葡萄球菌肠毒素基因分型PCR检测技术的研究

通过生物信息学分析,设计了不同基因型肠毒素检测引物;应用含溶菌酶的碱裂解法提取葡萄球菌DNA及梯度PCR方法提高了肠毒素检出率和特异性。从国内28株葡萄球菌分离株中共检测出14种不同型的肠毒素基因(sea-see、tsst-1、seg-sei、sek-sel、sen-seo、seq-ser和seu),未检测到sej和sem基因。毒素基因携带率为16.67%,同时携带4种及以上毒素基因的菌株有11株,占39.29%,其中sek、seq和sea毒素基因在所研究菌株中分布最广,分别占到15.50%、14.30%和10.70%。结果表明不同葡萄球菌菌株间毒素型的关联度不同,sek与seq,seb和sed,sec、sei、sen和seu基因型呈现密切相关,各型肠毒素的分布还与菌株分离来源有着密切联系。所建立的PCR方法可用于金黄色葡萄球菌肠毒素基因分型和分布的研究。

生牛奶中金黄色葡萄球菌肠毒素基因的检测与分布

目的:应用多重聚合酶链反应(PCR),检测生牛奶中16种金黄色葡萄球菌肠毒素(SE)基因的分布状况。方法:应用多重PCR的方法,对55个生牛奶样本中经分离鉴定的金黄色葡萄球菌菌株进行肠毒素基因SEA-SE lQ扩增,电泳检测扩增结果。利用16S rRNA基因片段在多重PCR中作为内部阳性参照,同时,所有菌株经反向乳胶凝集试验(reverse passive latex agglutination,RPLA)测定传统的肠毒素型SEA-SED。结果:从生牛奶中分离鉴定的金黄色葡萄球菌,含传统的毒素基因类型SEA-SEE,SEG-SEI基因的菌株仅占25.45%,携带新发现的毒素基因SE lJ-SE lQ的菌株占56.36%。毒素基因携带率为56.36%,同时携带2种及以上毒素基因的菌株占25.45%。结论:应用多重PCR技术检测金黄色葡萄球菌肠毒素基因型,具有敏感、快速、特异的特点,同时适用于传统和新型毒素基因。研究表明,生牛奶中分离的金黄色葡萄球菌带毒素基因阳性率高,而且携带新发现的肠毒素基因的亦占多数,应予以重视。