儿童分离肠球菌表面蛋白基因的检测

目的探讨肠球菌表面蛋白基因(Esp基因)的表达与肠球菌致病性的相互关系。方法采用PCR检测自我院住院或门诊患儿分离的152株致病性肠球菌Esp基因。结果152株肠球菌中98株检出Esp基因,占64.5%;30株粪便分离的非致病性肠球菌均未检出Esp基因(P<0.01);粪肠球菌、屎肠球菌Esp基因检测阳性率分别为90.9%和28.1%,粪肠球菌明显高于屎肠球菌(P<0.01);152株致病肠球菌来自不同的感染部位,尿液、阴道分泌物、痰液、血液和脐分泌物标本Esp基因的阳性率分别为83.7%、55.6%、50.0%、43.0%和33.0%,住院患儿标本中分离的致病性肠球菌的Esp基因阳性率为75.0%,明显高于门诊患儿阳性率37.5%(P<0.001)。结论肠球菌的Esp基因在肠球菌对宿主细胞的黏附定植以及逃避宿主免疫清除方面起到重要的作用。

牛源粪肠球菌esp基因的表达及生物信息学分析

为了研究粪肠球菌表面蛋白基因(esp)对奶牛乳房炎致病性的影响,应用PCR技术扩增了部分牛源粪肠球菌表面蛋白基因(esp),构建了原核表达载体p ET-28a::esp,并在大肠埃希氏菌BL21中表达esp;利用生物信息学软件分析其编码氨基酸的基本理化性质。结果显示:实验成功构建了原核表达载体p ET-28a::esp,并在大肠埃希氏菌BL21中得到了高效表达,选取的部分esp编码的蛋白分子质量大小为110 ku左右,主要以可溶性形式存在;生物信息学分析得出选取的部分CDS长度为3 795 bp,编码1 207个氨基酸,其中含有108个潜在的磷酸化位点,存在抗原表位,跨膜结构可能存在区域为1~200位aa,不存在信号肽,有6个肽糖基化位点;预测其蛋白质二级空间结构以α-螺旋、无规则卷曲、β-折叠为主,而且比较发现esp在粪肠球菌中的无规则卷曲和β-折叠比在表皮葡萄球菌略多一些;esp编码的蛋白为酸性亲水性蛋白,等电点为9.67,脂肪系数为82.34,总平均亲水性为-0.713,不稳定指数为43.99,总共包括19 799个原子,分子式为C_(6132)H_(10027)N_(1741)O_(1848)S_(51),说明esp是一种抗原指数较高的亲水性蛋白,在原核系统能高效表达。