鸡肠炎沙门菌毒力蛋白SipD生物信息学分析及原核表达

【目的】预测肠炎沙门菌(Salmonella Enteritidis, SE)SipD蛋白的潜在生物学功能,并表达纯化该蛋白,为探索SipD蛋白作为抗沙门菌纳米抗体的候选抗原提供理论依据。【方法】利用DNAStar软件对GenBank中公布的不同血清型沙门菌株SipD蛋白氨基酸序列进行相似性比对,并通过在线软件对SipD蛋白进行生物信息学分析。根据GenBank中SipD基因序列设计引物,以鸡肠炎沙门菌标准菌株(ATCC 13076)为模板,PCR扩增SipD基因,构建pET-32a(+)-SipD重组质粒,并转化大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞。应用IPTG诱导重组SipD蛋白的表达,并利用Ni^(2+)亲和层析法纯化。应用SDS-PAGE和Western blotting检测SipD蛋白的表达情况。【结果】SipD蛋白在不同血清型沙门菌之间高度保守;SipD蛋白分子式为C_(1619)H_(2573)N_(441)O_(540)S_(8),无跨膜区,为膜外蛋白,不存在信号肽,该蛋白的第1~343位氨基酸具有来自超家族侵袭质粒抗原IpaD的保守结构域;SipD蛋白二级结构中α-螺旋、延伸链、β-转角、无规则卷曲占比分别为59.18%、6.41%、3.21%和31.20%;SipD蛋白与B细胞结合的抗原表位有12个。SipD基因长1 029 bp,在大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞中以可溶性蛋白的形式表达;经纯化、透析、浓缩后蛋白浓度为8.6 mg/mL。SDS-PAGE和Western blotting分析发现,SipD蛋白纯度较高,可用于免疫羊驼制备纳米抗体。【结论】SipD蛋白为膜外蛋白,具有较多抗原结合位点;经表达纯化得到纯度较高的SipD重组蛋白,为进一步制备靶向鸡肠炎沙门菌SipD蛋白的纳米抗体提供材料。

基于金纳米球的肠炎沙门菌SERS免疫层析快速检测技术

为实现肠炎沙门菌的快速定量分析,采用Tris辅助柠檬酸钠还原法制备新型胶体金并利用Au-S配位作用在纳米金球表面修饰一层4-巯基苯甲酸(4-MBA)拉曼信号分子,然后以此为标记材料建立肠炎沙门菌表面增强拉曼(surface-enhancement of Raman scattering,SERS)免疫层析检测技术,并对其灵敏度、特异性和重复性进行考察。结果表明:建立的SERS免疫层析技术对肠炎沙门菌的可视化最低检测限(LOD)为10^(6) CFU/mL,而通过拉曼信号检测时LOD为10^(5) CFU/mL,灵敏度比裸眼观察提高了10倍。在10^(5)~10^(8) CFU/mL的浓度范围可根据标准曲线y=30.23×exp(-x/-147)-215.83(R^(2)=0.995)对肠炎沙门菌进行定量分析。该SERS免疫层析技术与鼠伤寒沙门菌、鸡白痢沙门菌、甲型副伤寒沙门菌等多种血清型沙门菌和大肠杆菌、副溶血弧菌等常见病原无交叉反应,特异性良好。同一批次的不同试纸条和不同批次的试纸条对相同样品的检测结果基本一致,重复性良好。以粪便和鸡蛋壳为基质的加标试验回收率在94.7%~104.9%之间,回收率良好。结果表明,基于金纳米颗粒的肠炎沙门菌SERS免疫层析快速检测技术灵敏度较高,特异性强,重复性好,能弥补传统胶体金试纸条无法定量的不足,可用于肠炎沙门菌的快速定量检测。

裂解性噬菌体对肉仔鸡感染肠炎沙门菌的治疗效果

旨在研究裂解性噬菌体S13-21对感染肠炎沙门菌肉仔鸡治疗效果及其对肉仔鸡生长性能、抗氧化能力、细胞因子及免疫球蛋白含量的影响。选用1日龄AA肉仔鸡72只,饲养至4日龄时随机分为4组,每组6个重复,每个重复3只鸡,即空白对照组(C)、沙门菌感染组(S)、噬菌体治疗组(S+P)和抗生素治疗组(S+A)。采用腹腔注射方式对S组、S+P组和S+A组肉仔鸡感染沙门菌,攻毒剂量为200μL·只^(-1)(1.0×10^(9)CFU·mL^(-1)),6 h后对S+P组和S+A组肉仔鸡进行治疗,按腹腔注射方式噬菌体剂量1 mL·只^(-1)(1.0×10^(12)PFU·mL^(-1)),抗生素剂量200μL·只-1(硫酸庆大霉素,800 IU·只^(-1)),连续治疗7 d,间隔12 h,治疗结束后第5天按重复称重并从每组随机选取6只屠宰取样。结果表明:1)试验结束时,S组肉仔鸡存活率仅为59%,与C组相比,体重极显著降低(P<0.01),脾重量增加但是差异不显著(P>0.05),血清和各组织T-SOD和GSH-Px活性极显著下降(P<0.01),MDA和细胞因子含量极显著增加(P<0.01)。2)与S组相比,S+P组肉仔鸡存活率提高25%以上,回肠和盲肠沙门菌载菌量极显著下降(P<0.01),除回肠部分指标外,血清和其余各组织中抗氧化指标、细胞因子和免疫球蛋白含量与S组相比差异显著(P<0.05)。综上所述,肉仔鸡感染肠炎沙门菌可破坏肠道黏膜屏障,造成生长受阻、组织损伤及全身性炎症反应,通过噬菌体治疗可专一性清除机体肠炎沙门菌感染,显著提高机体抗氧化能力和肠道黏膜屏障,缓解氧化应激和炎症反应,具有较强的保护作用,在一定程度上能够提高存活率,恢复肉仔鸡生长。

毒力岛基因SPI-1和SPI-2双缺失对肠炎沙门菌形态、毒力和免疫原性影响的研究

沙门菌毒力岛基因SPI-1和SPI-2分别编码Ⅲ型分泌系统(T3SS)中的T3SS-1和T3SS-2,T3SS可以将沙门菌分泌的效应蛋白转运至宿主细胞中。为分析毒力岛基因SPI-1和SPI-2缺失对肠炎沙门菌生物学特性、致病性和免疫原性的影响,本实验室前期构建了肠炎沙门菌SM6株毒力岛基因SPI-1和SPI-2双缺失株(SM6ΔT3SS),本研究通过绘制亲本株和缺失株的生长曲线,采用扫描电镜观察二者的形态,并测定二者对人结直肠腺癌细胞(Caco-2细胞)的黏附性与侵袭力。生长曲线结果显示,培养5 h时,SM6ΔT3SS株的生长速度显著快于亲本株SM6(P<0.05),自6 h起SM6ΔT3SS株的生长速度极显著快于SM6株(P<0.01)。扫描电镜观察可见,亲本株菌体多单个存在,而缺失株则出现明显的菌体聚集,且其表面被类似胶状物包裹。黏附性与侵袭力结果显示,与亲本株SM6相比,缺失株SM6ΔT3SS黏附及侵入Caco-2细胞的数量均极显著下降(P<0.001、P<0.001)。上述结果表明,毒力岛基因SPI-1和SPI-2的缺失可能改变了细菌的生长、代谢、分泌及或结构等特征,导致沙门菌的生物学特性的改变及降低了其对肠上皮细胞的黏附性和侵袭力。以1×10^(7)cfu/100μL的剂量经腹腔注射感染7日龄SPF鸡,并于感染后不同时间检测缺失株在SPF鸡盲肠、肝脏和脾脏的载菌量;将缺失株以1×10^(7)cfu/100μL的剂量经腹腔注射免疫7、21和35日龄鸡,在首免后不同时间采血,采用间接ELISA检测各组鸡血清中的IgG抗体水平;在首免后42 d时经腹腔注射1×10^(9)cfu/100μL/只的沙门菌SM6株,并于攻毒后7 d和14 d采血连同免疫期间采集的血一起采用间接ELISA检测各组鸡血清中IL-4和IFN-γ的分泌水平。在攻毒后14 d内观察并统计各组鸡的临床症状及死亡率。攻毒后7 d各组均剖杀部分鸡,采集其盲肠和肝脏组织制备病理切片观察各组织病理变化,评价该缺失株的免疫效力。载菌量结果显示,感染后2 d,缺失株在鸡脾脏和肝脏中的载菌量极显著低于亲本株(P<0.001),但在盲肠中的载菌量极显著高于亲本株(P<0.01);感染后4 d,缺失株在肝脏和盲肠中的载菌量极显著和显著低于亲本株(P<0.01、P<0.05);感染后8 d,缺失株在脾脏中的载菌量极显著低于亲本株(P<0.01),且两组鸡在上述脏器中的载菌量均降至较低水平;抗体和细胞因子的ELISA检测结果显示,首免后14 d,免疫组鸡的抗体水平显著高于对照组(P<0.05)。从免疫后21 d,免疫组鸡的抗体水平均极显著高于对照组鸡(P<0.001);免疫期血清中IFN-γ的分泌水平无明显变化,IL-4的含量在免疫后42 d极显著高于对照组(P<0.01);攻毒后鸡血清中IFN-γ和IL-4的含量均显著高于对照组(P<0.05)。整个实验期SM6ΔT3SS免疫组鸡均存活且无明显的临床症状、无死亡,肝脏和肠黏膜仅出现轻微病理损伤,对照组鸡组鸡攻毒后14 d内死亡率达80%,肝脏和肠黏膜均出显较明显的病变。上述结果表明,SM6ΔT3SS株能够刺激SPF鸡产生较高水平的体液免疫和细胞免疫反应,对SPF鸡的致病性降低,并对鸡有较好的免疫保护效力。本研究为阐明沙门菌致病机制和研发安全有效的沙门菌减毒活疫苗奠定了良好基础,也为沙门菌病的防控提供了新思路。

1株引起食物中毒事件的肠炎沙门菌定量蛋白质组学分析

目的 基于蛋白质组学,深入揭示1株引起食物中毒事件的肠炎沙门菌21A的分子特征,从而更好地防控食源性疾病的发生。方法 利用定量蛋白质组学技术对肠炎沙门菌株21A进行分析,使用Tims TOF Pro仪器在数据非依赖采集模式下采集质谱数据,利用MSstats软件完成肽段与蛋白的定量以及差异蛋白统计,并对差异表达蛋白的生物学功能进行GO、KOG功能富集、KEGG通路富集分析与CAZY注释、互作分析。结果 菌株21A中共鉴定出3183种蛋白质,其中差异蛋白300种。GO分析表明,差异蛋白主要与催化、结合、细胞内过程和代谢有关;KOG和KEGG分析显示,差异蛋白主要富集在6种代谢通路中;CAZY分析发现,37.96%的蛋白质为糖苷水解酶。结论 本研究揭示了肠炎沙门菌株21A的蛋白质组学特征,该菌株在入侵和感染过程中采用多种生存策略,包括增强毒力因子表达,增加脂质降解和诱导铁获取等。对代谢相关蛋白质的深入分析,有助于深入了解该菌的传播与感染机制,更好地防控食源性疾病的发生。

肠炎沙门菌疫苗株Sm24/Rif12/Ssq在蛋鸡体内的定殖规律

为明确肠炎沙门菌疫苗株Sm24/Rif12/Ssq在蛋鸡体内的定殖规律,选取50只海兰褐蛋鸡,于0日龄(出雏当日)滴口免疫1羽份(1×10~8 CFU/只)Sm24/Rif12/Ssq疫苗(首免),分别于免疫后1、3、5、7d采集咽拭子、泄殖腔拭子以及盲肠和肝脏样品测定疫苗株定殖水平,并于免疫后30 d采集血液测定抗体水平;随后选取30只经过首免的6周龄蛋鸡和30只经过二免的16周龄蛋鸡,分别滴口免疫1羽份(1×10~8 CFU/只)Sm24/Rif12/Ssq疫苗,即为二免和三免,于免疫后4 d采集泄殖腔拭子,测定疫苗株定殖水平,并于免疫后30、60、100 d采集血液测定抗体水平。结果显示,首免后咽拭子、泄殖腔拭子和盲肠样品中疫苗株载量呈先上升后下降趋势,疫苗株核酸检出率60%~100%,肝脏样品中疫苗株载量呈逐步下降趋势,疫苗株核酸检出率50%-90%,但未从血液样品中检出抗体;二免和三免后泄殖腔拭子中疫苗株核酸检出率为17%~20%,血清抗体阳性率呈逐步上升趋势。结果表明,Sm24/Rif12/Ssq疫苗株易定殖于0日龄蛋鸡肠道,而较难定殖于免疫后的高日龄蛋鸡肠道,并可于加强免疫后诱导蛋鸡产生可检测抗体。本研究阐明了Sm24/Rif12/Ssq疫苗株在蛋鸡体内定殖和抗体产生规律,为疫苗免疫后效果评估奠定了基础。

维持性血液透析患者感染肠炎沙门菌导致脾脏脓肿1例报道

血行感染是维持性血液透析(MHD)患者仅次于心血管事件导致住院和死亡的重要原因^([1]),其中,血管通路引起的血行感染占MHD患者所有感染的28%^([2])。MHD患者血管通路感染中最常见的微生物约70%是革兰氏阳性球菌,尤其是金黄色葡萄球菌。革兰氏阴性杆菌导致的血管通路病例仅占10%~20%^([3])。肠炎沙门氏菌是肠杆菌科的杆状革兰氏阴性菌属。

不同来源肠炎沙门菌耐药特征及遗传多样性特点的研究

目的分析福建地区腹泻病人和表观健康人群携带的肠炎沙门菌耐药特征及遗传多样性特点。方法收集福建地区腹泻患者和表观健康人群携带的肠炎沙门菌,采用K-B法进行药敏实验,PCR扩增毒力基因,多位点融数目亭联重复序列分析(multiple-locus variable-number tandem repeat analysis,MLVA)技术进行分子分型,并应用BioNumerics软件进行聚类分析。结果福建地区肠炎沙门菌除对CIP和NOR 100%敏感外,对其他8种药物(AMP、AMC-AC、CTX、CRO、CHL、NAL、SXT和TET)均有不同程度的耐药。腹泻患者分离株的多重耐药率(33.33%)高于表观健康人群分离株(15.22%)。10种毒力基因(sitC、hilA、sseL、sifA、mgtC、siiE、sopB、stn、spvB和pefA)均有检出,且其在腹泻患者和表观健康人群分离株中分布不同。毒力基因谱型54个(VP1~VP54),其中VP3只存在于表观健康人群分离株,且为其优势谱型,占比为13.04%;VP4和VP5只存在于腹泻患者分离株;VP4和VP3、VP1均为腹泻患者分离株中的优势谱型,占比均为11.90%。所有分离株共分为40个MLVA型(MT0001~MT0040)、2个主要基因簇(clusterⅠ和clusterⅡ),其中clusterⅡ包含的菌株均来自表观健康人群;clusterⅠ包含的菌株来自及腹泻患者和表观健康人群。结论福建地区肠炎沙门菌呈现遗传多态性,腹泻患者分离株的耐药性和致病力均高于表观健康人群分离株。

禽源肠炎沙门菌的分离鉴定及耐药性与致病性分析

【目的】为合理防控肠炎沙门菌感染,本试验针对四川4个地区禽源肠炎沙门菌的感染情况开展研究。【方法】通过细菌分离培养、生化试验及分子学方法进行细菌分离鉴定;进一步通过K-B法检测分离菌对14种抗菌药物的敏感性,并对分离菌进行耐药基因、毒力基因及致病性研究。【结果】细菌分离培养结果显示,分离菌符合沙门菌的培养特性,镜检为革兰氏阴性短杆菌,生化鉴定结果均符合沙门菌生化特性。沙门菌特异性毒力靶标基因invA和肠炎沙门菌特异性毒力靶标基因sdfI PCR扩增结果显示,获得大小分别为571和304 bp的目的条带,与预期大小相符,确认分离到10株肠炎沙门菌,总分离率为2.8%(10/361)。药敏试验结果显示,分离菌对氨基糖苷类、磺胺类、多肽类抗菌药耐药率较高;氨基糖苷类药物中,对庆大霉素和链霉素的耐药率分别为50%(5/10)和70%(7/10);磺胺类药物中,对复方新诺明和磺胺异噁唑的耐药率分别为40%(4/10)和100%(10/10);多肽类药物中,对多黏菌素B耐药率达90%(9/10);分离菌对喹诺酮类药物均表现敏感,对头孢类、β-内酰胺类和四环素类较敏感。分离菌普遍存在多重耐药现象,14种耐药基因中检出四环素类耐药基因tetB(40%)和tetM(90%),氨基糖苷类耐药基因aadA 1(80%)和aph(3’)-Ⅱa(90%),β-内酰胺类耐药基因bla TEM-1(100%),磺胺类耐药基因sul 3(100.0%);6种毒力相关基因中,ssaQ(SPI-2)、mgtC(SPI-3)、spi 4 D(SPI-4)、pipA(SPI-5)、invA(SPI-1)和spvB的检出率分别为60%、80%、70%、60%、100%和80%。致病性试验结果显示,小鼠灌胃分离菌菌液24 h后出现死亡,剖检及病理切片观察到脏器淤血、出血,细胞变性等,肠段出现绒毛断裂脱落。【结论】本研究成功分离得到10株禽源肠炎沙门菌,分离菌具有较强耐药性和多重耐药现象,毒力基因检出率较高且有较强的致病性,本研究结果可为肠炎沙门菌病的防控及临床治疗提供参考。

胫骨平台骨折患者伤口分泌物中分离出肠炎沙门菌1株

海南医学院第一附属医院临床微生物实验室于2022年6月16日从左胫骨平台骨折患者伤口分泌物中分离培养出1株革兰阴性杆菌,经全自动微生物鉴定药敏分析系统、血清凝集和基质辅助激光解吸飞行时间质谱等鉴定为肠炎沙门菌。根据病原学检测及药敏试验结果,序贯给予该患者美洛培南1.0 g q8h静脉点滴9 d,哌拉西林钠/他唑巴坦钠4.5 g q6h静脉点滴5 d,美洛培南1.0 g q8h静脉点滴19 d,万古霉素1.0 g q12h静脉点滴10 d,以及左胫骨平台感染清创+引流术后,患者伤口处未见明显渗血渗液且感染指标未见明显异常,最终治愈出院。

肠炎沙门菌greB基因缺失株构建及其生物学特性初步研究

目的研究旨在探究转录延长因子GreB对肠炎沙门菌致病力相关生物表型的影响。方法以肠炎沙门菌ATCC13076为亲本株,利用λ-Red重组系统构建ΔgreB基因缺失株及其回补株,测定肠炎沙门菌及其衍生菌在多种抑菌环境中生存能力、对细胞感染能力及在雏鸡体内繁殖动态,并采用RNA-seq检测和分析GreB对肠炎沙门菌致病力相关基因转录的影响。结果结果显示,greB基因缺失对肠炎沙门菌体外生长、生物被膜形成、SDS和高渗透压抵抗力无显著影响,但ΔgreB基因缺失株抗氧化能力显著提升;greB基因缺失减弱肠炎沙门菌对HCT116细胞入侵;与亲本株相比,ΔgreB基因缺失株在雏鸡肝脏、脾脏和肺脏的载量均下降,对雏鸡致病力下降约4倍;greB基因缺失导致肠炎沙门菌85个基因差异表达,其中34个基因表达下调,主要包括fim操纵子和inv操纵子,51个基因表达上调,主要包括pdu操纵子和ssa操纵子。结论greB基因缺失引致肠炎沙门菌多种毒力相关基因差异转录表达,增强肠炎沙门菌抗氧化能力,但降低其对上皮细胞侵袭力和动物致病力。

2019—2021年徐州市肠炎沙门菌的耐药性与分子分型

目的 了解徐州地区肠炎沙门菌的耐药情况,为食源性疾病的溯源及临床用药提供依据。方法 采用最低抑菌浓度法(MIC),检测2019—2021年徐州地区各监测哨点分离的40株肠炎沙门菌对16种抗生素的敏感性与耐药性,使用脉冲场凝胶电泳(pulsed field gel electrophoresis, PFGE)技术进行分子分型。结果 40株肠炎沙门菌仅对阿米卡星(AMK)全部敏感,对复方新诺明、头孢他啶、头孢西丁敏感≥90%;对萘啶酸(NAL)的耐药率达92.50%,耐药率依次是氨苄西林(AMP)90.00%、多粘菌素E(CT)和头孢唑林(CFZ)85.00%、氨苄西林/舒巴坦(AMS)与链霉素(STR)80.00%、头孢噻肟(CTX)35.00%、四环素(TET)30.00%。耐药谱可分为21种,耐≥4种抗生素的占85.00%(34株)。40株肠炎沙门菌PFGE分型共分为22种带型,带型之间的相似度为55.10%~100.00%,有2个优势带型(各6株,各占15.00%)。结论 2019—2021年徐州地区肠炎沙门菌耐药较严重且耐药多元,应注意临床合理用药,密切监控耐药谱变化。

肠炎沙门菌感染对蛋鸡肝脏ATP5G3、ND2基因表达的影响

肠炎沙门菌是引起急性胃肠炎的主要病原菌,感染后会出现发热、腹泻和呕吐等症状,属于无宿主特异性但是具有侵害性的病原菌。该病原菌不仅能使家禽死亡造成严重的经济损失,还会使人食物中毒,引发公共卫生安全。为探讨ATP5G3和ND2基因对蛋鸡肠炎沙门菌感染后的表达调控,本试验选取17周龄海兰褐蛋鸡50只,随机分为2组,试验组接种0.3 ml肠炎沙门菌菌液,对照组接种等量PBS。感染后1、3、5、7、14 d分别采集照组和试验组肝脏组织,检测ATP5G3和ND2在肝脏中的表达变化。结果表明,海兰褐鸡感染肠炎沙门菌后,试验组ATP5G3和ND2的表达量均在5 dpi开始高于对照组,表现为差异极显著(P<0.01)。初步揭示了肠炎沙门菌在宿主感染后影响ATPase基因的表达,进而影响机体能量代谢。

闽北地区鸡源肠炎沙门菌的分离鉴定与致病性分析

为了解福建闽北地区鸡源肠炎沙门菌(SE)的生物学特性及致病性,从该地区肉鸡规模化养殖场鸡群采集疑似病例,通过细菌分离培养、生化特征检测和PCR鉴定进行SE的分离鉴定,并对分离菌进行耐药表型检测和动物感染致病性研究。分离菌耐药表型检测结果显示,经分离鉴定得到的11株鸡源SE,对氨基糖胺类和β-内酰胺类耐药比较普遍,且多重耐药菌株占比高达81.81%;致病性检测结果显示,攻毒组鸡只在感染后24 h开始出现死亡现象,3~6 d为死亡高峰期;剖检结果显示,攻毒组鸡只肝脏淤血肿大,肠道组织充血、出血,肠壁变薄;病理切片观察显示,攻毒组鸡只肝脏和肠道组织出现大量炎性细胞浸润、细胞坏死的情况;细胞因子表达水平的检测结果显示,SE感染诱导鸡只肝脏和肠道组织促炎症细胞因子IL-1β、IL-6、IFN-γ、TNF-α的表达水平极显著(P<0.01)或显著(P<0.05)升高,而盲肠组织紧密连接蛋白ZO-1和分泌型免疫球蛋白A(sIgA)的含量极显著(P<0.01)或显著(P<0.05)下降。表明本地区鸡群感染的沙门菌血清型以SE为主,具有较强的致病力,分离株对氨基糖胺类和β-内酰胺类耐药比较普遍,且多重耐药菌株占比高。本研究结果可为该地区肠炎沙门菌病的防控及临床治疗提供参考。

肠炎沙门菌种特异性PCR及对感染鸭快速检测

根据GenBank登录的肠炎沙门菌(SE)种特异性DNA序列,设计合成了1对能特异性扩增293 bp DNA片段的引物,首次建立了SE的种特异性聚合酶链式反应(PCR)诊断方法。该方法仅需10 h即可获得结果且只能特异性扩增SE,而对照菌株的扩增结果均为阴性;检测SE的最低DNA模板量为50 ng/L,最少检测到的细菌数为19CFU/mL。对10只SE人工感染死亡雏鸭的心、肝和粪便的检测结果与细菌分离的结果符合率为100%,而对脾、脑、法氏囊的检测阳性率极显著(P<0.01)高于细菌分离率;应用该技术对临床送检的228只疑似SE感染死亡鸭病例检测结果也显著高于细菌分离法。研究结果表明,建立的PCR方法检测SE具有较好的特异性和敏感性,比传统的细菌分离鉴定更加快捷、准确,可用于SE感染疑似病例的检测及其分子流行病学调查。

肠炎沙门菌hcp基因对生物被膜形成的影响分析

细菌生物被膜的形成主要受细菌AI-2群体感应和菌体表面黏附素调控和影响,本实验室前期研究表明肠炎沙门菌SPI-19编码的hcp基因缺失能下调SEF14菌毛和鞭毛的表达。为研究hcp基因对肠炎沙门菌生物被膜形成能力的影响和潜在机制,本实验通过结晶紫染色法测定肠炎沙门菌两个代表株50336株和SD-2株的hcp突变缺失株及相应回补株的生物被膜形成能力,并与sefA和fliC缺失突变株的生物被膜形成能力对比显示,50336Δhcp和SD-2Δhcp与相应亲本株相比生物被膜形成能力分别降低67%和69%。而50336ΔfliC和SD-2ΔfliC与相应亲本株相比生物被膜形成能力分别降低49%和54%,sefA缺失对生物被膜形成无显著影响。此外,实验还通过对野生株及hcp缺失株AI-2分子活性检测显示,AI-2群体感应系统并未受到显著影响。本研究结果表明,hcp基因缺失显著影响肠炎沙门菌生物被膜的形成。

脉冲场凝胶电泳在肠炎沙门菌食源性疾病溯源中的应用

目的对2006年广州地区食源性疾病中分离的肠炎沙门菌进行分子分型,探讨广州地区肠炎沙门菌的分子型别和多态性,为食源性疾病溯源及致病菌数据库的建立提供依据。方法采用限制性内切酶XbaI,对2006年分离到的菌株进行PFGE分子分型,使用BioNumericsVersion4.0软件(使用Dice系数和UPGMA法)对菌株进行聚类分析,并与深圳市的肠炎沙门菌PFGE型别进行比较。结果所有74株肠炎沙门菌均得到一致的PFGE克隆型,表明两次不同的食源性疾病均由同一PFGE型引起。广州与深圳的肠炎沙门菌PFGE图谱的比较表明,两地食源性疾病分离株具有很近的亲缘关系。结论PFGE分子分型与流行病学资料紧密结合可增强对肠炎沙门菌食源性疾病的溯源和预警。

肠炎沙门菌污染鸡蛋的途径

近20年来,肠炎沙门菌(Salmonella Enteritidis,SE)是引起人类食源性沙门菌病大流行的主要病原菌之一,其传播的主要媒介是被污染的鸡蛋。鸡蛋的外壳表面和内部均可被污染。肠炎沙门菌通过两种可能途径造成鸡蛋内部污染,一是细菌穿过蛋壳造成鸡蛋的间接污染,二是细菌随着带菌生殖器官分泌物造成蛋产出前内容物的直接污染。

肠炎沙门菌LAMP检测方法的建立

为建立一种能快速检测肠炎沙门菌(SE)的方法,本研究根据基因库中SE种特异性基因(sdfⅠ)的保守序列,设计一套特异性环介导等温扩增(LAMP)引物,建立了SE的LAMP可视化检测方法。该方法的敏感性可达100fg DNA,高于常规PCR方法100倍;全部反应可在1h内完成;可通过肉眼观察颜色直接判定结果;对其他常见病原体的检测结果均为阴性。结果表明建立的LAMP方法简便、快速、灵敏、特异,可用于SE感染的快速检测。

酸化和渗透压不同处理顺序对肠炎沙门菌失活的影响

为探讨酸化和渗透压不同处理顺序对肠炎沙门菌失活的影响,运用统计学模型模拟了最优处理条件下,肠炎沙门菌在不同初始接菌量下的失活过程。实验结果表明:在25℃和10 h内,先15%Na Cl再p H值4.5处理使肠炎沙门菌失活的效果大于相反顺序的处理、同时处理或者单独处理的效果。模拟结果表明:在最优处理条件下的各个阶段中,随着初始接菌量的增加,肠炎沙门菌分别达到0.986 4和0.993 9失活率时对应的失活时间的变异性逐渐降低。对于大量群体细菌,用确定性失活动力学一级模型拟合的D值是单一的定值;而对少量群体细菌,由于个体细胞本身的变异性,D值表现出较高的变异性,并且可用概率分布的形式表示。酸化和渗透压不同处理顺序的研究能为食品工业生产控制致病菌提供借鉴,且应用的统计学建模方法有助于从个体细胞的角度理解群体失活过程,提高风险评估的准确性。