大肠癌细胞系Lovo中亚群(SP)细胞的分离培养和鉴定

目的:应用无血清培养液(SFM)培养Lovo细胞系,克隆分离具有干细胞样特性SP细胞.方法:应用SFM培养Lovo细胞,分离成球样生长的细胞群作为SP细胞,并通过有限稀释,分化,自我更新,含血清培养基(SSM)和SFM交替培养及Musashi-1化学染色方法来鉴定SP细胞.结果:Lovo细胞中约含有0.54%-0.62%的SP能够在无血清培养基中能够存活、增殖,形成悬浮的肿瘤细胞球;在SFM中加入血清可促使SP细胞分化;SP细胞可以连续传代,并可交替培养于SSM和SFM中,细胞形态无明显变化;SP细胞Musashi-1染色阳性.结论:应用SFM可从Lovo细胞中分离出极少量的具有干细胞特性的SP细胞.

干扰素-γ上调结直肠癌细胞系CEA表达的实验研究

背景与目的放射免疫治疗中肿瘤摄取标记抗体的量与肿瘤细胞靶位分子的表达量密切相关。本研究探讨不同浓度IFN-γ对结直肠癌细胞系CEA的诱导效应,以选择最适IFN-γ浓度上调结直肠癌细胞系CEA的表达及提高对131I-CL3结合率。方法取对数生长期结直肠癌细胞系LOVO和LS175T,实验组以终浓度为10、100、500、1000U/ml的IFN-γ诱导培养48h,对照组加入等量不含IFN-γ的培养液。各组2种细胞CEA的表达率及平均荧光强度(MFI)采用流式细胞仪(FACS)检测。结合法测定2种细胞诱导前后对131I-CL3的结合量(Ncpm)及结合率(BR)。细胞CEA表达率、MFI和BR的差异采用One-wayANOVA检验。结果LOVO与LS175T细胞CEA基础表达率分别为(75.6±6.8)%及(92.7±9.1)%,IFN-γ浓度在100U/ml以下时,LOVO细胞(F=2.689,P>0.05)及LS175T细胞(F=2.107,P>0.05)的CEA表达率均未见显著性增高。当IFN-γ浓度为500U/ml时,LOVO细胞CEA表达率(t=3.244,P<0.05)及LS175T细胞MFI(t=5.810,P<0.005)比对照组显著提高。IFN-γ浓度为500U/ml和1000U/ml两组之间,LOVO细胞CEA表达率(t=0.389,P>0.05)及LS175T细胞CEA表达率(t=0.113,P>0.05)未见显著差异。131I-CL3在LOVO与LS175T细胞的基础结合率分别为(22.1±2.4)%与(32.3±4.9)%。诱导后LOVO细胞增幅明显,倍增比(MR)为1.05～2.25倍,LS175T为1.11～1.56倍。在IFN-γ浓度为500U/ml时,LS175T细胞(t=4.988,P<0.01)及LOVO细胞(t=9.262,P<0.001)对131I-CL3的结合率均显著提高。结论IFN-γ可以上调结直肠癌细胞系CEA的表达,在一定范围内IFN-γ浓度与CEA表达率及对131I-CL3的结合量存在相关性。

人结肠癌细胞系中癌相关基因的表达及表型遗传修饰的影响

目的 观察DNA甲基化和组蛋白乙酰化对人结肠癌细胞系癌相关基因的表达和细胞周期的影响。方法 培养 2种结肠癌细胞系SW 1 1 1 6和Colo 32 0 ,分别以去甲基化制剂 5 氮脱氧胞苷 (5 aza 2′ deoxycytidine ,5 aza dC)和 (或 )组蛋白脱乙酰化酶 (histonedeacetylase ,HDAC)抑制剂trichostatinA(TSA)及丁酸盐干预细胞。提取细胞总RNA ,以RT PCR和定量RT PCR法研究抑癌基因p1 6 INK4A、APC、p2 1 WAF1 、p5 3和 p73以及癌基因c myc和c Ki ras、凋亡抑制基因survivinmRNA表达水平 ;并运用流式细胞术检测细胞周期变化。结果 正常情况下 ,SW 1 1 1 6和Colo 32 0细胞系中均有较弱的 p1 6 INK4A和APC表达 ;两种结肠癌细胞系 p2 1 WAF1 表达缺如 ,而 p5 3、p73和c myc、c Ki ras以及survivin均表达。以 5 aza dC干预后 ,p1 6 INK4A和APC表达增强 ,且不同的结肠癌细胞系表达增强最明显时 5 aza dC干预的时间与浓度不同。相反 p2 1 WAF1 仍无明显表达。值得注意的是这两个细胞系经TSA或丁酸盐处理后 ,p2 1 WAF1 转录水平显著上调。p5 3、p73、c myc、c Ki ras和survivin基因在干预前后表达无明显变化。另外 ,5 aza dC并不能改变细胞周期 ,而TSA或丁酸盐使细胞阻滞于G1 期。结论 两种人结肠癌细胞系中 ,p1

实时定量PCR测定大肠癌细胞系中ERCC1mRNA水平及草酸铂药物抵抗的关联性分析

目的分析草酸铂处理前后ERCC1 mRNA水平的变化,探讨肠癌细胞中ERCC1表达与草酸铂药物抵抗性的关联。方法以标准化肠癌细胞为研究模型,SRB细胞抑制率实验评价不同肠癌细胞对草酸铂的敏感性,实时定量PCR测定草酸铂处理前后的变化。结果不同肠癌细胞对草酸铂的敏感性不同。草酸铂处理前后ERCC1 mRNA水平变化不明显。无论草酸铂处理前后,IC50与ERCC1 mRNA水平呈正相关。结论肠癌细胞对草酸铂的敏感性与肠癌细胞中固有的ERCC1表达水平密切相关,可能作为预测草酸铂使用有效性与安全性的分子标志物。

Kail/CD82在不同转移潜能大肠癌细胞系的表达

目的:探讨Kail/CD82的表达与大肠癌转移潜能的相关性。 方法:采用免疫组织化学方法,检测Kail/CD82在大肠癌细胞系LoVo、HR8348、HCT116、HT29与SW480细胞的表达。 结果:Kail/CD82在LoVo、HR8348与HCT116细胞系呈低水平表达,在HT29与SW480细胞系则呈高水平表达。 结论:Kail/CD82的表达与结直肠癌细胞转移潜能密切相关。

EGF和受体FLT-1、FLK-1在大肠癌中的表达及siRNA沉默VEGF基因对大肠癌细胞系Caco-2、HT29、HCT116生物学特性的影响

目的研究VEGF和受体FLT-1、FLK-1在大肠癌组织中的表达和临床病理因素之间的关系;观察siRNA干扰VEGF基因对不同分化人大肠癌细胞系生物学特性的影响。方法应用免疫组织化学S-P法,检测82例大肠癌及14例大肠正常黏膜组织中VEGF和FLT-1、FLK-1的表达,分析大肠癌组织中FLT-1、FLK-1的表达与大肠癌临床病理参数之间的关系;以脂质体lip-2000为载体,用针对VEGF特异靶点的siRNA转染入3种不同分化人大肠癌细胞系Caco-2、HT29、HCT116后,免疫细胞化学S-P法、WesternBlot检测VEGF蛋白表达变化,MTT法检测对细胞增殖的影响;流式细胞技术检测细胞凋亡。结果①大肠癌组织VEGF和受体FLT-1、FLK-1阳性表达率显著高于正常大肠组织(P<0.05)。VEGF的表达在有无淋巴结转移组和不同的Duke分期中亦有显著差异(P<0.05)。FLT-1和FLK-1在大肠癌组织的阳性表达呈显著正相关,(r=0.457,P<0.05)。②VEGF-siRNA转染Caco-2、HT29、HCT116细胞后,免疫细胞化学结果显示:3种大肠癌细胞系的正常对照组,脂质体对照组及阴性错配对照组VEGF表达均呈深棕黄色强阳性表达,3组无明显差别;转染VEGF-siRNA组阳性细胞数均无明显减少,阳性细胞细胞浆呈浅棕黄色弱阳性表达。Westernblot结果显示:Caco-2、HT29、HCT116细胞VEGF-siRNA组细胞的蛋白条带亮度均明显低于正常对照组、脂质体对照组和阴性错配对照组,3种细胞的VEGF-siRNA组VEGF蛋白表达均较对照组明显下降。③MTT检测结果:与阴性对照组相比,3种细胞的VEGF-siRNA组细胞生长出现明显的抑制(P<0.05)。同一种细胞系VEGF-siRNA组中,不同时段(24h、48h、72h)肿瘤细胞增殖抑制率之间差异有统计学意义(P<0.05),且随着作用时间的增加,抑制率呈上升趋势,表明细胞生长抑制率在一定剂量范围内随时间的增加而增加,具有时间依赖性。同一时间阶段不同细胞(Caco-2、HT29、HCT116)的VEGF-siRNA组的抑制率之间差异有统计学意义(P<0.05)。④流式细胞术检测结果表明:与正常对照和阴性对照细胞组相比,Ca-co-2、HT29、HCT116细胞的VEGF-siRNA组,均出现明显亚二倍体峰,三种大肠癌细胞系VEGF-siRNA组的凋亡率显著高于正常对照组,两者比较差异有统计学意义(P<0.01)。结论 VEGF和受体FLT-1、FLK-1与大肠癌的发生密切相关,VEGF与大肠癌的预后有关。siRNA干扰VEGF基因能有效抑制人大肠癌细胞系VEGF蛋白表达,细胞增殖能力减弱,促进细胞凋亡。以VEGF基因为靶点,利用siRNA技术进行基因治疗有可能成为一种新的有效手段。

VEGFR_2siRNA腺病毒载体的构建及其对人结肠癌细胞系的影响

目的:构建血管内皮细胞生长因子受体2(VEGFR2)siRNA腺病毒载体,并研究其对结肠癌细胞系LOVOVEGFR2表达的影响.方法:首先构建含有VEGFR2siRNA的鼠U6载体(mU6-VEGFR2siRNA);利用HindⅢ与XbaⅠ双酶切将鼠U6载体启动子和VEGFR2siRNA克隆入无启动子穿梭载体promoterlesspShuttlevector,得到pShuttle-mU6pro-VEGFR2siRNA;将pShuttle-mU6pro-VEGFR2siRNA与腺病毒骨架质粒(pAdeasy-1)在BJ5183细菌中进行同源重组,得到PAdeasy-mU6Pro-VEGFR2siRNA;利用得到的重组腺病毒感染人结肠癌LOVO细胞系,观察VEGFR2siRNA对结肠癌细胞VEGFR2表达的影响.采用West-blot检测感染前后VEGFR2蛋白表达水平的变化.结果:成功构建血管内皮细胞生长因子受体2(VEGFR2)siRNA腺病毒载体,该载体显著抑制LOVO细胞中VEGFR2的蛋白表达水平(P<0.01).结论:构建的Adeasy-mU6pro-VEGFR2siRNA腺病毒能有效地抑制LOVO细胞中VEGFR2表达,从而为肿瘤的基因治疗打下基础,也为肿瘤血管抑制治疗提供了新思路.

γ-干扰素对人大肠癌细胞系的生长抑制作用和对细胞周期的影响

用人基因重组γ干扰素与三株人大肠癌细胞系LoVo、HR 8348、和HCI培养后,细胞呈现抑制性生长,细胞在细胞周期中的分布也同时发生改变,表现为G0/G1期细胞比例减少,S期细胞比例增高。细胞生长的抑制和细胞周期的改变随γ干扰素剂量增大(10—10~5U/ml)及作用时间延长(24—96小时)而增强。细胞在S期的堆积是细胞生长抑制的原因之一。

雷公藤内酯醇半合成衍生物对人结肠癌细胞系荷瘤小鼠肿瘤抑制作用的研究

目的:观察和评价雷公藤内酯醇的半合成衍生物(MC002)对人结肠癌HCT-8小鼠模型的肿瘤抑制作用。方法:用BALB/C裸小鼠接种人结肠癌HCT-8瘤株造成小鼠肿瘤模型,以MC002对荷瘤小鼠的相对肿瘤增殖率、瘤重、抑瘤率为指标评价MC002对小鼠的抑瘤作用。结果:MC002各剂量组瘤体积明显小于模型对照组,瘤重均显著降低,在1.5 mg.kg-1、1.0 mg.kg-1给药10次后T/C%均小于40%(P<0.05),且具有量效关系。结论:MC002能有效抑制人结肠癌HCT-8荷瘤小鼠体内肿瘤生长。通过深入研究MC002有可能发展成为一种新型抗癌药。

微小RNA-30b对直肠癌细胞系松软蛋白4及程度细胞凋亡基因4表达的影响

目的探讨微小RNA-30b对结肠癌细胞株松软蛋白4(Sox4)及程度细胞凋亡基因4(Pdcd4)表达的影响。方法用10%新生牛血清培养结肠癌HCT116和SW480细胞株,各分为干预组与模型组。p LVTHM/miR-30b慢病毒载体转染,细胞培养基培养6 h。用免疫印迹法与荧光定量PCR法对Sox4及Pdcd4表达进行测定。结果与模型组比较,干预组Sox4整合光密度值明显降低,干预组Pdcd4整合光密度值明显增高(P<0.01);与模型组比较,干预组Sox4蛋白表达较低,干预组Pdcd4表达增高(P<0.01)。结论 MicroRNA-30b能够显著降低直肠癌细胞系Sox4蛋白的表达。

腺病毒介导的人突变p27基因转染对人大肠癌细胞系的作用

目的 用人重组p2 7mt腺病毒感染大肠癌细胞株SW 480 ,研究p2 7mt对大肠癌细胞的抑制作用。方法 用重组腺病毒Ad -p2 7mt转染SW 480后 ,用Westernblot检测目的基因的表达 ;用流式细胞仪对转染细胞进行倍体分析 ,绘制生长曲线观察对细胞的生长抑制作用。结果 Ad -p2 7mt转染SW 480后 ,通过Westernblot分析发现p2 7在细胞中出现了高表达 ;PI染色流式细胞仪检测 ,77 9%的细胞阻滞于G0 /G1 期 ,而Ad -LacZ组及空白对照组分别为 2 5 5 7%和 2 5 2 9%(P <0 0 0 1) ;由生长曲线可以看出Ad -p2 7mt于 2 4h内对细胞就有明显的抑制作用 ( P<0 0 5 ) ,且持续时间长。结论 重组腺病毒能够有效转染p2 7mt基因进入SW480细胞内并获得了高表达 ;p2 7mt对细胞周期有明显的阻滞作用且对细胞的生长有明显的抑制作用。突变p2 7是一种细胞周期高效阻滞因子和高效生长抑制因子 ,为p2

半枝莲提取物对人大肠癌细胞系凋亡的影响

目的探讨半枝莲提取物(SBE)诱导人大肠癌细胞系(SW480、LoVo、HT-29)的凋亡作用及其可能机制。方法体外培养SW480、LoVo、HT-29细胞,以药物康复新、露蜂房作对照,应用MTT法和流式细胞术检测不同浓度SBE处理三种细胞48h后的抑制率、细胞凋亡率及周期变化;RT-PCR检测SBE处理后凋亡相关基因Bcl-2和Caspase-3mRNA表达。结果与康复新、露蜂房比较,SBE对三种细胞的抑制率和细胞凋亡率均呈剂量依赖性显著升高(P<0.01);S期细胞含量增多,出现S期阻滞;Caspase-3 mRNA表达亦显著上升,Bcl-2表达明显下降(P<0.01)。结论SBE具有诱导大肠癌细胞系凋亡和抑制增殖作用,作用强于康复新和露蜂房提取物。其机制可能与Caspase-3基因表达的上调及Bcl-2基因表达下降有关。

SOX7靶向ERK1/2/PD-L1通路抑制结直肠癌血管生成

目的探讨性别决定区Y框蛋白7(SOX7)对结直肠癌血管生成的影响及潜在作用机制。方法应用免疫荧光检测结直肠癌患者组织样本中SOX7表达水平,之后通过裸鼠、转染SOX7 mimic的人结直肠癌细胞系SW480细胞和人脐静脉内皮细胞(HUVEC)共培养进一步研究。用Western-blot验证SOX7与ERK1/2/PD-L1对结直肠癌细胞的相关蛋白表达的影响。用CCK8检测SOX7与ERK1/2/PD-L1对HUVEC增殖的影响。通过体外内皮细胞成管实验测定SOX7与ERK1/2/PD-L1对肿瘤血管生成的影响。结果SOX7在人结直肠癌组织中表达被抑制(P<0.01),同时SOX7的过表达抑制了小鼠体内肿瘤生长(P<0.01)。SW480细胞中SOX7的过表达抑制了ERK1/2、c-Jun的表达,并在ERK1/2的激动剂Senkyunolide I的作用下上调了SW480细胞的ERK1/2、c-Jun蛋白表达(P<0.01),逆转了SOX7对SW480细胞中ERK1/2、c-Jun蛋白表达的影响(P<0.01)。HUVEC中SOX7抑制了PD-L1、V-EGFR2、p-PI3K、HIF-1α的蛋白表达,Senkyunolide I上调了HUVEC的PD-L1、V-EGFR2、p-PI3K、HIF-1α的蛋白表达,并逆转了SOX7对HUVEC中上述相关蛋白表达的影响(P<0.01)。PD-1/PD-L1 Inhibitor 3抑制了PD-L1、V-EGFR2、p-PI3K、HIF-1α的蛋白表达,SOX7过表达在PD-1/PD-L1 Inhibitor 3的影响下并没有表现出抑制作用。CCK8实验结果显示SOX7过表达显著抑制了HUVEC的增殖能力,Senkyunolide I作用下的两组HUVEC增殖能力较SOX7 NC组与SOX7 mimic组明显上升,PD-1/PD-L1 Inhibitor 3作用下的两组HUVEC增殖能力较SOX7 NC组与SOX7 mimic组明显下降,以上均有明显统计学差异(P<0.01)。成管实验结果显示SOX7过表达抑制了HUVEC的血管生成,Senkyunolide I强烈加速了血管生成,而PD-1/PD-L1 Inhibitor 3血管生成则被显著抑制,以上均有明显统计学差异(P<0.01)。结论SOX7通过ERK1/2/PD-L1通路抑制结直肠肿瘤的增殖和血管生成,SOX7可能是晚期CRC患者临床治疗中潜在的抗血管生成靶点。

阿帕替尼和5-氟尿嘧啶单药及联合对肠癌细胞系HT-29的促调亡作用

目的观察阿帕替尼(Apatinib,Apa)和5-氟尿嘧啶(5-Fluorouracil,5-Fu)分别在单药、联合情况下对肠癌细胞系HT-29的增殖抑制及促凋亡作用,并研究其作用机制是否与信号通路磷脂酰肌醇3-激酶(phospholipid inositol 3-kinase,PI3K)/蛋白激酶B(protein kinase B,Akt)相关。方法将细胞分为对照组(加入二甲基亚砜,dimethyl sulfoxide,DMSO)、阿帕替尼组(80μmol·L^-1 Apa)、5-Fu组(100μmol·L^-15-Fu),联合组(80μmol·L^-1 Apa+100μmol·L^-15-Fu)。给药48 h后,用四甲基偶氮唑蓝(Methyl Thiazolyl Tetrazolium,MTT)法检测不同浓度Apa及5-Fu对细胞增殖的影响;用流式细胞术检测Apa及5-Fu对细胞凋亡的影响;用克隆形成实验检测Apa及5-Fu对细胞克隆形成能力的影响;用蛋白质印迹法(Western blot)检测Apa及5-Fu对PI3K、磷酸化磷脂酰肌醇3-激酶(phosphorylated phospholipid inositol 3-kinase,p-PI3K)、Akt、磷酸化蛋白激酶B(phosphorylated protein kinase B,p-Akt)蛋白表达的影响。结果Apatinib 80μmol·L^-1+5-Fu 100μmol·L^-1联合组细胞增殖抑制率提高最显著,此时对照组、阿帕替尼组、5-Fu组和联合组细胞增殖抑制率分别为0%,(0.25±0.08)%,(0.40±0.04)%,(0.74±0.02)%;细胞凋亡率分别为(3.00±1.20)%,(41.60±2.15)%,(43.90±1.80)%,(56.10±1.50)%;细胞克隆数分别为(88.33±3.06),(61.71±1.72),(57.75±4.21),(36.12±2.16)个。阿帕替尼组、5-Fu组、联合组的上述指标与对照组比较,差异均有统计学意义(P<0.05),联合组的上述指标与阿帕替尼组、5-Fu组比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。对照组、阿帕替尼组、5-Fu组、联合组细胞p-Akt蛋白表达量分别为1.05±0.10,0.10±0.01,0.80±0.08,0.11±0.01;p-PI3K蛋白表达量分别为0.92±0.06,0.61±0.10,1.01±0.11,0.80±0.05。阿帕替尼组、联合组的上述指标与对照组、5-Fu组比较,差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论Apa及5-Fu单药及联合均能以浓度依赖的方式抑制肠癌HT-29细胞系增殖。Apa可通过抑制PI3K/Akt的信号通路传导,诱导肠癌细胞凋亡。Apa联合5-Fu具有协同促进肠癌细胞凋亡的作用。

IL-24融合蛋白表达载体的构建及其对人小肠癌细胞的生长抑制作用

目的:构建人白细胞介素-24(IL-24)基因的表达载体并在大肠杆菌中表达．研究IL-24融合蛋白对人小肠癌细胞(HIC)的生长抑制作用．方法:用PCR从质粒TRAP-hIL-24中扩增人 IL-24 cDNA片段,并将该片段插入DGEX-KG 原核表达载体中,实现插入基因的融合表达．用SDS-PAGE和Western blot对表达产物进行鉴定．提取并纯化IL-24融合蛋白,以不同浓度与 HIC细胞共培养72 h,同时设立相应浓度梯度的GST蛋白组、HIC细胞对照组及空白孔,采用MTT法检测各组人小肠癌细胞的体外增殖结果:酶切结果证实,成功地构建了pGEX- KG-IL-24原核表达载体,并在大肠杆菌中获得稳定的表达,表达产物的相对分子质量(Mr) 同预期值相一致,融合蛋白为Mr53 000,GST 蛋白为Mr29 000．IL-24融合蛋白以浓度依赖性的关系抑制HIC细胞的生长,并且在20和40 mg／L时的抑制率明显高于GST蛋白．结论:成功地构建了重组表达载体pGEX-KG- IL-24,并在E.coli BL21中表达．IL-24融合蛋白对HIC细胞生长有抑制作用．

中药长必安对人大肠癌细胞CD_(44)表达的意义

目的探讨中药长必安对人大肠癌细胞表面CD44 表达的影响。方法按长必安含药小鼠血清作用浓度 ,将两株大肠癌细胞各自分别分成低、中、高三组 ,同时设阴性对照组、阳性对照组和长必安与5 -Fu联合用药组。将FITC标记鼠抗人CD44 抗体与上述各组细胞共同孵育后 ,用流式细胞仪检测各组细胞表面CD44 阳性百分率。结果中药长必安作用的各组细胞其CD44 的阳性率较阴性对照组和阳性对照组都有显著下降。结论长必安不仅能抑制大肠癌细胞的体外生长 ,还能有效地降低大肠癌细胞表面的CD44 表达 ,提示在临床应用中 ,长必安在直接抑制肿瘤的同时 ,还能调节机体的免疫应答和免疫状态。

野生型p53基因抑制人结肠癌细胞的体内抑瘤效应观察

目的研究人野生型p53基因对人结肠癌SW1116细胞生长的影响。方法采用电穿孔法将正向携带有野生型p53基因cDNA的重组反转录病毒质粒导入有p53基因突变的人结肠腺癌SW1116细胞,筛选带外源p53基因的G418抗药性SW1116细胞克隆,对其进行生长速度、软琼脂集落形成及裸鼠成瘤等方面的检测,分析其生物学特性变化。结果导入人野生型p53基因使人结肠腺癌SW1116细胞的生长速度明显减慢(P<0.05或0.01)、软琼脂集落数量明显较对照组减少(P<0.05或0.01),移植瘤体积较对照组明显小(P<0.05)。结论人野生型p53基因对人结肠腺癌SW1116细胞有明确的抑瘤效应。

二烯丙基二硫对人结肠癌SW480细胞增殖抑制的作用

目的探讨二烯丙基二硫(diallyl disulfide，DADS)对人结肠癌细胞系SW480增殖抑制作用及机制。方法以人结肠癌SW480细胞为实验研究对象，通过MTT法测定DADS对SW480细胞的增殖抑制效应，采用HE染色及流式细胞仪检测药物作用前后细胞形态学及细胞周期分布等方面的变化。结果MTT法测定结果显示DADS可抑制SW480细胞增殖。呈浓度依赖性；形态学观察发现DADS诱导SW480细胞呈现出成熟分化的特征；随着DADS浓度加大，阻滞在G2／M期的细胞数目增多，亚二倍体峰逐渐增高。结论DADS可抑制人结肠癌SW480细胞增殖，使癌细胞阻滞于G2/M期。

大肠癌细胞线粒体DNA D-环区的突变

目的:研究大肠癌细胞线粒体DNA D-环区突变情况. 方法:用PCR与直接测序相结合的方法,对比分析三株大肠癌细胞系和1例原代培养的正常肠上皮细胞的线粒体DNA D-环区的突变位点. 结果:三株大肠癌细胞系和1例正常的肠上皮细胞的线粒体DNA D-环区均存在不同程度的点突变,其中72位C→T, 73位A→G,16298位C→T,16519位T→C这四个突变位点在三株癌细胞和正常肠上皮细胞中均检测到,考虑为多态性变化.在SW480和LOVO细胞线粒体中检测到16224位T→C、16311位T→C两个相同的突变位点, 在SW480和HT29细胞线粒体中检测到114位C→T、498 位C→T、16234位C→T三个相同的突变位点. 结论:大肠癌细胞线粒体DNA D-环区具有多态性和突变性,特征性的突变可能与大肠癌的易感性洧关.

结肠癌LS174细胞培养上清对树突状细胞诱导CTL杀伤效应的影响

目的:观察结肠癌细胞对人单个核细胞源树突状细胞(DC)诱导的CTL杀伤效应的影响,探讨其在人体的免疫逃避机制.方法:人外周血分离单个核细胞以GM-CSF和IL-4培养DC,用结肠癌LS174细胞的提取物诱导DC,并激活T淋巴细胞抗肿瘤效应,在此不同过程中,体系中加入人结肠癌细胞系LS174的培养上清液.以正常培养体系为对照,通过计算细胞毒杀伤率检测不同条件下DC激活同种异体T淋巴细胞杀伤肿瘤细胞的能力.结果:LS174细胞培养上清液作为条件培养的DC,在DC培养的早期阶段对DC激活过程有明显的影响(在DC培养的第1d加入肿瘤培养上清组,第3d加入肿瘤培养上清组vs正常培养的DC组,DC培养第5d加入肿瘤培养上清组,DC激活T淋巴细胞过程加入肿瘤培养上清组,P<0.05).结论:肿瘤细胞分泌的某些物质可在DC培养的早期阶段影响肿瘤的免疫,这可能是肿瘤细胞逃避机体免疫监视的机制之一.