辽宁地区猪源大肠埃希菌O157:H7的流行病学调查和耐药性分析

猪源大肠埃希菌O157:H7是一种新型的人畜共患致病性大肠埃希菌[1],可通过污染的牛肉、奶制品、蔬菜、水果等途径感染人类或畜禽。不仅严重危害生猪养殖业的发展,而且对人类的健康也构成巨大威胁,人感染后主要表现为腹泻、出血性肠炎、溶血性尿毒综合征、血栓性血小板减少性紫癜等症状。众多动物食品污染源中,猪是其最重要宿主之一。本文从辽宁省9个地区的无害化处理厂、生猪养殖场和生猪屠宰场采集猪肛门拭子900份,进行大肠埃希菌O157:H7分离鉴定以及耐药性分析,为了解辽宁地区猪大肠埃希菌O157:H7的感染情况提供基础数据。

不同方法检测食品中大肠埃希氏菌O157:H7/HM能力验证结果比较与分析

为提高实验室对食品中大肠埃希氏菌O157∶H7的检验检测能力,笔者单位参加了由中国检验检疫科学研究院测试评价中心组织的食品中大肠埃希氏菌O157∶H7检测能力验证计划。此次实验采用国家标准《食品安全国家标准食品微生物学检验大肠埃希氏菌O157∶H7/NM检验》(GB 4789.36—2016)中的第一法和实时荧光PCR方法,分别对能力验证样品进行检测。结果显示,样品23-G520中未检出大肠埃希氏菌O157∶H7;样品23-F568中检出大肠埃希氏菌O157∶H7,结果反馈为满意。在能力验证实验中,不同检测方法同时使用、综合判断,能有效提高检测能力和结果的准确性。

检测肠出血性大肠埃希菌O157:H7的环介导等温扩增和PCR法比较

目的建立基于环介导等温扩增(LAMP)技术的肠出血性大肠埃希菌(EHEC)O157:H7快速简便检测方法,并与PCR进行比较。方法针对EHEC O157:H7保守的rfbE基因序列,设计特异性引物,建立LAMP和PCR检测技术并优化其反应条件,比较这两种检测方法的灵敏度、特异性和对实际样品的检测结果。结果成功建立了LAMP和PCR检测体系,灵敏度检测结果显示,LAMP检测限低至10 cfu/ml,PCR检测限为102cfu/ml,LAMP检测灵敏度高于PCR;对39株近源菌进行检测,结果显示,LAMP法仅7株EHEC O157:H7得到阳性结果,非EHEC O157:H7菌株均为阴性,PCR产物则出现非特异性条带,LAMP法特异性比PCR法高。对于32份猪肉样品的检测,LAMP和PCR与常规检测结果一致,3份样品检测阳性。结论 LAMP检测技术的特异性和灵敏度较PCR高,并且操作简便、检测成本低,耗时短,更有望发展成为快速准确检测EHEC O157:H7的有效手段。

食品中肠出血性大肠埃希菌O_(157):H_7的PCR检测

目的建立快速准确检测食品中肠出血性大肠埃希菌O157:H7的方法。方法采用多重聚合酶链式反应技术(MPCR)特异性扩增肠出血性大肠埃希菌O157:H7的STX、rfbEf、liC基因。结果分别在228,378,709 bp处扩增出3个目的基因片段,且只有肠出血性大肠埃希菌O157:H7获得扩增,其他菌种扩增均呈阴性。结论PCR方法比传统细菌检测方法更特异、快速、灵敏和简便,为食品中肠出血性大肠埃希菌O157:H7的快速检测提供了新的手段。

肠出血性大肠埃希菌O157∶H7黏附HeLa细胞模型的建立

目的建立肠出血性大肠埃希菌O157∶H7体外黏附HeLa细胞模型,为进一步研究其致病机制奠定基础。方法以细菌黏附HeLa细胞数量为指标,分别评价细菌数量、细菌与细胞孵育时间对细菌黏附数量的影响,得到最佳条件,最后肌动蛋白荧光染色(FAS)试验鉴定模型。结果加入细菌为1×105CFU,细菌与细胞孵育4h时,黏附细胞的数量最佳,FAS检测发现该条件下细菌能够引起细胞特异性黏附、擦拭(attaching&effacing,A/E)损伤,模型建立成功。结论成功建立O157∶H7体外黏附HeLa细胞模型,为进一步研究其致病机制提供了条件。

上海市浦东新区肠出血性大肠埃希菌O157：H7的监测研究

目的了解上海浦东新区腹泻病人、宿主动物肠出血性大肠埃希杆菌(E.coli)O157:H7携带情况以及市售食品的污染状况,为疾病防治工作提供决策依据。方法于2003～2006年的5～10月,在设置的监测点与超市采集家禽和腹泻病人粪便及禽畜肉制品;应用免疫磁珠富集,山梨醇麦康凯平板和Chromager O157显色平板分离培养E.coliO157:H7,生化和血清学反应进行鉴定。结果E.coliO157:H7阳性率分别为:腹泻病人粪便0.24%,鸡粪2.95%,鸭粪3.83%,家畜肉15.05%,家禽肉2.25%。检出的67株E.coliO157:H7中,仅1株来自腹泻病人的E.coliO157:H7具有毒力基因。结论浦东新区腹泻病人、宿主动物及其肉类食品中存在E.coliO157:H7感染或污染,存在E.coliO157:H7感染流行的潜在危险。

TaqMan探针荧光PCR检测肠出血性大肠埃希菌O157:H7方法的建立

肠出血性大肠埃希菌(Enterohemorrhagie Escherichia coli,EHEC)O157:H7是一种重要的传染病病原菌,以EHEC O157:H7标准菌株rfbE保守区设计一对特异引物和一条探针,建立了检测EHEC O157:H7核酸的荧光定量PCR检测方法。实验结果表明荧光定量PCR检测方法特异性好,最低检测限为20 cfu/mL,线性范围是102～108cfu/mL。稳定性试验表明批内变异系数和批间变异系数分别为2.06%和2.45%。

河南省6类食品中肠出血性大肠埃希氏菌O_(157)∶H_7污染状况调查

调查肠出血性大肠埃希氏菌O1 57∶H7在河南省 6类食品中的分布特征和污染状况 ,了解季节因素对于肠出血性大肠埃希氏菌O1 57∶H7分布的影响 ,以预防和控制食品污染保证食品安全。依据河南省自然地理概况 ,分 5个采样区域 ,按夏季和冬季在销售环节随机抽取样品 ,选择性增菌培养后 ,用O1 57胶体金试剂筛查 ,免疫磁珠富集后分离病原菌 ,应用bioM啨ｒｉｅｕｘＶＩＴＥＫ32AMSsystem ,GNI+ 和血清学的方法进行鉴定。结果显示 14 6 3份食品中共检出肠出血性大肠埃希氏菌O1 57∶H72 8株 ,检出率为 1 9% ,其中鲜肉和生食蔬菜检出率最高 ,为 3 3%和 3 2 % ,酸奶中未检出。夏季检出率 (2 5 % )明显高于冬季检出率 (1 1% )。结果提示 ,肠出血性大肠埃希氏菌O1 57∶H7在食品中的污染程度较为严重 ,其检出率的高低与O1 57∶H7感染性腹泻的流行强度呈正相关。应引起有关部门的足够重视 ,加强畜禽屠宰、蔬菜生产和销售环节的监督和监测 。

应用免疫磁珠分离法及荧光定量PCR技术快速检测肠出血性大肠埃希菌O157:H7

目的建立免疫磁珠分离法(immunomagnetic separation,IMS)联合荧光定量PCR(real-time PCR)技术快速检测肠出血性大肠埃希菌O157∶H7的方法。方法根据肠出血性大肠埃希菌O157∶H7抗原特异性基因rfbEO157设计引物和荧光探针,建立real-time PCR检测体系,并检测其特异性及敏感性;用O157免疫磁珠特异性捕获标本菌液中的O157∶H7大肠埃希菌,结合real-time PCR对磁珠捕获菌细胞的DNA进行检测分析。结果 Real-time PCR检测结果显示,O157∶H7大肠埃希菌可产生荧光信号,而其他常见致病菌均未见明显荧光信号;采用IMS-real-time PCR方法检测标本,菌液含菌量为3.3×102CFU/mL时即可被检出,检测全过程需时约4h。结论 IMS-real-time PCR检测方法具有特异性强、敏感度高、快速易操作等特点,该检测方法能提高O157∶H7大肠埃希菌的检出率和准确性,可用于标本的快速诊断、疾病监测和暴发疫情的病原学调查。

多重PCR检测肠出血性大肠埃希菌O157:H7

目的建立一种快速、特异的检测肠出血性大肠埃希菌O157:H7菌株的多重PCR方法。方法针对O157:H7菌株的O157、H7抗原特异基因rfbEO157、fliCH7以及stx1、stx2、eaeA和hlyA四种毒力基因设计相应引物,在同一扩增体系中进行PCR反应,通过优化多重PCR反应条件和循环参数,建立检测O157:H7菌株的多重PCR方法,并测定其特异性和灵敏度。结果 6对特异性引物各自扩增相应的基因片段,检测结果与常规PCR获得的结果一致。细菌纯培养物的检测灵敏度为1.33×104CFU。结论该多重PCR方法能在一次检测中同时反映待测菌株是否为肠出血性大肠埃希菌O157:H7及其携带毒力基因的情况,可为O157:H7大肠埃希菌感染的诊断及流行病学调查提供一种简便、快速的检测手段。

肠出血性大肠埃希菌O157∶H7实时荧光定量PCR快速检测方法的建立

本试验针对肠出血性大肠埃希菌(enterohemorrhagic Escherichia coli,EHEC)O157∶H7高度保守的rfbE基因序列设计合成引物及TaqMan探针,通过优化反应条件,建立了检测EHEC O157∶H7实时荧光定量PCR方法。结果显示,该法灵敏度约为7.3CFU/mL,对310份肉类、蛋、奶及其制品和动物腹泻物、人工污染样品等进行检测,共检出阳性样本20份,与采用AOAC标准检测结果的符合率为100%。表明建立的实时荧光定量PCR方法操作简便、特异性强、灵敏度高,具有良好的实用性。

肠出血性大肠埃希菌O157：H7多重PCR检测方法的建立

为建立肠出血性大肠埃希菌O157:H7的多重PCR检测方法,针对O157菌特异性eaeA基因、fliC基因、志贺毒素基因(stx1和stx2)及rfbE基因设计5对引物,构建多重PCR反应体系,优化反应的引物浓度和温度检测其特异性和敏感性,并对牛、猪、鸡及犬等不同动物来源的样品进行了大肠埃希菌O157检测。结果显示,该方法具有良好的特异性和敏感性,敏感性达到5×10~3CFU。从检测阳性样本中均分离到目的菌。应用建立的方法在确定样品中是否含有大肠埃希菌O157的同时,还能对菌株毒力进行初步判定。成功建立了肠出血性大肠埃希菌O157:H7多重PCR检测方法,为该病原菌感染的预防和监测提供了简便、快速的技术手段,具有良好的应用前景。

2000-2005年海盐县肠出血性O157：H7大肠埃希菌监测

目的:了解海盐县肠出血性O157:H7大肠埃希菌的分布及流行情况。方法:采取肠道门诊病人肛拭样和动物宿主粪便,采用免疫磁珠分离和大肠杆菌O157特异性单克隆抗体胶体金快速诊断技术以及特定培养基分离鉴定技术检测O157:H7大肠埃希菌。结果:从1例腹泻患者的大便中检出了1株O157:H7大肠埃希菌,不产生类志贺毒素;从动物粪便中检出7株O157大肠埃希菌。结论:海盐地区人群中感染率较低,且为非产毒株;猪、鸡是我地区O157:H7大肠埃希菌的主要贮存宿主动物。

中国部分地区人群和动物中肠出血性大肠埃希菌O157∶H7分布特征

自20世纪90年代以来,中国大部分省、市、自治区相继开展了人群和动物的肠出血性大肠埃希菌O157∶H7病原监测。监测结果显示:①在不同的地区和时间,人群中O157∶H7的感染率/带菌率不同;②动物中O157∶H7的带菌率存在地区、时间及种群的差异;③人群O157∶H7的感染与动物带菌存在关联。提示,加强人群和动物的病原监测、揭示O157∶H7在人群和动物中的流行规律、降低动物的感染或带菌率对预防与控制人群肠出血性大肠埃希菌O157∶H7的感染具有重要意义。

肠出血性大肠埃希菌O157:H7不同分型方法比较

目的 探讨建立快速敏感的EHECO15 7:H7诊断分型方法 ,有效地追踪溯源和控制传染源。方法 分别用反向被动乳胶凝集试验 (RPLA)、噬菌体分型、vt毒力基因PCR试验、脉冲场电泳胶 (PFGE) 4种实验方法对EHECO15 7:H7菌株进行分型。结果 对同起事件菌株 ,4种方法均有较好的分型能力 ;PFGE对散发菌株有很强的分型能力 ,而RPLA与vt毒力基因PCR试验尚有不足 ,但其操作简便 ,实验要求相对不高 ,可以作为EHECO15 7:H7致病毒素的初筛方法。结论 几种分型技术联合使用比任一种技术单独使用能提供更为可靠的分型结果。

河南省6类食品中肠出血性大肠埃希菌O157∶H7污染状况调查

[目的 ]调查肠出血性大肠埃希菌 O15 7∶H7在河南省 6类食品中的分布特征、污染状况及季节分布。 [方法 ]依据河南省自然地理概况分 5个采样区域 ,按夏冬季在销售环节随机取样。选择性增菌培养后 ,用 O15 7胶体金试剂筛查 ,免疫磁珠富集后分离病原菌 ,应用全自动生化鉴定系统和血清学的方法进行鉴定。 [结果 ]14 6 3份食品中共检出肠出血性大肠埃希菌 O15 7∶ H7共 2 8株 ,检出率 1.9% ,其中鲜肉和生食蔬菜检出率较高 ,分别为 3.3%和 3.2 %。夏季检出率 (2 .5 % )明显高于冬季检出率 (1.1% )。 [结论 ]肠出血性大肠埃希氏菌 O15 7∶H7在食品中污染较为严重 ,其检出率的高低与 O15 7∶ H7感染性腹泻的流行强度呈正相关。应加强畜禽屠宰、蔬菜生产和销售环节的监督监测 ,预防O15 7食源性暴发。

一种肠出血性大肠埃希菌O157∶H7鞭毛抗原检测新方法

目的 评价抗 -H7血清琼脂方法对大肠埃希菌O15 7∶H7鞭毛抗原的检测效果。方法 采用抗 -H7血清琼脂法对来自人、动物、环境水和食品中的 10 9株疑似O15 7∶H7菌株进行H7鞭毛抗原鉴定 ,并设鞭毛抗原阳性和阴性对照菌株 ,同时与试管凝集法和H 7特异性基因聚合酶链反应 (PCR)法进行比较。结果 3种方法对鞭毛抗原阳性和阴性对照菌株的检测结果均成立 ,抗 -H7血清琼脂法与试管凝集法比较其敏感性、特异性和符合率均为 10 0 % ;而与H7特异性基因PCR法比较其敏感性、特异性和符合率分别为 93 .75 %、95 .3 1%和 97.2 5 %。结论 抗 -H7血清琼脂法是简便快速、稳定可靠的H7鞭毛抗原鉴定方法 ,具有推广使用价值。