肠侵袭性大肠埃希菌噬菌体DK-13的生物学特性及应用

【目的】筛选并分离出能裂解肠侵袭性大肠埃希菌噬菌体,分析其生物学特性,并探究其对污染猪肉的杀菌作用。【方法】采用双层平板法分离鉴定噬菌体,并测定其最佳感染复数,一步生长曲线等,对其基因组进行测序分析以及裂解功效的测定。【结果】从医院污水中分离鉴定能特异裂解肠侵袭性大肠埃希菌(Enteroinvasive Escherichia coli,EIEC)的噬菌体并命名为DK-13,其呈典型的蝌蚪状外形,包含一个正二十面体的头部和一个可收缩的螺旋对称的尾部,属于肌尾噬菌体科(Myoviridae)噬菌体;生物学特性表明:最佳感染复数为0.01,潜伏期约为10 min,裂解期约为70 min,噬菌体DK-13能在50℃,pH 5.0-10.0条件下存活。全基因组测序表明,噬菌体基因组长约172 275 bp,GC含量为40.18%,预测其共有293个开放阅读框(open reading frames,ORF),未发现已知耐药基因和毒力基因。应用试验表明:被污染的猪肉中表现的杀菌效果良好,宿主菌的数量明显减少。【结论】分离并鉴定一株新的烈性噬菌体DK-13,DK-13具有潜伏期短、裂解效率高等优势,在食品安全方面具有很大应用潜力。

泉州市某区食品中致泻性大肠埃希菌的检测情况

目的 分析泉州市某区集贸摊点和超市食品中致泻性大肠埃希菌携带情况。方法 选择2021年1—12月从泉州市鲤城区超市以及集贸摊点采集的100份食品样本作为研究对象,严格按照GB 4789—2016《食品安全国家标准食品微生物检验致泻性大肠埃希菌检验》对所有标本开展致泻性大肠埃希菌微生物检验以及毒力基因检测,统计最终的检测结果。比较不同食品类型的致泻性大肠埃希菌检出率差异。结果 100份检测样本当中,总共20份检出致泻性大肠埃希菌,检出率为20.00%;其中包含产肠毒性大肠埃希菌(entero toxigenic Escherichia coli,ETEC)共6株,占比为30.00%;肠致病性大肠埃希菌(entero pathogenic Escherichia coli,EPEC)共5株,占比为25.00%;肠出血性大肠埃希菌(entero hemorrhagic Escherichia coli,EHEC)共5株,占比为25.00%;肠侵袭性大肠埃希菌(entero invasive Escherichia coli,EIEC)共4株,占比为20.00%。牲畜肉类、生禽肉类、凉拌类、海产类以及蔬菜类食品的致泻性大肠埃希菌检出率依次为38.89%、45.00%、5.00%、10.00%、4.55%,其中牲畜肉类、生禽肉类的致泻性大肠埃希菌检出率高于其他食品类型(P <0.05)。分离获得的致泻性大肠埃希菌20株内,出现EHEC的O157共5株;血清凝集予以H7鉴定,其中共有5株EHEC的O157:H7鉴定血清凝集,1株O157在羊肉上分离获得,SLT2、hly、eaeA毒力基因均在H7菌中携带,其他O157共4株,4种毒力基因均为阴性。结论 严格按照有关标准开展微生物检验能有效检出食品中的大肠埃希菌以及致泻性大肠埃希菌毒力基因,有关部门应该要加强卫生监督的力度,确保人民群众的食品安全。

脊髓损伤患者并发尿路感染的病原菌分布与肠侵袭型大肠埃希菌的基因分型分析

目的:分析医院脊髓损伤(spinal cord injury,SCI)患者并发尿路感染(urinary tract infection,UTI)的病原菌分布与肠侵袭型大肠埃希菌(enteroinvasive Escherichia coli,EIEC)的基因分型,为临床SCI患者UTI的诊治提供参考。方法:选取2019年10月—2021年10月医院泌尿外科收治的56例SCI并发UTI患者作为研究对象,统计患者中段尿的细菌培养与药敏试验结果,分析EIEC的检出情况,并对检出的EIEC开展多位点序列分型与其药敏试验,以多重聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)检测EIEC毒力基因分型。结果:56例SCI并发UTI患者的中段尿标本中,培养、检出67株病原菌(革兰阴性菌42株,其中31株EIEC、6株肺炎克雷伯菌、其他菌株5株)、革兰阳性菌25株(15株金黄色葡萄球菌、5株表皮葡萄球菌);药敏结果显示,31株EIEC对头孢他啶、环丙沙星、头孢唑林、氨苄西林、头孢替坦、头孢呋辛、复方磺胺甲噁唑的耐药率较高,对亚胺培南、美罗培南、替加环素的耐药率均低于10%;31株EIEC经PCR检出13个ST分子分型,其中占据前3位的ST型分别为ST131(占35.48%)、ST1193(占19.35%)、ST405(占12.90%),其余的ST10等10个ST分子分型分别为3.23%;毒力因子基因检测结果显示dsdA、tonB、finH、degP、ompR检出率均高于80%,而neuC、ireA检出率均低于20%。结论:SCI并发UTI患者感染的EIEC对临床常用抗菌药物均具有较高的耐药率,分子分型以ST131最为多见,且携带多种耐药基因,临床应加强医院感染监测与隔离防护措施,遏制多重耐药菌的流行。

肠侵袭性大肠埃希氏菌国家核酸标准样品的研制

目的研制肠侵袭性大肠埃希氏菌核酸标准样品,并对其均匀性和稳定性进行评价。方法本文研究了肠侵袭性大肠埃希氏菌核酸标准样品的关键制备技术和保存技术,定值技术和定值方式,开展均匀性和稳定性试验,并对食品中肠侵袭性大肠埃希氏菌核酸标准样品的不确定度进行确定;标准样品采用Pico Green DNA分子荧光定量方法进行定值。多家单位合作定值,确定标准样品的标准值及其不确定度。结果标准样品均匀性标准不确定度为0.016%,不稳定标准差为0.0100,均匀性和稳定性试验结果表明,本文研制的标准样品均匀且稳定。结论研制出具有溯源性的肠侵袭性大肠埃希氏菌核酸标准样品并获得国家标准样品证书,可适用于肠侵袭性大肠埃希氏菌的检测和质量控制。

一起水源型引起肠侵袭性大肠埃希菌暴发疫情的调查研究

目的查明一起幼儿园腹泻暴发疫情的病原学和流行因素。方法从患者粪便中分离培养获得的菌株进行血清学、生化、PCR毒力基因检测和分子分型。从流行病学调查和病人的三间分布分析引起暴发的原因。结果从20份病人粪便中分离到10株菌株,根据生化特性、噬菌体裂解试验、ipaH检测和ERIC-PCR图谱确定为肠侵袭性大肠埃希菌。引起暴发流行的原因为该镇的部分生活污水污染幼儿园的生活用水所致。结论本起腹泻暴发疫情为幼儿园生活用水污染引起的肠侵袭性大肠埃希菌暴发流行;在细菌性痢疾暴发流行时,应该与肠侵袭性大肠埃希菌进行病原学鉴别诊断。

肠侵袭性大肠杆菌DPO-PCR检测方法的建立与应用

目的为建立肠侵袭性大肠杆菌（EIEC）的DPO-PCR快速检测方法。方法本研究以EIECipaH基因为靶基因设计了一对双启动寡核苷酸（DPO）引物,建立了EIEC DPO-PCR检测方法。结果退火温度范围在47℃~67℃内都能有效地扩增出目的基因,表明该检测方法对退火温度不敏感;该DPO引物仅与EIEC的扩增反应呈阳性,而与其他菌株无非特异性扩增反应,表明该方法特异性强;该方法的灵敏度为1.17×102 cfu/mL。利用该检测方法对采集的230份样品进行检测,共计检出3份EIEC阳性样品,与国标法（GB 4789.6-2003）检测结果一致,显示了良好的实用性。结论该DPO-PCR方法设计简单、特异性强,具有良好的实用性。

特异血清吸附模板聚合酶链反应检测肠侵袭性大肠杆菌的研究

目的 建立检测与鉴定肠侵袭性大肠杆菌的新方法。方法 应用特异血清吸附模板聚合酶链反应 (SSST .PCR)检测肠侵袭性大肠杆菌。结果 与经典的分离培养法比较 ,此方法大大缩短了时间 ,由原来的 7天左右缩短到了 6～ 8小时 ;与单纯的PCR法比较 ,简化了DNA提纯的过程 ,并能进行分型。结论 SSST .PCR法是一种简单、快速、特异和敏感的新方法。

肠侵袭性大肠埃希菌Tat蛋白运输系统与其生理功能关系研究

目的构建TatABC基因缺失株,并探讨其与肠侵袭性大肠杆菌(EIEC)生理功能的关系。方法利用一步法基因缺失方法,敲除EIEC菌株的TatABC基因,探索该基因对EIEC形态、生长、生化及跨膜转运等生理功能的影响。结果TatABC基因缺失株的EIEC在镜下呈链状排列,在LB培养基上生长显著变慢;生化反应无明显变化;在厌氧条件下,由于不能转运TMAO还原酶,失去了在M9培养基上下生长的能力。结论 EIEC的Tat蛋白运输系统与其生理功能密切相关。

广安市首例肠侵袭性大肠埃希菌食物中毒的病原学鉴定

目的:弄清广安市某学校教师聚餐发生的一起食物中毒原因。方法:参照GB/T4789-2003[1]及《细菌学检验》[2],对病人、餐厅从业人员肛拭、粪便进行病原菌检测。结果:21份样品中7份检出肠侵袭性大肠埃希菌(EIEC),血清型均为O112 ac;K66。结论:本次食物中毒为EIEC所致。

肠侵袭性大肠杆菌致病机制的研究进展

肠侵袭性大肠杆菌(Enteroinvasive E.coli,EIEC)是引起较大儿童和成年人腹泻的重要病原菌,对人类的公共健康造成严重的危害。本文就肠侵袭性大肠杆菌引起的腹泻机制、粘附素系统、III型分泌因子和毒力岛等致病因子的研究进展作一综述。

一起肠侵袭型大肠埃希菌引起的食物中毒调查

目的调查一起由肠侵袭型大肠埃希菌引起的食物中毒。方法采集病人的剩余食物、呕吐物、粪便及肛拭标本,进行筛选检测及目标菌检测。收集患者双份血清与分离的可疑目标菌进行凝集试验。结果从患者粪便和肛拭标本中分离出肠侵袭型大肠埃希菌,豚鼠眼角膜结膜试验阳性;患者双份血清与分离菌凝集效价有4倍增长。结论本起食物中毒由肠侵袭型大肠埃希菌引起。

豪猪源肠侵袭型大肠杆菌的分离鉴定及致病性研究

【目的】查明引起福建省龙岩市某豪猪养殖场致豪猪腹泻死亡的病原菌及其特征,为该病的科学防控及合理用药提供参考依据。【方法】分离腹泻死亡豪猪的病原,并结合形态特征、生理生化试验、16S rRNA基因扩增、种系发育分群鉴定分离菌株;通过毒力基因检测、动物致病性试验及药敏试验对分离菌株的致病性和耐药性进行研究。【结果】从发病死亡豪猪肝脏组织中分离到1株大肠杆菌,命名为Fj/Porcupine2018,该分离菌株与22株不同来源的参考菌株16S rRNA序列之间的相似度为97.4%~99.8%,其中与禽源分离株(登录号:MN022583)和人源分离株(登录号:MW881377)的序列相似度高达99.8%;种系发育分群证实该分离菌株属于B1群。毒力基因检测结果显示,该分离菌株除检出肠侵袭型大肠杆菌毒力基因EinV外,还检出papC、iroC、Afa、luxs、stx2f及ompA 6种毒力相关基因。动物致病性试验显示,该分离菌株对小鼠具有较强的致病性,小鼠在攻毒后31 h内全部死亡,且肝脏、脾脏、肺脏及肠道等器官组织均有明显的病理损伤;在对常见抗菌药物的药敏试验中,该分离菌株对大环内酯类、四环素类、喹诺酮类、磺胺类、头孢类、氨基糖苷类、青霉素类7类11种药物表现出不同程度的耐药,耐药率为25%~100%,仅对头孢曲松和头孢西叮2种药物表现敏感。【结论】本研究分离获得了1株腹泻死亡豪猪的病原菌大肠杆菌,通过一系列生物学特性研究证实该分离菌为1株具有较强致病力且呈现多重耐药性的B1群肠侵袭型大肠杆菌,为豪猪等野生动物大肠杆菌病的防控提供了重要的参考依据。

多重PCR快速检测两种致泻性大肠杆菌方法的建立

本研究以肠出血性大肠杆菌O157∶H7及肠侵袭性大肠杆菌为目标菌,针对大肠杆菌共同基因uid A、肠出血性大肠杆菌O157∶H7的特异基因O-antigen、肠侵袭性大肠杆菌的特异基因ipa H设计3对引物,建立并优化了检测两种菌的多重PCR检测方法,进行了特异性验证和灵敏度分析,并应用于人工接种新鲜莴苣的检测中。实验结果表明,本研究建立的三重PCR快速检测两种致病菌的检出限为6.3×103CFU/m L,具有较好的灵敏度和特异性。利用所建立的多重PCR方法对人工接种肠出血性大肠杆菌O157∶H7和肠侵袭性大肠杆菌的新鲜莴苣进行检测,检出限为7.8×104CFU/m L。此方法能够对肠出血性大肠杆菌O157∶H7和肠侵袭性大肠杆菌两种食源性致病菌进行快速检测。