急性弛缓性麻痹病例中ECHO11病毒的基因特征分析

该文首次分析了我国ECHO11病毒的分子流行病学资料。1999～2004年，ECHO11病毒是山东省急性弛缓性麻痹（AFP）病例中分离到的优势毒株，2003年从山东省482例AFP病例中共分离到11株ECHO11病毒，其中相关的10例病例分布跨越山东省大部分地区，但发病日期集中在7月和12月。该研究试图通过对VP1编码基因全序列的测定和分析，为探讨ECHO11病毒与AFP之间的病因关系提供线索。分子流行病学研究提示，11株ECHO11毒株都位于同一传播链，核苷酸同源性为97．2％～100％，氨基酸同源性为99．6％～100％，其中7月和12月的分离株之间相层8～9个核苷酸，氨基酸序列一致。这说明山东省2003年7月和12月分别发生了ECHO11病毒流行，但这些毒株与AFP的病因关系尚需进一步研究。11株病毒组成了A基因型中的一个新亚型，在进化树上单独呈密切相关的一簇，与同基因型内的其它亚型的核苷酸同源性为82．2％～84．7％，氨基酸同源性为94.8％～97．6％．

上海市人群Echo30病毒性脑膜炎隐性感染调查

为了了解上海市不同年龄组人群的Echo30病毒隐性感染情况及IgG抗体阳性率分布。采集上海市412份不同年龄组人群血清,用间接酶联免疫吸附试验(ELISA)检测血清中的Echo30IgG抗体。发现受检普通人群血清中Echo30IgG抗体阳性率为25.8%。其中1岁以下婴幼儿中未见抗体阳性者,15岁以下儿童抗体阳性率较低(10%～16.7%),15岁以上人群抗体阳性率水平明显升高(45.0%～46.7%)。孕妇与普通人群抗体阳性率无显著性差异。研究结果提示上海市人群中存在隐性感染者,人群通过自然感染获得免疫保护,15岁以下儿童为Echo30感染及发病的高危人群,母体传递给婴幼儿的抗体水平较低,不能为婴幼儿提供先天性免疫保护。

银川市某医院体检人群EV71型和ECHO病毒感染率的调查

目的了解银川市不同年龄组人群肠道病毒71型(EV71型)和埃克病毒(ECHO)感染率情况及IgG抗体阳性率分布情况。方法采集宁夏银川市某医院204份不同年龄组体检人群血清,用间接酶联免疫吸附试验(ELISA)检测血清中的EV71型和ECHO IgG抗体。结果 204例受检人群血清中EV71型和ECHO IgG阳性率分别为32.4%和15.1%,其中1岁以内婴幼儿EV71抗体阳性率低,1岁～组EV71 IgG抗体阳性率最高达48.3%,但与其他组比较差异无统计学意义。1岁以内婴幼儿ECHO抗体阳性率低,随着年龄增长,抗体阳性率增高,15～65岁组ECHO IgG抗体阳性率最高,为22.3%,与其他组比较差异无统计学意义。结论普通人群中可能存在EV71型和ECHO隐性感染者,成人EV71隐性感染率较低,儿童是EV71的主要感染者,15岁以下儿童为ECHO感染的高危人群,人群通过自然感染获得免疫保护。

30例埃可19型肠道病毒性脑炎致病特征探讨

目的探讨30例埃可19(ECHO19)型肠道病毒引起病毒性脑炎患儿的临床特点、流行病学特征及病原学特性,以提高对该病的认识。方法采用主动监测和被动监测的方法,由临床、流行病学与实验室组成监测系统。结果从所采集的30份脑脊液标本中,分离鉴定出16株ECHO19型肠道病毒。结论本次儿童病毒性脑炎是由埃可19型肠道病毒引起。

ECHO病毒性脑炎30例临床分析

ECHO病毒为肠道病毒，主要通过粪-口途径传播，其4、6、19、11、16、30型流行株常侵犯中枢神经系统，引起病毒性脑炎流行。我科于2005年5～7月共收治30例ECHO6型病毒性脑炎，现报道如下。

云南省2022年手足口病病例中2株埃可病毒11型VP1区基因特征分析

目的对云南省2022年从手足口病(hand,foot and mouth disease,HFMD)病例中分离到的2株埃可病毒11型(echovirus 11,E11)进行分子生物学鉴定并对它们的VP1区基因特征进行分析。方法对2022年云南省手足口病实验室监测网络收集到的手足口病病例粪便标本进行病毒分离,对阳性标本先进行VP4/VP2结合区逆转录-聚合酶链反应(reverse transcription-polymerase chain reaction,RT-PCR)和基因测序定型,再对VP4/VP2结合区初步定型的标本进行VP1区RT-PCR和测序,用MEGA 7.0软件构建病毒VP1区基因进化树,进行基因特征分析。结果2022年从云南省手足口病病例粪便标本中检测到2株E11病毒,VP1区基因序列同源性分析结果表明,2株病毒最接近3株在欧洲葡萄膜炎(uveitis)病例中分离的病毒。本研究分离的2株病毒与欧洲3株病毒之间核苷酸相似性(nucleotide,nt)和氨基酸(amino acid,aa)同源性分别为84.37%(差异率15.63%)和95.21%(差异率4.79%)。云南2株和E11原始株(Silva)之间的核苷酸相似性为80.03%(差异率为19.97%),氨基酸同源性为93.50%(差异率6.50%),与原型株(Gregory)的核苷酸相似性为76.95%(差异率23.05%),氨基酸同源性为88.02%(差异率11.98%)。本次云南分离的2株E11为D5亚型。结论2022年云南省手足口病实验室检测到的2株E11为D5亚型,是目前云南和整个中国最为流行的基因亚型。应进一步加强对非脊灰肠道病毒(non-polio enteroviruses,NPEVs)和非EV-A71、非CVA16等手足口病中“其他肠道病毒”(other enteroviruses)尤其是E11病毒的分子生物学检测。

2021年广东省广州市一株埃可病毒11型菌株的分离与鉴定

目的探索疑似埃可病毒病原体感染标本的分离鉴定,了解埃可病毒11型(ECHO 11)生长特性及进化特征。方法将2021年广东省广州市发热、急性扁桃体炎患儿的咽拭子标本接种人横纹肌肉瘤细胞(RD)进行病毒分离培养通过巢式反转录聚合酶链反应及一步法聚合酶链反应等方法对疑似埃可病毒病原体进行鉴定;扩增分离株VP1基因全长序列,选择全球有代表性流行株,绘制进化树,确定分离株的基因型并研究分离株在细胞中的生长动力学。结果从患者咽拭子标本中分离出ECHO 11毒株,命名为Qi-2023。分离株在RD细胞中能有效增殖,病毒滴度随着复制时间的增加而上升,3~12 h之间病毒增殖最快。进化树结果表明该分离株与D型代表株聚类在一起,VP1基因核苷酸相似性为84.42%~99.08%。且与D5亚型同源性最高,VP1基因核苷酸相似性99.08%。结论从疑似肠道病毒感染患者的咽拭子中成功分离出一株ECHO 11,为D5亚型。这些研究将为ECHO 11感染防控提供实验室数据参考。

汕头地区人群中埃可病毒抗体的检测

目的 :观察人群中感染埃可病毒 (ECHO)状况。方法 :采用中和抗体试验测定人群血清抗体 ,血清作1∶10～ 1∶3 2 0稀释 ,病毒用 10 0TCID50 在微量培养板上进行 ;ECHO病毒 6个型分别与血清等量混合 ,结合 1h ,接种细胞 (同时设立病毒、细胞对照 ) ,观察细胞病变。结果 :血清ECHO 7、9、14、15、2 4、2 7型中和抗体阳性率和几何平均滴度依次为 :2 4 2 %和 7 18,16 0 %和 6 3 7,3 8 9%和 9 42 ,19 9%和 6 3 7,15 7%和 6 3 4,10 8%和 5 64。其中<3岁年龄组的抗体阳性率较低 ,为 2 6%～ 3 2 5 % ,15～ 40岁年龄组抗体阳性率最高 ,为 11 3 %～ 5 2 8%。结论 :汕头地区人群中ECHO 7、9、14、15、2 4、2 7型病毒的传播广泛 ,以青壮年感染率较高 ,婴幼儿较低 ,可能与参加社会活动多少有关。

健康青年埃可病毒感染血清流行病学调查

埃可病毒（ECHO）是一种球形无包膜呈对称20面体的单股正链线状 RNA 病毒，归类于微小病毒科肠道病毒属的一个亚类，依据抗原和基因结构的差异划分为30多个血清型，且各型间存在交叉免疫反应。该病毒感染遍布全世界，多为儿童散发，夏秋季多发，流行时隐性感染者较显性发病者多200余倍，无症状带毒者为主要传染源，主要通过粪-口途径传播，也可经空气飞沫传播，在同一家庭或集体单位流行，被 ECHO 污染的游泳池水可引起暴发流行。ECHO 对热敏感，50℃能迅速灭活，但对低温却相当稳定，－20℃可以长期保存，耐酸， pH＝3时仍能存活，对紫外线相当敏感，75％乙醇和5％皂酚等常用消毒剂不能灭活，但0．3％甲醛可迅速灭活［1，2］。为了解新兵人群 ECHO 感染情况，做好 ECHO 预防工作，笔者从血清标本库中随机抽取近8年入伍的364名新兵标本，进行了血清流行病学调查，现将调查结果报告如下。

肠道病毒ECHO 19型引起无菌性脑炎流行的诊断与遗传性分析

目的明确引起无菌性脑炎流行的病原,了解其遗传特征。方法收集部分病例脑脊液及双份血清标本,同时应用传统的病毒分离及中和鉴定、RT-PCR扩增肠道病毒目的基因片段及序列分析和双份血清中和抗体变化3种方法进行病因学诊断;并进一步针对病原进行基因序列测定和遗传树图构建分析。结果直接从首例及随后送检的18份脑脊液标本中扩增出肠道病毒核酸进行了早期诊断;病毒分离鉴定及双份血清中和抗体检测结果为:用RD和Hep-2两种细胞从30份脑脊液标本中分离出肠道病毒ECHO 19型16株(阳性分离率为53．33％),检测5例病例双份血清ECHO 19 病毒中和抗体水平,其中4例双份血清抗体阳转或呈4倍及以上升高,同时也证实了肠道病毒 ECHO 19为此次脑炎流行的病因;其中5株病毒VP1区全基因序列与已发表的其他ECHO19病毒株进行比对分析,显示:本次分离株间核苷酸序列同源性为98．9％-100．0％,来自于一个共同的祖先, 而与已发表其他毒株间亲缘性较远,差异性为13．0％-22．4％,属于一新的变异福建株。结论此次无菌性脑炎流行的病原为一变异的ECHO 19病毒;运用分子生物学技术不仅可以达到早期诊断目的,而且可以从分子水平提示病毒的遗传特性。

引起病毒性脑炎Echo25型肠道病毒龙岩分离株基因特征分析

目的对从龙岩市病毒性脑炎患者脑脊液（CSF）标本中分离的Echo25型VP1区序列进行分析。方法收集龙岩市某医院2012年诊断为病毒性脑炎或中枢神经系统感染的住院病例CSF标本进行肠道病毒（EV）的分离鉴定，4株经血清中和鉴定为Echo25型EV，测定4株分离株的VP1编码区序列，与GenBank上已发表的Echo25型病毒VP1区进行同源性比较及遗传进化分析。结果4株龙岩分离株VP1区片段核苷酸序列长度为498 bp，编码166个氨基酸。同源性分析的结果显示，4株龙岩分离株中的3株VP1区核苷酸相似性为100%，另一株与其他3株相似性为97%。与2010年的北京分离株KJ957190和2008年的河南分离株HM031189相似性较高。遗传进化分析显示，4株Echo25毒株均为B1基因亚型。结论Echo25是2012年龙岩市病毒性脑炎病原之一，且出现了不同传播链，提示应加强EV的监测，及时掌握Echo25病毒的遗传变异情况，为相关疾病的防控提供科学依据。

常用快速手消毒剂对两种肠道病毒的灭活效果研究

目的了解常用快速手消毒剂对两种肠道病毒PV-I、Echo11的灭活效果,以指导手卫生的方式。方法采用悬液定量灭活试验方法,检测常用的13种快速手消毒剂对脊髓灰质炎病毒PV-I、肠道病毒Echo11病毒作用1 min的灭活效果。结果快速手消毒剂A(有效氯370 mg/L)和B(乙醇75%~85%、三氯羟基二苯醚0.4%~0.5%)作用1 min,对PV-I和Echo11的灭活对数值均≥4.00;快速手消毒剂C(聚六亚甲基双胍0.45%~0.55%、乙醇63%~77%)作用1 min,只对Echo11的灭活对数值≥4.00;其余快速手消毒剂对PV-I和Echo11的灭活对数值均<4.00。结论PV-I作为消毒剂病毒灭活实验中的指示毒株,对快速手消毒剂的抗力比Echo11强。检测的13种消毒剂中,对PV-I、Echo11有灭活作用的快速手消毒剂占比分别为15.4%和23.1%,在临床中过度依赖快速手消毒剂阻断肠道病毒通过手的传播是有风险的,在流行季节或明确有肠道病毒污染的情况下,应选择皂液流动水洗手作为手卫生的方式。

2019年广东省新生儿埃可病毒11型感染事件病原检测结果分析

目的:分析2019年广东省两起医疗机构新生儿肠道病毒感染暴发事件实验室检测结果及埃可病毒11型(Echovirus 11, Echo11)基因特性,为新生儿肠道病毒感染防控提供依据。方法:收集疑似肠道病毒感染新生儿病例病原学标本,采用荧光定量PCR和基因测序两种方法进行肠道病毒分型鉴定,对阳性标本开展病毒分离,对Echo11的VP1基因进行全长序列测定并运用Danstar6、Bioedit7.09和MEGA6.06等生物信息学软件开展遗传进化分析。结果:收集到36例新生儿病例的93份标本,经鉴定,24例55份标本肠道病毒阳性,其中23例为Echo11阳性,1例为柯萨奇病毒B组4型(CVB4)阳性。从19例病例标本中分离到肠道病毒29株,其中18例28株为Echo11,1例1株为CVB4。VP1全长序列分析发现,本研究18株Echo11核苷酸同源性为98.2%~100.0%,两起新生儿感染事件Echo11的核苷酸同源性分别为99.7%~100.0%和99.8%~100.0%,均高度同源;Echo11可分为A、B、C、D、E和F共6个基因型,其中A基因型包含5个亚型(A1~A5),C基因型包含4个亚型(C1~C4),D基因型可分为等5个亚型(D1~D5),本研究18株Echo11均为D5亚型。结论:2019年广东省两起医疗机构新生儿感染暴发事件均由肠道病毒Echo11引起,均属于D5基因亚型。

云南省4株埃可病毒11型VP1基因特征分析

埃可病毒11型(Echovirus 11,ECHO11)属于肠道病毒B组,是最常见的人类肠道病毒(Human enterovirus,HEV)之一,常引起儿童无菌性脑膜炎、脑炎和急性迟缓性麻痹等疾病。为了对云南省手足口病(Hand,foot,and mouth disease,HFMD)监测中分离到的4株ECHO11毒株的VP1基因进行序列分析,并为云南地区ECHO11的进化及流行趋势等研究提供基础数据,本研究对收集到的HFMD病例标本进行病毒分离培养和鉴定,对鉴定为ECHO11的毒株VP1基因测定其完整序列,与GenBank上其他参考株的VP1区序列构建遗传进化树进行基因分析。结果显示,4株ECHO11型毒株分属A1和D5两个基因亚型,分别与各自基因亚型参考株的同源性为最高。D5基因亚型ECHO11分离株在进化树上聚集为3簇,提示存在多个传播链,其D5-1簇的VP1区氨基酸在多个位点上与同基因亚型的其他簇参考株存在特异突变。本研究揭示,云南地区存在两种不同基因亚型的ECHO11流行情况,特别是D5亚型的出现,提示我国周边流行的ECHO11基因型已进入中国大陆,应密切关注其流行变异情况,为今后制定由ECHO11引起的HFMD的公共卫生策略提供依据。

一起埃可病毒33型肠道病毒引起学校流感样疫情暴发调查

目的 调查分析湖南省石门县某乡学校一起由埃可病毒33型肠道病毒（ECHO33）引起的流感样疫情暴发的流行病学特征及病因。方法 采用现场流行病学调查方法了解病例发生情况及可疑传播途径。对采集的12份咽拭子标本进行人肠道病毒（enterovirus,EV）核酸检测以及病毒分离。采用VP1序列测定比对的方法,对分离的EV型别进行鉴定。结果 本次疫情从2013年5月29日开始至6月18日结束,持续20 d,共发生病例108例,罹患率为11.26%。6月6-9日为发病高峰期,发病92例（占85.19%）。病例首发在中学,病例以中学生为主,占69.44%,男女之比为1.12：1。高年龄组（12~,≥14岁）罹患率较低年龄组（≤5、6-、8-、10-岁）差异有统计学意义（P〈0.05）。病例的潜伏期为3.5 d,主要症状为发热（76.85%）、咽痛及扁桃体肿大（54.63%）、头痛、头晕（42.59%）。大多数患者病情较轻。病原学检测12份鼻咽拭子,其中10份标本EV阳性,型别鉴定证实为ECHO33型人肠道病毒。结论 本次学校流感样病例暴发疫情是由ECHO33型肠道病毒引起的,今后应加强对学校流感样病例暴发疫情的病原学监测和防控工作。

一起暴发流行的无菌性脑炎的病原分析

目的对一起暴发流行的无菌性脑炎进行病原分析。方法用荧光PCR法对14份咽拭子标本进行核酸定性检测,细胞培养分离得到病毒后进行微量细胞中和试验,并对病毒VP1区3’段核酸测序以鉴定病毒。结果 14份咽拭子标本中,甲型/乙型流感病毒、肠道病毒71型(EV71)和柯萨奇病毒A16型(Cox A16型)均为阴性,其中8份标本肠道病毒通用型为阳性。从该8份标本从中分离到3株疑似肠道病毒,经微量细胞中和试验及病毒VP1区3’段核酸测序鉴定,均为埃可病毒30(ECHO30)型肠道病毒。结论本次暴发的无菌性脑炎由ECHO30型肠道病毒引起。

湖北襄阳2016-2017年埃可病毒11型流行株基因特征分析

目的对2016—2017年中国湖北襄阳地区分离的埃可病毒11型(Echovirus 11,Echo11)基于VP1基因进行分子进化特征分析。方法采集2016—2017年中国湖北襄阳地区手足口病患儿肛拭子或咽拭子标本,应用real-time RT-PCR技术对肠道病毒阳性样本进行筛选,对肛拭子或咽拭子样本进行病毒分离。采用常规RT-PCR方法对在人横纹肌瘤细胞上分离的Echo11病毒襄阳流行株VP1区和3株代表株全长基因扩增并进行序列分析,使用DNAStar7.0软件包中的MegAlign、MEGA6.0中的Data和Phylogeny软件对核苷酸和氨基酸序列同源性、突变位点进行分析和构建系统进化树等。使用SimPlot软件进行重组分析,对3株代表株全长序列和GenBank中下载的核苷酸序列进行BootScan扫描,生成相似性图。结果本研究从3494份手足口病患儿样本中共分离出Echo11病毒11株,占比0.31%。11株Echo11流行株的VP1基因同源性比较高。核酸序列和氨基酸序列同源性分别为98.4%~100.0%和98.3%~100.0%。11株Echo11襄阳流行株与Echo11原型株(Echo11/Gregory,X80059)核酸序列和氨基酸序列同源性分别为73.9%~74.8%和87.7%~88.7%。襄阳地区流行的Echo11毒株均属于D进化分支,与中国大陆部分地区2013年以来的流行株亲缘关系相近。襄阳流行株和2010年Echo1河南流行株和2015年的Echo6湖北流行株在多个区域有较高的相似度,说明襄阳流行株基因组的多个区域可能发生了重组。结论襄阳地区流行的Echo11毒株均属于D进化分支,2016—2017年襄阳地区流行的Echo11是重组株。

一种三氯生复方消毒剂对三种肠道病毒灭活效果的研究

目的观察一种三氯生复方消毒剂对3种肠道病毒的灭活效果。方法采用悬液定量灭活试验方法,对该复方消毒剂灭活3种肠道病毒的效果进行观察。结果该复方消毒剂含三氯生4000~5000 mg/L与体积分数75%~85%乙醇。以该复方消毒剂原液作用0.5 min,对悬液内脊髓灰质炎病毒I型、肠道病毒71型和埃可病毒11型平均灭活对数均>4.00。结论该复方消毒剂原液对3种肠道病毒具有快速灭活效果。