新型肠道病毒89型结构蛋白VP1的构建表达及序列分析

目的研究克隆表达新型肠道病毒89型VP1结构蛋白,并进行活性鉴定和序列分析。方法分离肠道病毒89型VP1结构蛋白全基因,克隆入原核表达载体PET-28构建重组质粒pH-VP1,在大肠埃希菌BL21中进行表达,检测表达产物的特异性及活性。将EV89 VP1核酸序列与Genbank数据库中的序列进行比对并建立系统进化树。结果重组质粒在1 mmol/L的IPTG 37℃诱导7 h后可诱导表达得到约33 kD的蛋白,经Western Blot实验检测证明表达的融合蛋白具有EV89抗原的活性。分离的EV89病毒其VP1区核酸序列与Genbank数据库中仅有的3株EV89序列同源性分别为86.4%、85.9%、85.6%。结论成功构建EV89重组蛋白,其表达产物具有良好的特异性及活性,可进一步用于VP1检测方法的研制。进化分析表明,分离的EV89 VP1区与Genbank数据库中其他分离株亲源性较远。