大鼠肠肌间神经元胃动素受体的表达及胃动素引起神经元内钙信号的机制

目的观察大鼠肠肌间神经元胃动素受体(MTLR)的表达,并探讨胃动素引起神经元内钙信号的机制。方法采用免疫荧光双标技术观察大鼠肠肌间神经元MTLR的表达;应用激光共聚焦显微镜技术检测不同药物处理组胃动素引起的单个神经元内Ca2+荧光强度的变化。结果大鼠肠肌间神经元呈MTLR免疫反应阳性表达;在Hank's液中,10-6mol/L胃动素可引起神经元内Ca2+浓度的显著升高,其峰高(峰值减去静息值)为30.6±3.7,荧光强度相对变化百分比为(100.8±18.4)%。在D-Hank's液(去除细胞外Ca2+)中或用L型钙离子通道阻断剂维拉帕米预处理细胞后,胃动素可轻度升高胞内Ca2+浓度。与单独应用胃动素组相比差异有统计学意义(P<0.05)。当分别用G蛋白拮抗剂NEM和PLC抑制剂Compound48/80预处理细胞后再加入胃动素,胞内Ca2+浓度升高的程度明显降低,与单独应用胃动素组相比差异有统计学意义(P<0.05)。当用PKC抑制剂D-鞘氨醇预处理细胞后,再加入胃动素,其峰高和荧光强度相对变化百分比同单独应用胃动素组相比差异无统计学意义(P>0.05)。结论大鼠肠肌间神经元能自身表达MTLR。胃动素可明显升高神经元内Ca2+浓度,胞内Ca2+浓度的升高既源于外钙的内流又源于内钙的释放。外钙的内流主要通过L型Ca2+通道,G蛋白偶联型MTLR-PLC-IP3途径参与细胞内钙的释放。

胃动素受体激动剂对肠肌间神经元内钙的影响

目的探讨胃动素受体激动剂对体外培养大鼠肠肌间神经元内钙的影响。方法采用免疫荧光标记技术鉴定原代培养的肠肌间神经元;应用钙离子(Ca2+)指示剂Fluo-3/AM作为细胞内Ca2+的荧光探针,对负载培养的神经元,应用激光共聚焦显微镜技术检测胃动素及红霉素引起的单个神经元内Ca2+荧光强度(FI)的变化。结果胃动素和红霉素引起的神经元内Ca2+浓度变化为:(1)在Hank's液中,胃动素浓度为10-8、10-7、10-6mol/L时,神经元内Ca2+浓度逐渐升高,其峰高(峰值减去静息值)分别为10.6±2.1、15.9±1.2、30.6±3.7,相邻两组间存在显著性差异(P<0.05)。FI相对变化百分比分别为(40.1±6.3)%、(63.0±11.2)%、(100.8±18.4)%,相邻两组间存在显著性差异(P<0.05),且呈明显剂量依赖性。(2)在Hank's液中,10μg/ml红霉素可引起神经元内Ca2+浓度升高,其峰高为23.2±5.6,FI相对变化百分数为(82.8±13.0)%。(3)当用胃动素受体的抗体孵育后,再加入10μg/ml红霉素,其胞内Ca2+浓度的升高几乎完全被抑制。结论胃动素和红霉素均可引起体外培养肠肌间神经元的功能应答。胃动素可明显升高肠肌间神经元内Ca2+浓度,且呈剂量依赖性;红霉素可作用于肠肌间神经元胃动素受体引起胞内Ca2+浓度的升高。

电针对大鼠肠肌间丛神经元前脑啡肽原mRNA的影响

近年发现在肠肌间丛中有ＥＮＫ神经元，但它们与电针之间的关系尚未见报道。本文利用原位杂交方法观察了电针后前脑啡肽原（ＰＰＥ）ｍＲＮＡ在肠肌间丛种经元的表达。结果发现电针后 ＰＰＥ－ｍＲＮＡ的表达明显高于对照组，提示在肠神经系统中，电针诱发 ＰＰＥ－ｍＲＮＡ表达的增加与针刺镇痛的调整机制密切相关。

胃动素在中枢神经系统及外周肠肌间神经丛神经元的表达

目的:观察大鼠脑、小肠肌间神经丛神经元和血浆内胃动素的表达,探讨胃动素在水浸加束缚应激性胃溃疡中的作用。方法:实验于2004-10/2005-10在青岛大学医学院完成。选择健康雄性Wister大鼠76只,随机分为水浸加束缚组10只;侧脑室注射胃动素组32只;皮下注射N-硝基精氨酸酯+侧脑室注射胃动素组8只和相应的3个对照组:正常对照组10只;侧脑室注射生理盐水组8只;皮下注射N-硝基精氨酸酯+侧脑室注射生理盐水组8只。采用放射免疫分析、荧光免疫组化双染和神经生理学等实验方法,观察脑、小肠肌间神经丛和血浆内胃动素的表达,探讨胃动素对大鼠束缚加水浸诱导的应激性胃溃疡的影响。结果:76只大鼠均进入结果分析。①在正常大鼠小肠肌间神经丛内和原代培养的肠肌间神经结神经元均可见有胃动素样免疫反应阳性物的表达,且胃动素与一氧化氮合酶共同表达于同一神经元内,但胃动素不与消化道感觉性神经元内特有的钙结合蛋白共存。②在大鼠应激性胃溃疡产生的同时,其血浆内胃动素的含量明显少于正常对照组[(162.86±25.25),(221.54±31.82)ng/L,P<0.05],而下丘脑、延脑、垂体和肌间神经丛神经元内胃动素的含量明显高于正常对照组[(127.66±9.61),(74.34±19.63)ng/g;(40.56±3.17),(17.26±6.55)ng/g;(28.97±3.24),(11.42±1.25)ng/g;(27.97±2.20),(13.81±1.05)ng/g,P<0.05～0.01]。③侧脑室注射胃动素大鼠应激性胃溃疡的产生明显减少,且呈明显的量效依赖关系(P<0.05～0.01),但经皮下注射一氧化氮合酶抑制剂N-硝基精氨酸酯后,脑室注射胃动素,胃动素的胃黏膜细胞保护作用消失(溃疡数:89.00±12.61,81.12±11.39,P>0.05)。结论:胃动素与一氧化氮共存表达于肠肌间神经丛一氧化氮合酶神经元;应激性胃溃疡时神经系统和血浆内胃动素的表达发生变化;中枢胃动素对胃黏膜细胞具有保护作用,且呈明显的量效依赖关系。胃动素的细胞保护作用可能与一氧化氮的合成有关。

溃疡性结肠炎大鼠结肠肌层突触小体相关蛋白25的表达变化

目的:观察溃疡性结肠炎(ulcerative colitis,UC)大鼠结肠肌层分子量为25 kDa的突触小体相关蛋白(synaptosomal associated protein of 25kDa,SNAP-25)的表达情况.方法:应用2,4-二硝基苯磺酸(2,4-dinitrobenzene sulfonic acid,DNBS)灌肠的方法制作大鼠UC模型,免疫组织化学评估结肠肌层SNAP-25标记的神经轴突的密度,Western blot半定量检测肌层SNAP-25含量,HE染色法评价结肠炎症状态,生化检测方法评价结肠匀浆髓过氧化物酶(myeloperoxidase,MPO)活力、超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)活力及丙二醛(malonaldehyde,MDA)含量的变化,酶联免疫吸附试验(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)法检测白介素1円(interleukin1円,IL-1円)含量的变化.结果:在DNBS诱导的UC大鼠,结肠肌层中SNAP-25标记的轴突密度减小为对照的22.60%(23.76个/百个平滑肌细胞±13.24个/百个平滑肌细胞vs 5.37个/百个平滑肌细胞±1.96个/百个平滑肌细胞,P<0.01),肠道肌层SNAP-25蛋白表达量减少为对照组的34.31%(P<0.01).与对照组相比,结肠组织中MPO活力增高(1.91 U/g wet weight±0.58U/g wet weight vs 0.99 U/g wet weight±0.21U/g wet weight,P<0.01),SOD活力显著降低(4.11 U/mg protein±1.80 U/mg protein vs 9.01U/mg protein±2.17 U/mg protein,P<0.01),MDA含量增高(1.72 nmol/mg protein±0.28nmol/mg protein vs 1.11 nmol/mg protein±0.27 nmol/mg protein,P<0.01),IL-1円表达量增高(181.51 pg/mg protein±55.30 pg/mg protein vs 84.27 pg/mg protein±42.27 pg/mg protein,P<0.01).结论:DNBS诱导的UC大鼠的结肠肌层SNAP-25蛋白表达量明显减少,肠道组织炎症及氧化应激水平增高可能是其重要原因之一.

Neuroprotective action of Ginkgo biloba on the enteric nervous system of diabetic rats

AIM: To investigate the effect of Ginkgo biloba extract on the enteric neurons in the small intestine of diabetic rats. METHODS: Fifteen Wistar rats were divided into three groups: control group (C), diabetic group (D) and diabetic-treated (DT) daily with EGb 761 extract (50 mg/kg body weight) for 120 d. The enteric neurons were identified by the myosin-V immunohistochemical technique. The neuronal density and the cell body area were also analyzed. RESULTS: There was a significant decrease in the neuronal population (myenteric plexus P = 0.0351; submucous plexus P = 0.0217) in both plexuses of the jejunum in group D when compared to group C. With regard to the ileum, there was a significant decrease (P = 0.0117) only in the myenteric plexus. The DT group showed preservation of the neuronal population in the jejunum submucous plexus and in the myenteric plexus in the ileum. The cell body area in group D increased significantly (P = 0.0001) in the myenteric plexus of both segments studied as well as in the ileum submucosal plexus, when compared to C. The treatment reduced (P = 0.0001) the cell body area of the submucosal neurons of both segments and the jejunum myenteric neurons. CONCLUSION: The purified Ginkgo biloba extract has a neuroprotective effect on the jejunum submucous plexus and the myenteric plexus of the ileum of diabetic rats.