不同肠道病毒感染手足口病患儿病毒载量及临床特征对比分析

目的对比分析肠道病毒71型(EV71)与柯萨奇A组16型(Cox A16)感染手足口病(HFMD)患儿的病毒载量及临床特征。方法收集2015年5—9月唐山市妇幼保健院儿科确诊的HFMD患儿430例,根据临床症状、体征和病毒种类将患儿分为EV71轻度组162例、EV71重度组87例、Cox A16轻度组158例、Cox A16重度组23例。采用实时荧光定量反转录PCR技术检测患儿咽拭子EV71、Cox A16 RNA,计算病毒载量;记录患儿的病程、体温、热程、口腔溃疡、流涎、咳嗽、手部出疹、足部出疹、嗜睡、惊厥、呕吐、意识改变、肢体抖动、肌痉挛情况。结果标准曲线显示循环阈值(Ct值)与病毒载量的对数呈高度负相关(r=-1.000,P<0.01)。Ct值(X)与病毒载量的对数(Y)的关系为Y=-0.29X+13.03。Cox A16轻度组、Cox A16重度组HFMD患儿Ct值较EV71轻度组、EV71重度组降低(P<0.05);EV71轻度组与EV71重度组、Cox A16轻度组与Cox A16重度组HFMD患儿Ct值比较,差异无统计学意义(P>0.05)。EV71重度组、Cox A16重度组HFMD患儿病程较EV71轻度组、Cox A16轻度组延长(P<0.05);EV71重度组HFMD患儿病程较Cox A16重度组延长(P<0.05)。4组HFMD患儿体温≥38.5℃、口腔溃疡、流涎、手部出疹、足部出疹发生率比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。EV71重度组、Cox A16重度组HFMD患儿热程≥3 d发生率较EV71轻度组、Cox A16轻度组升高(P<0.007);EV71重度组、Cox A16重度组HFMD患儿体温≥38.5℃+热程≥3 d发生率较EV71轻度组、Cox A16轻度组升高,EV71轻度组HFMD患儿体温≥38.5℃+热程≥3 d发生率较Cox A16轻度组升高,EV71重度组HFMD患儿体温≥38.5℃+热程≥3 d发生率较Cox A16重度组升高(P<0.007);Cox A16轻度组、Cox A16重度组HFMD患儿咳嗽、手部出疹数≥15个(双手)、足部出疹数≥15个(双足)发生率较EV71轻度组、EV71重度组升高(P<0.007)。EV71重度组、Cox A16重度组HFMD患儿嗜睡、呕吐发生率较EV71轻度组升高,EV71重度组HFMD患儿嗜睡发生率较Cox A16重度组升高(P<0.01)。结论 HFMD患儿病毒载量与感染病毒相关,但不同病情程度间病毒载量无差别。不同病毒感染及病情程度患儿间热程≥3 d、体温≥38.5℃+热程≥3 d、咳嗽、手部出疹数≥15个(双手)、足部出疹数≥15个(双足)、嗜睡、惊厥、呕吐、意识改变、肢体抖动、肌阵挛发生率有差异。

肠道病毒71型在脑干脑炎婴幼儿脑干中的分布及感染机制

目的观察人肠道病毒71型(enterovirus 71,EV71)以及细胞间黏附分子1(intercellular adhesionmolecules-1,ICAM-1)在脑干脑炎死亡的婴幼儿脑干中的表达及分布特点,探讨EV71进入中枢神经系统的机制以及ICAM-1的参与作用。方法收集22例尸检确认为脑干脑炎婴幼儿的脑干组织为实验组,并以10例先天性心脏病死亡婴幼儿的脑干组织作为对照组。选择实验组中镜下小血管呈典型的"袖套样"改变的切片进行EV71-VP1免疫组织化学染色,然后对EV71-VP1阳性的切片进行ICAM-1免疫组织化学染色。染色结果经图像分析和统计学处理,比较实验组和对照组的染色结果。结果 (1)实验组EV71-VP1免疫组织化学阳性染色呈深棕黄色,主要位于脑干星形胶质细胞内,对照组染色呈阴性。(2)ICAM-1阳性呈深棕黄色,在脑干血管周围炎症细胞、胶质小结内的炎症细胞及胶质细胞表达升高,与对照组比较差异具有统计学意义(P<0.05)。结论EV71可作为脑干脑炎致死婴幼儿法医病理诊断的筛选依据。EV71可能通过血源性侵染脑干,ICAM-1可能在脑干炎症改变过程中起重要作用。

感染肠道病毒71型手足口病患儿粪便排毒时间及病毒载量的相关因素研究

目的：通过连续性监测EV71病毒核酸,研究手足口病患儿感染EV71病毒后在粪便中的排毒时间、病毒载量及其相关因素。方法：观察45例EV71患儿12周,及非EV71组27例作为对照。每隔7 d收集粪便1次,采用real-time PCR Taq Man探针法定量检测病毒核酸。并用Kaplan-Meier生存分析法进行数据分析。结果：57例（79.2%）患儿为持续排毒（EV71 39例,非EV7118例）,有15例（20.8%）为间歇排毒（EV71组6例,非EV71组9例）。在持续性排毒中,EV71组患儿在第1-7周病毒核酸阳性率均为100%,第8-12周分别为94.4%、91.2%、81.6%、81.6%、81.6%,非EV71组在第1-10周病毒核酸阳性率分别为100%、88.9%、83.3%、72.2%、55.5%、23.2%、38.9%、22.2%、14.8%、14.8%、14.8%。这2组粪便核酸阳性率分布有统计学差异（t=4.00,P=0.00）。EV71组与非EV71组患儿的病毒载量在第9周有统计学意义（Z=-2.17,P=0.03）。EV71与非EV71重症组、EV71与非EV71普通组及EV71普通组与重症组患儿的病毒载量在各随访时间内均无统计学意义（P〉0.05）。EV71组患儿病毒载量在年龄和性别上均无统计学差异（χ-2=3.15,P=0.21;Z=-0.03,P=0.98）。结论：手足口病患儿多数为持续排毒,可持续12周以上,EV71组排毒时间长于非EV71组;但EV71组病毒载量低于非EV71组。EV71组病毒载量与年龄和性别无关。

洛阳市非EV71、非CA16肠道病毒中优势毒株状况分析

目的了解洛阳市引起手足口病的普通肠道病毒的构成情况,警惕比例较高毒株发展为新的优势毒株,为洛阳市的手足口病防控提供科学依据。方法采用实时荧光PCR(RT-PCR)对洛阳市手足口病的送检粪便标本进行核酸鉴定,随机选取9例普通肠道病毒阳性,而柯萨奇病毒A16型(CA16)和新肠道病毒71型(EV71)阴性的标本,进行5′UTR测序,确定毒株的亚型。利用CA6的特异性引物,选取75例普通肠道病毒阳性标本(CA16和EV71阴性),用RT-PCR方法鉴定CA6的阳性数量,分析CA6的构成比。结果 9个普通肠道病毒5′UTR测序结果进行BLAST初筛,结果显示CA6为5株,在普通的肠道病毒中为优势毒株;75例普通肠道病毒中,共检测出CA6 20例。CA6在普通肠道病毒中的比例为29.76%(25/84);25例CA6中,男13例,女12例;引发重症的病例为2例;城市地区5例,乡村20例。结论洛阳市引起手足口病的普通肠道病毒的构成较为复杂,在引起手足口病的普通肠道病毒中CA6病毒所占比例较高,对此应引起重视。

六安地区手足口病患儿肠道病毒分离鉴定与临床表现

目的对六安地区手足口病流行区患儿标本进行病毒分离与鉴定,为进一步预防和控制该病流行奠定基础。方法采集手足口病患者咽拭子和疱疹液标本,进行病毒分离、中和实验和逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)特异性扩增进行鉴定,同时对肠道病毒71型(EV71)抗原决定簇部位VP1区进行核苷酸序列测定与分析。结果14份咽拭子和8份疱疹液标本中分离得到6株病毒,经中和实验、RT-PCR及VP1片段检测与测序证实为EV71型,与BrCr-ts株、台湾分离株、深圳分离株一致性分别为98%、84%和83%。结论该流行区2008年爆发的手足口病病原体为EV71型。

柯萨奇病毒、肠道病毒71型引起的重型手足口病比较

手足口病是由多种肠道病毒引起常见传染病,在这些肠道病毒中,以柯萨奇病毒和肠道病毒71型（EV71）为主。本研究分析这两种病毒引起的重型手足口病156例患者的临床表现、实验室指标,现报道如下。

1766例抗肠道病毒71型IgM抗体检测的结果分析

目的了解黄石地区婴幼儿肠道病毒71型(EV71)的感染情况。方法采集黄石市中心医院1766例患儿手指末梢血,利用免疫层析技术采用捕获法检测抗EV71-IgM抗体。结果共检出抗EV71-IgM抗体364例(20.61%),手足口病、皮疹、扁桃体炎、肺炎、上呼吸道感染、发热、疱疹性咽炎、支气管炎患儿的抗EV71-IgM抗体阳性率分别为45.18%、33.70%、15.56%、15.38%、14.08%、13.94%、2.5%、2.44%。阳性病例的临床表现主要以手足口病和发热为主。结论在手足口病流行期间应对疑诊EV71感染的患儿进行抗EV71-IgM抗体检测。

肠道病毒EV71相关受体在人二倍体细胞KMB17表面的构成分析

目的研究人二倍体细胞KMB17表面与肠道病毒EV71感染相关的受体Toll样受体4(TLR4)、血小板衍生生长因子受体α多肽(pDGFR-αR1)的表达情况,以及细胞周期、细胞代次、EV71感染对这两种受体表达的影响。方法使用荧光标记的特异抗体:PE-TLR4、FITC-PDGFR-αR1标记不同细胞代次、处于不同细胞周期时段的KMB17细胞,应用流式细胞仪检测表达这两种受体蛋白的阳性细胞率,以及EV71感染前后,阳性细胞率的变化。使用NCBI primer blast设计TLR4、PDGFR-αR1特异的引物,提取不同细胞代次、细胞周期时段KMB17细胞的RNA,使用real-timePCR检测这些受体蛋白特异mRNA的量。结果 KMB17细胞在使用血清饥饿法进行G0/G1同步化后约22h进入S期,在36h进入G2期,在48h左右完成分裂。PDGFR-αR1、TLR4平均阳性细胞的比例分别为4.47%和11.82%;通过流式细胞仪检测,在G0/G1期,PDGFR-αR1、TLR4的平均阳性细胞比例分别为4%和8.9%;在S期,分别为2.6%和9%;在G2/M期,分别为4.4%和13.5%;EV71病毒感染后,PDGFR-αR1阳性的细胞比率由2.6%上升至4.0%,TLR4阳性细胞比率分别为11.6%和12.8%。结论人二倍体细胞KMB17表面表达肠道病毒相关的受体TLR4和PDGFR-αR1,表达PDGFR-αR1的阳性细胞较TLR4少,不同代次的KMB17细胞这2种受体阳性细胞比例的差异不大,PDGFR-αR1阳性细胞在G0期较多,TLR4阳性细胞在G2/M期较多;EV71病毒感染后,PDGFR-αR1、TLR4阳性细胞的比率变化不大,表明这两种受体分子在KMB17细胞表面表达较稳定,不受EV71感染的影响。

某地区2010年手足口病患者肠道病毒RNA实时荧光逆转录PCR检测结果分析

目的用实时荧光定量RT-PCR技术检测惠州市2010年手足口病患者肠道病毒RNA,了解手足口病病例肠道病毒的感染情况,为制定预防和控制肠道病毒感染策略提供依据。方法采集2010年1～12月本院送检的1712例手足口病患者的粪便、肛拭子、咽拭子和脑脊液等标本5849份,应用荧光RT-PCR技术检测样本中的肠道病毒(EV)、肠道病毒71型(EV71)、柯萨奇病毒A组16型(CA16)。结果男性及女性EV、EV71和CA16感染率分别为68.15%、43.61%、5.56%和61.23%、37.03%、5.70%;共检出1123份EV阳性标本,705份EV71阳性标本,96份CA16阳性标本,阳性率分别为60.28%、33.35%和5.13%;4～6月和7～9月是手足口病发病高峰期,感染肠道病毒EV、EV71型、CA16型人数分别占所有肠道病毒EV、EV71、CA16型感染者的36.33%、49.50%、42.70%和42.56%、38.72%、40.63%;0～4岁的儿童是手足口病的高发人群,占所有患者的85.46%。结论惠州市2010年手足口病的病原以肠道病毒71型为主,夏秋季节是手足口病发病高峰期,0～4岁儿童是感染肠道病毒的高危人群。

肠道病毒71型感染致重症手足口病研究进展

手足口病（hand,foot and mouth disease,HFMD）主要是由肠道病毒（enterovirus,EV）71型（EV71）和柯萨奇病毒A组（Coxsackie virus-A,Cox A）16型（Cox A16）引起的急性丙类传染病,以3岁以下儿童多见,多呈自限性。相较于Cox A16及其他EV感染所致HFMD,EV71感染易累及神经系统（如无菌性脑炎、脑干脑炎、神经源性肺水肿等），病情重，病死率高，已成为儿童的头号杀手。

鼠肠道病毒RT-PCR检测与基因序列分析

目的对鼠类携带的肠道病毒进行检测并分析病毒基因序列特征。方法设计肠道病毒属一致-简并引物,采用RT-PCR方法对宁波口岸捕获的鼠类肠道内容物样品进行检测,对PCR产物进行测序,并将所测序列与国内外肠道病毒属病毒株序列进行核苷酸同源性分析和构建种系进化树。根据基因序列比对结果,采用鼻病毒通用引物进行验证。结果共检测165份鼠类样品,2份黄毛鼠样品经检测为阳性,扩增片段大小为378bp,标识为DXEV1601。片段的系统发生分析显示DXEV1601与人鼻病毒1B SC9813株位于同一进化分支,与23个不同肠道病毒属病毒流行株同源性相似度范围为50.3%～59.6%。经鼻病毒特异性引物扩增为阳性。结论宁波地区野生鼠类中存在鼻病毒感染。

肠道病毒71型-免疫球蛋白M及超敏C反应蛋白联合检测在手足口病患儿诊断中的应用研究

目的在手足口病(HFMD)病发初期,明确病原学诊断,同时通过检测超敏C反应蛋白(hs-CRP)水平,并探讨建立儿童HFMD的hs-CRP的参考范围。方法回顾性分析2014—2015年本院收治的HFMD病儿,按病情分成4组,A组普通观察病例,B组留院观察病例,C组住院病例,D组早期重症、重症、危重病例。分别检测肠道病毒71型(EV71-Ig M),柯萨奇病毒A组16型(CoxA16)及hs-CRP水平。结果 EV71是HFMD的重症病例的主要病原体;hs-CRP水平随病情加重有升高趋势,重症患儿明显高于轻型,hs-CRP≥8.43 mg/L时有预警价值。结论及早明确HFMD的病原体,有效降低EV71感染重症病例的病死率,联合检测hs-CRP建立有效的参考范围可以较好地预测危重病患儿的发生,为及早干预并发症的发生和预后提供临床价值。

镇江地区肠道病毒71型VP1基因的检测及系统进化分析

目的检测我国镇江地区2008年手足口病(HFMD)散发病例中的肠道病毒71型(EV71),并进行毒株的种系进化分析。方法采集临床HFMD患者粪便标本,抽提病毒RNA,通过巢式聚合酶链反应技术进行特异性扩增。经琼脂糖凝胶电泳鉴定为阳性的标本,采用EV71特异性引物对其VP1区的核苷酸序列进行扩增。扩增的VP1片段经纯化后与测序载体PET32a(+)连接,转化大肠埃希菌DH5α,并对阳性质粒进行酶切和测序鉴定。利用Clustalx和MEGA4.0分析软件,进行系统进化分析。结果通过聚合酶链反应扩增获得EV71VP1基因,根据遗传进化分析发现该病毒株与1999、2000年在美国亚特兰大以及2000年中国北京地区流行的EV71型遗传距离较近,均属于C型。结论镇江地区HFMD患者中分离的EV71病毒株属C基因型。

两种不同方法检测肠道71型病毒的比较

目的研究不同方法检测肠道71型病毒的灵敏度和特异性。方法采集135例临床确诊为手足口病患儿和44例临床确诊为非手足口病患儿血清,分别用免疫层析法(ICA)和酶联免疫吸附试验(ELISA)检测抗肠道71型病毒IgM抗体。结果ICA法检出阳性病例29例,ELISA法检出阳性病例27例;ICA法和ELISA法的灵敏度分别为21.48%和20.0%,特异性为100%。结论 ICA法和ELISA法均具有较高特异性,但其灵敏度较低。

2010年合肥儿童手足口病病例肠道病毒血清基因型分析

目的：对合肥地区2010年5～7月儿童手足口病流行期间的手足口病患儿进行病原学调查.方法：采集手足口病患儿的疱疹液、粪便、咽拭子进行病毒分离;分离的病毒接种非洲绿猴肾细胞（Vero）后待细胞病变（CPE）达到＋＋＋＋以上后提取RNA.分别用EV71和CA16的VP1基因的特异性引物进行RT-PCR鉴定,并根据血清型不同比较其临床特征.结果：77例患儿采集的标本中65例分离到病毒；经RT-PCR检测发现其中47例CA16阳性,18例为EV71,比例为2.6∶1.CA16感染和EV71感染在患者的年龄大小、症状轻重等方面无显著统计学差异.结论：手足口病患儿检测到的主要病原是CA16和EV71,两者感染对临床的影响无显著差异.

儿童肠道病毒性脑炎的临床特点及脑脊液病毒检测结果分析

目的探讨肠道病毒性脑炎(EVE)儿童的临床特点及脑脊液病毒检测结果。方法回顾性分析河南省儿童医院2015年1月至2017年12月收治的216例EVE病儿病例资料。结果临床特点:发热症状占69.44%,头痛占64.35%,呕吐占75.00%;6~8月发病占39.35%,9~11月占31.48%;白细胞(WBC)总数>10×10^9/L占68.98%,C反应蛋白(CRP)升高占57.87%;脑电图轻中度异常检出率21.76%。脑脊液病毒检测:肠道病毒(EV)通用核酸检测阳性率55.56%,其中埃柯病毒30(ECHO30)型占79.17%;特异性Ig M抗体阳性95例;不同年龄段、不同发病时间段病儿脑脊液EV通用核酸阳性检出率、特异性Ig M抗体阳性检出率比较均差异有统计学意义(P均<0.05)。预后:均治愈出院。结论儿童EVE主要症状为发热、头痛及呕吐,好发于夏、秋季;脑脊液病毒检测以ECHO30为主且特异性Ig M抗体检出率较高,经综合治疗后病儿预后良好。

柯萨奇B1型肠道病毒重症感染早产儿的护理1例

柯萨奇病毒属于RNA病毒类微小核糖核酸科的肠道病毒属,分A组1-22、24型及B组1-6型,其感染易流行于夏秋季节,主要通过消化道传播,亦有呼吸道、胎盘、羊水、产道感染,故新生儿柯萨奇病毒感染可在宫内、产时、出生后发生[1]。宫内感染多在出生后3 d内发病,产时感染在1周内发病,而生后感染多发病较晚,宫内感染、产时感染症状均比生后感染为重[2]。轻型感染可无明显临床症状,而严重感染可引起严重的全身性疾病,临床表现为侵犯脑、心脏、肺、肝脏等多个重要器官系统,尤其是新生儿脓毒血症、新生儿感染性休克、脑膜脑炎、心肌炎、新生儿坏死性小肠结肠炎、肝炎和凝血障碍等,甚至死亡[3]。