小鼠IFN-γ基因佐剂对分泌型柯萨奇病毒B3 VP1核酸疫苗免疫作用的影响

目的构建小鼠IFN-γ真核表达质粒,观察其对分泌型柯萨奇病毒B3(CVB3)核酸疫苗的影响.方法以RT-PCR扩增小鼠IFN-γ基因,构建真核表达重组质粒pcDNA3/mIFN-γ,检测其在cos-7细胞内的表达;将分泌型pcDNA3/sVP1,pcDNA3/sVP1+pcDNA3/mIFN-γ肌注免疫小鼠,每2wk注射1次,共3次,每次免疫后13d取血测血清抗体水平.末次免疫后2wk,以500TCID50的CVB3腹腔内感染,观察小鼠的存活情况.结果成功构建了pcDNA3/mIFN-γ并能有效表达;pcDNA3/sVP1组和pcDNA3/sVP1+pcDNA3/mIFN-γ组均能诱导小鼠产生中和抗体,抗体滴度随免疫次数的增加而提高,但两组小鼠抗体滴度和生存率无显著性差异;混合质粒注射组血清的病毒滴度明显低于pcDNA3/sVP1组,且心肌病理损伤明显减轻.结论IFN-γ作为基因佐剂,在一定程度上增强了分泌型CVB3VP1基因疫苗的免疫保护作用.

柯萨奇B组病毒感染与云南省地方性猝死的关系

目的探讨柯萨奇B组病毒(CoxsackievirusB,CVB)感染与云南省地方性猝死的关系。方法根据流行病学现场调查和临床检查资料,在病区设立病例组和内对照组,在非病区设立外对照组。酶联免疫法(ELISA)检测3组人群近期CVB感染情况及CVB阳性患者CVB1～6型的分布。结果CVB非特异性IgM抗体阳性率在内对照组为88.5%,外对照组为29.2%,两组之间差异有统计学意义(χ2=33.975,P<0.01);病区CVB非特异性IgM抗体阳性率在病例组为92.0%,内对照组为88.5%,两组之间差异无统计学意义(χ2=0.248,P>0.05)。CVB阳性患者亚型分布,在病区内以CVB5(53.3%)、CVB6(34.8%)为主,CVB3未检出,CVB1(2.2%)、CVB2(1.1%)、CVB4阳性患者(8.7%)有少量检出;在非病区内以CVB1(42.9%)为主,CVB3、CVB5未检出。结论CVB感染与云南省地方性猝死有一定的关联,CVB感染是云南省地方性猝死的可疑危险因素。

柯萨奇B3病毒感染对HL-1心肌细胞及间充质干细胞的影响研究

背景扩张型心肌病(DCM)是一种以心腔扩大及心肌收缩功能减退,伴或不伴充血性心力衰竭的心肌病。病毒性心肌炎是形成DCM的重要病因,而引起心肌炎的病毒以柯萨奇B组病毒(CVB)最为常见。间充质干细胞(MSC)已广泛应用于急性心肌梗死及慢性心力衰竭的实验研究中,但其应用于心肌炎的研究较少。目的比较柯萨奇B3病毒(CVB3)感染对HL-1心肌细胞及MSC的影响,以期寻找一种新的心肌炎的治疗措施。方法 2015年6月—2017年6月,分别培养HL-1心肌细胞、MSC,生长至80%汇合状态待用。分别将HL-1心肌细胞、MSC分为未感染组、感染后4 h组、感染后12 h组、感染后24 h组,其中感染后4 h组、感染后12 h组、感染后24 h组分别用CVB3感染4、12、24 h,未感染组仅用无血清培养基培养1 h,采用实时荧光定量PCR法检测CVB3基因拷贝数。分别将HL-1心肌细胞、MSC分为未感染组、感染组,其中感染组用CVB3感染,未感染组仅用无血清培养基培养1 h,分别于感染后4、12、24 h采用MTS法检测细胞活性。用CVB3分别感染HL-1心肌细胞(HL-1心肌细胞组)、MSC(MSC组),采用病毒空斑实验检测病毒滴度。结果 HL-1心肌细胞未感染组、感染后4 h组、感染后12 h组、感染后24h组CVB3基因拷贝数比较,差异有统计学意义(P<0.05)。MSC未感染组、感染后4 h组、感染后12 h组、感染后24 h组CVB3基因拷贝数比较,差异有统计学意义(P<0.05)。HL-1心肌细胞感染组感染后4、12、24 h细胞活性小于HL-1心肌细胞未感染组(P<0.05)。HL-1心肌细胞未感染组不同时间点细胞活性比较,差异无统计学意义(P>0.05);HL-1心肌细胞感染组不同时间点细胞活性比较,差异有统计学意义(P<0.05)。MSC未感染组与MSC感染组感染后4、12、24 h细胞活性比较,差异无统计学意义(P>0.05)。MSC未感染组、感染组不同时间点细胞活性比较,差异有统计学意义(P<0.05)。HL-1心肌细胞组病毒滴度大于MSC组(P<0.05)。结论 CVB3能够在HL-1心肌细胞中复制,感染CVB3后HL-1心肌细胞活性降低;但CVB3不能在MSC中复制,且感染CVB3后MSC细胞活性并未明显改变。

内皮间充质转化与急性病毒性心肌炎早期心肌纤维化的关系

目的:探讨心脏内皮间充质转化(EndMT)与急性病毒性心肌炎心肌纤维化形成的关系。方法:28只Balb/c小鼠随机分为对照组(n=8)、心肌炎组(n=10)和心肌炎+重组人骨形成蛋白7(rh-BMP7)干预组(干预组,n=10)。心肌炎组和干预组小鼠1次性腹腔接种柯萨奇病毒B3(CVB3),对照组小鼠腹腔注射等量病毒培养液,对照组和心肌炎组小鼠次日一次性腹腔注射生理盐水0.1 ml,干预组小鼠腹腔注射等量rh-BMP7(300μg/kg)以抑制转化生长因子(TGF-β1);7 d后处死小鼠取心脏,以苦味酸天狼星红染色后计算心脏胶原容积积分(CVF),实时RT-PCR法和Western blot方法检测小鼠心脏中TGF-β1、内皮细胞标志物(CD31和VE-cadherin)、成纤维细胞特异蛋白(FSP-1)、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)和I型胶原(Col1α1)的基因和蛋白表达情况。结果:与对照组比较,心肌炎组小鼠心肌坏死区出现明显心肌纤维化,也出现了以内皮细胞表型(CD31、VE-cadherin)丢失、间充质细胞表型蛋白(FSP-1、α-SMA)和胶原Col1α1增多为特征的EndMT现象;同时,TGF-β1表达明显增高;抑制TGF-β1可以同时逆转EndMT和心肌纤维化。结论:EndMT参与急性病毒性心肌炎心肌纤维化的形成,TGF-β1是重要介导因子。

广东省一株新型肠道病毒EV-B83型的全基因组序列进化分析及重组分析

本研究对2001年广东省急性弛缓性麻痹(Acute flaccid paralysis,AFP)病例中分离到的一株肠道病毒AFP341GD-CHN2001株进行了高通量测序后,获取该全基因组序列,经鉴定该毒株为EV-B83。为了解该广东省首株EV-B83分离株的全基因组特征及其重组特点,本研究对AFP341GD-CHN2001毒株通过最大似然法构建系统进化树,利用bootscanning分析该毒株与其它型别肠道病毒的重组位点,最后根据该重组位点分区段构建系统进化树,进一步验证重组分析结果。全长VP1序列构建的分子进化树表明,AFP341GD-CHN2001毒株与EV-B83原型株及柬埔寨SEP025KH2012分离株形成一簇;初步构建P1、P2、P3编码区序列系统进化树,提示该分离株在其分子进化中可能存在基因重组,而bootscanning分析表明非结构蛋白编码区是其发生基因重组的区域。根据bootscanning分析的断裂点对该毒株的全基因组序列分成3段构建系统进化树,该系统进化分析结果进一步明确该分离株于2B、2C、3D非结构编码区存在型间重组,与AFP341GD-CHN2001发生重组的毒株为CV-A9分离株NSW-V20AU2008、CV-B2分离株NSW-V53AU2010以及CV-B3分离株SSMJL-CHN2006。当前GenBank数据库中仅有来自美国以及中国云南的两株EV-B83全基因组序列,缺乏对该基因型的分子进化特征描述,本研究中的AFP341GD-CHN2001毒株为广东省首株EV-B83分离株,扩展了EV-B83数据信息,为今后EV-B83的研究提供了基础性资料。

短双链RNA对柯萨奇B组3型病毒体外感染的抑制作用研究

目的利用RNA干扰技术，在细胞、蛋白和基因水平上观察短双链RNA对柯萨奇病毒体外感染Hela细胞的增殖抑制作用、对病毒RNA复制和蛋白合成的影响。方法应用病毒致细胞病变作用保护实验、空斑形成减少实验、Western Blot、RT-PCR等方法，在体外检测其抗CVB3病毒作用。结果设计、合成的8条SiRNA中，针对基因组2B、VP4、2A、3C区的SiRNA-2、SiRNA-3、SiRNA-6、SiRNA-7具有不同程度的抑制病毒作用。其中，病毒基因组2B的SiRN．2作用效果最好，对Hela细胞CVB3感染72h后致细胞病变和空斑形成的抑制率为95％，抑制病毒蛋白的合成，病毒基因的复制水平也显著降低，在病毒0．1、0．01、0．001、0．0001 MOI感染水平上对CVB3致细胞病变作用的抑制率分别为30％、70％、88％和99％（48h）。结论针对CVB3基因组2B的SiRNA-2具有较强的抑制柯萨奇B3型病毒感染的作用。

无菌性脑膜炎暴发中柯萨奇B3病毒的基因特征分析

目的明确2008年山东省临沂市郯城县无菌性脑膜炎暴发的病原，对分离到的柯萨奇B3病毒的基因特征、遗传变异规律及进化来源进行分析。方法采集暴发病例的粪便、脑脊液标本，应用RD、Hep-2细胞进行病毒分离；阳性分离物分别采用中和试验、逆转录-聚合酶链式反应（RT-PCR）和核苷酸序列测定方法进行定型，最后与GenBank中检索到的其他CVB3毒株进行同源性分析，并构建VP1完整编码区亲缘进化树研究其遗传进化规律。结果共采集22份粪便和120份脑脊液标本，分离到病毒35株，经鉴定34株为CVB3，1株为ECH030。34株CVB3分离株VPI区部分序列（381bp）核苷酸同源性为90.5％-100％，氨基酸同源性为98.4％-100％；与Nancy原型株的核苷酸同源性为79.5％-81.6％，氨基酸同源性为98.4％-99.2％。012／2008TC／SD／CHN和177／2008TC／SD／CHN与安徽2008年分离的Fuyang19株同源性最高，核苷酸同源性分别为98.2％和91.0％，氨基酸同源性分别为99.2％和98.9％；进化树分析显示，中国大陆分离株独处一支，且呈单源性发生关系。结论此次脑膜炎暴发的病原是CVB3。它与其他的中国分离株同源性高，与国外分离到的CVB3具有不同的基因特征。

柯萨奇B5病毒所致无菌性脑膜炎暴发的病原学鉴定及基因特征分析

目的对2009年山东省临沂市一起无菌性脑膜炎暴发所分离的病原体进行鉴定，并分析其基因特征。方法采集无菌性脑膜炎患者脑脊液标本42份，分离病毒；RT—PCR扩增阳性分离物，测定VP1核苷酸序列，与GenBank中其他毒株进行同源性分析，并构建VP1基因亲缘进化树。结果分离到肠道病毒17株，经肠道病毒组合血清中和试验和分子分型鉴定为柯萨奇B5病毒（CVB5）。CVB5分离株之间核苷酸和氨基酸同源性分别为92．3％～100．0％和98．7％～100．0％，与CVB5原型株（Faulkner株）的核苷酸和氨基酸的同源性分别为81．0％～82．4％和96．6％～97．0％。VPl区亲缘进化树分析显示，全球CVB5可分为A、B、C、D共4个基因型，引起本次无菌性脑膜炎暴发的CVB5属于基因型D，但位于不同的传播链中。结论CVB5是此次临沂市无菌性脑膜炎暴发的病原体．分离株之间有较大的遗传差异，但均属于D基因型。

柯萨奇病毒A16型YY157株在Vero细胞中培养与增殖特性的研究

目的 探索柯萨奇病毒A16型（CVA16） YY157株在非洲绿猴肾（Vero）细胞中培养与增殖的合适条件.方法 把CVA16 YY157株接种于Vero细胞适应性传代,挑斑纯化后,在不同条件下培养并比较其对病毒滴度的影响.结果 CVA16 YY157株在Vero细胞中培养能导致细胞病变（CPE）,可形成蚀斑.将此CVA16病毒以0.01 ～0.1MOI接种于Vero细胞,并在低于2％牛血清浓度的培养基,35℃培养60 h,CPE可达90％以上;此条件下收获培养液上清,可得到较高滴度的病毒.结论 初步建立了CVA16 YY157株在Vero细胞中培养与增殖的方法,为其下一步的大规模培养及疫苗制备奠定了基础.

髓系触发受体-1在柯萨奇病毒B3导致的炎症反应及心肌细胞损伤中作用的实验研究

目的通过体外观测柯萨奇病毒B3（CVB3）感染后髓系触发受体-1（TREM-1）在巨噬细胞中的表达，进一步探讨病毒性心肌炎炎症损伤的作用机制。方法CVB3感染巨噬细胞后，按感染时间进行分组，检测各组TREM-1mRNA的转录情况（具体分为0h、1h、4h、8h和12h组），免疫印迹法检测TREM-1及其下游分子DAP-12蛋白的表达（具体分为0h、16h、24h和48h组），用LP-17阻断TREM-1作为干预组，与单纯CVB3感染组（24h）和不感染CVB3的对照组比较，酶联免疫吸附法检测巨噬细胞分泌蛋白肿瘤坏死因子α（TNF—α）的量，用CCK8和AnnexinV-FITC观察与巨噬细胞上清共培养后的心肌细胞的活力和凋亡。结果CVB3感染后4h组TREM-1mRNA表达量高于0h组（但差异无统计学意义），8h组和12h组则显著高于0h组（P均〈0．01），16h组和24h组TREM-1蛋白表达水平显著高于0h组（P均〈0．01）。CVB3感染24h组和48h组TREM-1的下游信号分子DAP-12的蛋白表达也显著高于0h组（P均〈0．01）。LP-17干预组巨噬细胞分泌的TNF-α的量明显少于CVB3感染组（24h）（P〈0．01）。LP-17干预组心肌细胞的活力显著高于CVB3感染组（24h）（P〈0．01），细胞凋亡少于CVB3感染组（24h）（P〈0．01）。结论CVB5通过诱导巨噬细胞中TREM一1的表达产生过度的炎症反应，进一步引发心肌细胞的间接损伤是急性病毒性心肌炎的发病机制之一。

2005年四省、区的柯萨奇病毒A组16型血清流行病学研究

目的了解2005年中国广东、黑龙江、新疆和云南四省、区1～5岁年龄儿童中的柯萨奇病毒A组16型（CVA16）抗体水平，为防控CVA16引起的手足口病的流行提供科学依据。方法随机挑取上述四省、区2005年1～5岁年龄儿童血清503份进行CVA16的微量中和实验。结果CVA16抗体阳性率在广东、黑龙江、新疆和云南分别为41．90％、9．40％、40．00％和34．40％。平均抗体滴度（GMT）均较低（平均为1：6．1），广东、黑龙江和云南各省内各年龄组间GMT差异无统计学意义（F值分别为0．97、0．40、1．06，P均〉0．05），而四省、区间比较，黑龙江与其他三个省、区GMT差异有统计学意义（F=10．61，P〈0．00）。结论2005年或以前CVA16已经在四省、区存在局部流行，但是不同省、区间的CVA16流行传播范围和程度不相同；1～5岁年龄段儿童是CVA16的易感人群。

黑龙江省克山病病区内外环境硒水平及人群柯萨奇B组病毒感染现况调查

目的了解黑龙江省克山病病区内外环境硒水平及柯萨奇B组病毒（CVB）人群感染情况，为采取有针对性的防治措施提供依据。方法在克山病病区设立病区病例组和病区对照组，在非病区设立非病区对照组，采集血液样品用于检测血硒及CVB IgM抗体，同时采集病区和非病区土壤、粮食用于硒测定：硒的测定采用氢化物发生原子荧光光度法，CVB IgM抗体采用酶联免疫吸附法（ELISA）检测。结果病区土壤、玉米、小麦、大豆含硒量[（0．092±0．011）、（0．003±0．001）、（0．005±0．003）、（0．006±0．001）mg／kg]均低于非病区[（0．198±0．016）、（0．012±0．004）、（0．037±0．007）、（0．037±0．008）mg／kg]，二者比较差异均有统计学意义（t值分别为17．007、8．551、15．842、12．109，P〈0．01）。病区病例组血硒[（34．803±13．302）μg／L]低于病区对照组[（41．235±13．571）μg／L]，二者比较差异有统计学意义（P〈0．05）；病区病例组、病区对照组、非病区对照组的CVB感染阳性率分别为90．0％（36／40）、68．3％（41／46）、45．8％（22／48），病区和非病区CVB感染的比值比（OR）为3．957，95％可信区间为1．898～8．246；病区病例组和病区对照组CVB感染的OR值为4．171．95％可信区间为1．298～13．404；CVB感染组与未感染组血硒水平比较，差异无统计学意义（t=1．179，P〉0．05）。结论黑龙江省克山病病区仍存在低硒及CVB感染情况。

柯萨奇病毒B3感染人宫颈癌细胞株HeLa细胞后Bad mRNA表达的意义

目的探讨柯萨奇病毒B3(CVB3)诱导的Bad mRNA表达的意义。方法体外培养的He La细胞通过CVB3感染建立模型,通过倒置显微镜下观察CVB3感染He La细胞后在不同时间点(3 h、6 h、9 h、12 h、24 h)细胞形态学变化,采用反转录聚合酶链式反应(RT-PCR)检测凋亡相关基因Bad mRNA的表达。采用SPSS 16.0统计软件进行统计分析,两组Bad mRNA的表达水平采用均数±标准差表示,显著性比较采用t检验。结果 CVB3感染He La细胞后对照组各时间点无形态上的变化;病毒组随着感染时间的延长,逐渐出现细胞病变效应,以感染24 h后最明显。对照组各时间点Bad mRNA的表达量比较差异无统计学意义(P>0.05),病毒组各时间点Bad mRNA的表达量比较差异无统计学意义(P>0.05),但感染24 h后病毒组Bad mRNA[(0.61±0.06)s]表达低于对照组[(0.76±0.06)s],差异有统计学意义(t=-3.445,P<0.05),而3 h、6 h、9 h、12 h后病毒组和对照组Bad mRNA表达量的比较差异无统计学意义(t=-0.97,-0.43,-3.9,-0.97;P>0.05)。结论促凋亡基因Bad mRNA在CVB3病毒感染的He La细胞中发挥促凋亡作用。

临沂市脑膜炎／脑炎症候群监测病例埃可病毒30型的分离及其基因特征分析

目的 调查山东省临沂市脑膜炎/脑炎症候群（AMES）病例中人类肠道病毒病原谱的构成,分析主要病原体埃可病毒30型的基因特征.方法 采集AMES病例的脑脊液、粪便和（或）咽拭子标本,所有标本经预处理后,接种RD、Hep-2细胞分离病毒,阳性分离物采用血清学和分子生物学方法鉴定型别,与GenBank检索到的其他Echo30毒株进行同源性比较,并构建VP1完整编码区系统进化树研究其遗传进化规律.结果 2010年4-12月,共采集101例病例的222份标本（脑脊液56份,咽拭子94份,粪便72份）,其中34例患者的47份标本（脑脊液4份,咽拭子18份,粪便25份）中分离到HEV,11例鉴定为Echo30.通过同源性分析,发现其核苷酸同源性与2003年山东省泰安市、章丘市及江苏省分离株最近（91.2％～95.4％）,与原型株差异较大（17.9％～19.6％）；11株临沂分离株之间核苷酸差异为0～10.2％.系统进化树分析显示,临沂分离株属于基因型6的3个不同分支,提示来自3个传播链的Echo30病毒在临沂市共同循环.结论 山东省临沂市2010年AMES病例标本的优势分离株为Echo30,与国外分离株属于不同的进化分支,具有不同的基因特征.

EB病毒、巨细胞病毒、单纯疱疹病毒和柯萨奇病毒感染和多发性硬化复发关系的研究

目的探讨EB病毒（EBV）、巨细胞病毒（CMV）、单纯疱疹病毒-1（HSV-1）、柯萨奇病毒B组Ⅰ～Ⅵ型近期活动性感染和复发-缓解型多发性硬化（RRMS）复发的关系。方法采用酶联免疫吸附法检测34例RRMS患者和200名正常对照者血浆EB病毒、巨细胞病毒、单纯疱疹病毒-1、柯萨奇病毒B组Ⅰ～Ⅵ型IgM抗体，比较病例组和对照组间上述病毒近期活动性感染率的差别，并对病例组病毒近期活动性感染者和无活动性感染者的临床资料进行分析比较。结果两组间EB病毒、巨细胞病毒、单纯疱疹病毒-1及柯萨奇病毒B组Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅵ型IgM抗体阳性率的差异无统计学意义。RRMS组和对照组间柯萨奇病毒B组Ⅳ型、V型IgM抗体阳性的差异有统计学意义（分别为3／34和0/200，P〈0．05；2／34和0／200，P〈0．05）。病例组中任一病毒近期活动性感染者和无活动性感染者相比，其年龄、病程、发作次数、入院体温、血白细胞分类计数（中性粒细胞、淋巴细胞和单核细胞）、糖皮质激素应用与否及EDSS分值间的差异均无统计学意义。结论RRMS患者复发期柯萨奇病毒B组Ⅳ型、V型近期活动性感染率较高，但近期病毒活动性感染和症状的严重度无关，未发现EBV、CMV、HSV与RRMS复发的关系。

EV71-B5亚型在亚太地区流行病学及进化分析

EV71-B5亚型自2003年首次报道以来,在亚太地区频繁引发手足口病(Hand,foot and mouth disease,HFMD)疫情,并可引起部分婴幼儿重症表现甚至死亡。为了阐明EV71-B5亚型在亚太地区的流行病学规律及进化特征,本文采用分子生物学软件(主要包括BioEdit、MEGA 5.0、Jmodeltest2.1.7、BEAST1.8.2、Tracer1.5、FigTree1.4.3、SPREAD1.0.7),对60条亚太地区的EV71-B5亚型序列进行进化分析及系统发育地理学分析。分析结果显示EV71-B5亚型可在同一地区(中国台湾、泰国等)频繁流行,最近共同祖先的起源时间为2000年9月(95%CI:1999年8月~2001年9月),平均进化速度为4.045×10^(-3)(95%CI:3.222×10^(-3)~4.909×10^(-3));此外,迁移图谱表明EV71-B5亚型在亚太地区具有明显的迁移传播现象,中国厦门EV71-B5亚型分离株(JN964686)推测来源于新加坡地区(BF=3.17)。这种现象提示我国需要加强对该亚型的监测力度,以免发生大范围暴发。

一起暴发性病毒性脑炎的病原学调查

目的分离鉴定引发2010年河南省一起病毒性脑炎暴发的病原，并进一步分析该病原体分离株外壳蛋白1（VPl）区基因特征。方法于2010年4月河南省平顶山市鲁山县病毒性脑炎暴发期间，采集8例住院患儿的粪便标本（共8份），其中3例患儿同时采集脑脊液标本（共3份），未采集到脑脊液标本的5例患儿中4例采集了血清标本（共4份）。对标本进行病毒分离和肠道病毒（EV）组合血清鉴定，对阳性分离物采用逆转录PCR方法扩增VPl区基因、测定核苷酸序列并进行亲缘进化分析。结果采集的脑脊液、血清、粪便标本共15份，荧光定量PCR检测结果显示，11份标本EV通用检测阳性，其中2份粪便标本分离到2株病毒毒株，EV组合血清鉴定血清型别均为柯萨奇病毒（Cox）阳性，VPl区全长基因序列均为849bp，与CoxB5的核苷酸相似性为77．1％一96．9％，氨基酸相似性为95．8％-100％，遗传发育树分析与D基因型属同一分支。结论CoxB5是引起本次河南省平顶山市鲁山县病毒性脑炎暴发的病原体，其基因型为D基因型。

柯萨奇病毒IgM抗体胶体金免疫层析快速诊断试纸条的研制

目的建立一种快速检测柯萨奇病毒IgM抗体的胶体金免疫层析试纸条,并优化制备中各关键步骤的实验条件。方法以柠檬酸三钠还原法制备20nm的胶体金溶液,标记羊抗人IgM,制备免疫胶体金复合物,组装胶体金免疫层析快速诊断试纸条。结果用柠檬酸还原法制备的20nm胶体金溶液呈亮红色。胶体金标记羊抗人IgM最低稳定量是1μg/ml,最适稳定量为1.5μg/ml。最适pH为8.2。血清标本检测结果与进口ELISA试剂盒比较差异无统计学意义。结论胶体金免疫层析试纸条制备质量不但与抗原抗体的质量、层析材料的选择、胶体金的制备与标记等因素密切相关,而且缓冲系统、辅助添加剂的选择与优化也非常重要。

2010年湖北省急性出血性结膜炎病原鉴定及基因进化分析

目的 鉴定引起2010年湖北省急性出血性结膜炎（acute hemorrhagic conjunctivitis,AHC）疫情的病原体,并对其进行基因进化分析.方法 采集20份门诊AHC患者眼结膜拭子,对其进行病毒分离,随后通过PCR方法分别检测阳性分离物中肠道病毒70型（human enterovirus D-70,EV-D70）和柯萨奇A24变异株（Coxsackievirus A24 variant,CV-A24v）.对CV-A24v分离株进行VP1区和3C区全序列测定,分析其与全球流行CV-A24v的基因进化关系.结果 20份标本中有11份病毒分离阳性,PCR检测表明这11份病毒分离物为CV-A24v.基于3C区和VP1区构建的基因进化树表明湖北CV-A24v属于GenotypeⅣ基因型的Cluster 3（GⅣ-C3）,而且在GⅣ-C3内湖北CV-A24v分属于A和B两个传播链.结论 本研究表明2010年至少有两个CV-A24v传播链在湖北同时流行.

113例实验室确诊手足口病流行病学特征和临床特点分析

目的了解不同病原类型以及普通、重症病例手足口病患儿的流行特征及临床特点。方法采用描述流行病学方法对113例实验室确诊手足口病病例的流行病学特征和临床特点进行详细分析。结果113例手足口病确诊病例流行特征与同期疫情流行特征基本相同，不同病原类型以及普通、重症病例手足口病部分临床特点存在差异。结论应根据本病特点开展防控工作，早期识别重症病例，重点应做好暴发疫情的调查处置，减少重症和死亡病例。