肠出血性大肠埃希菌O104∶H4病原学及其防治研究进展

2011年5-7月在德国北部暴发一起肠出血性大肠埃希菌(enterohemorrhage,Escherichia coli,EHEC)O104:H4感染的疫情,该疫情从德国北部起始,很快就席卷整个德国并蔓延至欧洲、北美国家。EHECO104:H4是新世纪以来出现的又一新发传染病,其致病性强,传播速度快,引起全世界的关注。迄今中国尚无此病的报道,但在全球化的今天,了解并充分防范已成共识。据此,该文就EHEC的病原学、快速检测法、所引起的主要疾病发病机制及临床症状、预防措施等方面的研究进展进行综述。

肠出血性大肠埃希菌O104:H4检测技术

近几周来,因受肠出血性大肠埃希菌感染引发的溶血性尿毒综合征在欧洲多国陆续暴发,死亡人数超过预期,造成了人群极大恐慌,对欧盟经济,特别是农业生产带来了巨大损失。本中心就该疾病的背景、疫情监测和报告、样本采样和送检、检测流程和医院感染控制进行了资料摘编,以供临床防治疫情参考。

检测肠出血性大肠埃希菌O157:H7的环介导等温扩增和PCR法比较

目的建立基于环介导等温扩增(LAMP)技术的肠出血性大肠埃希菌(EHEC)O157:H7快速简便检测方法,并与PCR进行比较。方法针对EHEC O157:H7保守的rfbE基因序列,设计特异性引物,建立LAMP和PCR检测技术并优化其反应条件,比较这两种检测方法的灵敏度、特异性和对实际样品的检测结果。结果成功建立了LAMP和PCR检测体系,灵敏度检测结果显示,LAMP检测限低至10 cfu/ml,PCR检测限为102cfu/ml,LAMP检测灵敏度高于PCR;对39株近源菌进行检测,结果显示,LAMP法仅7株EHEC O157:H7得到阳性结果,非EHEC O157:H7菌株均为阴性,PCR产物则出现非特异性条带,LAMP法特异性比PCR法高。对于32份猪肉样品的检测,LAMP和PCR与常规检测结果一致,3份样品检测阳性。结论 LAMP检测技术的特异性和灵敏度较PCR高,并且操作简便、检测成本低,耗时短,更有望发展成为快速准确检测EHEC O157:H7的有效手段。

食品中肠出血性大肠埃希菌O_(157):H_7的PCR检测

目的建立快速准确检测食品中肠出血性大肠埃希菌O157:H7的方法。方法采用多重聚合酶链式反应技术(MPCR)特异性扩增肠出血性大肠埃希菌O157:H7的STX、rfbEf、liC基因。结果分别在228,378,709 bp处扩增出3个目的基因片段,且只有肠出血性大肠埃希菌O157:H7获得扩增,其他菌种扩增均呈阴性。结论PCR方法比传统细菌检测方法更特异、快速、灵敏和简便,为食品中肠出血性大肠埃希菌O157:H7的快速检测提供了新的手段。

肠出血性大肠埃希菌O157∶H7黏附HeLa细胞模型的建立

目的建立肠出血性大肠埃希菌O157∶H7体外黏附HeLa细胞模型,为进一步研究其致病机制奠定基础。方法以细菌黏附HeLa细胞数量为指标,分别评价细菌数量、细菌与细胞孵育时间对细菌黏附数量的影响,得到最佳条件,最后肌动蛋白荧光染色(FAS)试验鉴定模型。结果加入细菌为1×105CFU,细菌与细胞孵育4h时,黏附细胞的数量最佳,FAS检测发现该条件下细菌能够引起细胞特异性黏附、擦拭(attaching&effacing,A/E)损伤,模型建立成功。结论成功建立O157∶H7体外黏附HeLa细胞模型,为进一步研究其致病机制提供了条件。

TaqMan探针荧光PCR检测肠出血性大肠埃希菌O157:H7方法的建立

肠出血性大肠埃希菌(Enterohemorrhagie Escherichia coli,EHEC)O157:H7是一种重要的传染病病原菌,以EHEC O157:H7标准菌株rfbE保守区设计一对特异引物和一条探针,建立了检测EHEC O157:H7核酸的荧光定量PCR检测方法。实验结果表明荧光定量PCR检测方法特异性好,最低检测限为20 cfu/mL,线性范围是102～108cfu/mL。稳定性试验表明批内变异系数和批间变异系数分别为2.06%和2.45%。

上海市浦东新区肠出血性大肠埃希菌O157：H7的监测研究

目的了解上海浦东新区腹泻病人、宿主动物肠出血性大肠埃希杆菌(E.coli)O157:H7携带情况以及市售食品的污染状况,为疾病防治工作提供决策依据。方法于2003～2006年的5～10月,在设置的监测点与超市采集家禽和腹泻病人粪便及禽畜肉制品;应用免疫磁珠富集,山梨醇麦康凯平板和Chromager O157显色平板分离培养E.coliO157:H7,生化和血清学反应进行鉴定。结果E.coliO157:H7阳性率分别为:腹泻病人粪便0.24%,鸡粪2.95%,鸭粪3.83%,家畜肉15.05%,家禽肉2.25%。检出的67株E.coliO157:H7中,仅1株来自腹泻病人的E.coliO157:H7具有毒力基因。结论浦东新区腹泻病人、宿主动物及其肉类食品中存在E.coliO157:H7感染或污染,存在E.coliO157:H7感染流行的潜在危险。

河南省6类食品中肠出血性大肠埃希氏菌O_(157)∶H_7污染状况调查

调查肠出血性大肠埃希氏菌O1 57∶H7在河南省 6类食品中的分布特征和污染状况 ,了解季节因素对于肠出血性大肠埃希氏菌O1 57∶H7分布的影响 ,以预防和控制食品污染保证食品安全。依据河南省自然地理概况 ,分 5个采样区域 ,按夏季和冬季在销售环节随机抽取样品 ,选择性增菌培养后 ,用O1 57胶体金试剂筛查 ,免疫磁珠富集后分离病原菌 ,应用bioM啨ｒｉｅｕｘＶＩＴＥＫ32AMSsystem ,GNI+ 和血清学的方法进行鉴定。结果显示 14 6 3份食品中共检出肠出血性大肠埃希氏菌O1 57∶H72 8株 ,检出率为 1 9% ,其中鲜肉和生食蔬菜检出率最高 ,为 3 3%和 3 2 % ,酸奶中未检出。夏季检出率 (2 5 % )明显高于冬季检出率 (1 1% )。结果提示 ,肠出血性大肠埃希氏菌O1 57∶H7在食品中的污染程度较为严重 ,其检出率的高低与O1 57∶H7感染性腹泻的流行强度呈正相关。应引起有关部门的足够重视 ,加强畜禽屠宰、蔬菜生产和销售环节的监督和监测 。

肠出血性大肠埃希菌O157：H7多重PCR检测方法的建立

为建立肠出血性大肠埃希菌O157:H7的多重PCR检测方法,针对O157菌特异性eaeA基因、fliC基因、志贺毒素基因(stx1和stx2)及rfbE基因设计5对引物,构建多重PCR反应体系,优化反应的引物浓度和温度检测其特异性和敏感性,并对牛、猪、鸡及犬等不同动物来源的样品进行了大肠埃希菌O157检测。结果显示,该方法具有良好的特异性和敏感性,敏感性达到5×10~3CFU。从检测阳性样本中均分离到目的菌。应用建立的方法在确定样品中是否含有大肠埃希菌O157的同时,还能对菌株毒力进行初步判定。成功建立了肠出血性大肠埃希菌O157:H7多重PCR检测方法,为该病原菌感染的预防和监测提供了简便、快速的技术手段,具有良好的应用前景。

2000-2005年海盐县肠出血性O157：H7大肠埃希菌监测

目的:了解海盐县肠出血性O157:H7大肠埃希菌的分布及流行情况。方法:采取肠道门诊病人肛拭样和动物宿主粪便,采用免疫磁珠分离和大肠杆菌O157特异性单克隆抗体胶体金快速诊断技术以及特定培养基分离鉴定技术检测O157:H7大肠埃希菌。结果:从1例腹泻患者的大便中检出了1株O157:H7大肠埃希菌,不产生类志贺毒素;从动物粪便中检出7株O157大肠埃希菌。结论:海盐地区人群中感染率较低,且为非产毒株;猪、鸡是我地区O157:H7大肠埃希菌的主要贮存宿主动物。

中国部分地区人群和动物中肠出血性大肠埃希菌O157∶H7分布特征

自20世纪90年代以来,中国大部分省、市、自治区相继开展了人群和动物的肠出血性大肠埃希菌O157∶H7病原监测。监测结果显示:①在不同的地区和时间,人群中O157∶H7的感染率/带菌率不同;②动物中O157∶H7的带菌率存在地区、时间及种群的差异;③人群O157∶H7的感染与动物带菌存在关联。提示,加强人群和动物的病原监测、揭示O157∶H7在人群和动物中的流行规律、降低动物的感染或带菌率对预防与控制人群肠出血性大肠埃希菌O157∶H7的感染具有重要意义。

河南省6类食品中肠出血性大肠埃希菌O157∶H7污染状况调查

[目的 ]调查肠出血性大肠埃希菌 O15 7∶H7在河南省 6类食品中的分布特征、污染状况及季节分布。 [方法 ]依据河南省自然地理概况分 5个采样区域 ,按夏冬季在销售环节随机取样。选择性增菌培养后 ,用 O15 7胶体金试剂筛查 ,免疫磁珠富集后分离病原菌 ,应用全自动生化鉴定系统和血清学的方法进行鉴定。 [结果 ]14 6 3份食品中共检出肠出血性大肠埃希菌 O15 7∶ H7共 2 8株 ,检出率 1.9% ,其中鲜肉和生食蔬菜检出率较高 ,分别为 3.3%和 3.2 %。夏季检出率 (2 .5 % )明显高于冬季检出率 (1.1% )。 [结论 ]肠出血性大肠埃希氏菌 O15 7∶H7在食品中污染较为严重 ,其检出率的高低与 O15 7∶ H7感染性腹泻的流行强度呈正相关。应加强畜禽屠宰、蔬菜生产和销售环节的监督监测 ,预防O15 7食源性暴发。

肠出血性大肠埃希菌O157:H7不同分型方法比较

目的 探讨建立快速敏感的EHECO15 7:H7诊断分型方法 ,有效地追踪溯源和控制传染源。方法 分别用反向被动乳胶凝集试验 (RPLA)、噬菌体分型、vt毒力基因PCR试验、脉冲场电泳胶 (PFGE) 4种实验方法对EHECO15 7:H7菌株进行分型。结果 对同起事件菌株 ,4种方法均有较好的分型能力 ;PFGE对散发菌株有很强的分型能力 ,而RPLA与vt毒力基因PCR试验尚有不足 ,但其操作简便 ,实验要求相对不高 ,可以作为EHECO15 7:H7致病毒素的初筛方法。结论 几种分型技术联合使用比任一种技术单独使用能提供更为可靠的分型结果。

一种肠出血性大肠埃希菌O157∶H7鞭毛抗原检测新方法

目的 评价抗 -H7血清琼脂方法对大肠埃希菌O15 7∶H7鞭毛抗原的检测效果。方法 采用抗 -H7血清琼脂法对来自人、动物、环境水和食品中的 10 9株疑似O15 7∶H7菌株进行H7鞭毛抗原鉴定 ,并设鞭毛抗原阳性和阴性对照菌株 ,同时与试管凝集法和H 7特异性基因聚合酶链反应 (PCR)法进行比较。结果 3种方法对鞭毛抗原阳性和阴性对照菌株的检测结果均成立 ,抗 -H7血清琼脂法与试管凝集法比较其敏感性、特异性和符合率均为 10 0 % ;而与H7特异性基因PCR法比较其敏感性、特异性和符合率分别为 93 .75 %、95 .3 1%和 97.2 5 %。结论 抗 -H7血清琼脂法是简便快速、稳定可靠的H7鞭毛抗原鉴定方法 ,具有推广使用价值。

肠出血性大肠埃希菌O157∶H7外膜蛋白A的表达、鉴定和纯化

目的构建肠出血性大肠埃希菌O157∶H7外膜蛋白A基因重组质粒,研究其在大肠埃希菌中的表达情况。方法用RT-PCR法从肠出血性大肠埃希菌O157∶H7菌株克隆OmpA基因,构建重组质粒pET-30a(+)-OmpA,经双酶切及基因测序鉴定后在E.coli BL21(DE3)原核表达系统中诱导OmpA的表达,通过蛋白质电泳技术检测蛋白的表达,用Western blot法测定和分析免疫反应性。结果获得的目的基因为1041bp,与预期值相符,测序结果与GenBank公布序列的同源性达100%,重组质粒pET-30a(+)-OmpA在原核系统下可表达OmpA,Western blot分析His-Tag单抗能与OmpA(His-Tag)发生免疫反应。结论OmpA重组质粒构建成功,表达产物具有抗原性。

肠出血性大肠埃希菌O157∶H7环介导恒温扩增快速检测方法的建立与应用

目的肠出血性大肠埃希菌(Enterohemorrhagic Escherichia coli,EHEC)O157∶H7是一种重要的人畜共患病致病菌,主要通过被污染的食物传播,引起出血性结肠炎,建立其快速检测方法具有重要意义。方法基于EHEC O157∶H7保守的rfbE基因序列,设计4条引物,利用环介导等温扩增技术(loop-mediatedisothermal amplification,LAMP),成功建立了EHEC O157∶H7LAMP快速检测方法 ,60min内即可完成致病菌检测。结果利用该LAMP方法对30种共38株细菌进行检测,所试EHEC O157∶H7均为阳性结果 ,说明该方法具有高度特异性。本方法对纯培养的EHEC O157∶H7检测限为12CFU/mL,污染食品中EHEC O157∶H7的检测限为18CFU/g。实践应用表明,对1121份进出口肉类、奶类制品及人工污染样品等进行检测,检出57份LAMP阳性,与采用AOAC标准检测结果的符合率为100%。结论该LAMP方法操作简便、特异性强、灵敏度高,具有良好的实用性。

出血性大肠埃希菌O157∶H7广东分离株对小鼠致病性的研究

探索肠出血性大肠埃希菌Escherichia coli O157∶H7广东分离株021210(NalR)[以下简称O157∶H7 021210(NalR)]对小鼠的半数致死量(LD50),揭示其在小鼠体内产生的病理变化.将20日龄的昆明鼠随机分组,饮水中加入萘啶酮酸预处理,消除肠道杂菌,再分别以不同剂量腹腔注射O157∶H7 021210(NalR),进行临床观察和病理学检查.测定出LD50,试验结果表明一定剂量的O157∶H7 021210(NalR)可引起小鼠主要脏器及肠道发生病变.