大鼠肠道缺血/再灌注时肠淋巴干结扎对肠道屏障的影响

目的比较大鼠肠道缺血/再灌注时肠淋巴干结扎与不结扎对肠道屏障的影响,探讨肠道淋巴及肠道屏障功能在危重病发生中的作用。方法健康雄性SPF级SD大鼠随机分为4组:空白组、假手术组、肠道缺血/再灌注组、肠道缺血/再灌注+淋巴干结扎组。分别检测肠道损伤程度,细菌、内毒素的移位情况及循环中D-乳酸、二胺氧化酶(DAO)的水平。结果假手术组、肠道缺血/再灌注组、肠道缺血/再灌注+淋巴干结扎组的黏膜厚度及绒毛高度均较空白组显著降低(P<0.05),肠道缺血/再灌注组、肠道缺血/再灌注+淋巴干结扎组间差异无显著性;空白组、假手术组未检测到细菌移位,肠道缺血/再灌注组细菌移位率为40%,肠道缺血/再灌注+淋巴干结扎组细菌移位率为20%;内毒素水平肠道缺血/再灌注组最高,肠道缺血/再灌注+淋巴干结扎组较肠道缺血/再灌注组显著降低(P<0.05),但肠道缺血/再灌注组、肠道缺血/再灌注+淋巴干结扎组均较空白组、假手术组增高(P<0.05);肠道缺血/再灌注组、肠道缺血/再灌注+淋巴干结扎组D-乳酸与DAO水平较空白组、假手术组显著增加(P<0.05),且肠道缺血/再灌注组高于肠道缺血/再灌注+淋巴干结扎组(P<0.05)。结论肠道缺血/再灌注损伤可导致肠黏膜厚度和绒毛高度显著降低,肠淋巴干结扎对肠道形态虽无明显保护作用,但减少细菌在肠系膜淋巴结的定植并降低血循环中内毒素、D-乳酸与DAO的水平。

大鼠肠道缺血/再灌注损伤后肠淋巴阻断对肺损伤的保护作用

目的比较大鼠肠道缺血再灌注时肠淋巴干结扎与不结扎对急性肺损伤的影响,探讨肠道淋巴在急性肺损伤发生中的作用。方法将40只健康雄性SPF级SD大鼠随机分为空白组、假手术组、肠道缺血再灌注组和肠道缺血再灌注+淋巴干结扎组,每组10只。在缺血再灌注后通过TUNEL法及HE染色分别检测肺组织Ⅱ型肺泡上皮细胞的凋亡和形态学变化,髓过氧化物酶(MPO)的活性和肺组织NO及一氧化氮合酶(NOS)水平。结果与肠道缺血再灌注组相比,肠道缺血再灌注+淋巴干结扎组的肺组织损伤程度明显减轻,平均Ⅱ型肺泡上皮细胞凋亡数显著降低(P<0.05);与其他3组比较,缺血再灌注组大鼠的肺组织MPO活性、NO及NOS浓度均显著增高(P<0.05)。结论肠淋巴干结扎可明显减轻肠道缺血再灌注引起的肺组织损伤,减少急性肺损伤的发生,这可能与肠淋巴阻断减少了经淋巴途径到达肺部的炎症介质相关。

肠道缺血再灌注的淋巴液对Toll样受体4基因缺陷小鼠炎性因子和Toll样受体4配体高迁移率族蛋白B1的影响

目的观察肠道缺血／再灌注（I／R）的淋巴液对炎性因子和Toll样受体4（TLR4）的配体高迁移率族蛋白B1（HMGB1）的影响。方法收集淋巴液，SD大鼠20只，体重（300±20）g，分为淋巴液引流组（N组，只引流淋巴液180min）和肠道I／R淋巴液引流组（I／R组，引流淋巴液180min同时夹闭肠系膜上动脉60min后复灌120min）。TLR4基因缺陷（TLR4^-/-）小鼠和野生型小鼠（C57BL／6）各32只，分别分为4个亚组（n=8），从尾静脉注射不同成分。N组：注射普通淋巴液；I／R组：注射I／R的淋巴液；Edt组：注射内毒素；HMGB1组：注射HMGB1蛋白。180min后取材。结果大鼠肠道I／R时，I／R组引流的淋巴液中内毒素和HMGB1显著高于普通引流组[内毒素：（Q034±0．050）Eu／ml比（0．017±0．023）Eu／ml，P=0．033；HMGB1：（4．293±0．883）ng／ml比（0．509±0．128）ng／ml，P=0．006]。TLR4^-/-小鼠和野生型小鼠在注射不同成分后，注射HMGB1的野生型小鼠比HMGB1的TLR4^-/-小鼠回肠黏膜厚度（TLR4^-/-比野生型小鼠：（602．1±37．5）μm比（335．8±43．2）μm，P=0．000]和绒毛高度[（404．5±18．6）μm比（273．0±31．7）μm，P=0．000]显著降低；注射I／R淋巴液的二组黏膜厚度和绒毛高度都有所降低，但TLR4^-/-组比野生型组小鼠黏膜厚度和绒毛高度的降低显著减少；注射普通淋巴液和内毒素的TLR4^-/-与野生型小鼠之间血清细胞因子白细胞介素（IL）-6、肿瘤坏死因子（TNF）-α、内毒素和HMGB1差异无统计学意义。注射I／R淋巴液的TLR4^-/-组的炎症因子水平显著低于其野生型小鼠组[TLR4^-/-比野生型，TNF-α：（28．637±5．166）pg/ml比（41．917±8．175）pg／ml，P=0．000；IL-6：（60．900±24．729）pg／ml比（110．265±28．545）pg／ml，P=0．000]；注射HMGB1的TLR4^-/-组的炎性因子浓度显著低于野生型小鼠组[TLR4^-/-比野生型小鼠，TNF-α：（20．865±6．464）pg／ml比（31．059±6．204）pg／ml，P=0．004；IL-6：（36．268±8．977）pg／ml比（76．677±14．009）pg／ml，P=0．000]。结论大鼠肠道I／R时淋巴液中的内毒素和HMGB1水平显著升高；小鼠注射I／R淋巴液、内毒素和HMGBI后，注射I／R淋巴液组的炎症因子和HMGB1较普通淋巴液的小鼠显著增高；TLR4^-/-小鼠与野生型小鼠相比，炎症因子水平和肠道黏膜的局部损伤都显著减轻。“肠-淋巴”途径在肠道I／R损伤中可能具有关键性作用。