钩藤碱对人体肠系膜动脉平滑肌细胞大电导钙激活钾通道的影响

目的:探讨钩藤碱(Rhy)对人体肠系膜动脉平滑肌细胞大电导钙激活钾通道(BKCa)的作用。方法:切取人体肠系膜动脉并分离细胞,以膜片钳测BKCa活性。结果:(1)高血压病组(EH)与非高血压组(NH)比较,前者BKCaPo较高,Tc较低;加入Ca2+后,与加Ca2+前相比NH组Po的增加幅度高于EH组。(2)加入Rhy后,在细胞贴附式BKCa无反应;在内面向外式EH组BKCaPo增加的幅度高于NH组,同一浓度下,前者Po较高,Tc较低。结论:(1)EH组BKCa活性高于NH组。(2)Rhy可直接激活BKCa,且在EH组更为显著。

高血压病患者肠系膜动脉平滑肌细胞钙激活钾通道研究

目的:研究高血压病患者肠系膜动脉平滑肌细胞钙激活钾通道(KCa)的功能活动。方法:应用膜片钳制技术内面向外式单通道记录方法。结果:①人肠系膜动脉平滑肌细胞KCa开放具有电压依赖性。KCa通道电导在高血压组、正常组分别为191.4pS、197.7pS。胞内侧应用TEA可阻断通道。②增加浴液中Ca2+浓度(从0增至10-8、10-7、5×10-7、10-6mol/L),各组KCa开放概率(Po)均呈浓度依赖性增加,高血压组Po从0.016增至0.023、0.031、0.053、0.094,正常组Po从0.004增至0.023、0.041、0.072、0.184。通道平均开放时间延长,平均关闭时间缩短。③Ca2+浓度为0时,高血压组KCa开放概率明显高于正常组,在其它Ca2+浓度下高血压组KCa开放概率等于或低于正常组。结论:高血压病患者肠系膜动脉平滑肌细胞KCa的Ca2+敏感性较低,可能促进高血压的发生。

成人肠系膜动脉平滑肌细胞培养的探讨

目的研究成人肠系膜动脉血管平滑肌细胞的生物学特性及培养方法。方法运用贴块法进行成人肠系膜动脉血管平滑肌细胞的培养,并用倒置显微镜进行形态学观察和用免疫组化对培养细胞进行鉴定。结果运用贴块法成功培养了成人肠系膜动脉血管平滑肌细胞,培养的细胞呈典型“峰谷”样生长,免疫组化S P法检测α平滑肌肌动蛋白单克隆抗体(αSMActin)表达,确认为人血管平滑肌细胞(hVSMC)。经传代培养至3～5代,细胞生长特性未见异常改变。结论贴块法培养的成人肠系膜动脉血管平滑肌细胞生长稳定性好,且培养与纯化能同步进行。

大蒜素对自发性高血压大鼠肠系膜动脉平滑肌细胞钙电流的作用

目的:观察大蒜素(Gar)对自发性高血压大鼠(SHR)肠系膜动脉平滑肌细胞L-型钙电流(LCa,L)的影响。方法:利用双酶-两步法消化得到单个大鼠肠系膜动脉血管平滑肌细胞,用全细胞膜片钳记录钙电流。在细胞池中灌流含Gar的细胞外液,观察药物对LCa,L的作用和门控机制及门控动力学参数的改变。结果:1Gar对ICa,L的抑制效应呈浓度依赖性和电压依赖性特征。刺激电位0 mV时,200μmol/L Gar可使ICa,L峰值密度由(-8.4±0.4)pA/pF降低为(-6.1±0.3)pA/pF;2药物可使ICa,L半激活电压V1/2右移,半失活电压左移及失活后恢复动力学减慢等环节可减少通道的开放和重复开放,从而减少ICa,L峰值密度和窗口电流。结论:Gar可能通过减少细胞的钙电流发挥降压效应。

衰老诱导大鼠肠系膜动脉平滑肌细胞BK_(Ca)通道β1亚基功能下调

目的：探讨衰老对大鼠肠系膜动脉平滑肌细胞大电导钙激活钾通道（BKCa）生物物理特性的影响。方法选用老年组（22～24月龄）和青年组（4～5月龄）雄性Wistar大鼠，采用膜片钳内面向外模式进行肠系膜动脉平滑肌细胞BKCa单通道记录。结果衰老组 BKCa通道平均开放概率（Po）和平均开放时间显著低于青年组；电压依赖性和钙敏感性亦显著下降；Tamoxifen （1μmol／L）可诱导两组 Po增加，但青年组增加百分比显著高于老年组。结论衰老诱导大鼠肠系膜动脉平滑肌细胞BKCa通道功能下调，以β1亚基功能下调更为显著。

成人肠系膜动脉平滑肌细胞增殖模型的稳定性研究

目的：研究动脉血管平滑肌细胞（ＡＳＭＣ）的生长特性和体外血管活性物质对ＡＳＭＣ增殖作用的影响。方法：应用复合酶法和贴块法成功地进行了成人ＡＳＭＣ分离，经低浓度的人胰岛素样生长因子Ｉ（ＨＩＬＧＦ－Ｉ）作用，成人ＡＳＭＣ呈典型的“谷”与“峰”样生长，经历了１０多个月传代培养至３５代，并用ＰＭＡ作ＭＴＴ细胞毒性实验。结果：该细胞生长活性未见异常改变。结论：此方法能使分离下来的ＡＳＭＣ的休眠期缩短，传代后生长特征稳定性强，培养与纯化能同步进行。

高血压病患者肠系膜动脉平滑肌细胞钙激活钾通道变化及前列腺素E_1对通道活性的影响

目的 探讨高血压病患者肠系膜动脉平滑肌细胞钙激活钾 (KCa)变化及前列腺素 (PG)E1 对通道活性的影响。方法 用酶消化法获取血管平滑肌细胞 ,以膜片钳技术检测KCa通道的活性 ,通过Pclamp专用软件实时采样记录其平均开放时间 (To) ,平均关闭时间 (Tc) ,平均开放概率 (Po)等。然后分别加入不同浓度的Ca2 +(10 - 8、10 - 7、10 - 6mol L)及PGE1 (10、2 0、40、10 0、2 0 0、40 0nmol L)后 ,再观察上述参数变化。结果 高血压病组肠系膜动脉平滑肌细胞KCa通道活性显著高于非高血压组 ,加入Ca2 +后 ,两组KCa通道均被明显激活 ,与加Ca2 +前比较 ,非高血压组Po增加了 18.4倍 ,而高血压病组Po仅增加了 1.7倍。PGE1 可使高血压病患者肠系膜动脉平滑肌细胞KCa通道To延长 ,Tc缩短 ,Po增加。结论 高血压病患者肠系膜动脉平滑肌细胞KCa通道活性明显高于非高血压者 ,但对Ca2 +的敏感性降低 ,PGE1 可明显激活高血压病患者肠系膜动脉平滑肌细胞KCa通道。

组织块贴壁法培养人肠系膜动脉平滑肌细胞的研究

目的采用组织块贴壁法建立成人肠系膜动脉血管平滑肌细胞体外模型,为心血管疾病研究提供实验基础。方法运用组织块贴壁法对成人肠系膜动脉平滑肌细胞进行原代培养,用倒置显微镜和免疫组化进行细胞形态学观察和鉴定。结果运用组织块贴壁法成功获得大量单个成人肠系膜动脉平滑肌细胞,培养的细胞呈典型"峰-谷"样生长,免疫组化显示胞浆内平滑肌肌动蛋白阳性表达。经胰酶消化后可传20代。结论通过组织块贴壁法可以获得成人动脉平滑肌细胞(human vascular smooth muscle cell,hVSMC),为心血管疾病的实验研究提供良好的材料。

雌激素对高血压人体肠系膜动脉平滑肌细胞大电导钙激活钾通道的作用研究

目的 研究雌激素（E）对非高血压（NH）及原发性高血压（EH）人体肠系膜动脉平滑肌细胞（HMASMC）大电导钙激活钾通道（BKCa channels）及自发性瞬时外向电流（STOCs）的作用,探讨雌激素在NH及EH下对该通道作用的差异性.方法 急性酶分离法分离获取单个HMASMC,采用全细胞穿孔膜片钳技术记录该细胞上的BKCa和STOCs.结果 雌激素可明显激活NH组HMASMC上的BKCa和STOCs,在测试电压范围内,雌激素使膜电位从0到＋60 mV时BKCa的电流密度均显著性增加,在0和＋60 mV时其电流密度分别从（1.95±0.39）pA/pF、（15.40±4.27）pA/pF增加到（2.81±0.84）pA/pF（P＜0.05,25例）、（26.55±6.24）pA/pF（P＜0.01,25例）,其中0 mV时增加了0.44倍,＋60 mV时增加了0.72倍;电位为-20 mV时STOCs的幅度和频率分别从（7.920±2.031）pA、（3.15±0.79）Hz增加到（12.92±3.41）pA（P＜0.05,25例）、（4.41±0.96）Hz（P＜0.01,25例）,其中幅度增加了0.63倍,频率增加了0.40倍.而EH组在测试的-60到＋50 mV电压范围,雌激素没有这种显著性激活作用,在0和＋60 mV时其电流密度分别从（1.34±0.43）pA/pF、（4.91±1.40）pA/pF增加到（1.53±0.55）pA/pF（P＞0.05,14例）、（8.04±2.0）pA/pF（P＜0.05,14例）,其中0 mV时增加了0.14倍,＋60 mV时增加了0.63倍;在电位为-20 mV时STOCs的幅度和频率分别从（5.39±1.93）pA、（0.75±0.37）Hz增加到（6.70±1.06）pA（P＞0.05,14例）、（2.34±0.98）Hz（P＜0.05,14例）,其中幅度增加了0.24倍,频率增加了2.12倍.结论 雌激素对NH组HMASMC上的BKCa和STOCs有明显的激活作用,而在EH组这种激活作用显著降低,由此推测EH组HMASMC对雌激素的反应性较NH组低,这种差异性将为雌激素合理应用于临床提供有力的实验依据.关键词：高血压;雌激素;人体肠系膜动脉;平滑肌细胞;自发性瞬时外向电流;

人胰岛素样生长因子-I 对高血压病人肠系膜动脉平滑肌细胞增殖周期的影响

目的在细胞水平研究高血压病人动脉血管平滑肌细胞（ＡＳＭＣ）的生长特性和体外血管活性物质对ＡＳＭＣ增殖作用的影响。方法应用复合酶法进行高血压病人ＡＳＭＣ分离，并用人胰岛素样生长因子Ｉ（ＨＩＬＧＦ－Ｉ）干预以观察人ＡＳＭＣ的增殖情况。结果经低浓度的ＨＩＬＧＦ－Ｉ作用，高血压病人ＡＳＭＣ呈典型的“谷”与“峰”样生长，经历了１０多个月传代培养至３５代。发现该细胞生长分裂活性活跃，与人胎儿脐动脉增殖活性相似。结论复合酶法能使高血压病人的ＡＳＭＣ的静止期缩短，传代后生长特征稳定性强，高血压病人体外培养ＡＳＭＣ的增殖有赖于ＨＩＬＧＦ－１的存在。

内皮素-1对高血压病患者肠系膜动脉平滑肌细胞钙激活钾通道活性的影响

目的 探讨内皮素 1(ET1)对高血压病患者血管平滑肌细胞KCa通道活性的影响。方法 选择高血压病患者 18例 ,血压正常者 17例 ,两组患者均于腹部手术时取肠系膜动脉小分支用酶消化法获得单个血管平滑肌细胞。以膜片钳技术检测KCa通道的活性 ,记录不同钳制电压下单通道电流的平均开放时间 (To)、平均关闭时间 (Tc)、平均开放概率 (Po)、电流幅值 (Am) ,并绘制成电流 电压关系曲线。再分别加入Ca2 + (10 -8、10 -7、10 -6mol/L)、ET1(2× 10 9mol/L、4×10 9mol/L、6× 10 9mol/L、8× 10 9mol/L)后检测To、Tc、Po、Am等参数变化。结果 ①高血压病患者KCa通道活性变化 :于细胞内面向外膜片下 ,在对称性高钾液中 ,高血压病组KCa通道平均开放概率增加 ,关闭时间延长、开放时间缩短。在浴液中分别加入Ca2 + 后 ,两组KCa通道均被明显激活 ,但血压正常组Po的增加显著高于高血压病组 (P <0 .0 0 1)。②ET1对高血压病患者KCa通道活性的影响 :血压正常者在内面向外式膜片下 ,Po、Tc均先增加后降低 ,显示低浓度时兴奋、高浓度时抑制 ,然而高血压病患者肠系膜血管平滑肌KCa通道对ET1则缺乏反应。结论 高血压病患者肠系膜动脉平滑肌细胞KCa通道活性明显高于血压正常者 ,但对Ca2 + 的敏感性降低。

前列腺素E_1对人肠系膜动脉平滑肌细胞钙激活钾通道活动的影响

目的 :探讨前列腺素E1 (PGE1 )对人肠系膜动脉平滑肌细胞钙激活钾通道 (KCa)活动的影响。方法 :选择因消化道疾病手术而无血管病变的患者的肠系膜动脉小分支 ,用酶消化法获得单个平滑肌细胞 (SMC) ,应用膜片钳技术观察PGE1 对KCa的影响。结果 :在内面向外膜片下 ,PGE1 可使KCa开放概率 (Po)增加 ,平均开放时间 (To)延长 ,平均关闭时间 (Tc)缩短 ,并增大单通道电流幅值。结论 :PGE1 激活KCa,增加K+ 外流 ,引起细胞膜超极化从而舒张血管。

高血压病肠系膜动脉平滑肌细胞端粒酶活性表达的研究

目的 :探讨高血压病动脉平滑肌组织端粒酶活性与高血压的发病关系。方法 :采用PCR -ELISA法检测 30例高血压病患者和 2 0例血压正常者肠系膜动脉平滑肌细胞 (SMC)端粒酶活性。结果 :高血压患者端粒酶阳性表达 2 8例 (93.3% )。血压正常者端粒酶阳性表达 3例 (15 % )。差异非常显著 (P <0 .0 5 )。结论 :高血压病动脉平滑肌细胞端粒酶活性的表达升高 ,可能与高血压发病有关。

血管钠肽对大鼠肠系膜动脉平滑肌细胞Ca^(2+)激活K^+通道的作用

目的:研究血管钠肽(VNP)对大鼠肠系膜动脉血管平滑肌细胞(VSMCs)Ca2+激活K+通道(KCa)的作用及其机制。方法:采用全细胞膜片钳技术观察VNP对KCa的影响,以及HS-142-1、8-Br-cGMP和美蓝(MB)在这一过程中的作用。结果:①VNP(10-6mol/L)显著增强KCa(P<0.05,n=5)。②8-Br-CGMP(10-3mol/L)模拟VNP增强KCa的作用(P<0.05,n=6)。③HS-142-1(2×10-5mol/L)或MB(10-5mol/L)完全阻断VNP增加KCa电流密度的作用。结论:VNP通过作用于VSMCs的钠尿肽GC耦联受体,升高细胞内的cGMP水平,激活KCa。

原代肠系膜动脉平滑肌细胞的分离培养

取大鼠肠系膜动脉,用I型胶原酶消化,并进行体外培养,倒置相差显微镜观察ASMC生长状态及特点;免疫组织化学进行细胞鉴定。大鼠肠系膜平滑肌细胞呈典型"峰-谷"样生长,该原代培养细胞对平滑肌特异性肌动蛋白表达阳性。传代细胞生长稳定,可为研究小血管平滑肌细胞特性提供一个较理想的模型。

有氧运动对衰老大鼠肠系膜动脉平滑肌细胞自发瞬时外向流的影响

目的探讨有氧运动对衰老大鼠肠系膜动脉平滑肌细胞自发瞬时外向流(STOCs)的影响及可能机制。方法 19~21月龄雄性Wistar大鼠,随机分为安静组(O-SED)和有氧训练组(O-EX);另选2月龄大鼠作为青年对照组(Young)。采用穿孔膜片钳技术对细胞STOCs进行记录。结果 STOCs具有明显的电压依赖性;在相同钳制电位下,STOCs的幅值和频率均Young组>O-EX组>O-SED组。蛋白免疫印迹分析显示衰老细胞BKCa的α和β1亚基表达均下降,而有氧运动显著抑制此变化。结论衰老可诱发大鼠肠系膜动脉平滑肌细胞BKCa的亚基下调,从而使STOCs减弱、膜去极化和外周阻力增加;而规律性有氧运动可显著抑制此变化,这可能是运动诱导衰老血管逆重构、缓解血管张力增高的重要机制。

血管活性剂对高血压患者肠系膜动脉平滑肌细胞钙激活钾通道活性的调控作用

探讨血管活性剂内皮素-1（ET-1）及前列腺素E1（PGE1）对高血压病患者肠系膜动脉平滑肌细胞钙激活钾（Kca）通道活性的调控作用。方法：切取21例老年高血压病患者及18例老年非高血压者肠系膜动脉小分支节段，用酶消化法获取血管平滑肌细胞，以膜片钳技术检测Kca通道的活性，通过Pclamp专用软件实时采样记录其平均开放时间（To），平均关闭时间（Tc），平均开放概率（Po）等。结果：（1）高血压病患者Kca通道活性变化，于细胞内面向外膜片下，高血压病组与血压正常组比较，前者Kca通道Po增加，Tc延长，To缩短。在浴液中分别加入Ca^2＋后，两组Kca通道均被明显激活，与加Ca^2＋前比较，血压正常组Po的增加显著高于高血压病组（P〈0．001），说明高血压病组Kca通道的敏感性显著低于血压正常组。（2）两组溶液中加入ET-12～8×10^9mol／L后，在内面向外式膜片下，血压正常组Po先增加后降低，Tc缩短，然而高血压病组患者肠系膜血管平滑肌Kca通道对ET-1则缺乏显著反应。（3）溶液中加入PGE1后，在内面向外膜片下，高血压病患者血管平滑肌细胞Kb通道的通道电导增加，To显著处长，Tc显著缩短，Po显著增加，并呈浓度依赖性。结论：（1）高血压病患者肠系膜动脉平滑肌细胞Kca通道活性明显高于非高血压者。但对Ca^2＋的敏感性降低。（2）ET-1对正常人动脉平滑肌细胞Kca通道活性呈浓度依赖的双重作用。而对高血压病患者Kca通道活性无明显影响。（3）PGE1可明显激活高血压病患者Kca通道。

miRNA-195在腹主动脉瘤血管平滑肌细胞中作用机制探讨

目的探讨miRNA-195在大鼠腹主动脉瘤中表达及对血管平滑肌细胞的作用。方法建立大鼠腹主动脉瘤模型,实时荧光定量PCR检测miRNA-195在腹主动脉瘤组织中的表达量;血管平滑肌细胞中转染miRNA抑制物,用CCK-8试剂盒检测细胞增殖变化,流式细胞仪技术检测细胞凋亡率,蛋白印迹法检测MMP-2、MMP-9和OPN蛋白表达。结果miRNA-195在大鼠腹主动脉瘤组织中呈高表达;血管平滑肌细胞中转染miRNA-195抑制物后,转染组细胞的增殖能力在48 h、72 h和96 h比对照组提高40.5%(P<0.05)、39.7%(P<0.01)、36.1%(P<0.001),且转染组细胞凋亡率比对照组降低35.6%(P<0.001),MMP-2蛋白、MMP-9蛋白和OPN蛋白在转染组中表达量分别比对照组降低45.4%、36.8%和48.8%,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论miRNA-195表达升高导致血管平滑肌细胞数量减少,并可能通过上调MMP-2和MMP-9蛋白表达致细胞外基质发生降解,从而促进腹主动脉瘤的形成和发展。

基于平滑肌细胞表型转化角度探讨中医药治疗动脉粥样硬化进展

动脉粥样硬化是一种以纤维斑块和粥样斑块为主要病理特征的血管系统疾病。当纤维斑块或粥样斑块形成后,使动脉壁增厚、变硬,导致动脉管腔狭窄、弹性下降,甚至可导致急性冠状动脉综合征、缺血性脑卒中等并发症的发生,是多种心脑血管疾病的病理基础。血管平滑肌细胞主要环形分布于血管壁的中膜内,与血管的顺应性及弹性回缩密切相关,在生理情况下,血管平滑肌细胞具有收缩力强的特性,保持着低增殖、低迁移功能,在不同的环境条件影响下,血管平滑肌细胞会发生表型转化,从收缩表型向合成表型转化,促使平滑肌细胞由中膜迁移至内膜,随后在内膜中大量积聚并刺激结缔组织的形成,进而导致斑块失稳、管腔狭窄甚至斑块破裂等病理过程的发生。该文阐述了血管平滑肌与动脉粥样硬化发生发展的关系,并总结近十年中医药通过调控血管平滑肌细胞防治动脉粥样硬化的进展,旨在为中医药防治动脉粥样硬化提供更为可靠的理论依据。

基于单细胞测序技术解析冠状动脉粥样硬化患者平滑肌细胞的细胞间通信及关键基因

目的·利用单细胞RNA测序技术(single-cell RNA sequencing,scRNA-Seq)阐释冠状动脉粥样硬化(coronary atherosclerosis,CA)的细胞通信景观,挖掘主导细胞亚群及其关键基因。方法·下载GSE131778数据集并进行预处理、质控、降维聚类及注释;利用CellChat包进行细胞通信分析,识别主导细胞亚群。利用FindAllMarker函数,筛选主导细胞亚群与其他细胞亚群间的差异表达基因(differentially expressed genes,DEGs),并构建其蛋白相互作用(protein-protein interaction,PPI)网络,将Degree算法排序前五位的DEGs作为关键基因。将关键基因与CellChat分析出的细胞通信网络进行匹配和挖掘,获取关键基因参与的配体-受体对(ligand-receptor pair,L-R)及其介导的信号通路,并对结果进行可视化。构建动脉粥样硬化小鼠模型,并利用反转录聚合酶链式反应检测关键基因在颈动脉粥样硬化病变处的表达情况。结果·在CA病变处共鉴定出11个细胞亚群,包括平滑肌细胞、内皮细胞、巨噬细胞、单核细胞等。细胞通信分析结果显示,CellChat在11个细胞亚群中检测到70对显著的L-R和26条相关的信号通路;平滑肌细胞处于通信活跃状态,与其他细胞亚群间相互作用的次数和强度最显著,是主导细胞亚群。DEGs筛选结果显示,平滑肌细胞亚群和其他细胞亚群之间共有206个DEGs,其中ITGB2、PTPRC、CCL2、DCN、IGF1被识别为关键基因。关键基因介导的细胞通信分析结果显示:CCL2与ACKR1形成L-R,通过介导CCL信号通路参与平滑肌细胞与内皮细胞间的通信网络;ITGB2分别与ITGAM、ITGAX组成受体复合物,再与C3形成L-R介导补体信号通路,参与平滑肌细胞与巨噬细胞、单核细胞间的通信网络。动物实验对关键基因的验证结果同生物信息学分析的结果一致。结论·平滑肌细胞在CA病理过程中是主导细胞,与其他细胞间有广泛的通信网络,可通过CCL2-ACKR1、C3-(ITGAM+ITGB2)和C3-(ITGAX+ITGB2)介导的CCL和补体信号通路,与内皮细胞、巨噬细胞和单核细胞构建细胞通信网络。