介素-4(Interleukin-4,IL-4)的表达量,以探明L-茶氨酸对产肠毒性大肠杆菌免疫应激小鼠肝脏的保护作用。结果表明,不同剂量的茶氨酸干预处理均能明显降低由大肠杆菌E44813感染引起的肝脏、脾脏系数的升高,降低血清ALT、AST及肝组织匀浆MDA水平,提高肝组织匀浆SOD、CAT、GSH-PX活性,减少IFN-γ、IL-4表达量,改善肝脏组织病理损伤,其中以300 mg·kg-1剂量组效果最好,说明茶氨酸干预对产肠毒性大肠杆菌诱导的免疫应激小鼠肝损伤具有保护作用,而且可能是通过减少IFN-γ与IL-4的表达、降低炎症反应、提高抗氧化能力等途径达到保护肝脏的作用。

大肠杆菌K88ac菌毛操纵子fae全基因的克隆、表达及生物学活性初步研究

目的:在体外克隆和表达猪肠产毒性大肠杆菌(ETEC)K88ac菌毛操纵子fae结构基因,并检测重组菌毛的相关生物学活性。方法:利用长PCR技术以猪ETECK88ac株C83902基因组DNA为模板扩增编码K88菌毛操纵子fae基因,克隆入表达质粒载体pBR322,构建和筛选重组质粒pBR322-fae,转化至不含任何菌毛的大肠杆菌EP株;电镜观察重组菌表面菌毛表达情况;用热抽提法提纯表达的重组菌毛;用纯化菌毛免疫小鼠制备高效价抗血清;用SDS-PAGE和Westernblot检测重组菌毛的抗原性,用细胞黏附和黏附抑制试验检测其生物学活性。结果和结论:在电镜下观察到重组菌表面大量表达K88ac菌毛,该重组菌与兔抗K88ac菌毛单因子阳性血清、鼠抗K88ac菌毛单克隆抗体均产生凝集反应;纯化菌毛经SDS-PAGE,结构单位菌毛呈单一的相对分子质量约26×103的蛋白条带;纯化菌毛免疫小鼠后可制备出高效价的鼠抗血清,玻板凝集试验和Westernblot结果表明体外表达的K88ac菌毛具有与K88ac野生菌毛相同的抗原性;猪小肠上皮细胞系黏附和黏附抑制实验结果表明重组EP菌和野生菌株一样具有较强的黏附猪小肠上皮细胞系的能力,而且提纯重组菌毛制备出的鼠抗血清能有效抑制上述重组菌或野生菌株对猪小肠上皮细胞系的黏附结合。

西藏藏猪源大肠杆菌毒力基因检测与分型

为研究西藏地区藏猪源肠产毒性大肠杆菌(ETEC)毒力分型情况,为用药方案提供科学依据,对西藏6个不同地、市200株藏猪源大肠杆菌进行了肠产毒性大肠杆菌毒力基因的PCR检测。结果显示:藏猪源肠产毒性大肠杆菌22对毒力基因中,只检出STp以及CS8基因,检出率为8%。对检测到的16株藏猪源肠产毒性大肠杆菌进行克隆测序,经系统发育分析发现藏猪源肠产毒性大肠杆菌菌株内同源性达到99.9%左右,与Genbank中所录其他菌株的同源性达到95%~100%。按照系统发育进化分型的方法,对16株大肠杆菌的检测结果显示有3株属于D群,其余均属于A群,P27、P28和P32有可能是一种具有致病性的大肠杆菌。上述结果说明藏猪源肠产毒性大肠杆菌基因确实存在,应引起重视,提示西藏地区要根据各地实际情况需要加强监测ETEC引起的腹泻,建立流行毒株预警机制,并合理用药。

重新正确认识大肠杆菌

大肠杆菌是肠道内常在菌群的成员之一。自1885年被德国医生 Theodore Es-cherich 分离出,并命名为埃希氏大肠杆菌(E.Coli)或普通大肠杆菌以来,由于它同时是人与动物肠道的正常菌群的主要成员,一般不致病;

几种功能性物质抑制产肠毒性大肠杆菌的效果及作用机制研究

不同浓度葛根素(PR)、丙酮酸乙酯(EP)、酪醇(TS)、氧化锌(ZnO)处理IPEC-1细胞,CCK-8法检测细胞活力;乳酸脱氢酶(lactate dehydrogena,sLeDH)试剂盒检测几种功能性物质对ETEC K88感染IPEC-1细胞损伤程度的影响;实时荧光定量PCR法检测不同功能性物质对ETEC K88感染IPEC-1细胞相关基因相对表达水平的影响。结果:PR、EP和ZnO均可促进IPEC-1细胞增殖,其最适添加浓度分别为5μmol/L、1 mmol/L和1μmol/L;TS无促进IPEC-1细胞增殖作用。ETEC K88感染IPEC-1细胞后导致LDH活性显著升高(P<0.05);与K88组相比,添加5μmol/L PR、1 mmol/L EP和1μmol/L ZnO均能显著降低LDH活性(P<0.05)。ETEC K88感染后引起白细胞介素-6(IL-6)、白细胞介素-8(IL-8)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、趋化因子配体2(CXCL2)、热休克蛋白70(HSP70)和核因子E2相关因子(Nrf2)的相对表达量显著升高(P<0.05),细胞周期蛋白D(cyclin D)和绒毛蛋白(Villi)n基因的相对表达量显著降低(P<0.05)。PR显著提高了细胞IL-8和Villin基因的相对表达量(P<0.05);EP显著降低了(P<0.05)细胞TNF-α和CXCL2基因的相对表达量;ZnO显著提高了Villin和Cyclin D基因的相对表达量(P<0.05)。此外,PR、EP和ZnO均能降低大肠杆菌16S rRNA基因的相对表达量(P<0.05)。综上所述,PR、EP和ZnO均能抑制ETEC K88的增殖,具有抑菌效果,EP可以降低K88造成的炎性基因的表达,PR可以增加肠绒毛基因表达,ZnO可以增加细胞周期基因的表达。

临床血液分离大肠埃希菌株耐药性及生物被膜形成分析

目的探讨该院血流感染产超广谱酰胺酶(ESBLs)大肠埃希菌(ECO)检出率及其对常用抗菌药物的耐药性及生物被膜形成能力。方法采用法国生物梅里埃公司的Vitek2-Compact全自动微生物分析仪进行鉴定和药物敏感性分析,采用结晶紫半定量方法检测菌株的生物被膜形成能力。结果 92株ECO临床血液分离菌株中,产ESBLs菌株53株(占57.61%),ESBLs阴性菌株39株(占42.39%)。对3类以上抗菌药物耐药ECO 73株(占79.35%),其中,产ESBLs菌株52株,占总菌株数的56.52%,占产ESBLs菌株数的98.11%。耐药率最高的为氨苄西林(94.57%),其次为头孢唑啉(71.74%)和氨苄西林/舒巴坦(67.39%);环丙沙星和左氧氟沙星的耐药率均在60%以上。对于临床常用的氨苄西林/舒巴坦、头孢菌素类、氟喹诺酮类、氨基糖苷类的妥布霉素和单酰胺类抗菌药物,与ESBLs阴性菌株相比,产ESBLs菌株的最小抑菌浓度(MIC)值显著升高,耐药率显著升高(P<0.05)。而对头霉素类、呋喃类、氨基糖苷类的庆大霉素和阿米卡星、含酶抑制剂的哌拉西林/他唑巴坦和碳青霉烯类抗菌药物的敏感性ESBLs阳性组与ESBLs阴性组比较,差异无统计学意义(P>0.05)。96.74%的ECO临床血液分离株具有生物被膜形成能力,生物被膜形成量以中量为主。结论该院ECO血液分离菌株产ESBLs比例高,生物被膜形成能力强,呈现多药耐药的特征。

双歧杆菌纯化黏附素对ETEC和EPEC黏附肠上皮细胞的竞争抑制作用

目的 观察双歧杆菌分泌型黏附素对产毒性大肠杆菌 (ETEC)和致病性大肠杆菌 (ETEC)黏附肠上皮Lovo细胞的竞争抑制作用。方法 采用黏附试验计数肠上皮Lovo细胞黏附的细菌数并比较其结果。结果 除黏附素浓度为 1μg/ml和 5 μg/ml时不能明显抑制ETEC和EPEC对Lovo细胞的黏附外 ,10 μg/ml、2 0 μg/ml、30 μg/ml浓度组均能明显抑制ETEC和EPEC对Lovo细胞的黏附 ,且随浓度的逐渐增加 ,这种抑制作用也逐渐增强。

儿童肠道感染致病性大肠埃希菌血清型分布及耐药性研究

目的:了解广州地区儿童细菌感染性腹泻粪便中检出致病性大肠埃希菌(EPEC)的血清型分布及耐药特征,为本地区的流行病学研究及临床合理用药提供依据。方法:采集2007年7月至2009年6月来我院就诊的腹泻患儿大便标本进行常规病原菌的分离培养,对可疑菌株进行生化鉴定和血清学分型,采用K-B纸片扩散法进行药敏试验。结果:4568例大便标本共检出EPEC113株,检出率2.47%。血清学分型共检测到10种血清型,主要以O55K59、O126K71、O44K74为主,分别占15.93%、15.04%、15.04%。EPEC对氨苄西林耐药率较高,已达85.8%,对复方新诺明、头孢噻肟、头孢曲松、头孢他啶的耐药率分别为69.0%、37.2%、37.2%、15.9%,但对舒普深敏感率仍高达96.5%。结论:广州地区腹泻儿童肠道感染的EPEC血清分型较为分散,以O55K59、O126K71和O44K74为主。EPEC对氨苄西林的耐药率已较高,舒普深可作为临床EPEC感染治疗的经验用药。

产肠毒性大肠杆菌DPO-PCR检测方法的建立与应用

双启动寡核苷酸引物（dual-priming oligonucleotide，DPO）是一种新型的引物设计方法，具有设计简易、特异性强以及退火温度范围宽的特点。以产肠毒性大肠杆菌LT基因为靶基因，设计了一对DPO引物，经过对TaqDNA聚合酶、Mg2＋、dNTP反应体系因子的优化，建立了产肠毒性大肠杆菌DPO-PCR检测方法，测定了该方法的灵敏度、特异性以及退火温度不敏感性。结果显示，该方法检测灵敏度为1．24×10^2CFU／ml，在45℃～65℃退火温度范围内，均可实现靶基因的高效扩增。该方法特异性强，测试菌株中4株产肠毒性大肠杆菌均为阳性结果，其余菌株为阴性结果，且无非特异性扩增发生。与常规PCR方法相比，DPO—PCR方法不需要对引物参数特别是退火温度反复优化，同时DPO引物的特殊结构又增强了检测特异性，为致病性微生物的快速准确检测提供了新方法。

预防肠道感染病的联合疫苗策略

进入目前常规免疫接种程序的新候选疫苗最好能作为联合疫苗。志贺菌和肠产毒性大肠杆菌(ETEC)联合疫苗可以极大地造福于疾病流行区的儿童。新的候选疫苗越来越能满足这些要求,但它们有许多与提呈、配方和调节方法有关的策略问题。

肿瘤专科医院临床和环境标本中产超广谱β-内酰胺酶大肠埃希菌流行病学调查

目的了解肿瘤专科医院临床和环境标本中产超广谱伊内酰胺酶（ESBL）大肠埃希菌的基因型及同源性。方法检测2012年6月至2013年1月郑卅l大学附属肿瘤医院住院患者的临床标本（St液、尿液、痰液、胸腔积液、腹腔积液、引流液、粪便等）和环境标本（空气、陪护者手、门把手、床扶手、床头柜、医护人员手）中产ESBL大肠埃希菌，经表型确认试验确定ESBL的表型，多重PCR检测blatzEM、blasnv、blaoxn、blaDTX和blarox等基因型，脉冲场凝胶电泳（PFGE）分析临床标本和环境标本中菌株的同源性。结果表型确认试验检测到临床标本和环境标本中共有产ESBL大肠埃希菌41株，其中临床标本中有36株（为28例患者的临床标本），环境标本中有5株。多重PCR检测ESBL基因，单一型别ESBL菌株以携带TEM-1基因型和CTX14基因型为主；两种型别ESBI．菌株以携带CTX-14、TEM-1基因型为主；三种型别ESBL菌株同时携带CTX-14、TEM-1和SHV—1基因型。PFGE结果显示，28例患者的粪便和其他临床标本中产ESBL大肠埃希菌之间没有同源性，外科一病区3例患者及其中1例患者的床头柜上检出产ESBL大肠埃希菌有同源性。结论郑州大学附属肿瘤医院产ESBL大肠埃希菌主要流行的基因型为TEM-1、CTX-14、CTX-1。同一菌株可具有多种基因型别，以两种型别为主。外源性感染是产ESBL大肠埃希菌感染途径之一。

一起学校大肠埃希菌O153暴发疫情的流行病学调查

目的探讨温州市洞头区某学校一起由大肠埃希菌O153感染引起的暴发疫情的流行病学特征,为类似疫情防控提供技术支持。方法采用统一的流行病学个案调查表进行现场调查,描述流行特征,采取病例对照研究探讨病因假设,采集患者、食堂工作人员的肛拭标本进行病原微生物培养,采用多重PCR技术确定毒力基因。结果 2016年10月16—31日,1 256名学生和教职工中累计发现病例126例,罹患率为10.03%(126/1 256),无重症和死亡病例。患者的临床表现为腹泻(≥3次/d)(100.00%),伴有腹痛(84.13%)、恶心(27.78%)、呕吐(13.49%)、发热(7.14%)等症状。学生、教师不同食堂就餐罹患率差异有统计学意义(χ~2=0.24,P=0.01)。病例对照研究提示饮用学生食堂未烧开的水是此次暴发疫情的危险因素(OR=5.33,χ~2=10.33,P=0.00),病原微生物培养和多重PCR技术毒力基因鉴定确认为肠产毒大肠埃希菌O153感染。结论本次疫情为由肠产毒大肠埃希菌O153引起学校感染性腹泻暴发,病例分布呈现明显的聚集性,发病曲线呈持续性暴露,饮用学生食堂未烧开的水是危险因素。建议学校严格执行因病缺课登记,完善校医制度,做好食堂卫生和饮用水管理。