直肠滴入中药对CoxA16、EV71肠道病毒感染手足口病的疗效

目的观察直肠滴入中药对CoxA16、EV71肠道病毒感染手足口病的疗效。方法选取2019年8月—2022年8月贵州水矿控股集团有限公司总医院CoxA16、EV71肠道病毒感染手足口病患儿85例,按照随机数表法分为观察组(42例)和对照组(43例),其中对照组患儿给予利巴韦林治疗,观察组患儿给予直肠滴入中药治疗。对比两组患儿治疗前后口腔疱疹、发热、皮疹等症状的评分,治疗前后患儿炎症因子、免疫指标水平及两组患儿治疗后不良反应发生率。结果治疗前,两组患儿的口腔疱疹、发热、皮疹评分差异无统计学意义(P>0.05),治疗后,两组患儿的口腔疱疹、发热、皮疹评分均降低,并且治疗后观察组患儿的以上症状评分低于对照组(P<0.05);治疗后,两组患儿白细胞介素(IL)-6、IL-8、肿瘤坏死因子(TNF)-α均降低,并且治疗后观察组患儿的以上降低幅度大于对照组(P<0.05);治疗后,两组患儿CD4^(+)、CD3^(+)、CD4^(+)/CD8^(+)水平均升高,CD8^(+)水平降低,并且治疗后观察组患儿的变化幅度大于对照组(P<0.05);观察组患儿不良反应发生率为4.76%,对照组患儿不良反应发生率为18.60%,观察组不良反应发生率低于对照组(P<0.05)。结论给予CoxA16、EV71肠道病毒感染手足口病患儿直肠滴入中药治疗,能减轻患儿临床症状及炎性反应,改善免疫功能,且不良反应少,值得借鉴。

手足口患儿EV71、CoxA16和其他肠道病毒感染情况及基因型分析

目的探究2018—2020年平顶山市新华区手足口患儿EV71、CoxA16和其他肠道病毒感染情况及基因型状况。方法选择平顶山市新华区疾病预防控制中心2018年7月至2020年12月收治的104例手足口病患儿作为研究对象,通过患儿粪便及肛拭子标本对患儿病毒核酸进行检测,观察患儿肠道病毒病原学构成情况及分析患儿EV71病毒及CoxA16病毒VP1基因中各基因型同源性,并记录手足口病患儿临床症状表现及外周血白细胞水平。结果104例手足口病阳性样本中,EV71病毒感染54例(51.92%),CoxA16病毒感染7例(6.73%),其他肠道病毒感染43例(41.35%),EV71病毒感染比例高于CoxA16病毒感染比例,差异有统计学意义(P<0.05);CoxA16 VP1基因序列与A、B、C基因型代表株核苷酸同源性为82.6%~82.9%,与D基因型代表株核苷酸同源性为92.7%~99.2%;EV71 VP1基因序列与C4基因型代表株核酸同源性为92.4%~96.8%,与C4a基因型代表株核苷酸同源性为94.3%~96.8%,与C4b基因型代表株核苷酸同源性为92.4%~93.7%;EV71病毒、CoxA16病毒及其他肠道病毒感染组之间发热、皮疹等临床症状所占比例及外周血白细胞水平比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。结论手足口病患儿中EV71病毒感染比例相比于CoxA16病毒感染比例更高;且CoxA16及EV71 VP1基因序列均存在高同源性的病毒株;但各病毒株感染后临床症状表现几乎一致。

热毒宁注射液治疗CoxA16、EV71肠道病毒感染手足口病的效果与安全性分析

目的 探讨热毒宁注射液治疗CoxA16、EV71肠道病毒感染手足口病的效果与安全性。方法 选择2015年10月-2016年5月在我院治疗的CoxA16、EV71肠道病毒感染的手足口病患儿96例,随机分为两组,其中对照组48例给予利巴韦林注射液治疗,研究组48例给予热毒宁注射液治疗,比较两组的治疗效果与安全性。结果 研究组治疗总有效率（97.92%）明显高于对照组（83.33%）,差异有统计学意义（P〈0.05）;两组均无严重不良反应（P〉0.05）。结论 热毒宁注射液治疗CoxA16、EV71肠道病毒感染手足口病患儿的效果显著,安全可靠,值得推广。

肠道病毒71型和柯萨奇病毒A16型分离株的VP1基因特征分析

目的:探讨苏皖地区手足口病(HFMD)患者肠道病毒71型(EV71)和柯萨奇病毒A16型(CA16)分离株的VP1基因特征。方法:采集南京市、马鞍山市2009至2010年HFMD患者临床标本进行病毒分离和RT-PCR鉴定;扩增并测定VP1基因序列;从GenBank中选取EV71和CA16不同基因型参考毒株,利用生物信息学软件进行同源性比对和系统进化树分析。结果:共分离到9株EV71和4株CA16,EV71分离株的核苷酸和氨基酸序列同源性分别为96.5%～99.8%和99%～100%;CA16分离株的核苷酸和氨基酸序列同源性为96.2%～98.5%和99.3%～100%;系统进化树分析显示,9株EV71全部属于C4a基因亚型,而4株CA16则全部属于B1b基因亚型。结论:2009至2010年苏皖地区分离到的EV71和CA16毒株分别属于C4a和B1b基因亚型,与国内其他地区HFMD病原学及分子进化研究结果一致,有望成为疫苗候选株作进一步研究。

肠道病毒71型、柯萨奇病毒A组16型相关手足口病临床特征分析

目的分析肠道病毒71型(EV71)、柯萨奇病毒A组16型(CA16)相关手足口病(HFMD)的临床特征。方法回顾性分析209例EV71及CA16相关HFMD患儿临床资料,并进行比较。结果普通型HFMD患儿中,EV71感染患儿平均月龄偏大,体温高,呕吐及臀部出疹率高(P<0.05);CA16感染患儿男性偏多,发热天数长,心率快,AST、CRP显著升高(P<0.05)。重症HFMD患儿中,EV71所致病例多于CA16所致者(P<0.05),且嗜睡、肌震颤、易惊等临床表现的发生率高,易并发脑膜脑炎、脑干脑炎(P<0.05),实验室指标WBC、血糖(GLU)水平升高(P<0.05);CA16感染患儿男性较多,流涎、腹泻、口腔溃疡发生率高(P<0.05),实验室指标AST、CK、CRP水平显著升高(P<0.05)。结论 EV71及CA16相关HFMD临床特征有所不同,根据临床表现结合实验室指标WBC、GLU、AST及CRP等,有助于区分EV71或CA16感染。

合肥市0-14岁人群柯萨奇病毒A组16型和肠道病毒71型的感染状况调查

采用ELISA法检测0-14岁人群柯萨奇病毒A组16型（CoxA16）及肠道病毒71型（EV71）抗体水平。在入选的1000例儿童中,EV71 IgM总阳性率19．9%,EV71 IgG总阳性率47.7%,CoxA16 IgM总阳性率22．8%,CoxA16 IgG总阳性率51．3%；EV71 IgM总阳性率与CoxA16 IgM总阳性率比较,差异无统计学意义（χ^2=2．794,P〉0．05）；EV71 IgG总阳性率与CoxA16 IgG总阳性率比较,差异无统计学意义（χ^2=2．793,P〉0．05）。各年龄组比较,新生儿组IgG抗体阳性率较高,其EV71 IgG抗体阳性率41．5%,CoxA16 IgG抗体阳性率49．5%；婴儿组IgG抗体阳性率最低,EV71 IgG、CoxA16 IgG抗体阳性率分别为38．0%,43．5%；除新生儿组外,随年龄增加,人群EV71、CoxA16 IgG逐渐增高,组间差异有统计学意义（χ^2=27．04、19．98, P 〈0．01）；在 IgM 方面,人群EV71、CoxA16 IgM 随年龄逐渐升高,组间差异有统计学意义（χ^2=41．12、37．13,P〈0．01）。两种HFMD病原体的IgM、IgG抗体性别间差异无统计学意义（χ^2=0．51、1．77、0．36、2．12,P〉0．05）。

肠道病毒71型和柯萨奇病毒A16型多重反转录-聚合酶链反应的建立及初步应用

本文旨在建立一种快速、高效的检测肠道病毒71型(EV71)和柯萨奇病毒A16型(CA16)的方法,用于儿童手足口病的病原学监测。通过设计肠道病毒通用引物和CA16、EV71的型特异性引物,建立以不同引物浓度配比及两阶段退火温度提高检测敏感度和特异度的多重反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)方法,并对首都儿科研究所附属儿童医院2010年3～10月收集的371例手足口病患儿381份临床标本同时进行病毒分离和核酸检测。结果显示,本研究建立的多重RT-PCR方法对CA16和EV71的最低模板检测浓度分别为5.32pg/ml和0.64pg/ml,反应特异度为100%。应用该方法检测381份手足口病临床标本的总阳性率为77.4%,其中CA16与EV71的检测阳性率分别为31.8%和35.4%,两者检测阳性比为1∶1.1。以病毒分离为标准,多重RT-PCR对CA16及EV71检测的准确率分别为95.2%和98.6%。因此,本研究新建立的多重RT-PCR方法准确、简便,适用于较大量样本的手足口病病原学监测。2010年引起北京地区儿童手足口病的主要病原为CA16和EV71。

柯萨奇病毒A组16型与肠道病毒71型致手足口病临床特点比较

手足口病是由多种肠道病毒引起的常见感染性疾病,其中肠道病毒71型(EV-A71)和萨奇病毒A组16型(CV-A16)是最常报道的病毒类型[1]。手足口病易发生在5岁以下儿童,大多数患儿表现出自限性疾病症状,典型症状包括发热、手脚皮疹、口腔内水疱。研究显示,一小部分手足口病可迅速发展,导致致命的神经系统和全身并发症,特别是在EV-A71相关的患儿中[2]。EV-A71型、CV-A16型手足口病患儿临床表现不同,疾病预后也不尽相同[3]。为了比较EV-A71型、CV-A16型手足口病患儿临床特征,本研究选取30例CV-A16型手足口病患儿和45例EV-A71型手足口病患儿,以观察2组不同病毒导致手足口病临床特征和血清学特征。

胶体金法在检测肠道病毒71型IgM和柯萨奇病毒A16型IgM中的应用

目的探讨胶体金法在检测肠道病毒71型IgM(EV71-IgM)和柯萨奇病毒A16型IgM(CA16-IgM)中的应用价值。方法选择医院2017-2018年收治的400例手足口病患儿作为研究对象,均进行胶体金法和酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测;以最终确诊结果为参照,比较胶体金法与ELISA法对于CA16-IgM抗体、EV71-IgM抗体的检测结果和符合率。结果胶体金法检出CA16-IgM抗体的符合率低于ELISA法,但差异无统计学意义(P>0.05);胶体金法检出EV71-IgM抗体的符合率低于ELISA法,但差异无统计学意义(P>0.05)。结论胶体金法检测CA16-IgM抗体、EV71-IgM抗体的符合率与ELISA法相近,可为临床患儿提供早期诊断的依据。

手足口病主要病毒CoxA16、EV71与WBC、ALT、AST、CKMB的关系

目的:探讨手足口病的主要病毒柯萨奇病毒16型(Cox A16)、肠道病毒71型(EV71)与白细胞(WBC)、谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)、肌酸激酶同工酶(CKMB)的关系。方法:选择鹤壁市人民医院2017年3月至6月的146例疑似手足口病患儿,采集并检测患儿的四项血液指标,利用酶联免疫吸附法对Cox A16和EV71进行定性,再根据定性结果将患儿分为四组进行统计学分析,其中Cox A16(-)EV71(+)组39例、Cox A16(-)EV71(-)组45例、Cox A16(+)EV71(+)组46例、Cox A16(+)EV71(-)组16例。结果:四组患儿CKMB的组间差异较大,尤其是当EV71阳性时,CKMB的活性显著高于其他组;以Cox A16(-)EV71(-)组为对照组,四组患儿的WBC、ALT、AST差异均不大,但当患儿EV71呈阳性时,患儿的CKMB显著升高。结论:流行病调查时可采用血清EV71病毒抗体联合CKMB活性对小儿手足口病疑似患儿进行确诊,但WBC、ALT和AST不可用于EV71病毒感染的手足口病疑似患儿的确诊,CKMB、WBC、ALT和AST均不可用于Cox A16病毒感染的手足口病疑似患儿的确诊。

四季抗病毒合剂联用利巴韦林对CoxA16病毒增殖和感染作用的影响

目的探讨四季抗病毒合剂（Sijikangbingdu mixture，SJM）、利巴韦林注射液（Ribavirin injection，RBV）和SJM＋RBV对A16型柯萨奇病毒（CoxAl6）增殖和感染作用的影响。方法分别使用75TCID5、50TCID50CoxAl6感染Vero细胞模型和5日龄BALB／c乳鼠腹腔内注射1×10^6TCID50CoxAl6建立感染动物模型，采用SJM、RBV和SJM＋RBV给药后，检测CoxAl6感染Veto细胞损伤程度等指标，计算各用药方式对病毒感染乳鼠的死亡率、生存时间、体质量、临床症状评分等参数。结果SJM、RBV和SJM＋RBV对CoxAl6细胞的增殖具有剂量依赖性显著抑制作用，即随其剂量增大抑制作用显著增强（P〈0．01）。SJM、RBV和SJM＋RBV对CoxAl6病毒均具有显著抑制作用（P〈0．01），但SJM＋RBV组的抑制作用最强（P〈0．01或P〈0．05）。SJM、RBV和SJM＋RBV均能显著改善CoxAl6病毒感染乳鼠的临床症状，尤其SJM＋RBV组的乳鼠生存率和临床评分等指标均显著好于SJM和RBV组。结论SJM＋RBV抑制CoxAl6细胞增殖作用、提高感染CoxAl6病毒BALB／c乳鼠的存活率、延长其存活时间等保护效应均显著优于SJM、RBV单用组，并显著下移了抗CoxAl6病毒的有效剂量（相对SJM、RBV单用有效剂量而言），为临床治疗手足口病提供了用药新策略。

2017-2020年江门地区儿童手足口病流行病学特征及非EV71型非CA16型肠道病毒型别分析

目的:分析广东省江门市2017-2020年手足口病的流行特征,了解非EV71型非CA16型肠道病毒的分子流行病学特征,为本市进一步临床治疗和防控工作提供科学依据。方法:通过全国传染病报告信息管理系统收集2017-2020年本市手足口病患儿资料,收集整理2017-2020年本院信息系统报告的手足口病例及分析其流行特征,采用荧光RT-PCR法对疑似手足口病患者标本同时进行EV通用型、EV71型、CA16型检测,并选取EV71型和CA16阴性而EV通用型阳性的标本进行型别鉴定,设计5’非编码区特异性引物,RT-PCR扩增后进行序列测定,最后对核苷酸的同源性进行比对及确定病毒的型别。结果:2017-2020年江门市共报告HFMD总发病人数为31 709例,其中2017年报告病例数最高。4年内共采集了因怀疑手足口病到本院就诊患儿的2 587例标本,并同时进行EV通用型、EV71型、CA16型检测,总阳性1 263例,总阳性率为48.82%。阳性主要以托幼儿童和男患儿为主。其中EV71核酸阳性173例,占13.70%;CA16核酸阳性282例,占22.33%;其他EV核酸阳性808例,占63.97%。在2017-2020年中确定属于肠道病毒分型共87份,检出的非EV71型非CA16型的肠道病毒有6种型别,分别为CA6、CA10、CA4、CA12、CA5、CA8,其中CA6是占主要的,为70.11%,其次是CA10占13.79%。结论:江门市手足口病的分布呈现出人群差异、季节差异,非EV71型非CA16型的肠道病毒病原谱有六种,病毒型别以CA6为主。应持续进行病原学检测,掌握优势型别,为防控提供依据。

肠道病毒71型和柯萨奇病毒A16鼠源性广谱中和活性单克隆抗体的制备

目的制备可以同时阻断肠道病毒71型(EV71)及柯萨奇病毒A组16型(CV-A16)感染的中和活性单克隆抗体(mAb)。方法采用EV71病毒体蛋白1(VP1)羧基端的163~177位氨基酸(SP55)免疫BALB/c小鼠,通过杂交瘤技术制备mAb,用EV71中和抗原表位SP55以及高度同源的CV-A16 VP1羧基端的第163~177位氨基酸(PEP55)同时进行检测,筛选同时与EV71和CV-A16发生交叉反应的mAb,并进行体外中和试验检测对EV71和CV-A16的中和作用,并分析mAb的生物学特性。结果筛选获得1株可以同时中和EV71及CV-A16的mAb 6E5,其重链为IgG1亚类,轻链为Kappa链;细胞微量中和实验表明其抗EV71感染的中和效价为1∶128,抗CV-A16感染的中和效价为1∶32。结论成功获得1株能同时中和EV71及CV-A16的广谱中和活性mAb。

人肠道病毒71型和柯萨奇病毒A组16型的现况研究

手足口病最早由新西兰学者Seddon于1957年报道，1958年加拿大学者Robinson等在手足口病患者的咽拭子及粪便中分离出CA16病毒，CA16病毒第一次被认为是手足口病的病原。1959年英国学者Atsop从患者疱疹液中又分离出CA16病毒，CA16病毒是引起手足口病的病原体进一步被证实，手足口病因患者的临床特点被命名。1969年肠道病毒71在美国1名脑炎患者的脑脊液、粪便中被分离出，1992年EV71型血清型被确定。

人肠道病毒71型和柯萨奇病毒A16型B细胞线性表位的生物信息学预测

发展了人肠道病毒B细胞线性表位(简称线性表位)的生物信息学预测算法,系统性地预测和比较了人肠道病毒71型(Enterovirus71,EV71)和柯萨奇病毒A16型(CoxsackievirusA16,CVA16)的线性表位.结果显示:EV71和CVA16结构蛋白(Viral Protein, VP)上都有16个线性表位,2种肠道病毒的线性表位的位置高度一致,但氨基酸序列保守性较低,大多数表位都存在至少3个氨基酸残基的差异,提示2种病毒的线性表位具有血清型特异性,这很可能是两者不能交叉反应的原因.线性表位主要分布在β链之间的环上和C-末端,分别有13个(81.3%)和2个(12.5%)表位.与文献报道相比较,16个线性表位中,分别有6个(37.5%) EV71和12个(75%) CVA16的表位已被实验验证.特别是实验研究重点关注的VP1,6个预测表位中,分别有4个(66.7%) EV71的预测表位和5个(83.3%)CVA16的预测表位已被实验所验证.说明算法具有较高的预测可靠度.线性表位的实验研究主要集中在VP1,预测结果提示VP2和VP3也能形成表位,应该加以重视.生物信息学算法通过预测和筛选潜在的线性表位,能够大大降低实验负荷,为包括EV71和CVA16在内的人肠道病毒的研究提供有力支持.对肠道病毒线性表位的预测,有助于更好地监测和预警手足口病疫情,辅助疫苗的研发和准备.

黄曲霉毒素B1对仔猪体内流感病毒复制、器官损伤和肠道菌群的影响

【背景】黄曲霉毒素B1(AFB1)是由寄生曲霉菌产生的次级代谢产物,广泛存在于世界各地受污染的食品和饲料中,被认为是影响人类和动物健康的主要风险因素之一。猪流感病毒(SIV)是目前世界上传播最为广泛的病毒之一,其复制易受环境和营养等多种因素影响。然而,饲料中AFB1污染与SIV感染的关系尚不明确。【目的】探究AFB1暴露对SIV感染的仔猪体内SIV复制、器官损伤和肠道菌群的影响,为研究霉菌毒素中毒机制奠定基础,也为探讨其他感染性疾病易感性增加原因提供参考。【方法】选取保育期雄性仔猪32头,随机分为4组(每组8头),在试验开始第1和第4天分别滴鼻接种低致病性SIV病毒稀释液,建立SIV感染仔猪(本体动物)模型。每天新鲜稀释AFB1,按照0、10、20和40μg·kg^(-1)(饲料)浓度灌服给仔猪,持续21 d。分别在第7、14和21天饲喂前对仔猪进行称重,然后应用多种技术手段检测各组仔猪器官脏器指数、剖检变化和病理特征,并在此基础上,进一步使用免疫印迹分析肺部SIV的核衣壳蛋白(NP)的表达情况以及16S rRNA检测肠道菌群变化,阐明AFB1暴露对SIV感染、脏器损伤和肠道菌群的影响。【结果】暴露于40μg·kg^(-1)AFB1的仔猪较对照组仔猪(无AFB1)体增重显著降低(P<0.01),NP蛋白表达以及肺脏指数显著升高(P<0.01),而脾脏指数显著降低(P<0.01)。剖检结果显示,暴露于40μg·kg^(-1)AFB1仔猪的脾脏、肝脏和肺脏损伤严重。H.E染色也表现出相似的结果,与SIV对照组相比,40μg·kg^(-1)AFB1处理组仔猪脾脏出现淤血,红白髓界限不清;肝组织出血、炎症细胞浸润;肺脏小肺泡融合成形态不规则的大肺泡,肺泡间质增厚,炎性细胞浸润增多;此外,肠绒毛形状不规则,结缔组织松散,有淋巴细胞浸润。16S rRNA测序结果显示,暴露于40μg·kg^(-1)AFB1显著提高了仔猪肠道放线菌门和梭状芽孢杆菌的相对丰度,降低了乳酸菌属和拟杆菌属的丰度。【结论】AFB1暴露降低了SIV感染仔猪的体增重,促进SIV复制,加剧了肺组织等器官损伤,并引起肠道菌群紊乱,该发现为研究AFB1的毒性作用机制提供理论参考依据。

荧光RT-PCR同步检测肠道病毒71型和柯萨奇病毒A组16型方法的建立及应用

目的建立快速、灵敏、特异的肠道病毒71型和柯萨奇病毒A16型的荧光PCR检测及分型方法。方法针对肠道病毒71型和柯萨奇病毒A16型的特异性保守基因vp1基因分别设计一对引物和对应的探针,对荧光RT-PCR反应体系进行优化,验证方法的特异性、灵敏度和重复性,并对临床样品进行检测分析。结果该方法对肠道病毒71型和柯萨奇病毒A16型的检测有高度特异性,与甲肝、腮腺炎、风疹、乙型脑炎等病毒均无交叉反应,检测灵敏度可达10拷贝/μl;43例患儿肛拭子标本中肠道病毒71型和柯萨奇病毒A16型检测率分别为37.21%(16/43)和13.95%(6/43)。结论荧光RT-PCR法分型检测肠道病毒71型和柯萨奇病毒A16型的方法具有快速、便捷、特异、灵敏等特点,适用于肠道病毒的早期诊断。

两种儿童常见腹泻病毒感染的肠道菌群特征研究

目的研究轮状病毒和腺病毒感染幼龄儿童肠道菌群的分布特征,为治疗及改善预后提供新思路。方法收集临床诊断为急性腹泻的幼龄儿童粪便标本22例,其中确诊为轮状病毒感染者12例,腺病毒感染者10例,并选择同期健康体检儿童粪便标本12例作为对照,采用16S rDNA靶向扩增检测三组幼龄儿童肠道微生物的多样性和组成结构,分析其菌群结构、丰度及差异。结果三组人群肠道菌群的Alpha多样性和Beta多样性均存在显著差异。属水平上,健康对照组、轮状病毒组和腺病毒组丰度最高的分别为拟杆菌属、埃希氏菌属/志贺氏菌属和双歧杆菌属。LEfSe差异性分析显示,与健康对照组相比,轮状病毒组中双歧杆菌属、阿克曼氏菌属、瘤胃球菌属、优杆菌属等益生菌丰度显著降低,但革兰阴性菌如埃希氏菌属/志贺氏菌属丰度增高;腺病毒组中丹毒梭菌属、葡萄球菌属等条件致病菌丰度显著增高,而优杆菌属等较低,双歧杆菌相比对照组没有减少。结论轮状病毒和腺病毒感染均导致了幼龄儿童肠道菌群失调,但其感染后体内菌群种类和分布存在显著差异,提示两种病毒引起的腹泻,治疗中益生菌的服用和选择存在差异。