生物被膜对鸡源肠外致病性大肠埃希氏菌耐药表型的影响

探讨鸡源肠外致病性大肠埃希氏菌(ExPEC)生物被膜(BF)形成能力及BF与耐药性之间的相关性,采用96孔微量板法和正交试验测定10株鸡源ExPEC的BF形成能力和BF强阳性菌株的最佳成膜条件,使用二倍倍比稀释法测定β-内酰胺类抗生素对生物被膜态与浮游态鸡源ExPEC的最小抑菌浓度(MIC)。结果显示,10株鸡源ExPEC的BF阳性率为90%,E-26、E-28、E-43为弱阳性菌株(+);E-27、E-30、E-42为中等阳性菌株(++),E-39、E-40、E-41为强阳性菌株(+++),E-20为阴性菌株;3株强阳性菌株BF最佳成膜条件不相同;3株BF强阳性鸡源ExPEC的BF形成后,对β-内酰胺类抗生素耐药性有不同程度增加,同种抗生素对不同菌株的MIC变化可能不同,不同抗生素对同一菌株变化也不同。因此,鸡源ExPEC的BF阳性率较高,但各菌株形成BF的能力存在差异,不同菌株形成BF所需的条件不完全相同,BF形成会使鸡源ExPEC对抗生素的耐药水平增强,但同为BF阳性鸡源ExPEC,形成BF后β-内酰胺类抗生素耐药水平变化存在差异。

猪源肠外致病性大肠埃希氏菌的分离鉴定与药敏试验

为对陕西某猪场仔猪肺炎病例进行确诊,无菌采集患病仔猪肺脏,并进行细菌分离培养、生化试验、16S rRNA基因测序、小鼠致病性试验、药敏试验以及耐药基因检测。结果表明,分离到的菌株其培养特性和生化试验与大肠埃希氏菌一致,16S rRNA基因测序与大肠埃希氏菌的同源性为98%;小鼠致病性试验验证了该菌株的致病性;药敏试验显示该菌对氨苄西林、复方阿莫西林、庆大霉素、四环素、头孢噻呋钠、头孢他啶、恩诺沙星、氟苯尼考和磺胺异恶唑等9种抗菌药物表现耐药,对替加环素、美罗培南和多黏菌素B敏感;耐药基因检测结果发现该菌携带sul3、tetA和TEM等耐药基因。研究结果确定了引起某猪场仔猪肺炎的病原菌,并对其生物学特性、耐药情况进行了研究,为临床诊断治疗提供参考。

禽致病性大肠埃希氏菌生物被膜形成的调控机制研究进展

禽致病性大肠埃希氏菌能够引起禽类感染性细菌病,给禽类养殖业造成了重大的经济损失,并严重限制了禽类养殖业的健康发展。为了了解禽致病性大肠埃希氏菌的感染机制,论文简述了生物被膜的形成过程及其危害。细菌生物被膜的形成不但增强细菌对抗菌药物的耐药性,而且导致宿主持续和反复性感染,同时还很难被预防、控制和清除。论文还分析了普遍存在于各类细菌中的重要调控系统——群体感应、双组份系统和第二信使的信号转导途径及其调控机制,并阐述了群体感应、双组份系统和第二信使以及两系统间的互作网络对细菌生物被膜的影响。因此,了解多系统共同调控生物被膜形成的分子机制或许可以作为破坏生物被膜形成的新策略,从而为控制由生物被膜引起的感染和抗菌药物耐药性提供研究方向。

江苏省某监测点家畜来源肠致病性大肠埃希菌分离株分子特征分析

目的分析江苏省某监测点家畜来源肠致病性大肠埃希菌分离株分子特征,进而评估其潜在的致病性,为感染性腹泻的监测与防控提供依据。方法采用全基因组测序技术对江苏省某监测点分离的家畜来源的37株肠致病性大肠埃希菌(EPEC)菌株进行特征性分析。结果本地家畜来源的EPEC均为非典型EPEC(aEPEC),其血清型多样,携带多种与腹泻相关的毒力基因,有9种ST型且具有区域性流行特征,eae基因包含有5种亚型,β1为优势亚型,其在腹泻病人中也最为常见。结论aEPEC对公众健康构成潜在威胁,应在感染性腹泻的监测工作中,加强对家畜粪便及养殖环境的监测。

兔源肠致病性大肠埃希菌全基因组测序及毒力和耐药基因分析

目的揭示一株从腹泻实验兔中分离到的肠致病性大肠埃希菌ILAREc-01的基因组特征、毒力基因和耐药基因分布情况。方法采用高通量测序法对基因组序列进行测定,采用VFDB、ARDB、CAZy、SWISS-PROT、COG、CARD、KEGG、T3SS等8个数据库对基因组中的基因功能进行预测,并且对ILAREc-01菌株进行了遗传进化分析。结果ILAREc-01基因组中编码5249个基因;CARD数据库分析表明ILAREc-01菌株具有7类耐药机制的59个耐药基因;通过VFDB数据库分析,在ILAREc-01中注释了553个毒力基因,并发现了肠细胞脱落位点毒力岛(LEE);ILAREc-01与FORC028、E2865和110512株具有较高的同源性。结论本研究进行了兔源肠致病性大肠埃希菌ILAREc-01的全基因组测序,完成了毒力基因和耐药基因的注释,并开展了遗传进化分析,为揭示该病原的致病机制和科学防控实验兔大肠埃希菌病提供了数据支撑。

一株兔源大肠埃希氏菌噬菌体的分离及生物学特性分析

为了筛选高效裂解兔源致病性大肠埃希氏菌的宽谱噬菌体,用滴定法和双层平板法分离纯化出1株噬菌体vB-EcoS-tE10,用透射电镜观察该噬菌体的形态特征,并研究其生物学特性。结果表明,在透射电镜下其头部呈20面体,长径约为52.5 nm,横径约为51.6 nm,尾部长约86.9 nm,有明显的颈部。最佳感染复数为0.1,潜伏期为20 min,暴发期为80 min,裂解量为608 PFU/cell,在30~60℃作用0.5~1 h,其活性不受影响,在pH为6~9可保持很高的效价,能裂解9株兔源大肠埃希氏菌、1株鸡源大肠埃希氏菌和1株产肠毒素性大肠埃希氏菌K99,属于高效裂解性宽谱噬菌体,在大肠埃希氏菌噬菌体及裂解酶的开发和利用方面有较高价值。

青海牧区犊牛腹泻大肠埃希氏菌毒力基因及血清型分布特征研究

为掌握青海牧区致牦牛腹泻大肠埃希氏菌病的流行特征,以期为牦牛大肠埃希氏菌性腹泻的预防和治疗提供依据,对青海省玉树、果洛、海北地区采集的99份犊牦牛腹泻相关样本进行致病性大肠埃希氏菌的分离培养及O抗原血清分型、毒力基因扩增及小鼠毒性试验等研究。结果显示,分离菌株主要携带F17、ompA、fimC、espA、HPI、LEE、VT1、SLT2等毒力基因,未检出K88、K99、LT1等毒力基因,小鼠最低致死剂量为2.5×10^(9)CFU/mL,优势血清型为O25、O55和O107,分别占定型血清的25.40%、14.29%和19.05%,系统主要发育群为B1群。研究结果将为后续青海地区致犊牦牛腹泻大肠杆菌病的治疗、发病机制探讨及疫苗研制提供支撑。

朱鹮源大肠埃希氏菌分离鉴定及耐药性与致病性研究

为分析陕西楼观台朱鹮源大肠埃希氏菌携带情况,无菌采集朱鹮咽拭子和肛拭子进行细菌分离鉴定,成功从肛拭子中分离到一株疑似大肠埃希氏菌菌株,对分离菌株进行生化试验、16S rRNA测序鉴定、药敏试验、耐药基因鉴定、毒力基因鉴定及小鼠致病性试验。经鉴定该菌株为大肠埃希氏菌,命名为XNZH1,该菌株对氧氟沙星、安普霉素、大观霉素、四环素和氟苯尼考耐药,携带耐药基因sul2和毒力基因etrA。小鼠致病性试验结果显示,经腹腔接种的6只小鼠均在接种后18 h内死亡,且从脑组织中分离到该菌,推测该菌可穿过血脑屏障。进化树分析表明,该菌株与分离株MH532531.1同源性高达98%。试验结果表明朱鹮源大肠埃希氏菌具有高度耐药性和致病性,结果可为朱鹮大肠埃希氏菌病的防控及合理用药提供依据。

泉州市某区食品中致泻性大肠埃希菌的检测情况

目的 分析泉州市某区集贸摊点和超市食品中致泻性大肠埃希菌携带情况。方法 选择2021年1—12月从泉州市鲤城区超市以及集贸摊点采集的100份食品样本作为研究对象,严格按照GB 4789—2016《食品安全国家标准食品微生物检验致泻性大肠埃希菌检验》对所有标本开展致泻性大肠埃希菌微生物检验以及毒力基因检测,统计最终的检测结果。比较不同食品类型的致泻性大肠埃希菌检出率差异。结果 100份检测样本当中,总共20份检出致泻性大肠埃希菌,检出率为20.00%;其中包含产肠毒性大肠埃希菌(entero toxigenic Escherichia coli,ETEC)共6株,占比为30.00%;肠致病性大肠埃希菌(entero pathogenic Escherichia coli,EPEC)共5株,占比为25.00%;肠出血性大肠埃希菌(entero hemorrhagic Escherichia coli,EHEC)共5株,占比为25.00%;肠侵袭性大肠埃希菌(entero invasive Escherichia coli,EIEC)共4株,占比为20.00%。牲畜肉类、生禽肉类、凉拌类、海产类以及蔬菜类食品的致泻性大肠埃希菌检出率依次为38.89%、45.00%、5.00%、10.00%、4.55%,其中牲畜肉类、生禽肉类的致泻性大肠埃希菌检出率高于其他食品类型(P <0.05)。分离获得的致泻性大肠埃希菌20株内,出现EHEC的O157共5株;血清凝集予以H7鉴定,其中共有5株EHEC的O157:H7鉴定血清凝集,1株O157在羊肉上分离获得,SLT2、hly、eaeA毒力基因均在H7菌中携带,其他O157共4株,4种毒力基因均为阴性。结论 严格按照有关标准开展微生物检验能有效检出食品中的大肠埃希菌以及致泻性大肠埃希菌毒力基因,有关部门应该要加强卫生监督的力度,确保人民群众的食品安全。

猪源肠外致病性大肠埃希氏菌的生物膜形成能力及耐药性

[背景]猪源肠外致病性大肠埃希氏菌(extraintestinal pathogenic Escherichia coli,ExPEc)是一种严重危害养猪业的病原菌,有关其生物膜形成能力与耐药性的研究报道很少。[目的]探讨从病猪肺脏中分离鉴定的3株ExPEc的生物膜形成能力及耐药性,为从抗生物膜形成角度防治猪肠外大肠埃希氏菌病提供参考。[方法]采用96孔板结晶紫染色法结合正交实验优化猪源ExPEc分离株的生物膜形成最佳条件与成膜能力;通过扫描电镜观察各菌株生物膜的形态结构;利用PCR方法检测其携带的生物膜形成相关基因;采用微量肉汤稀释法测定抗生素对生物膜态与浮游态下猪源ExPEc分离株的最小抑菌浓度(minimum inhibitory concentration,MIC)。[结果]3株猪源ExPEc的最佳成膜条件并不一致,但在各自最佳条件下均能形成很强的生物被膜且同时携带10个生物膜形成相关基因(pgaA,pgaB,pgaC,pgaD,luxS,fimA,hipA,iha,flhC,flhD)。扫描电镜观察显示,菌株SE-1聚集后可形成片状生物膜,菌株SE-2和SE-3聚集后可形成多层结构的生物膜,且聚集体间有明显空隙。部分受试抗菌药物对生物膜态SE-1、SE-2和SE-3菌株的MIC值较对应浮游菌提高了2-32倍,药物敏感性由原来的敏感转为中敏或耐药。[结论]实验结果为从抗生物膜形成角度防治猪肠外大肠埃希氏菌病奠定了基础。

牛肉样品中产志贺毒素大肠埃希氏菌和肠致病性大肠埃希氏菌的分离鉴定

于2018年9月—2019年3月,每个月从超市和农贸市场中抽取20个样本,共抽取140个牛肉及制品样本,在qPCR初筛时stx阳性率为45.8%,eae的阳性率为52.2%。每月的stx初筛阳性率分别为65%、60%、80%、5%、25%、45%和40%;eae初筛阳性率分别为70%、70%、65%、0%、40%、65%和55%。检出携带stx基因的产类志贺毒素大肠埃希氏菌样本4份,样本阳性菌株检出率为2.9%;检出携带eae基因的肠致病性大肠埃希氏菌样本12份,样本阳性菌株检出率为8.6%。

克拉维酸强化的阿莫西林对致病性大肠埃希氏菌体外抑菌试验

克拉维酸是一种 β 内酰胺酶抑制剂 ,与阿莫西林同时应用时使得通过产生 β 内酰胺酶对阿莫西林耐药的大多数细菌重新成为敏感菌。对来源于鸡、猪的共 31株致病性大肠埃希氏菌最小抑菌浓度 (MIC)测定表明 ,70 %以上菌株对阿莫西林耐药 ;克拉维酸与阿莫西林联合使用使MIC显著下降 ;与单一使用阿莫西林相比 ,头孢氨苄青霉素对大多数分离菌的MIC较低。

211菌对猪致病性大肠埃希氏菌的体外抑制作用

将产乳酸、能生成芽胞的 2 11菌对猪的 9株致病性大肠埃希氏菌进行抑制试验。结果表明 ,培养 2 4～ 72h ,2 11菌对 9株大肠埃希氏菌均能产生抑制作用 ,抑菌长度 0～ 3 .2 5cm ;最佳抑菌时间为 2 4～ 48h ;72h后抑菌区有不同程度的所缩小 ,O14

中药对鸡致病性大肠埃希菌的体外抑菌试验

为研究25种中药对秦皇岛地区鸡致病性大肠埃希菌(Escherichia coli)地方流行株QH1(O78)、QH2(O89)、QH4(O1)的体外抑菌效果,以E.coli标准株ATCC25922作为质控菌株。利用水提法制备中药药液,使终浓度为1g/mL;用平板琼脂打孔法和改良微量二倍稀释-平板法分别测定25种中药的抑菌圈直径和最小抑菌浓度(MIC)。结果表明,金银花、黄连、乌梅、五味子4种中药对鸡致病性E.coli地方株极度敏感,抑菌圈直径在20.3mm^22.7mm之间,其MIC在15.65mg/mL^31.25mg/mL之间;其他药物对鸡致病性E.coli地方株有不同程度的敏感性,为鸡致病性E.coli地方株中药防治提供理论基础。

牦牛致病性大肠埃希氏菌病的诊断

西藏那曲地区牦牛发病死亡数量较大 ,本病症状与大肠埃希氏菌病极为相似。通过对流行病学调查 ,临床症状及病理变化观察 ,细菌学、血清学检查鉴定 ,动物回归试验 。

肠外致病性大肠埃希菌多重耐药性及氨基糖苷类耐药基因分析

目的检测临床分离猪、鸡源肠外致病性大肠埃希菌的耐药性,分析其携带的氨基糖苷类耐药基因,以指导临床用药,探究细菌对氨基糖苷类抗生素的抗性机制。方法应用K-B法测定分离株对19种常用抗生素的耐药情况。用双纸片法检测产ESBLs菌株并进行基因分型。用PCR和测序方法检测氨基糖苷类抗性基因aadA1,aadA2,strA-strB,aadB,aacC2,aac(3)-IV,aph(3′)-Ia,aph(3′)-IIa。结果临床分离株表现多重耐药性,对头孢菌素类药物和阿米卡星的敏感性最高(63%～97%),93%的菌株耐药谱值≥10。共检测到两株产超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)菌株,基因型属TEM-1+CTX-M-14。耐药菌株与相应的氨基糖苷类耐药基因符合率高(≥74%)且序列保守。结论猪、鸡源肠外致病性大肠埃希菌呈多重耐药性,其对氨基糖苷类抗生素的抗性机制以产生针对该类抗生素的修饰酶为主。

傅立叶变换红外光谱技术对6种致病性大肠埃希氏菌快速分型的研究

目的建立肠致病性大肠埃希氏菌(Enteropathogenic E.coli,EPEC)、肠产毒性大肠埃希氏菌(Enterotoxigenic E.coli,ETEC)、肠侵袭性大肠埃希氏菌(Enteroinvasive E.coli,EIEC)、肠黏附性大肠埃希氏菌(Enteroadhesive E.coli,EAEC)、肠出血性大肠埃希氏菌(Enterohmorrhagic E.coli,EHEC)、弥散粘附性大肠埃希氏菌(Diffusely adherent E.coli,DAEC)6种致病性大肠埃希氏菌的傅立叶变换红外光谱(Fourier transform infrared spectroscopy,FT-IR)数据库及FT-IR分型方法。方法应用FT-IR技术对6种致病性大肠埃希氏菌进行指纹图谱数据采集并对其进行基线校正、归一化等处理,应用化学计量学方法对光谱数据进行分析。结果本研究建立了6种致病性大肠埃希氏菌的FT-IR光谱数据库,实现了对6种可疑目标大肠埃希氏菌鉴定;建立了主成分分析(principal component analysis,PCA)和分级聚类分析(hierarchical cluster analysis,HCA)2种模型,成功实现了对6种致病性大肠埃希氏菌的快速分型。结论 FT-IR分析方法快速、简便、易操作,结果重现性好,是一种鉴定6种致病性大肠埃希氏菌的有效方法。

26味中药对狐源致病性大肠埃希菌地方株体外抑菌试验

为了研究五味子等26味中药对狐源致病性大肠埃希菌(Escherichia coli)HL2(O1)地方流行株的体外抑菌活性,采用水提法制备了单味中草药药液,浓缩为生药含量为1g/mL,利用平板打孔法和微量二倍稀释法分别测定26味中药对狐源致病性E.coli HL2(O1)的抑菌圈直径和最小杀菌浓度(MBC)。结果显示,五味子、诃子对狐源致病性E.coli呈极度敏感,抑菌圈直径在21.3mm^20.3mm之间,MBC均为7.825mg/mL;金银花、黄连、苦参3味药物高度敏感,抑菌圈直径在16.4 mm^19.3 mm之间,MBC在15.65mg/mL^31.25mg/mL;板蓝根、黄芩、五倍子等10味药物中度敏感,抑菌圈直径在11.3mm^14.2mm之间,MBC在62.5mg/mL^250mg/mL;连翘、地丁、白头翁、穿心莲4味药物为低度敏感;其余药物无明显的效果。筛选出了五味子、诃子、黄连、金银花、苦参5味对狐源致病性E.coli HL2(O1)地方株敏感的中药,可为狐源致病性E.coli的防治提供基础。

贵州省平塘县旅游区2020—2021年生活饮用水大肠埃希菌监测分析

目的通过贵州省平塘县旅游景区生活饮用水中细菌学指标进行监测,掌握生活饮用水水质现况,为预防旅游景区水质突发事件和制定应急处理措施提供依据。方法2020—2021年,选择该县7个旅游景区所在地的集中供水水厂7座为监测点,分别于每年枯水期与丰水期采集各检测点的水源水、出厂水与末梢水样本,监测水样中的总大肠菌群、大肠埃希菌阳性情况,大肠埃希菌阳性的水样再监测肠致病性大肠埃希菌阳性情况。结果共采集水样140份,其中水源水样本84份,出厂水、末梢水各28份。水源水总大肠菌群阳性60份(71.4%),大肠埃希菌阳性48份(57.1%);出厂水总大肠菌群阳性样本5份(17.9%),大肠埃希菌阳性4份(14.3%);末梢水总大肠菌群阳性样本6份(21.4%),大肠埃希菌阳性4份(14.3%),样本均未检出肠致病性大肠埃希菌。枯水期水源水、出厂水与末梢水样本的总大肠菌群与大肠埃希菌阳性检出率均高于丰水期;2021年样本大肠埃希菌阳性检出率均低于2020年同期;2021年水源水、出厂水样本总大肠菌群均低于2020年同期。结论该县旅游景区生活饮用水中水源水样本总大肠菌群和大肠埃希菌阳性检出率远高于出厂水与末梢水,末梢水样本的总大肠菌群阳性检出率略高于出厂水。建议当地采取措施加大对水源地的保护力度,集中供水水厂应规范出厂水消毒工艺和消毒效果监测,供水部门应适时维护或更换供水管网。