肠毒素性大肠杆菌CS3菌毛呈现载体的构建

目的 构建大肠杆菌CS3菌毛呈现载体 ,实现外源表位在细菌表面的呈现。方法 通过对CS3亚基蛋白二级结构、抗原表位、亲水性及柔韧性的预测分析 ,确定外源表位的插入位点 ,重叠延伸PCR方法进行定点突变 ,将口蹄疫病毒VP1插入到CS3中以验证表面呈现能力 ;用重组菌腹腔注射免疫小鼠以探讨其抗原性。结果 在大肠杆菌CS3的 136位氨基酸残基后突变插入BamHⅠ酶切点构建成呈现载体 ,全细胞ELISA、电镜和免疫电镜观察等均表明外源表位在大肠杆菌表面得到了表达 ,而且可诱发机体产生针对CS3和外源表位的双重免疫应答。结论 该大肠杆菌CS3菌毛呈现载体可以实现外源表位的表面呈现 ,可望成为研制基因工程活菌疫苗的表达载体。